Məlumat

HUVEC hüceyrələri və HT-29 adenokarsinoma hüceyrələrini əhatə edən Western Blotting üçün bir bakterial proteaz inhibitor kokteyli istifadə edilə bilərmi?

HUVEC hüceyrələri və HT-29 adenokarsinoma hüceyrələrini əhatə edən Western Blotting üçün bir bakterial proteaz inhibitor kokteyli istifadə edilə bilərmi?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Əziz biokimya yoldaşlarım,

Western Blotting, daha doğrusu RIPA hüceyrə lizisi tamponu və proteaz inhibitor kokteyli ilə birlikdə müəyyən proteaz inhibitorlarının istifadəsi ilə bağlı bəzi məsləhətlərə ehtiyacım var. Millipore texniki nümayəndəsi, "539134 | Proteaz İnhibitor Kokteyl Seti III, EDTA -Free - Calbiochem" i yaxşı bir ümumi proteaz inhibitoru kokteyli kimi istifadə etməyi tövsiyə etdi.

AEBSF, bestatin, E-64 və pepstatin A (E.coli proteaz inhibitor kokteyli) olan başqa bir proteaz inhibitor kokteylim var, lakin aprotinin və ya leupeptin inhibitorlarını ehtiva etmir. Bu son 2 inhibitor olmadan bir məməli hüceyrə lizatında proteoliz riski varmı? İstifadə etdiyimiz xüsusi hüceyrə növləri bunlardır: HUVEC (insan göbək damarı endotel hüceyrələri) və HT-29 adenokarsinoma hüceyrə xətti.


Ümumiyyətlə, leupeptin (bir sistein, treonin və serin proteaz) və aprotinin (bəzən Trasylol; tripsin inhibitoru adlanır) məməlilərin əksəriyyəti lizat tamponlarına daxil edilir. Onlara ehtiyacınız olub-olmamağınız həqiqətən maraqlandığınız zülaldan asılıdır: onun in vitro necə parçalandığını bilirsinizsə, o zaman yalnız bu proteazların inhibəsi ilə yaxşı davranmalısınız. Bunun əvəzinə mümkün qədər çox protein saxlamaq istəyirsinizsə, onları əlavə etməlisiniz. Onları istifadə etməsəniz, bəli, bu proteazlar hüceyrə zülallarının bir qismini parçalayacaq.

Yaxşı xəbər odur ki, aprotinin və leupeptin ayrı-ayrılıqda ala və onları işləyən lizis tamponu üçün lazımi konsentrasiyalara əlavə edə bilərsiniz.