Məlumat

Warfarin niyə protein C-nin bioloji aktivliyini azaldır?

Warfarin niyə protein C-nin bioloji aktivliyini azaldır?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Warfarin VKOR inhibe edir. Beləliklə, K vitamini asılılığını pozur $qamma$- Fc- II, VII, IX, X karboksilləşməsi.

Bəs Protein C və Protein S ilə tam olaraq nə əlaqəsi var? Antikoaqulyant sistemə necə təsir edir?

[İst. Kim, Yesel və Oh Young Bang. "Varfarinin erkən dozalarının paradoksal prokoaqulyant təsiri: Atrial fibrilasiya ilə əlaqəli vuruşu olan xəstələrdə qeyri-vitamin K oral antikoaqulyantın mümkün rolu." Vuruş jurnalı cild. 17,2 (2015): 216-8. doi: 10.5853/jos.2015.17.2.216

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4460341/]

Bu maneənin mexanizmi ilə bağlı məqalə tapa bilmədim. Hər hansı bir kömək təqdir ediləcəkdir.


Niyə varfarin C zülalının bioloji aktivliyini azaldır? - Biologiya

Zülalların və zülalların təmizlənməsinin öyrənilməsi

Niyə zülalları öyrənmək lazımdır. Zülalların və onların funksiyalarının öyrənilməsi həm hüceyrələri, həm də orqanizmləri başa düşmək üçün əsasdır. Zülalların biologiyada vacib olmasının bir neçə səbəbi var:

  • hüceyrədə metabolik prosesləri qoruyan katalizatorlar kimi xidmət edirlər.
  • həm hüceyrə daxilində, həm də hüceyrənin xaricində struktur elementləri kimi xidmət edirlər;
  • bir hüceyrə tərəfindən ifraz olunan və ya digər hüceyrələr tərəfindən tanınan hüceyrədaxili matrisə yerləşdirilən siqnallardır,
  • hüceyrədənkənar mühit haqqında məlumatı hüceyrəyə çatdıran reseptorlardır,
  • onlar reseptorların təsirinə vasitəçilik edən hüceyrədaxili siqnal komponentləri kimi xidmət edir,
  • onlar hansı genlərin ifadə olunduğunu və mRNA-ların zülallara çevrilib-çevrilmədiyini müəyyən edən mexanizmin əsas komponentləridir,
  • onlar DNT və RNT-nin manipulyasiyasında iştirak edirlər: DNT replikasiyası, DNT rekombinasiyası, RNT-nin birləşdirilməsi və ya redaktə edilməsi.

In vitro iş. Bu mühüm rollara görə, bir zülalın təcrid olunmuş şəkildə təmizlənməsi və öyrənilməsi çox vaxt dəyərlidir. Təmizlənmiş proteini təcrid etmək və öyrənmək qabiliyyəti müasir biokimyanın əsasını təşkil edir. Bir zülal təcrid oluna və təmizlənə bilərsə, digər zülallardan ayrılıqda öyrənilə bilər və onun enzimologiyası və ya siqnal qabiliyyəti ətraflı öyrənilə bilər. Məhz zülalları müstəqil şəkildə təcrid etmək və onları ayrı-ayrılıqda və ya qarışıqlarda ətraf mühitə (duz, temperatur, pH və s.) tam nəzarət etməklə öyrənmək bacarığı in vitro işin əsasını təşkil edir. Bu in vitro yanaşma açıq şəkildə genetik yanaşmalar və in vivo yanaşmalarla tamamlana bilsə də, müasir bioloq üçün mövcud olan eksperimental dizayn repertuarında əslində heç bir əvəz yoxdur.

Protein təmizlənməsinin dəyəri. Bunun xaricində zülalların təmizlənməsinin bir sıra vacib səbəbləri var və bunların qısa siyahısı insanların bu işdə niyə bu qədər vaxt və səy sərf etdiyini vurğulamaq üçün xidmət edə bilər:

  1. Bir proteini təmizləyərək müəyyən bir bioloji aktivliyin (enzimatik aktivlik, siqnal qabiliyyəti və s.) Əslində unikal bir zülalda yerləşdiyini aydın şəkildə müəyyən etmək olar.
  2. Təmizlənmiş zülallar son dərəcə qiymətli biokimyəvi reagentlər kimi xidmət edir. Təmizlənmiş böyümə faktorları və ya hormonlar, proteazlar, DNT polimerazalar, tərs transkriptazalar, ligazalar, fosfatazalar və ya xüsusi bir epitopu tanıyan antikorlar kimi şeylər əldə etmək olduqca qiymətlidir.
  3. Bir protein təmizləndikdən sonra onun enzimologiyasını öyrənmək, müəyyən substratlara yaxınlığını anlamaq və ya enzimatik reaksiyaları katalizasiya etmək qabiliyyətini araşdırmaq mümkündür. Bu cür yanaşmalar, bioloji molekulların metabolik proseslərdə katalizator və ya kimyəvi enerjini ion qradiyentlərinə və ya mexaniki qüvvələrə çevirən çeviricilər kimi necə hərəkət edə biləcəyini anlamağa imkan verdi.
  4. Təmizlənmiş zülalların mövcudluğu bio-üzvi kimyaçılara spesifik qalıqların dəyişdirilməsinə imkan verir ki, bu qalıqların konkret strukturları necə təmin etdiyini və ya zülalın katalizator kimi fəaliyyət göstərməsinə imkan versin.
  5. Təmizlənmiş zülallar zülalın N-terminal ardıcıllığından və ya zülaldan əldə edilən peptiddən ardıcıllıq məlumatı əldə edən Edmund deqradasiyası ilə ardıcıllıqla sıralana bilər. Bu yanaşma sürətlə kütləvi spektroskopiya ilə əvəz olunur. Ardıcıllıq məlumatları cDNA -ları təcrid etmək üçün problar hazırlamaq üçün istifadə edilə bilər və bu məlumatlar bütün zülalın əsas ardıcıllığını çıxarmaq üçün istifadə edilə bilər. MALDI-TOF (Matrix Assisted Lazer Desorption Ionization Time of Flight), yalnız az miqdarda olsa belə bir protein haqqında çox məlumat verə bilən bir texnologiyadır.
  6. Qismən təmizlənmiş zülallar tez -tez zülalların və ya onlardan alınan peptidlərin ionlaşdırılması və kütləvi spektroskopiya aparılması nəticəsində yaranan fraqmentlər əsasında müəyyən edilə bilər. Kütləvi spektroskopiyaya həsr olunmuş bir sayt üçün bura vurun. Rockefeller -dəki 'PROWL' saytı zülalların analizi üçün protokoollar, proqram təminatı və faydalı məlumat bazalarına bağlantılar ehtiva edir.
  7. Ənənəvi quruluş-funksiya tədqiqatları, yalnız şərti fermentləri deyil, həm də bu zülalların mutant formalarını təcrid etmək və təmizləmək qabiliyyətinə görə olduqca güclü hala gəldi. CDNA-nın klonlaşdırılması ilə bağlı başqa bir bölmədə müzakirə olunacaq sayt yönümlü mutagenez və ifadə sistemlərinin ortaya çıxması ilə, hər hansı bir maraq mutasiyası ilə bir zülal istehsal etmək və təmizləmək mümkündür. Bu, "təkmilləşdirilmiş" protein molekullarının dizaynını və hipotezlərin geniş spektrini sınamağa imkan verir.
  8. Genetik mühəndisliyi istifadə edərək, müəyyən bir funksiyanı yerinə yetirə bilən yeni zülallar və ya protein elementlərinin birləşməsini yaratmaq mümkündür.
    • Məsələn, transkripsiyanı aktivləşdirə bilən bir zülal bölgəsini, yeni bir DNT bağlayan protein istehsal edən DNT-də müəyyən bir yeri tanıyan başqa bir zülal bölgəsi ilə birləşdirmək mümkündür. Başqa bir bölmədə müzakirə olunan iki hibrid ekranın əsasını təşkil edir.
    • İstilik sabitliyi və ya proteaz müqaviməti kimi xüsusilə arzuolunan xüsusiyyətləri artırmaq üçün zülalları dəyişdirmək də mümkündür.
  9. Xüsusi bir ferment aktivliyi və ya siqnal qabiliyyəti olan bir zülal təmizlənə bilərsə, bu, bioloji sistemlərin necə işlədiyinin vacib bir göstəricisi olaraq xidmət edir. Bir hüceyrədə müəyyən bir metabolik yolun olduğuna dair sübut, bu yolun komponentlərini kataliz edən fermentləri təcrid etməklə əhəmiyyətli dərəcədə yaxşılaşır. Müəyyən bir polipeptid böyümə faktorunun təcrid edilməsi orqanizmin angiogenez kimi xüsusi hüceyrə və ya toxuma proseslərini necə tənzimlədiyinin güclü göstəricisi ola bilər. Məsələn, angiogenez anlayışımız kapilyar formalaşmanı stimullaşdıran VEGF zülalının təcrid olunması ilə kəskin şəkildə artır. Eyni şəkildə, böyümə konusunun müvafiq əlaqələr yaratmaq üçün bədən daxilində necə hərəkət edə biləcəyini başa düşmək, böyümə konusunu (collapsin) parçalaya bilən molekullar təcrid edildikdə və təmizləndikdə kəskin şəkildə yaxşılaşır.
  10. Bir zülal təcrid edildikdən sonra, maraqlı hipotezlərə əhəmiyyətli dəstək verə biləcək və yanlış fərziyyələri təkzib edə biləcək o proteinin yerini in vivo olaraq təyin edə bilən reaktivlər (antikorlar) istehsal etmək mümkündür.
  11. Zülalların quruluş-funksiya əlaqələrini anlayaraq, bir zülalın funksiyasını in vivo test etmək üçün istifadə edilə bilən xüsusi reaktivlər hazırlamaq mümkündür.
    • Məsələn, G-zülallarının mutasiya edilməsinin yollarını başa düşmək, zülalın ya aktiv (hər zaman açıq) olması və ya heç vaxt aktivləşə bilməməsi (konstitusiya olaraq söndürülməsi), bioloqlara bu fərdi zülalların rolunu in vivo araşdırmağa imkan verir. (Siz artıq bilirsiniz ki, G zülalları GTP və ÜDM-i bağlayır və molekulyar açarlar kimi çıxış edir və GTP-nin bağlanması "açılır", ÜDM-in bağlanması "söndürülür"). Bu fikirlərin bir çoxu və onların struktur əsasları ras adlı bir zülalla işlənmişdi, lakin sonradan onlarla oxşar zülallar (məsələn, rac və rho) təcrid olundu və hamısı oxşar mexanizmlə işləyir! Beləliklə, birini başa düşmək digərlərini başa düşməyi çox asanlaşdırır və vacib sualları tez görüb düzgün eksperimental qərar qəbul edir. Ras biliyindən, konstitusiya olaraq irqi yarada biləcək xüsusi mutasiyalar proqnozlaşdırıla bilər və bu proqnozlar doğrudur.
    • Eyni şəkildə, DNT bağlayan zülalların DNT ardıcıllığını necə tanıdığını anlamaq bizə imkan verir: (1) xüsusi DNT mutasiyalarının əhəmiyyətini anlamaq, (2) dəyişdirilmiş DNT sıralarını tanıya bilən və ya bilinən bir DNT ardıcıllığını tanıya bilən zülallar dizayn etmək və (3) dizayn etmək normal olaraq hüceyrədə olan zülalların fəaliyyətinə mane olan mutant zülallar. Məsələn, bir zülalda bHLH motivi varsa (əsas Helix Loop Helix), hansı ardıcıllıqla DNT ilə qarşılıqlı əlaqədə olduğunu və hansı mutasiyaların zülalın DNT ilə bağlanmasına mane ola biləcəyini və ya hansı sekansların endogen zülallarla rəqabət apara biləcəyini yaxşı proqnozlaşdırmaq mümkündür. DNT bağlanması üçün.
  12. Nəhayət, zülal quruluşunu təyin etmək üçün x-ray difraksiya * və 2-D NMR-nin artan gücü daha çox miqdarda təmizlənmiş zülalın olmasını tələb edir. 3-D zülal quruluşunu anlamaq, zülal qatlanmasının necə idarə olunduğunu anlamağımıza imkan verdi və zülalların in vivo şəkildə necə hərəkət etdiyinə dair diqqətəlayiq bir anlayış təmin etdi. Bir ion kanalını görüntüləmək qabiliyyəti, hətta aşağı qətnamədə belə, bir elm adamının membranlardan keçən ion axını anlayışını sonsuza qədər dəyişdirməlidir. Eyni şəkildə, zülalların spesifik DNT ardıcıllığını necə tanıdığını anlamaq cəmiyyətimizin transkripsiya aktivləşdirilməsini və ya repressiyasını başa düşməsini dəyişir. Zülalın bu tip 3-ölçülü təsvirinin təsiri bioloji prosesləri təsəvvür etməyimizə dramatik təsir göstərməyə kömək edə bilməz.
    • Yeni protein quruluşunun təyin edilməsi böyük bir işdir. Hər iki metoddan istifadə etmək üçün çoxlu miqdarda saf protein olmalıdır. Kristalloqrafiya üçün protein kristalları * hazırlanmalı və defraksiya məlumatları təhlil edilməlidir. Bu məlumatların təfsir edilməsi, ümumiyyətlə ağır metal ehtiva edən bir zülalın defraksiya nümunəsi haqqında əlavə məlumatlar əldə etmək deməkdir. Bu sayt difraksiya və kristaloqrafiyanın daha ətraflı müzakirəsini təqdim edir.
    • 2D-NMR bir kristal hazırlamaq ehtiyacından qaçınır, lakin bu yanaşma daha kiçik zülallarla (təxminən 20.000-50.000 Daltondan az) məhduddur və kompleks bir məlumat dəstinin diqqətlə təhlili tələb edir. NMT-də nəzəriyyələrin və praktiki məsələlərin təsvirini bu saytlarda tapa bilərsiniz: 1 , 2 .
  13. Xüsusi amin turşusu qalıqlarının zülal funksiyasında necə iştirak etdiyini başa düşmək, xüsusən də zülalın 3-D quruluşu haqqında məlumatlarla birləşdirildikdə, zülalların xüsusi ardıcıllığının bioloji funksiyalarda necə iştirak etdiyini anlamağa kömək edir. Zülalların öyrənilməsindən əldə edilən bu cür biliklərin toplanması, DNT verilənlər bazasındakı çoxlu məlumatlar ilə birlikdə, ən yaxşı adlandırıla bilən "protein deskriptorları" nın qurulmasına imkan verdi. Bu deskriptorlar ya birincil ardıcıllıqla qorunmuş bir amin turşusu ardıcıllığından, ya da zülaldakı paylanmış amin turşularının müəyyən bir modelindən ibarət ola bilər. Tez -tez bu deskriptorlar bir zülalın əsas ardıcıllığı ilə tanına bilər, ancaq müəyyən bir tanımlayıcının həqiqi bir zülalda necə işləyəcəyini başa düşmək, belə bir təsvirin dəyərini kəskin şəkildə artıra bilər. Məsələn, proteolizin enzimologiyasını və asp-hisser katalitik triadasının əhəmiyyətini başa düşmək yeni amin turşusu ardıcıllıqlarında nümunə axtarmağı məqsədəuyğun edir. Müəyyən bir amin turşusu ardıcıllığının alfa-spiral və ya təsadüfi bir sarmal meydana gətirə biləcəyini təxmin edə bilmək bir zülalın xüsusiyyətlərini və tez-tez funksiyasını başa düşmək üçün vacib ola bilər. Bir lösin fermuarında lösin qalıqlarının bioloji paylanmasını göz önünə gətirmək, bu lösin nümunəsini böyük maraq doğurur. "Sink barmaq motivi" olan zülalların bir çoxunun transkripsiya faktorları olduğunu qəbul etmək çox vaxt zülalın funksiyasına dair bir ipucu verəcəkdir.
  14. Təmizlənmiş zülallar tez -tez təmizlənmiş sistemlərdə (in vitro) öyrənilsə də, mikroenjeksiyon sistemlərinin meydana gəlməsi, təmizlənmiş zülalların bioloji aktivliklərinin təyin oluna biləcəyi tək hüceyrələrə daxil edilməsinə imkan verir. İn vitro sistemlərdən nəzərəçarpacaq dərəcədə fərqli olaraq, mikroinyeksiya təmizlənmiş zülalın çoxlu sayda zülal və strukturlarla qarşılıqlı əlaqədə ola biləcəyi hüceyrəyə daxil edilməsinə imkan verir. İn vitroda asanlıqla bərpa edilə bilməyən kompleks dəyişiklikləri (məsələn, hüceyrə davranışı, hüceyrə forması, hüceyrə bölgüsü) öyrənmək mümkündür. Bu, ifadə vektorundan istifadə etmədən müxtəlif zülalların müxtəlif hüceyrə tiplərinə daxil edilməsinin sürətli yoludur. Klassik in vivo və in vitro tədqiqatlar arasında olan bu tip tədqiqat "in vivtro" adlandırıla bilər. Protein funksiyasını öyrənmək üçün vacib bir yanaşmadır. Eyni şəkildə, müəyyən bir zülalın inkişafına və ya fizioloji bir funksiyaya təsirini bir orqanizmə daxil edərək öyrənmək mümkündür.
  15. Bir zülalın təmizlənməsi də maraqlanan bir nuklein turşusunun təmizlənməsinə kömək edə bilər. Məsələn, hnRNT, snRNA zülalları təmizlənirsə, onlar əlaqəli RNT ilə birlikdə təmizlənə bilər və bağlı RNT gücləndirilə bilər. Qısaca olaraq prosedurdakı addımlar bunlardır: təmizlənmiş protein-RNT kompleksi etmək, məhdudlaşdırılmış RNT-ni təmizləmək, əks transkripsiya etmək, polinukleotid təbliğat quyruğu əlavə etmək, PCR gücləndirmək. Xüsusilə təmizlənmiş zülala bağlanan RNT -lər yaxınlıq seçilə, gücləndirilə və sıralana bilər.

Zülalların təmizlənməsinin məntiqi. In vitro zülalları öyrənməyin açıq dəyərinə baxmayaraq, zülalların təmizlənməsi məntiqinin nə qədər tez qiymətləndirilməməsi diqqət çəkir. Protein təmizlənməsinin məntiqini qısaca təsvir edərək başlayacağam və sonra iki xüsusi nümunə istifadə edərək məntiqi izah etməyə çalışacağam. Bir proteini təcrid etmək üçün iki şey mütləq vacibdir:

  1. Birincisi, maraq zülal üçün bir analiz olmalıdır və
  2. İkincisi, bu fəaliyyət üçün ağlabatan bir mənbəyə sahib olmaq lazımdır.

Təhlillər. Protein üçün analiz sadəcə olaraq mövcud olan müəyyən bir fəaliyyətin miqdarını kəmiyyətcə müəyyən etmək üsuludur. Təhlillər bioloqların yaradıcı olduğu qədər müxtəlif ola bilər. Aşağıdakı kimi sadə ola bilərlər:

  • NADPH birləşmiş reaksiyada oksidləşdiyi üçün udma qabiliyyətindəki dəyişikliyi ölçmək,
  • proteazlaşdırılan zülalın molekulyar çəkisinin dəyişməsi,
  • etiketli bir DNT və ya RNT parçasının bir jel üzərində yerdəyişməsi,
  • bir fraksiya bir DNT protein kompleksi meydana gətirərək filtrdə etiketli bir DNT saxlamaq qabiliyyəti,
  • radioaktiv etiketli substratın bir fiziki xüsusiyyətə malik kimyəvi maddədən digər fiziki xüsusiyyətə malik kimyəvi maddəyə çevrilməsi;
  • hüceyrə ölümünü stimullaşdırmaq qabiliyyəti, hüceyrə yayılmasını stimullaşdırmaq qabiliyyəti,
  • hüceyrə fərqliliyini stimullaşdırmaq qabiliyyəti,
  • in vivo inkişafa təsiri və ya
  • hər hansı digər ölçülə bilən miqdar.

Aşağıda görəcəyimiz kimi, seçilən hər hansı bir testin, ölçülə bilən olması, istənilən fəaliyyətin müəyyən bir hissəsində daha çox və ya daha çox olub olmadığını müəyyən edə bilməsi vacibdir. Təxminən sonsuz sayda analiz olmasına baxmayaraq, hər hansı bir analizin dəyərini qiymətləndirmək üçün istifadə edilməli olan iki meyar var:

  • Birincisi, bir sınaq təcrübə baxımından əlverişli olmalıdır. Bu, olduqca həssas və yerinə yetirilməsi asan olması deməkdir. Təhlil həssas deyilsə, bu o deməkdir ki, onun olub-olmadığını müəyyən etmək üçün böyük miqdarda fəaliyyət olmalıdır və belə böyük miqdarlar çox vaxt mövcud olmur. Eynilə, bir testin yerinə yetirilməsi üçün bir neçə gün lazım olsa, bu, təcrübi irəliləyiş üçün böyük bir maneə olacaq. Bir zülal üçün bir analiz uzun müddət davam edərsə, zülalın demək olar ki, həmişə qeyri -sabit olması və ya proteolizə məruz qalması, təmizlənməsinin qeyri -mümkün olması təbiətin bir qaydası kimi görünür.
  • İkincisi, istifadə olunan analiz maraq fəaliyyətinə xas olmalıdır. Karyerasının çox hissəsini bakterial rekombinasiyada iştirak edən zülalların təmizlənməsinə sərf edən bacarıqlı biokimyaçı Riçard Kolodner bunu Rolling Stones-un mahnısını ifadə etməklə ifadə edirdi. "Hər zaman istədiyini əldə edə bilməzsən, amma çox çalışsan, bəzən istədiyini əldə edərsən" mahnısını oxuyurdu. Beləliklə, seçilmiş analizin diqqətlə nəzərdən keçirilməsi uzunmüddətli elmi uğur üçün vacibdir. Tanınmış bir alimin laboratoriyasında çalışan bir bakalavr, bir dəfə DNT bağlayan bir zəncir zülalı olduğunu düşündüyünü təmizlədi. Onun təhlili, bu zülalın tək telli DNT-yə güclü bağlanma qabiliyyətidir. İlk qiymətləndirmədə maraqlandığı protein üçün ağlabatan bir analiz kimi görünə bilər. Təəssüf ki, bioloji rolu RNT-yə bağlanan bir protein ola bilər. həm də əhəmiyyətli DNT bağlama fəaliyyətinə malikdir. Onun vəziyyətində, təcrid olunmuş şey budur! Beləliklə, müəyyən bir analizin spesifikliyini nəzərə almaq və in vitro fəaliyyətini ekstrapolyasiya etməkdənsə, in vivo bir zülalın funksiyasını təyin etmək üçün bir metod hazırlamaq həmişə vacibdir. Burada başqa bir nümunə var. Əsas funksiyası in vivo olaraq etanolu aldehidə endirmək olan bir ferment, retinolu in vitro retinaldehidə çevirmək qabiliyyətinə malik ola bilər, bu fəaliyyətin in vivo nəticəsi olmaya bilər.

Mənbələr. İkincisi, zülalın təmizlənməsi üçün məqbul protein mənbəyi tələb olunur. Zəngin mənbədən zülalın təmizlənməsinin zəif mənbədən daha asan olduğunu başa düşmək çətin deyil. Bundan əlavə, zəngin bir mənbənin daha çox maraq doğuran zülal verməsi ehtimalı var. Hansı başlanğıc materialın sınaqdan keçirilməli olduğu seçimi tez-tez təmizlənmənin müvəffəqiyyətini və ya uğursuzluğunu müəyyən edəcəkdir. Məsələn, əzələlərdə son dərəcə kiçik konsentrasiyalarda olan asetilkolin reseptorunun təcrid edilməsi çətin və son dərəcə çətin bir işdir. Asetilkolin reseptorunun təmizlənməsi xeyli asanlaşır, baxmayaraq ki, bir elektrik şüasının elektroplaksından təmizlənərsə yenə də çətin bir işdir. Elektroplaksdakı hüceyrələrin səthlərindən biri asetilkolin reseptoru ilə sıx şəkildə doludur və bu, onun təmizlənməsini çox asanlaşdırır.

Ağlabatan bir analiz və bir material mənbəyi nəzərə alınmaqla, kifayət qədər vaxt, pul və səbr verilərək istənilən zülalı təmizləmək mümkün olmalıdır. Əlbəttə ki, işin çətin ola biləcəyi mümkündür, çünki maraq doğuran zülal son dərəcə qeyri-sabit ola bilər. Proteolizə son dərəcə həssas ola bilər və ya asanlıqla denatüre edilə bilər, detala diqqət yetirmək tez -tez bu problemlərin aradan qaldırılmasına imkan verəcəkdir. Tez -tez, zəngin bir protein mənbəyinin müəyyən edilməsi problemi, zülal üçün süni bir qaynaqla dəyişdirilərək aradan qaldırıla bilər. Bir zülalı kodlayan cDNA əldə olunarsa, zülal adətən yüksək səviyyələrdə ifadə oluna bilər və bu, eksperimentalistə dərhal üstünlük verir. Əlbəttə ki, bir çox hallarda maraq doğuran bir protein üçün gen hələ mövcud deyil.

Zülalın təmizlənməsinin strategiyası və məntiqi. Bir proteini təmizləmək üçün başlanğıc materialdan başlamalı və çox sayda fiziki və ya biokimyəvi yanaşmadan istifadə edərək parçalamalısınız.İlkin material sentrifuqalama, duz ilə çökmə, ion sütunlarına bağlanma ( ion mübadiləsi xromatoqrafiyası *), sürətin çökməsi *, tarazlıq sıxlığının çökməsi *, yaxınlıq sütunlarına bağlanması *, ölçü sütunları ilə ayrılması (bax. gel filtrasiyası) istifadə edərək fraksiyalara ayrıla bilər. xromatoqrafiya *), izoelektrik fokuslama ilə fraksiya, bilinən ligandlar və ya bağlayıcı tərəfdaşlarla əlaqə qurma qabiliyyəti və ya təcrübəçi üçün mövcud olan hər hansı bir üsul. Belə bir fraksiya əldə edildikdən sonra, maraq aktivliyi bəzi fraksiyalarda tapılmalıdır, digərlərində yox. Fəaliyyətin fraksiya prosesi ilə məhv edilmədiyini fərz etsək (demək olar ki, həmişə tamamilə doğru olmayan bir fərziyyə), fraksiya iki məqsədə xidmət edir. Birincisi, çirkləndirici materialı çıxarır, ikincisi, maraq aktivliyi olan hissəni zənginləşdirir. Zənginləşdirilmiş fraksiya daha sonra başqa bir fraksiya mərhələsinə məruz qala bilər və proses təkrarlana bilər. Fəaliyyətin miqdarı dəqiq müəyyən edilə bilərsə (analiz edilə bilər) və fraksiya içərisində olan materialın (ümumiyyətlə zülalın) ümumi miqdarı təyin edilə bilər. Hazırlığın hər bir mərhələsində spesifik aktivlik (yəni fraksiya daxilində olan maddənin ümumi miqdarına bölünən aktivlik) müəyyən edilə bilər. Yaxşı hazırlanmış bir təmizləmə prosedurunda, hər bir fraksiya mərhələsi çirklənmə materialının (zülallar, nuklein turşuları, lipidlər və başqa hər hansı bir şey) çıxarılması və xüsusi aktivliyin tədricən artması ilə nəticələnməlidir. Təbii ki, real dünyada nəinki spesifik aktivliyin artması, həm də demək olar ki, həmişə ümumi aktivliyin itirilməsi müşahidə olunur. Zənginləşdirməni maksimum dərəcədə artırmaq və itkini minimuma endirmək hər hansı bir təmizləmə sxeminin məqsədidir və yaxşı bir təmizləmə sxeminin hazırlanması çox vaxt bir sıra güzəştlərdir. Təmizləmə sxemini bütün bu ədədləri izləyən bir təmizləmə cədvəlində* ümumiləşdirmək olar. Belə bir cədvəl yalnız bir yazıda rəsmi arqumentlər hazırlamaq üçün deyil, həm də təmizləmə sxemində müəyyən bir addımın mənalı olub-olmaması ilə bağlı praktik qərarlar qəbul etmək üçün vacibdir (yəni zənginləşdirmə və məhsuldarlığın yaxşı birləşməsidirmi?). Bu proses açıq şəkildə qeyri -müəyyən şəkildə təkrarlana bilər, amma bir zülalın saflaşdırıldığını söyləmək mümkündürmü?

Təmizlik meyarları. Bu sualın klassik cavabı zülalın daimi spesifik aktivliyə təmizlənməsi və ya homojenliyə qədər təmizlənməsi ideyası ilə verilir. Daimi spesifik fəaliyyətə təmizlənmə, bir hissənin xüsusi aktivliyinin daha da təmizlənməsi ilə artırıla bilməyəcəyi deməkdir. Ciddi mənada bu o deməkdir ki, sonrakı təmizləmə cəhdləri əbəsdir, çünki fraksiyada qalan yeganə material əslində yoxlanılan fəaliyyət üçün cavabdeh olan materialdır. Təmizlənmənin son mərhələlərində, bir sütun boyunca müəyyən bir aktivliyin ölçülməsi sabit bir rəqəmlə nəticələnməlidir, yəni zülal səviyyəsində bir artım olduğu üçün aktivlik səviyyəsində müvafiq bir artım olmalıdır. Beləliklə, bu klassik meyar əslində mənfi bir meyardır, bu daimi olaraq müəyyən bir fəaliyyət üçün saf və ya saflaşdırıldığını iddia etdiyimiz hissədə çox az miqdarda kənar materialın olması və ya olmamasıdır. Əslində insan heç vaxt təmizliyə nail ola bilməz. Yalnız materialın 90%, 99% və ya 99,99% təmiz olduğunu iddia edə bilərsiniz. Bu fakt, müəyyən bir material haqqında açıqlamalar verərkən həmişə xatırlanmalıdır, ancaq müəyyən bir fəaliyyətin müəyyən bir polipeptiddə və ya polipeptidlərin birləşməsində və ya iki fərqli enzimatik fəaliyyətdə (məsələn, DNT-polimerazda) olduğunu iddia etmək üçün güclü bir şəkildə istifadə edilə bilər. aktivlik və ekzonükleaz aktivliyi) eyni zülalda olur. Əgər iki fəaliyyətin birgə fraksiyalaşdığını göstərmək olarsa, bu, onların eyni zülalda ola biləcəyini göstərir. Təkrar cəhdlərdən sonra iki fəaliyyət ayrıla bilmirsə, mübahisə daha da güclənir. Əgər onların hər ikisi bir peptid və ya bir qrup peptid (zülal kompleksinin alt bölmələri) ilə birgə fraksiyalaşarsa, onda arqument çox güclü olur. Təbii ki, paklıq ancaq aşkarlana bilənlər baxımından müəyyən edilə bilər. Əgər nuklein turşusu ölçülmürsə, zülal zülal baxımından təmiz ola bilər, lakin çirkləndirici nuklein turşusu və ya çirkləndirici karbohidrat ola bilər. Bəzi hallarda, bir karbohidrat və ya nuklein turşusunun olması əslində bir enzimatik aktivliyin vacib bir komponenti ola bilər və bu, bir zülalın nuklein turşusuna nisbətinin də fraksiya mərhələsində sabit olduğunu göstərməklə dəqiq şəkildə müəyyən edilə bilər.

SDS gel və ya poliakrilamid gel* üzərində tək bir zolaq varsa, zülalın təmiz olduğu ifadəsini tez-tez eşidə bilərsiniz (bax: SDS gel*). Bu iddiada bir az həqiqət və bir az yalan var. Poliakrilamid jelində aşkar edilə bilən tək bir zülal varsa, bu o hissədə ekvivalent bolluğun başqa heç bir zülalının olmadığını göstərir. Bir fraksiya 10x, 100x və ya 10,000x daha çox protein ayırırsa, nəticədə çirkləndirici bantlar tapılmalıdır. Yenə də təmizlənmə kəmiyyət məsələsidir. Eynilə, bəzi fəaliyyətlər əslində birdən çox zülalın birləşməsidir (ferment çoxlu alt vahidlərə malik ola bilər) və buna görə də aktivlik homojenliyə qədər təmizləndikdən sonra təmizlənmiş preparat müəyyən bir stoicheometriyada polipeptidlərin və ya hətta polipeptidlərin və nuklein turşularının birləşməsinə malik olmalıdır. ferment aktivliyi üçün tələb olunur.

Daimi xüsusi fəaliyyət üçün təmizlənmənin ümumiliyi. Sonda qeyd etmək lazımdır ki, bu cür məntiq yalnız zülalların təmizlənməsinə aid deyil. İstər lipid, istər alkaloid, istər psixotrop maddə, istərsə də xərçəng əleyhinə dərman, karbohidrat və ya vitamin olsun, hər hansı digər maddənin fraksiyaya bölünməsi eyni dərəcədə doğrudur. Parçalamaq, ümumi materialın bolluğunu ölçmək və müəyyən bir fəaliyyəti müəyyən etmək qabiliyyəti bioloji və biotibbi tədqiqatların bütün aspektlərində güclüdür.

Zülalların parçalanması və SDS jellərinin dəyəri. Zülal fraksiyasını təsvir etmək bu araşdırmanın əhatə dairəsindən kənardadır. Bu sahədə bacarıq zülal kimyası və fiziki biokimya biliklərini tələb edir. Zülalların təmizlənməsinin məntiqini başa düşmək üçün zülalları xüsusiyyətlərinə görə ölçüsünə, formasına, çökmə sürətinə, müxtəlif ion qruplarına bağlanma qabiliyyətinə, substratlara yaxınlığa görə ayıra bilən geniş bir yanaşma olduğunu bilmək vacibdir. və ya yalançı substratlar, həll olma qabiliyyəti, stabillik və s. Bu xüsusiyyətlər fərqli zülallar üçün fərqlidir. Beləliklə, zülallar arasında nuklein turşularından daha çox dəyişkənlik var.

SDS poliakrilamid jelləri, bir qarışıqda hansı zülalların olduğunu təyin etmək üçün asanlıqla istifadə edilə bilən sadə, asanlıqla əldə edilə bilən, analitik bir vasitə təmin edir. Bu vacibdir, çünki:

  • bu texnika multimerik zülalları ayırır və peptidləri molekulyar çəkiyə görə ayırır (SDS gellərindəki lüğət girişinə baxın)
  • hər bir peptidin molekulyar ağırlığının qiymətləndirilməsinə imkan verir
  • həssasdır (Comassie Brilliant Blue ilə boyanma ilə təxminən 0,1 mikroqram aşkar edilə bilər və "gümüş rəngləmə" təxminən 100 dəfə daha həssasdır)
  • zülal modifikasiyasına həssasdır (qlikozilləşmə və fosforlaşma tez-tez hərəkətliliyi dəyişir)
  • 50 və ya daha çox zülalın həllinə icazə verə bilər
  • zülalların sintezini və dövriyyəsini öyrənmək üçün izotopik etiketləmə ilə birləşdirilə bilər
  • antigenləri izləmək üçün dəyişdirilə bilər (bax western blotting )
  • sürətlidir (bir günün bir hissəsində edilə bilər)
  • öyrənmək asandır və bütün protein qarışıqları üçün eyni şəkildə edilir
  • əlbəttə ki, zülalları denatürasiya edir, belə ki, bioloji aktivlik adətən (lakin həmişə deyil) itirilir.

Zülalların təmizlənməsi və klonlaşdırmaya keçiddə strateji qərarların və şansların təsviri

Yuxarıda qeyd olunan mülahizələrin (və klonlaşdırma körpüsü) əhəmiyyətinin əla bir hekayəsi, NGF (sinir böyümə faktoru), BDNF (beyin mənşəli nöronal trofik faktor) və NT-3 (neyrotrofinlər ailəsinin 3 üzvünün təmizlənməsidir) neyrotrofin 3). Bu hekayə yarım əsrdən çox bir dövrü əhatə edir, lakin o, müvafiq analizin seçilməsinin, rahat analizlərin işlənib hazırlanmasının və zülalın təmizlənməsi üçün müvafiq mənbənin seçilməsinin vacibliyini göstərir.

Bioloji anlayış. Sinir böyüməsi faktorunun mövcudluğuna dair ilk sübut, sinirlərin sağ qalması və sinir fərqliliyini gücləndirmək üçün fəaliyyət göstərən, yayılmış, ifraz olunan bir polipeptid olduğu laboratoriyada neyroembriologiya təhsili alan Dr.Rita Levi-Montalcini anlayışı ilə başlayır. Viktor Hamburgerdən. Bu laboratoriya cücə əzalarını köçürməyin və ya götürməyin sinir sisteminin inkişafına təsirini öyrənirdi. Köçürülən əzalar nəinki inkişaf edə bilər, həm də innervasiya edilə bilərdi və neyroanatomik iş innervasiya ediləcək hədəfin ölçüsü (transplantasiya ilə artırıla və ya amputasiya ilə azaldıla bilər) ilə müvafiq orqanlardakı neyronların sayı arasında uyğunluğu göstərdi. hədəfi innervasiya etmək üçün yer. Əhəmiyyətli töhfələrdən biri əlavə əzaların transplantasiyasının yalnız sinir sisteminin bölgəsində bu hədəfi innervasiya edən neyronların deyil, həm də hədəfi innervasiya etməyən sinirlərin sayını artırdığını müşahidə etmək idi. Bu, sinirlərin sayını artırmaq üçün bir məsafədə hərəkət edə biləcək gizli bir yayılmış faktorun ola biləcəyi fikrini irəli sürdü. Ağıllı bir təcrübə bu fərziyyəni təsdiqlədi. İnkişaf edən cücə yumurtasının xorioallantoik membranının üstünə toxumanın (hətta şiş toxumasının) əlavə edilməsi, inkişaf edən embrionda sinir sayının artması ilə nəticələndi. (Xorioallantoik membran, inkişaf etməkdə olan embrionu yumurtanın içindəki hava cibindən ayıran membrandır. Qazlara və kiçik molekullara keçir, lakin hüceyrələrə nüfuz etmir, buna görə hüceyrə-hüceyrə təması yoxdur). Bu, neyronların taleyini idarə edən bir növ faktorun olması lazım olduğunu göstərdi və Dr. Levi-Montalcini bu amili təmizləmək üçün yola çıxdı.

Birinci dərs. Bu hekayə başlayanda təmizlənəcək faktorun zülal və ya başqa bir molekul forması olması həqiqətən də aydın deyildi. Daha da əhəmiyyətlisi, bu faktorun əsl bioloji aktivliyinin sinirlərin sayını artırmaq olub -olmadığı məlum deyildi, bu da problemi izah etməyin ən asan yolu və ya neyronların sağ qalmasına təsir edəcək. Nəhayət, nümayiş etdirildi ki, sinir böyümə faktorunun təsiri embriogenezin gec dövrlərində mövcud olan hüceyrə ölümünün miqdarına nəzarət etmək idi və nəticədə neyronların sayının və ölçüsünün artmasına səbəb olan hüceyrə ölümünə təsir etdi. neyron qrupları (gangliya adlanır). Bu NGF hərəkət mexanizminin qurulması, müasir nörobiyologiyanın ən əhəmiyyətli konseptual inkişaflarından biri idi və apoptoz anlayışına böyük bir fikir verdi. Yalnız çox sonra, sinir böyümə faktorunun əslində bir çox başqa fəaliyyətə sahib olduğu nümayiş etdirildi. Erkən neyroblastda o, bölünməyə kömək edə bilər və bu mənada klassik mitogen faktordur. Hal-hazırda aparılan işlər, sinir artım faktorunun, sinir olmayan dəstəkləyici hüceyrələr, lakin periferik sinir sistemindəki miyelinat sinirləri olan Schwann hüceyrələrinə təsirini nümayiş etdirir. Güman ki, bu bioloji aktivlik də sinir artım faktorunu təmizləmək üçün bir yol ola bilərdi. Bu vəziyyətdə, Schwann hüceyrə faktoru və ya digər əlaqəli bir ad olaraq sinir böyümə faktoruna istinad edərdik. Bu heç də qeyri -adi bir vəziyyət deyil. Fibroblast böyümə faktoru ailəsinin çox sayda fərqli toxumaya çoxlu təsiri var və buna görə də ailənin ilk iki üzvü olan aFGF və bFGF birdən çox laboratoriya tərəfindən yenidən kəşf edildi və dəyişdirildi və erkən ədəbiyyatda bu böyümə faktorları üçün ən az 27 fərqli ad var. . Beləliklə, 'analiz etdiyiniz şeyi alırsınız', ancaq əldə etdiyiniz şeylər bəzi gözlənilməz sürprizlər tuta bilər.

Dərs 2. Qanqliyanın ölçüsünü və qanqlionda sağ qalan neyronların sayını təyin etmək üçün lazım olan nöroanatomik analiz. İnkişaf etməkdə olan bir cücədə, şübhəsiz ki, vaxt aparan və çətin olur. Güman ki, belə bir fenomen bir böyümə faktoru üçün bir analizin əsasını təşkil edə bilər, lakin iş, əlbəttə ki, olduqca yavaş irəliləyəcəkdir.

İnkişaf etməkdə olan cücənin bir analiz sistemi olaraq istifadəsinin çətinliyi, toxuma mədəniyyətini öyrənmək üçün Rio de Janeyrodakı Braziliya Universitetində Dr. Carlos Chagusun laboratoriyasına baş çəkmək qərarına gələn Dr. Levi-Montalcini tərəfindən tam qiymətləndirildi. Bu laboratoriya gənc heyvanlarda dorsal kök qanqlionlarını təcrid etmək və bu qanqliyaların mədəniyyətdə sağ qalmasına imkan verən üsullar hazırlamağa müvəffəq olmuşdur. Dorsal kök ganglionlarını (DRG) təcrid etmək üçün lazım olan əməliyyat nisbətən düzdür və bir çox dorsal kök ganglionu qısa bir prosedurda təcrid edilə bilər. Doktor Levi-Montalcini, ziyarətçi bir alim olaraq, sarkoma-180 (və ya S-180) adlanan bir şiş növü ilə dorsal kök ganglionlarının kulturasının DRG-nin dramatik morfoloji dəyişikliyi ilə nəticələndiyi monumental kəşf etdi. DRG, sonrakı təhlillər zamanı neyron tərəfindən istehsal olunan uzantılar olduğu aydın şəkildə nümayiş etdirilən bir "halo" proseslər yaratdı. Bu, yalnız bioloji mənada öyrənilən molekul haqqında bir şey göstərdiyinə görə deyil, həm də bəlkə də daha da önəmlisi, zülalın təmizlənməsində istifadə edilə bilən rahat bir analiz verdiyinə görə əhəmiyyətli bir irəliləyiş idi.

Dərs 3. DRG analizinə keçid vacibdir. Birincisi, analizlərin tez bir zamanda aparılması rahatdır və icazə verilir (yaxşı bir analizin əlamətlərindən biri), eyni zamanda vacibdir, çünki bu, test olunan cavab növündə incə bir dəyişiklikdir. Bu analiz indi neyrit uzatma faktorunun axtarışıdır və belə bir amil inkişaf zamanı neyronların sayının artırılmasında iştirak edə bilər və ya olmaya da bilər. Nəticədə, NGF -nin həm sağ qalmağa, həm də nevrit genişlənməsi kimi fərqli xüsusiyyətlərin ifadəsinə təsir göstərdiyi doğrudur, buna görə də analiz sistemindəki keçid təsadüfən baş verdi. Şübhəsiz ki, tarix fərqli bir istiqamət götürə bilərdi. Biri nevritin uzanması ilə, ikincisinin isə hüceyrənin sağ qalması ilə əlaqəli iki faktor ola bilər. Bu halda analiz sistemlərində keçid iki amildən yalnız birinin təcrid olunması və təmizlənməsi ilə nəticələnəcək. Belə bir vəziyyətdə asan bir təhlili izləmək və istifadə etmək qərarı daha məntiqli ola bilərdi, ancaq hər iki fəaliyyətdən də tək bir molekulun məsul olması doktor Levi-Montalcini və iş yoldaşının uğurları idi.

Bu analizlə, Dr. Levi-Montalçini sinir böyümə faktorunu bir şiş olan sarkomadan-180-dən təmizləmək üçün yola çıxdı və buna görə də nisbətən böyük ölçüdə əldə edilə bilən maraq faktorunun kifayət qədər homojen mənbəyi olması üstünlüyünə sahib idi. miqdarda, zülalların təmizlənməsində vacib məqamlar. Təəssüf ki, sarkoma-180-də NGF-nin səviyyəsi olduqca kiçikdir və buna görə də mənbədən təmizlənmə zamanı qarşılaşa biləcək itki çətinliyi 50-ci illərin əvvəllərində zülalların təmizlənməsi texnologiyasının ondan daha az mürəkkəb olduğu zaman keçilməz olardı. bu gündür. Təsadüfən və ya bəlkə də böyük ağılların məhsuldar tədqiqat xətlərini müəyyən edib izlədiyinin göstəricisi olaraq, bu problem maraqlı hadisələr silsiləsində aradan qaldırıldı. 50-ci illərin əvvəllərində zülalların təmizlənməsinə yanaşmalardan biri zülalların həll edilməsinə kömək etmək üçün toxumanın qismən proteolizindən ibarət idi. O zaman, ilan zəhəri tez-tez yaxşı bir proteaz mənbəyi olaraq istifadə olunurdu və buna görə də S-180-dən çıxarışlar ilan zəhərindən alınan proteazlarla müalicə olunurdu. Protein təmizlənməsini (yəni protein səviyyəsini və bioloji aktivliyi izləyən) izləmək üçün lazım olan mühasibat uçotunu apararkən, proteolizin həqiqətən də bioloji aktivliyin əhəmiyyətli dərəcədə artması ilə nəticələndiyi aşkar edilmişdir. Nəzarətlər, bioloji aktivliyin bu artımının, əslində, S-180-dən daha çox faktor mənbəyi olan ilan zəhərindən əldə edildiyini göstərdi. Bu, təmizlənmə mənbəyini S-180-dən ilan zəhərinə çevirmək qərarına səbəb oldu. İlan zəhəri faktorun zəngin mənbəyidir, lakin onu çox miqdarda əldə etmək asan deyildi və bahalı idi. Buna görə də zəhər istehsalından məsul olan bezlə əlaqəli ola biləcək digər toxumaların araşdırılması qərarı verildi. Siçan tüpürcək bezinin ilan zəhərindən daha asan əldə edilə bilən bol sinir böyümə faktoru mənbəyi olduğu ortaya çıxdı. Beləliklə, böyümə faktorunu tüpürcək bezindən təmizləmək üçün eksperimental strategiya yenidən dəyişdirildi. Zəngin bir mənbədən təmizləmək daha asandır.

Dərs 4. Zəngin bir böyümə faktoru aktivliyinin mənbəyinin müəyyən edilməsi, zülalın təmizlənməsinin iki əsas komponentini hazırladığından bu hekayədə əhəmiyyətli bir əlamət idi. Dr. Levi-Montalcini və onun əməkdaşları indi həm kifayət qədər əlverişli analizə, həm də zəngin NGF mənbəyinə malik idilər və bu birləşmə onlara faktoru homojenliyə qədər təmizləməyə imkan verdi. Zülalların təmizlənməsində mühüm dərslər verən iki maraqlı köməkçi hekayə var.

  • NGF təmizləmə mənbəyi olaraq siçan tüpürcək vəzilərinə keçidlə bağlı maraqlı bir sual, S-180-dən təmizlənmə səyləri davam etdirilsəydi, eyni molekulun təsbit edilib-edilməyəcəyidir. 1980 -ci illərdə, biz (John Wagner və Pat D'Amore), asidik FGF -nin, PC12 hüceyrələrində NGF səbəb olduğu ilə fərqlənməyən nevrit genişlənməsinə səbəb ola biləcəyini kəşf etmişdik. Sarkoma-180-nin həqiqətən NGF deyil, turşu FGF istehsal edə biləcəyi sualına yenidən baxmağa qərar verdik. Sarkoma-180 ekstraktları heparinə yaxınlıq sütunlarında fraksiyalaşdırıldı və ekvivalent ölçülü iki zirvə təcrid olundu, biri turşulu FGF mövqeyində, ikincisi isə NGF mövqeyində elüt edildi! Sarkoma-180 NGF təmizlənməsi üçün material mənbəyi olsaydı və əvvəlki zirvəsi ikincisindən çox seçilsə, Dr Levi-Montalcini və onun əməkdaşları tərəfindən təmizlənmiş molekulun indi bildiyimiz molekul ola biləcəyini düşünmək maraqlıdır. turşu FGF.
  • Bu tədqiqat xəttindən gələn başqa bir maraqlı hekayə epidermal böyümə faktorunun (EGF) kəşfidir. NGF təmizləndikdən sonra bu amilə qarşı antikorlar lazım idi. Sinir böyümə faktoru hazırlıqları antiserum istehsal etmək üçün dovşanlara enjekte edildi, lakin bu enjeksiyonun təsirlərindən biri də, enjekte edilmiş dovşanlardan doğulan körpələrin vaxtından əvvəl gözlərini açması idi. Dr Cohen, bioloji aktivliyi izləmək üçün bir analiz olaraq istifadə etməyə qərar verdi və bu, EGF -nin tanınmasına və təmizlənməsinə səbəb olan ilk ipuçlarından biridir. EGF klassik mitogen kimi geniş şəkildə öyrənilmiş ilk təmizlənmiş böyümə faktorudur. Bir daha dediyinizi alırsınız.

Dərs 5. Sinir böyümə faktorunun (Varon et al Biochemistry 6: 2202 (1967) və ya Bocchini and Angeletti (PNAS 64: 787 (1969)) və ya bu sənədlərdəki istinadların təmizlənməsi ilə bağlı bəzi ilkin sənədləri oxumaq öyrədicidir. .Bu sənədlər klassik protein təmizlənməsi nümunələridir və hər ikisi də bioloji aktivliyin tək bir zülalda olduğuna dair sübutları müzakirə edir. İlkin təmizlənmə bir çox təmizləmə addımları tələb etdi və olduqca zəhmətli idi, lakin onlar NGF strukturunun qurulmasına imkan verdilər.

NGF quruluşunu başa düşmək və qiymətləndirmək digər işçilərə son dərəcə sürətli və səmərəli zülal təmizləmə sxemləri hazırlamağa imkan verdi. Mobley və başqaları. tüpürcək bezlərindən sinir artım faktorunun yüksək konsentrasiyası ilə nəticələnə bilən sürətli, iki addımlı bir təmizləmə prosesi hazırladı (Biokimya, 15: 5543). Bu təmizlənmə ilkin olaraq tüpürcək vəziləri tərəfindən ifraz olunan sinir böyümə faktorunun formasının böyümə faktorunun aktiv forması (beta NGF adlanır) və bir neçə digər zülal molekulları arasında kompleks olduğuna dair biliklərə əsaslanır. Bu kompleks 7S NGF olaraq bilinir. Ekstraktlar tüpürcək bezindən hazırlanırsa və zibil çıxarılırsa, ekstraktlar heç bir zülal (bəlkə də 2%) çıxarmayan bir addımda bir CM-selüloz sütunundan (c arboxy m ethyl üçün) keçə bilər və buna görə də heç bir zənginləşmə ilə nəticələnmir. NGF. Bu sütundakı fraksiya aşağı pH səviyyəsinə uyğunlaşdırılarsa, bəzi maddələr çökər və 7S NGF ayrılaraq beta NGF əmələ gətirər. Əgər həll sonra birinci sütun fraksiyalanmasında istifadə olunan eyni pH və duz şərtlərinə qaytarılır və ikinci bir sütundan keçirsə, beta NGF, 7S NGF -dən fərqli olaraq, zülalların böyük əksəriyyəti keçərkən sütuna yapışır. vasitəsilə. (Bu şərtlərdə sütuna yapışacaq olan zülallar ilk sütun mərhələsində çıxarılır). İkinci sütuna yapışan yalnız iki zülal var və bunlar yüksək pH və yüksək duz ilə ardıcıl yuyulma ilə təcrid edilə bilər. Bu zülallardan ikincisi 99% -dən çox saf olan NGF -dir.

Mobley və həmkarları tərəfindən hazırlanan təmizləmə sxemi sürətlidir, çünki zülalın məlum quruluşundan ağıllı şəkildə istifadə edir. NGF -nin bol bir qaynaqda olduğu bir toxuma əsaslanır. Nəticədə, bir həftədən az müddətdə homojen bir zülalın milliqram miqdarını təmizləmək mümkündür. Bu, ilk NGF təmizləmələrini aparmaq üçün lazım olan çox həftəlik işlərdən daha sürətli və daha asandır.

Dərs 6. NGF-nin təmizlənməsi 80-ci illərin əvvəllərinə qədər həyata keçirilməyən BDNF-nin təmizlənməsindən kəskin şəkildə fərqlidir. NGF-yə bənzər aktivliyə malik olan başqa bir proteini təcrid etməyə cəhd etmək qərarı sağlam bioloji arqumentə əsaslanırdı. BDNF -nin təmizlənməsinə başladığı zaman, NGF -ə bənzər fəaliyyətlərə sahib olan, lakin fərqli bir bioloji quruluşa malik olan digər faktorların olması lazım olduğu bilinirdi. Bu, bir çox neyronun təbii olaraq meydana gələn hüceyrə ölümü dövründən keçdiyi üçün bilinirdi, halbuki populyasiyaların yalnız bir qismi NGF -ə reaksiya verdi. Bir çoxlarına, hüceyrə ölümünün dərəcəsini idarə edən digər amillərin olması lazım olduğu aydın görünürdü. Silvio Aaron (yuxarıda müzakirə edilən NGF-nin təmizlənməsi haqqında məqalənin ilk müəllifi) periferik sinir sistemində sinir böyümə faktorunun fəaliyyətinin katekolaminlər (epineferin və norepineferin) ifraz edən hüceyrələrlə məhdudlaşdığını yüksək qiymətləndirdi. asetilkolin ifraz edən hüceyrələrə təsir göstərir. Buna görə də o, Dr. Levi-Montalçininin strategiyasına bənzər bir strategiyadan istifadə etmək qərarına gəldi, lakin DRG-ləri qanqlion kimi istifadə etmək əvəzinə, zülal ekstraktlarının siliyer qanqliona təsirini öyrənməyi seçdi və bu fikir sonda CNTF-nin təmizlənməsinə səbəb oldu ( siliyer neyron trofik faktor) özlüyündə olduqca maraqlı bir hekayədir, amma burada təqdim etməyəcəyəm.

BDNF (Beyin Törəmə Nörotrofik Faktor), beyində mövcud olan neyrotrofik bir faktora verilən addır. Beyin nisbətən böyük miqdarda əldə edilə bilən üstünlüklərə malikdir və biokimyaçı baxımından böyümə faktoru fəaliyyətinin əla mənbəyi ola bilər. Bir gənc alim, Dr Barde və həmkarları, neyrotrofik bir amili təmizləmək üçün beyni bir qaynaq olaraq istifadə etmək qərarına gəldilər və beyin ekstraktlarının neyroblastoma xəttinə təsirini analiz olaraq istifadə etdilər. Bu, əlverişli bir analiz idi, lakin təbii ki, transformasiya olunmuş sinir xətti olan neyroblastoma in vivo maraq doğuran bioloji aktivliyə malik olan amil üçün yaxşı bir analiz olacağını güman edirdi. Doktor Bard, gənc bir alim olaraq, olduqca çətin bir layihə seçmişdi. Beyində bir fəaliyyət var idi, ancaq homojenliyə uyğunlaşdırmaq üçün hər bir işdə əhəmiyyətli itkilər olan nisbətən çox sayda addım atmalı idi. O, BDNF-ni 2-D geldə fraksiyadan sonra tək zolaq kimi müəyyən etmək üçün bir milyon dəfədən çox təmizləməli idi! Əksər biokimyəvi tədqiqatlar üçün yararsız olacaq az miqdarda material əldə etdi (EMBO 1: 549), lakin bir kəşf dalğası bioloji tədqiqatlara rekombinant texnologiyanı tətbiq etdi. Bu qrup BDNF -ni beyindən təmizləmək və bioloji aktivliyini öyrənmək əvəzinə, BDNF üçün bir cDNA təcrid etməyə və molekulu rekombinant mənbələrdən təmizləməyə qərar verdi. Bu qərar, cDNA klonlaşdırılmasının əhəmiyyətindən danışacağımız növbəti bölməmizə giriş kimi xidmət edir, lakin bu fəsildə BDNF-nin klonlaşdırılmasının əhəmiyyəti həqiqətən də ondan ibarətdir ki, BDNF-nin süni sistemlərdə ifadəsi bu tədqiqatçılara çoxlu bir mənbə verdi. BDNF-nin nisbətən yüksək konsentrasiyalarda mövcud olduğu BDNF. Bu, onlara BDNF-ni sürətlə təmizləməyə və onun bioloji təsirlərini öyrənməyə imkan verdi. Bundan əlavə, BDNF -ni klonlaşdırmaq və ifadə olunan zülalın bioloji aktivliyə malik olduğunu göstərmək, doğru molekulun təmizləndiyini və klonlandığını göstərən güclü sübut idi. Bu, müəyyən bir zülalda bioloji aktivliyin ola biləcəyinin qeyri-ənənəvi sübutudur, lakin inandırıcıdır. Ciddi olmaq üçün klassik sübutlarla birləşdirilməlidir (məsələn, klonlanmış molekulun bioloji aktivliyin yalnız bir hissəsi olması və ya real aktivliyin ifadəsini aktivləşdirən tənzimləyici molekul ola bilər və s.). Bu texnoloji irəliləyişlər səbəbindən BDNF tarixi, şübhəsiz ki, NGF tarixindən daha sürətlə irəliləmişdir.

Son dərs və cDNA klonlaşdırma strategiyasına bir körpü. BDNF-ni kodlayan cDNA NGF-yə çox homolog olan bir zülal proqnozlaşdırdı. Beləliklə, BDNF, NGF böyümə faktorları ailənin üzvü hesab edilə bilər. NGF və BDNF-nin müqayisəsi göstərdi ki, güclü homologiyalı bölgələr və zülalların daha az qorunduğu bölgələr var. Güclü homologiyanın bu bölgələrinin ailənin digər üzvlərində də mövcud ola biləcəyinə dair fərziyyə irəli sürərək, əgər həqiqətən də belə digər üzvlər mövcud idisə, sırf hipotetik zülalın ilkin quruluşuna əsaslanaraq, digər ailə üzvləri üçün cDNT-nin təcrid edilməsi strategiyasını tərtib etmək mümkündür. və onun cDNA-sı (bu vaxta qədər NGF üçün cDNT başqa yerdə təsvir olunduğu kimi məlum ardıcıllıq əsasında yaradılan oliqonukleotid zondu ilə təcrid olunmuşdu).

Homologiyanın bölgələrini seçərək aralarında PCR apararaq həm NGF, həm də BDNF -ə uyğun məhsullar meydana gəldi, lakin yeni bir cDNA üçün tarama üçün zond olaraq istifadə edilə biləcək başqa bir məhsul da var idi. Bu strategiya, son dərəcə sürətli bir şəkildə və NGF və ya BDNF əldə etmək üçün tələb olunandan daha az səylə yeni bir cDNA və müvafiq proteinin təcrid olunmasına gətirib çıxardı (Hohn et al, Nature, 344-399 (1990)). Neyrotrofinlər ailəsinin üçüncü üzvü NT-3 adlanır. NT-3 üçün cDNT-ni təcrid etmək mümkün olduğundan, onu təbii mənbələrdən təmizləmək üçün heç vaxt zəhmətli prosesdən keçmək lazım deyildi.


Molekulyar Hüceyrə Biologiyası. 4-cü nəşr.

Orqanizmin inkişafı və funksiyası böyük ölçüdə genlər tərəfindən idarə olunur. Mutasiyalar kodlaşdırılmış bir zülalın strukturunda dəyişikliklərə və ya ifadəsində azalmaya və ya tam itkiyə səbəb ola bilər. DNT ardıcıllığındakı bir dəyişiklik kodlanmış zülalın bütün nüsxələrini təsir etdiyindən mutasiyalar xüsusilə bir hüceyrəyə və ya orqanizmə zərər verə bilər. Bunun əksinə olaraq, RNT və ya protein molekullarının sintezi zamanı meydana gələn hər hansı bir dəyişiklik daha az ciddidir, çünki hər bir RNT və zülalın bir çox nüsxəsi sintez olunur.

Genetiklər çox vaxt orqanizmin genotipi və fenotipi arasında fərq qoyurlar. Ciddi desək, bir fərdin daşıdığı bütün genlər onun genotipidir, halbuki fərdin funksiyası və fiziki görünüşü onun fenotipi adlanır.. Bununla belə, iki termin adətən daha məhdud mənada istifadə olunur: genotip adətən fərdin tək bir gendə (və ya az sayda gendə) mutasiyaların olub-olmamasını, fenotip isə həmin genotipin fiziki və funksional nəticələrini bildirir.


Niyə varfarin C zülalının bioloji aktivliyini azaldır? - Biologiya

Dərin vena trombozu (DVT) və ya ağciyər emboliyası (PE) kimi qan laxtasının (tromboembolizm) səbəbini araşdırmaq üçün sizdə protein C və ya protein S çatışmazlığının olub olmadığını müəyyən etmək üçün

Səbəbi bilinməyən qan laxtası olduqda, xüsusən də klassik risk faktorlarınız olmadıqda, gənc yaşda (50 yaşdan kiçik) və ya qeyri-adi bir yerdə yeni doğulmuş körpənizdə ağır laxtalanma pozğunluğu olduqda, bəzən qan laxtalanması yaxın qohumun C və ya S vitamini çatışmazlığı var

Qolunuzdakı bir damardan alınan qan nümunəsi

Bu testi etməzdən əvvəl qan laxtanız müalicə olunana və aradan qalxana qədər gözləməlisiniz. Sizə həmçinin antikoaqulyant terapiyanı dayandırmaq göstərişi verilə bilər. Həkiminiz tərəfindən verilən bütün təlimatlara əməl edin.

Test nəticələrinizi laboratoriyanın veb saytında və ya xəstə portalında tapa bilərsiniz. Bununla birlikdə, hazırda Lab Tests Online -dasınız. Sizə yerinə yetirdiyiniz test (lər) haqqında məlumat vermək üçün laboratoriyanızın veb saytı tərəfindən bura yönləndirilmiş ola bilərsiniz. Test nəticələrini əldə etmək üçün laboratoriyanızın veb saytına və ya portalına qayıtmalı və ya həkiminizlə əlaqə saxlamalısınız.

Laboratoriya Testləri Onlayn laboratoriya testləri haqqında məlumat təqdim edən, mükafat qazanan xəstə təhsili veb saytıdır. Laboratoriya alimləri və digər tibb mütəxəssisləri tərəfindən nəzərdən keçirilmiş saytdakı məzmun, saytda qeyd olunan hər bir test üçün nəticələrin nə demək ola biləcəyinə dair ümumi izahatlar təqdim edir, məsələn, yüksək və ya aşağı qiymətin sizin həkiminizə nə təklif edə biləcəyi kimi. sağlamlıq və ya tibbi vəziyyət.

Testləriniz üçün istinad diapazonları laboratoriya hesabatınızda tapıla bilər. Onlar adətən nəticələrinizin sağında tapılır.

Laboratoriya hesabatınız yoxdursa, istinad aralığını əldə etmək üçün həkiminizə və ya test (lər) i yerinə yetirən laboratoriyaya müraciət edin.

Laboratoriya testlərinin nəticələri özlüyündə mənalı deyil. Onların mənası istinad diapazonları ilə müqayisədən irəli gəlir. İstinad aralığı sağlam bir insan üçün gözlənilən dəyərlərdir. Onlara bəzən "normal" dəyərlər deyilir. Test nəticələrinizi istinad dəyərləri ilə müqayisə edərək, sizin və səhiyyə xidmətinizin əməkdaşının test nəticələrinizdən hər hansı birinin gözlənilən dəyərlər aralığına düşmədiyini görə bilərsiniz. Gözlənilən aralığın xaricində olan dəyərlər, mümkün şərtləri və ya xəstəlikləri müəyyən etməyə kömək edəcək ipuçları verə bilər.

Laboratoriya testlərinin dəqiqliyi son bir neçə onillikdə əhəmiyyətli dərəcədə inkişaf etsə də, sınaq cihazları, kimyəvi reagentlər və texnika fərqləri səbəbindən bəzi laboratoriyalar arası dəyişkənliklər meydana gələ bilər. Bu saytda bu qədər az istinad aralığının verilməsinin səbəbidir. Nəticələrinizin "normal məhdudiyyətlər daxilində" olub olmadığını qiymətləndirmək üçün testinizi həyata keçirən laboratoriyanın təqdim etdiyi diapazondan istifadə etməli olduğunuzu bilmək vacibdir.

Ətraflı məlumat üçün, istinad aralığı və nə demək istədiklərini oxuyun.

Protein C və protein S qanda qan laxtasının əmələ gəlməsini tənzimləməyə kömək edən iki zülaldır. Mümkün olan həddindən artıq laxtalanma pozğunluğunun araşdırılması çərçivəsində bu zülallar üçün iki ayrı test tez -tez birlikdə aparılır. Testlər hər bir proteinin miqdarını ölçür (antigen testləri) və düzgün funksiyalarını yerinə yetirdiklərini qiymətləndirir (aktivlik testləri).

Normalda, bir bədən toxuması və ya damar divarı zədələndikdə, qanaxmanın dayandırılmasına kömək etmək üçün zədələnmə yerində hemostaz adlanan bir proses meydana gəlir. Trombosit adlanan kiçik hüceyrə parçaları yerə yapışır və toplanır və laxtalanma faktorları adlanan zülallar bir -birinin ardınca aktivləşdikcə laxtalanma kaskadı başlayır. Nəhayət, sabit bir laxta meydana gəlir, əlavə qan itkisinin qarşısını alır və zədələnmiş sahə yaxşılaşana qədər yerində qalır. Daha sonra laxta ehtiyac qalmadıqda parçalanır. Kifayət qədər miqdarda trombosit və kifayət qədər laxtalanma faktoru olmalı və sabit bir pıhtı meydana gəlməsi üçün hər biri normal fəaliyyət göstərməlidir.

Protein S, protein C üçün əsas kofaktor rolunu oynayır. İkisi də, qan laxtaları meydana gətirmək və meydana gətirmək üçün lazım olan xüsusi laxtalanma faktorlarını (V və VIII faktorları) təsirsiz hala gətirərək qan laxtasının meydana gəlməsini tənzimləmək və nəzarət etmək üçün birlikdə çalışırlar. Bu, əyləclərin sürətlə gedən avtomobili yavaşlatması kimi, laxtanın əmələ gəlməsini yavaşlatmaq kimi xalis təsirə malikdir. Buna görə də, kifayət qədər protein C və ya S yoxdursa və ya onlar normal fəaliyyət göstərmirsə, laxtanın əmələ gəlməsi nəzarətsiz keçə bilər ki, bu da həddindən artıq laxtalanmaya səbəb ola bilər. Bu şərtlər yüngüldən ağıra qədər dəyişə bilər.

Əskik və ya disfunksiyalı protein C və ya protein S qaraciyər xəstəliyi, böyrək xəstəliyi, ağır infeksiyalar və ya xərçəng kimi əsas vəziyyətə (əldə edilmiş) görə ola bilər və ya irsi olaraq valideyndən uşağa keçə bilər. Həm protein C çatışmazlığı, həm də S vitamini çatışmazlığı otozomal dominant bir nümunədə miras alınır. Təxminən hər 200-500 nəfərdən 1-də bir normal gen və bir anormal gen (heterozigot) var ki, bu da protein C çatışmazlığına səbəb olur. Təxminən 500 nəfərdən 1-də heterozigot gen mutasiyasına görə protein S çatışmazlığı var.

İki növ irsi var protein C çatışmazlığı:

  • Tip 1 qeyri -kafi miqdarla əlaqədardır.
  • Tip 2 anormal funksiya ilə əlaqədardır və Tip 1-dən daha az rast gəlinir.

Protein S qanda iki formada mövcuddur: sərbəst və başqa bir zülala bağlanır, ancaq C vitamini üçün kofaktor olmaq üçün yalnız sərbəst protein S mövcuddur. Üç növ irsi var. protein S çatışmazlığı:

  • Tip 1 çatışmazlığı kifayət qədər miqdarın olmaması ilə əlaqədardır.
  • Tip 2 anormal funksiya ilə bağlıdır.
  • Tip 3, ümumi protein S səviyyəsi normal olsa da, sərbəst protein S səviyyəsinin azalması ilə əlaqədardır.

Protein C və protein S üçün testlər dərin venoz tromboz (DVT) və ya ağciyər emboliyası (PE) (venoz tromboemboliya və ya VTE) kimi uyğun olmayan qan laxtasının səbəbini təyin etmək üçün tez-tez birlikdə həyata keçirilən iki ayrı testdir. Mümkün bir həddindən artıq pıhtılaşma pozğunluğunu araşdırmaq və başqa bir qan laxtalanma riskini təyin etmək üçün testlər istifadə edilə bilər, xüsusən də heç bir açıq risk faktoru və ya ailənizdə qan laxtalanma tarixi yoxdursa.

Protein C və protein S üçün testlər onların funksiyasını (aktivliyini) və ya miqdarını (antigen) ölçür:

  • Protein C və protein S funksional (aktivlik) testləri, həddindən artıq laxtalanma üçün digər testlərlə birlikdə, aktivliklərini ölçmək və qan laxtalanmasını tənzimləmək və yavaşlatmaq qabiliyyətlərini qiymətləndirmək üçün sifariş edilir. Aktivliyin azalması C və ya S miqdarının azalması və ya nadir hallarda C və ya S zülallarının işləməməsi səbəbindən ola bilər.
  • Funksional test nəticələrindən asılı olaraq, aktivliyin azalmasının istehsalın azalması və ya anormal funksiyadan qaynaqlandığını müəyyən etmək və çatışmazlığın növünü təsnif etməyə kömək etmək üçün protein C antigeninin və sərbəst və ya bəzən ümumi protein S antigeninin miqdarı ölçülə bilər. Zülal S və ya C çatışmazlığı irsi bir genetik dəyişiklik səbəbiylə varsa, mövcud olan C və ya S protein miqdarı və aktivlik dərəcəsi, bir nüsxənin (heterozigot) və ya iki nüsxənin (homozigot) olub olmadığını müəyyən etmək üçün istifadə edilə bilər. mutasiya. Zülal C və ya S proteinində homozigot mutasiya nadir hallarda olur.

Protein C və protein S testləri aşağıdakı hallarda sifariş edilə bilər:

  • Xüsusilə nisbətən gənc olduğunuz zaman (50 yaşdan kiçik) qan laxtalanmısınız.
  • Qaraciyərdən və ya böyrəkdən gələn damarlar və ya beynin qan damarları kimi qeyri-adi yerdə laxtalanmısınız.
  • Bir neçə laxtalanma epizodunuz olub
  • Qan laxtalanması inkişaf etdirmək üçün başqa heç bir səbəbiniz yoxdur


Protein C və protein S səviyyələri mövcud qan laxtalanmasından və qan laxtalarının müalicəsi ilə təsirlənir. Buna görə də, ilkin səviyyələri təyin etmək üçün qan laxtanızın müalicəsi və aradan qaldırılmasından sonra və antikoagulyant müalicəni kəsdikdən sonra testlər aparılmalıdır. Adətən bu o deməkdir ki, həkiminiz qan laxtasından dərhal sağlamlıq riskini aradan qaldırmaq üçün DVT və ya VTE-ni müalicə edəcək və sonra qan laxtasının səbəbini müəyyən etmək üçün bir neçə həftə və ya ay sonra testlər sifariş edəcək.

Protein C və ya zülal S-nin aktivliyinin və ya miqdarının azaldığını göstərən test adətən başqa bir vəziyyətdə təkrarlanır. Qazanılmış çatışmazlıq aşkar edilərsə, əsas vəziyyət irəlilədikcə və ya həll olunduqca zülal C və ya protein S səviyyələri bəzən yenidən yoxlana bilər. .

Yenidoğulmuşda yayılmış damardaxili laxtalanma (DIC) və ya purpura fulminans kimi ağır laxtalanma pozğunluğu olduqda protein C və S testləri təyin oluna bilər.

Zülal C və ya protein S çatışmazlığı olan yaxın bir qohumunuz olduqda, xüsusən də qohumunuzun ağır bir forması varsa və ya gənc yaşda ilk VTE varsa, Protein C və Protein S testləri bəzən sifariş verilə bilər.

Normal fəaliyyət və protein C və protein S səviyyəsi adətən adekvat laxtalanma tənzimlənməsini göstərir.

Aşağı protein C və ya protein S səviyyəsi və ya aktivliyi qan laxtalanmasının kifayət qədər tənzimlənmədiyini və damarlarda qan axını maneə törədən bir laxtalanma riskinin artdığını göstərir.

  • Qanın laxtalanma riskinin dərəcəsi zülalın çatışmazlığı və/və ya disfunksiyasının dərəcəsindən asılıdır.
  • Aşağı səviyyələr, bədənin kifayət qədər istehsal etməməsi və ya çox miqdarda zülal istifadə etməsi və ya düzgün işləməyən zülallar istehsal etməsi ilə nəticələnə bilər.
  • Az miqdarda və ya funksional olmayan zülalların səbəbi, əldə edilmiş şərtlər və ya daha az yaygın olaraq irsi (genetik) xəstəliklər ola bilər.

Həyatın sonrasında inkişaf edən aşağı protein C və S zülalına səbəb olan şərtlər (onlarla doğulmamışsınız) mülayim və müvəqqəti ola bilər və ya şiddəti dəyişkən və kəskin, xroniki və ya mütərəqqi ola bilər. Aşağıdakılar bəzi nümunələrdir:

  • Hər iki zülal qaraciyərdə istehsal olunur və istehsalı K vitaminindən asılıdır. Buna görə də aşağı səviyyələr aşağıdakı səbəblərdən ola bilər:
  • Warfarin (Coumadin®) antikoaqulyant terapiyası (vitamin K antaqonisti)

Protein C və protein S istehsalını kodlayan genlərdə irsi mutasiyalar nisbətən nadirdir. Onlar nəticələnə bilər:

  • Protein C və ya protein S istehsalının azalması
  • Normal fəaliyyət göstərə bilməyən anormal protein C və ya S
  • Bədən tərəfindən daha sürətli təmizlənən anormal protein S (Tip 3 çatışmazlığı)


Bu mutasiyalar baş verdikdə, onlar bir-birindən müstəqildirlər və mutasiya bu və ya digər gendə olur (protein C və ya protein S). Gendəki mutasiyalar bir gen nüsxəsində (heterozigot) və ya iki gen nüsxəsində (homozigot) baş verə bilər.Bir gen nüsxəsindəki mutasiya DVT və/və ya VTE-nin inkişaf riskini orta dərəcədə artırır, lakin iki gen nüsxəsindəki mutasiya ağır laxtalanmaya səbəb ola bilər və yeni doğulmuş körpədə həyatı üçün təhlükə yaradan purpura fulminans və ya DIC-ə səbəb ola bilər. Bu, təkrarlanan qan laxtalanmasına qarşı ömür boyu sayıqlıq tələb edir. Zülal C və ya S proteinində homozigot mutasiyalar nadirdir.

İrsi bir çatışmazlıq təsdiq edildikdən sonra, cərrahiyyə, xərçəng üçün kemoterapi və ya oral kontraseptiv istifadəsi kimi laxtalanma riskinizi artıran vəziyyətlərdə olduğunuz zaman həkiminiz buna uyğun olaraq idarə edəcək.

Var Üç növ irsi protein S çatışmazlığı protein S çatışmazlığı üçün heterozigot olması ilə əlaqələndirilir. Protein S çatışmazlığı üçün heterozigot olan insanların VTE riski əhəmiyyətli dərəcədə artır. Üç növ çatışmazlıq ilə görülə bilən nəticələr aşağıda ümumiləşdirilmişdir. Ən çox yayılmış növlər 1 və 3-dür.

Növü
Çatışmazlıq
Pulsuz protein S. Ümumi protein S antijeni Ümumi protein S Fəaliyyəti
1 Azalıb Azalıb Azalıb
2 Normal Normal Azalıb
3 Azalıb Normal Azalıb

Yüksək protein C və/və ya yüksəlmiş protein S adətən tibbi problemlərlə əlaqəli deyil və klinik cəhətdən əhəmiyyətli hesab edilmir.

Bir sağlamlıq mütəxəssisi, ehtimal ki, uyğun olmayan qan laxtalanmasına (qanama və ya tromboz) səbəb ola biləcək qaraciyər xəstəliyi, K vitamini çatışmazlığı və ya xərçəng kimi əsas xəstəlikləri və ya şərtləri araşdırmaq üçün digər testlər də sifariş edər. Həddindən artıq laxtalanmanı araşdırmaq üçün istifadə edilə bilən digər testlərə nümunələr daxildir:

Antitrombinin azalması kimi digər faktor çatışmazlıqları və ya Faktor V Leiden və ya protrombin 20210 mutasiyası kimi irsi şərtlər eyni vaxtda varsa, qan laxtalanma riski artır.

Bir qan laxtası yaşamamısınızsa, müalicəyə ehtiyacınız olmayacaq. Qan laxtalanması baş verərsə, standart antikoaqulyasiya terapiyası təyin edilə bilər. Bədən yavaş-yavaş udduğu zaman qan laxtasının böyüməsini dayandırır və həmçinin yeni laxtaların əmələ gəlməsinin qarşısını alır. Əsas şərtləri müalicə etmək və/və ya həll etmək və siqaret çəkmə kimi digər risk faktorlarından qaçınmaq qan laxtalanma riskini azalda bilər.

Lazım gələrsə, tərkibində C və S zülalları olan təzə dondurulmuş plazma qısa müddətli profilaktik tədbir olaraq verilə bilər (məsələn, cərrahi əməliyyatdan əvvəl), lakin bu gündəlik istifadə edilə bilən bir müalicə deyil.

Protein C konsentratı 2007-ci ildə FDA tərəfindən protein C çatışmazlığı olan xəstələrdə istifadə üçün təsdiq edilmişdir və o, ağır protein C çatışmazlığından əziyyət çəkən və purpura fulminans inkişaf etdirən körpələrin müalicəsi üçün dərhal istifadə olunur. Ancaq digər populyasiyalarda istifadəsi mübahisəli olaraq qalır.

Antikoagulyasiya müalicəsindəsinizsə, sağlamlıq təminatçınız, laxtalanma testi üzrə bir mütəxəssislə məsləhətləşməli və C və/və ya protein S aktivliyi analizinin etibarlı şəkildə aparıla və şərh edilə biləcəyinə qərar verməli ola bilər. Antikoaqulyant dərmanlar ya zülal C və zülal S səviyyələrini dəyişə bilər, ya da protein C və protein S aktivlik analizlərinə müdaxilə edə bilər, buna görə də testlər üçün qan nümunələri toplanmazdan əvvəl müalicə bir müddət dayandırılmalı ola bilər.

Birbaşa yox. Müvəqqəti bir vəziyyətdən (məsələn, hamiləlik və ya infeksiya) bağlı çatışmazlıqlarınız varsa, onlar özləri normal səviyyəyə qayıtmalıdırlar. Qaraciyər xəstəliyi və ya K vitamini çatışmazlığı kimi əsas bir vəziyyətdən qaynaqlanırsa, bu vəziyyətə diqqət yetirilməlidir. Əgər sizdə irsi protein C və ya protein S çatışmazlığı varsa və ya disfunksiyanız varsa, həkiminiz tez-tez digər laxtalanma risk faktorlarını azaltmağa diqqətinizi cəmləməyi məsləhət görür. Buraya siqaret çəkməmək və oral kontraseptivlərdən çəkinmək daxildir.

Mütləq deyil. Genlərin nüfuz etmə qabiliyyəti aşağı olduğu üçün müntəzəm tarama tövsiyə edilmir. Bu o deməkdir ki, genetik dəyişikliyiniz olsa belə, laxtalanma probleminiz ola bilər və ya olmaya bilər. Sağlamlıq təminatçınız, ciddi bir C vitamini və ya S vitamini çatışmazlığı və ya erkən yaşda tromboz inkişaf etdirmə tarixiniz varsa, bu testi sifariş etmək istəyə bilər.

Bu Saytda

Vebdə başqa yerdə

Cari İcmalda İstifadə olunan Mənbələr

(14 Avqust 2018) Protein C və Protein S Testləri. MedlinePlus. Https://medlineplus.gov/lab-tests/protein-c-and-protein-s-tests/ saytında onlayn olaraq mövcuddur. 18 aprel 2019-cu ildə əldə edilib.

(4 Yanvar 2019) Protein C çatışmazlığı. Medscape. Https://emedicine.medscape.com/article/205470-overview saytında onlayn olaraq mövcuddur. 18 aprel 2019-cu ildə əldə edilib.

(© 2019) Protein S çatışmazlığı. Indiana Hemofiliya və Tromboz Mərkəzi. Onlayn olaraq https://www.ihtc.org/protein-s-deficiency/ saytında mövcuddur. 21 aprel 2019-cu ildə əldə edilib.

Qan laxtası. Amerika Hematologiya Cəmiyyəti. Onlayn olaraq https://www.hematology.org/Patients/Clots/ saytında mövcuddur. 21 aprel 2019-cu ildə əldə edilib.

(© 2019) Protein C (Qan). Rochester Universiteti Tibb Mərkəzi. Onlayn olaraq https://www.urmc.rochester.edu/encyclopedia/content.aspx?contenttypeid=167&contentid=protein_c_blood ünvanında mövcuddur. 21 aprel 2019-cu ildə əldə edilib.

(© 2019) Protein C Fəaliyyəti, Plazma. Mayo Clinic Laboratories. Https://hematology.testcatalog.org/show/CFX saytında onlayn olaraq mövcuddur. 22 aprel 2019-cu ildə əldə edilib.

(©2019) Protein S Fəaliyyəti, Plazma. Mayo Klinik Laboratoriyaları. Onlayn olaraq https://hematology.testcatalog.org/show/S_FX saytında mövcuddur. 22 aprel 2019-cu ildə əldə edilib.

(2016) Protein C çatışmazlığı. Milli Nadir Xəstəliklər Təşkilatı. Onlayn olaraq https://rarediseases.org/rare-diseases/protein-c-deficiency/ saytında mövcuddur. 22 aprel 2019-cu ildə əldə edilib.

(Oktyabr 2009) Protein C çatışmazlığı. Genetika Ev Referansı. Onlayn olaraq https://ghr.nlm.nih.gov/condition/protein-c-deficiency#statistics ünvanında mövcuddur. 22 aprel 2019 tarixində əldə edildi.

(18 oktyabr 2018) Anadangəlmə Zülal C və ya S çatışmazlığı. MedlinePlus. Https://medlineplus.gov/ency/article/000559.htm saytında onlayn olaraq mövcuddur. 22 aprel 2019-cu ildə əldə edilib.

Əvvəlki Rəylərdə İstifadə Edilən Mənbələr

Thomas, Clayton L., Redaktor (1997). Taberin Siklopedik Tibbi Lüğəti. F.A. Davis Company, Philadelphia, PA [18th Edition].

Pagana, Kathleen D. & amp Pagana, Timothy J. (2001). Mosby's Diaqnostika və Laboratoriya Test Referansı 5-ci Nəşr: Mosby, Inc., Saint Louis, MO.

Gardner, B. (3 aprel 2001). Protein C çatışmazlığı. Medscape İlkin Baxım, Pediatriya Mütəxəssisdən soruşun [Onlayn məlumat]. Http://www.medscape.com/viewarticle/413850_print ünvanında onlayn olaraq mövcuddur.

Pıhtılaşma Test Panelləri. Florida Xəstəxanası Xərçəng İnstitutu, Klinik və Tədqiqat Laboratoriyaları [Onlayn məlumat]. Onlayn olaraq http://www.fhci-labs.com/researchlabs/clinicallabs/hemostasisandthrombosis/panels.htm ünvanında mövcuddur.

Qarışıq laxtalanma testi adları. UAB Koaqulyasiya Xidməti, Birmingemdə Alabama Universiteti [Onlayn məlumat]. Http://peir.path.uab.edu/coag/article_187.shtml və Protein C Aktivliyi, Aktivləşdirilmiş Protein C Müqaviməti (Faktor V Leiden üçün Ekran) ünvanında onlayn olaraq mövcuddur: http://peir.path.uab.edu/coag /cat_index_14.shtml#191.

Schlesinger, K. və Ragni, M. (2002). DIC, İltihab, Sepsis və Aktivləşdirilmiş Protein C (APC). Transfuziya Təbabətinin Yenilənməsi, Buraxılış №3 [Onlayn məlumat]. Http://www.annals.org/issues/v135n5/full/200109040-00013.html saytında onlayn olaraq mövcuddur.

Fəsil 132 Trombotik Bozukluklar, Ümumi. Merck Diaqnoz və Müalicə Təlimatları, Bölmə 11. Hematologiya və Onkologiya [Onlayn məlumat]. Http://www.merck.com/pubs/mmanual/section11/chapter132/132a.htm saytında onlayn olaraq mövcuddur.

Protein C çatışmazlığı. İllinoys Universiteti - Urbana/Champaign, Carle Xərçəng Mərkəzi, Hematologiya Resurs Səhifəsi, Xəstə Resursları [Onlayn məlumat]. Onlayn olaraq http://www-admin.med.uiuc.edu/hematology/PtProtC.htm ünvanında mövcuddur.

Protein S çatışmazlığı. İllinoys Universiteti - Urbana/Champaign, Carle Xərçəng Mərkəzi, Hematologiya Resurs Səhifəsi, Xəstə Resursları [Onlayn məlumat]. Http://www-admin.med.uiuc.edu/hematology/PtProtS.htm saytında onlayn olaraq mövcuddur.

Bardi, J. (2002). Açılan Terapiyanın Sirləri. Scripps Araşdırma İnstitutu, Xəbərlər və Baxışlar [Onlayn xəbər bülleteni]. Http://www.scripps.edu/newsandviews/e_20020617/print-ruf.html saytında onlayn olaraq mövcuddur.

Elstrom, R. (2001, 28 oktyabr, Yenilənib). Protein C. MedlinePlus Sağlamlıq Məlumatı, Tibbi Ensiklopediya [Onlayn məlumat]. Http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003659.htm saytında onlayn olaraq mövcuddur.

Elstrom, R. (2001, 28 oktyabr, Yenilənib). Protein S. MedlinePlus Sağlamlıq Məlumatı, Tibbi Ensiklopediya [Onlayn məlumat]. Onlayn olaraq http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003660.htm ünvanında mövcuddur.

Koaqulyasiya Test Panelləri. Klinik və Tədqiqat Laboratoriyaları, Florida Xəstəxanası Xərçəng İnstitutu [Onlayn məlumat]. Http://www.fhci-labs.com/researchlabs/clinicallabs/hemostasisandthrombosis/panels.htm saytında onlayn olaraq mövcuddur.

Laposata, M. & amp; Vancott, E. (2000 Yanvar). Hiperkoagulyativliyi necə inkişaf etdirmək olar. Xəbərlərdə CAP [Onlayn Koaqulyasiya Case Study]. Onlayn olaraq http://www.cap.org/CAPToday/casestudy/coag5.html saytında mövcuddur.

Zəhərli ısırıqlar və sancmalar. Tibbi Məlumat-Ev Nəşrinin Merck Təlimatı, Bölmə 24. Qəzalar və Yaralanmalar, Fəsil 287 [Onlayn məlumat]. Http://www.merck.com/mrkshared/mmanual_home/sec24/287.jsp saytında onlayn olaraq mövcuddur.

Menta, S. (1999 Bahar). Pıhtılaşma kaskadı. Fiziologiya Bozukluklarının Qiymətləndirilməsi, Tibb Kolleci, Florida Universiteti [Onlayn məlumat]. Onlayn olaraq http://www.medinfo.ufl.edu/year2/coag/title.html ünvanında mövcuddur.

Bauer, K. (2001). Trombofilias: Müəyyən edilməmiş Terapevtik təsiri olan yaxşı təyin olunmuş risk faktorları. Ann Intern Med. 2001135: 367-373 [Jurnal]. Http://www.annals.org vasitəsilə onlayn olaraq mövcuddur.

DeLoughery, T. (1999, 15 mart). Hemostaz və tromboz testləri. OHSU [Onlayn tələbə paylama]. Onlayn olaraq http://www.ohsu.edu/som-hemonc/handouts/deloughery/printtest.html saytında mövcuddur.

(10 yanvar 2001, Dəyişdirilmiş). Pıhtılaşma Testinin Təsvirləri. Klinik Pıhtılaşma Laboratoriyası, Duke Universitetinin Regional Referal Laboratoriya Xidmətlərinin bölməsi [Onlayn məlumat]. Onlayn olaraq http://pathology.mc.duke.edu/coag/TestDes.htm ünvanında mövcuddur.

Pagana, Kathleen D. & Pagana, Timothy J. (© 2007). Mosby's Diaqnostika və Laboratoriya Test Referansı 8-ci Nəşr: Mosby, Inc., Saint Louis, MO. S 781-782.

Nanda, R. (15 aprel 2005). Anadangəlmə protein C və ya S çatışmazlığı. MedlinePlus [Onlayn məlumat]. Onlayn olaraq http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/000559.htm ünvanında mövcuddur. 3/25/07 tarixində əldə edilib.

Nanda, R. (15 aprel 2005). Protein C. MedlinePlus [Onlayn məlumat]. Http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003659.htm saytında onlayn olaraq mövcuddur. 3/25/07 tarixində əldə edilib.

Nanda, R. (15 aprel 2005). Protein S. MedlinePlus [Onlayn məlumat]. Onlayn olaraq http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003660.htm ünvanında mövcuddur. 3/25/07 tarixində əldə edilib.

(© 2007). Protein C, Trombomodulin və Endotelial Hüceyrə Protein C Reseptorunun Anormallıqlarının Diaqnozunda Laboratoriya Məsələləri. CAP [Onlayn məlumat]. Http://www.cap.org vasitəsilə onlayn əldə etmək olar. 3/25/07 tarixində əldə edildi.

(© 2007). Protein S Testləri üçün Texniki, Diaqnostik və Epidemioloji Məsələlərə Baxış. CAP [Onlayn məlumat]. Http://www.cap.org vasitəsilə onlayn əldə etmək olar. 3/25/07 tarixində əldə edilib.

Dugdale, D. və s. al. (2 Mart 2009 tarixində yeniləndi). Protein C. MedlinePlus Tibb Ensiklopediyası [Onlayn məlumat]. Http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003659.htm saytında onlayn olaraq mövcuddur. Sentyabr 2010 tarixində əldə edildi.

Dugdale, D. et. al. (28 mart 2010-cu ildə yenilənib). Anadangəlmə C və ya S çatışmazlığı. MedlinePlus Tibbi Ensiklopediyası [Onlayn məlumat]. Onlayn olaraq http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/000559.htm ünvanında mövcuddur. Sentyabr 2010 tarixində əldə edildi.

Cuker, A. və Pollak, E. (Yenilənib 2009 İyun 11). Protein C çatışmazlığı. eMedicine [Onlayn məlumat]. Onlayn olaraq http://emedicine.medscape.com/article/205470-overview saytında mövcuddur. Sentyabr 2010 tarixində əldə edildi.

(Oktyabr 2009-cu ildə nəzərdən keçirildi). Protein C çatışmazlığı. Genetika Ev Referansı [Onlayn məlumat]. Http://ghr.nlm.nih.gov/condition/protein-c-deficiency ünvanında onlayn olaraq mövcuddur. 2010-cu ilin sentyabrında əldə edilib.

(Oktyabr 2009-cu ildə nəzərdən keçirildi). Protein S çatışmazlığı. Genetika Ev Referansı [Onlayn məlumat]. Http://ghr.nlm.nih.gov/condition/protein-s-deficiency ünvanında onlayn olaraq mövcuddur. Sentyabr 2010 tarixində əldə edildi.

Spence, R. et. al. (12 yanvar 2010-cu ildə yenilənib). Hemostatik pozğunluqlar, trombosit olmayan eTibb. [Onlayn məlumat]. Http://emedicine.medscape.com/article/210467-overview saytında onlayn olaraq mövcuddur. Sentyabr 2010 tarixində əldə edildi.

Godwin, J. (Yenilənib 2009, 27 avqust). Protein S çatışmazlığı. eMedicine [Onlayn məlumat]. Onlayn olaraq http://emedicine.medscape.com/article/205582-overview saytında mövcuddur. Sentyabr 2010 tarixində əldə edildi.

Pagana, K. D. & Pagana, T. J. (© 2007). Mosby's Diaqnostika və Laboratoriya Test Referansı 8-ci Nəşr: Mosby, Inc., Saint Louis, MO. Səhifə 781-782.

Wu, A. (© 2006). Tietz Clinical Guide to Laboratory Tests, 4th Edition: Saunders Elsevier, St. Louis, MO. Səh. 922-923, 926-927.

Milli Qan Pıhtılaşması Birliyi. Protein C çatışmazlığı. Onlayn olaraq http://www.stoptheclot.org/News/article136.htm saytında mövcuddur. 2010-cu ilin sentyabrında əldə edilib.

Milli Qan Laxtalanması Alyansı. Protein S çatışmazlığı: klinik perspektiv. Onlayn olaraq http://www.stoptheclot.org/News/article137.htm saytında mövcuddur. 2010-cu ilin sentyabrında əldə edilib.

Chen, Yi-Ben. və s. al. (3 mart 2013-cü ildə yenilənib). Protein C. MedlinePlus Tibbi Ensiklopediyası. Http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003659.htm saytında onlayn olaraq mövcuddur. Oktyabr 2014 tarixində əldə edildi.

Gersten, T. və s. al. (8 fevral 2012-ci ildə yenilənib). Anadangəlmə protein C və ya S çatışmazlığı. MedlinePlus Tibbi Ensiklopediyası. Http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/000559.htm saytında onlayn olaraq mövcuddur. 2014-cü ilin oktyabrında əldə edilib.

Cuker, A. və Pollak, E. (Yenilənmiş 2013, 5 Mart). Protein C çatışmazlığı. eTibb. Onlayn olaraq http://emedicine.medscape.com/article/205470-overview saytında mövcuddur. Oktyabr 2014 tarixində əldə edildi.

(2013-cü ilin mayında nəzərdən keçirilib). Protein C çatışmazlığı. Genetika Ev Referansı. Http://ghr.nlm.nih.gov/condition/protein-c-deficiency ünvanında onlayn olaraq mövcuddur. Oktyabr 2014 tarixində əldə edildi.

(Oktyabr 2009-cu ildə nəzərdən keçirildi). Protein S çatışmazlığı. Genetik Ev Referansı. Http://ghr.nlm.nih.gov/condition/protein-s-deficiency ünvanında onlayn olaraq mövcuddur. Oktyabr 2014 tarixində əldə edildi.

(© 1995-2014) Protein S Fəaliyyəti, Plazma. Mayo Tibbi Laboratoriyaları. http://www.mayomedicallaboratories.com/test-catalog/Clinical+and+Interpretive/80775. 2014-cü ilin oktyabrında əldə edilib.

Sadaka, F. et al. Septik şokda aktivləşdirilmiş C vitamini: uyğunluq təhlili. Kritik Baxım 2011, 15: R89. doi: 10.1186/cc10089. Http://ccforum.com/content/15/2/R89 saytında onlayn olaraq mövcuddur. Oktyabr 2014 tarixində əldə edildi.

Godwin, J. (Yenilənib 2012 Yanvar 10). Protein S çatışmazlığı. eTibb. Http://emedicine.medscape.com/article/205582-overview saytında onlayn olaraq mövcuddur. Oktyabr 2014 tarixində əldə edildi.

Pagana, K. D. & Pagana, T. J. (© 2012). Mosby's Diaqnostika və Laboratoriya Test Referansı 11-ci Nəşr: Mosby, Inc., Saint Louis, MO. Səh. 767-768.


Warfarinin Vasculature üzərində təsiri

Atriyal fibrilasiyada, vuruşda və hiperkoagulyasiya olunan xəstəliklərdə geniş istifadə olunan varfarin antikoaqulyant təsirləri ilə geniş yayılmışdır. Qaraciyər daxilində VKDP car-karboksilasiyasını blok edərək qaraciyərdə laxtalanma faktorlarının əmələ gəlməsinin qarşısını alır. Bununla birlikdə, varfarin periferik karboksilasyona təsir edərək VKDP -lərin periferik istehsalına müdaxilə edir. Skelet sağlamlığında əhəmiyyətli bir VKDP olan osteokalsin (və burada daha ətraflı nəzərdən keçirilmir) warfarin tərəfindən inhibə edilir və warfarin terapiyasına yerləşdirilən heyvanlarda aylar ərzində osteopeniya inkişaf edir (37). In vitro təcrübələr göstərdi ki, warfarin həm Qaz-6 (38) həm də MGP (39) karboksilləşməsini maneə törədir. Bütün heyvan araşdırmalarında, Qiymət və s. varfarinin siçovullarda geniş damar kalsifikasiyasına səbəb olduğunu göstərdi (40). Bu modeldə, varfarin və D vitamininin səbəb olduğu hiperfosfatemiyanın birləşməsi gənc, lakin yetkin olmayan heyvanlarda kütləvi damar kalsifikasiyasına səbəb oldu. Bu kalsifikasiya, əsasən MGP çatışmazlığında görünənə bənzər intim ehtiyatlı medianın elastik lamellərini əhatə edir. Varfarin, D vitamini, fosfat və yaşın kalsifikasiya prosesinə nisbi töhfələri hələ də məlum deyil, lakin D vitamini analoqlarının və varfarinin geniş yayılması nəzərə alınmaqla potensial dərman təsiri ilə bağlı məsələləri gündəmə gətirir. Varfarinlə müalicə olunan heyvanlarda damar tutulmasının paylanması, kapilyarların və damarların nisbi ehtiyatlı olması ilə orta ölçülü damarlara üstünlük verir (29). Bu, müəyyən damar yataqlarının damar kalsifikasiyasına daha həssas olub-olmaması və VKDP-lərin ifadəsinin damar daxilində dəyişə biləcəyi ilə bağlı suallar doğurur. Ən azından in vitro təcrübələr və bütün gənc heyvanlara D vitamini tətbiq edildikdə, varfarin damar kalsifikasiyasını pisləşdirir.

Bu əlaqə insanlarda öyrənilməmişdir. Varfarin ürək -damar ədəbiyyatında, xüsusən arterial baypas greftinin açıqlığı ilə əlaqəsi geniş araşdırılsa da, əksər tədqiqatlar lümen açıqlığının angioqrafik qiymətləndirilməsinə əsaslanır. Damar kalsifikasiyası tez -tez mediya ilə məhdudlaşdığından, lümeni təsir etmədən qəti nəticələr vermək çətindir. Bununla belə, kiçik bir kompüter tomoqrafiyası tədqiqatı göstərdi ki, warfarin istifadəsi həm qapaq, həm də koronar kalsifikasiya ilə əlaqələndirilir (41). Aort stenozu üçün dəyişdirilən aortal qapaqların histopatoloji müayinəsi, varfarinlə müalicə olunan xəstələrdə valvulyar kalsifikasiyanın iki qat artdığını göstərdi (42). Warfarin başlanğıcı, tipik olaraq kiçik kapilyarları əhatə edən sistemik bir damar kalsifikasiya sindromu olan kalsemik uremik arteriopatiya ilə də əlaqələndirilmişdir (43). Nəhayət, damarların kalsifikasiyasına diqqət yetirən yaxşı işlənmiş tədqiqatlar olmadan, warfarinin damarların kalsifikasiyasına təsiri haqqında heç bir nəticə çıxarmaq mümkün deyil. Aydındır ki, bu müşahidə tədqiqatları assosiasiya təklif etməkdən başqa bir şey edə bilməz, lakin potensial əlaqə ən azı warfarin və damar kalsifikasiyası arasındakı əlaqəni daha yaxşı qiymətləndirmək üçün daha geniş perspektivli tədqiqatlara zəmanət verir.


Təbii Antikoagulyantlar, Protein C, Protein S və Antitrombinin Eksiklikleri

Hematologiya/Onkologiya (B.L.) və Hemofiliya və Tromboz Mərkəzindən (D.L.O.), Dartmouth-Hitchcock Tibb Mərkəzi, Livan, NH Tibb və Patologiya Departamentləri, Dartmut Tibb Məktəbi, Hannover, NH (D.L.O.).

Hematologiya/Onkologiya (B.L.) və Hemofiliya və Tromboz Mərkəzindən (D.L.O.), Dartmouth-Hitchcock Tibb Mərkəzi, Livan, NH Tibb və Patologiya Departamentləri, Dartmut Tibb Məktəbi, Hannover, NH (D.L.O.).

Siz və ya ailə üzvünüz bədəndəki dərin damarlardan birində (yəni dərin damar trombozu və ya DVT) qan laxtalanması inkişaf etdirmiş və ya ağciyərlərə gedən qan laxtası (məsələn, ağciyər emboliyası və ya PE) ola bilər. ). Tibbi yardımınızın bir hissəsi olaraq, həkiminiz sizi qan laxtasının yaranmasına səbəb ola biləcək şərtlərə görə qiymətləndirmiş ola bilər.

Trombofiliya qan pıhtılarının əmələ gəlməsinə meylin artdığı bir vəziyyətdir.O, irsi ola bilər və bir və ya bir neçə valideyndən miras qalmış genlər tərəfindən ötürülə bilər və ya cərrahiyyə, xərçəng, hamiləlik və ya müəyyən dərmanlar (məsələn, bəzi kontraseptivlər və menopozal hormon əvəzediciləri) kimi vəziyyətlər vasitəsilə əldə edilə bilər. Ən çox görülən iki irsi trombofiliya şərti, hər ikisi də əvvəlki Kardiyoloji Xəstə Səhifələrinin mövzusu olan V faktor Leiden və protrombin 20210 gen mutasiyalarıdır. 1,2 Bu Kardiyoloji Xəstə Səhifəsi, təbii antikoagulyantlar, protein C, protein S və antitrombində irsi və ya qazanılmış trombofili ilə nəticələnə biləcək çatışmazlıqları təsvir edəcək.

Təbii antikoagulyantlar nələrdir?

Qan, oksigen və qida maddələrini bədənin bütün toxumalarına çatdırmaq üçün qan damarlarından keçir. Bir qan damarı zədələndikdə, bir proses çağırılır laxtalanma zədələnmiş damardan qanaxmanı dayandıran qanın laxtalanmasına səbəb olur. Pıhtılaşma başladıqda, qandakı digər maddələr, təbii antikoagulyantlar, laxtalanma sahəsini məhdudlaşdırmaq üçün əyləc rolunu oynayır və beləliklə normal qan axını maneə törədəcək qədər böyük laxtaların əmələ gəlməsinin qarşısını alır. Qanda kifayət qədər laxtalanma qabiliyyətinin olmasını təmin etmək üçün çox incə bir tarazlıq var. Pıhtılaşma qabiliyyətinin çox az olması qanaxma problemlərinə gətirib çıxarır, çox laxtalanma qabiliyyəti (trombofili) isə qan laxtalanmasına səbəb ola bilər. Qanama və laxtalanma arasındakı bu tarazlığın vəziyyəti insandan insana dəyişir və bir çox şey tarazlığı poza bilər (Şəkil). Pıhtılaşma prosesini dayandırmağa kömək etmək üçün təbii antikoagulyantlardan tələb olunduğundan, bu maddələrdən birinin çatışmazlığı bu tarazlığı pozaraq trombofiliyaya səbəb ola bilər. Ən vacib təbii antikoaqulyantlar protein C, protein S və antitrombindir (əvvəllər bunlar adlanırdı). antitrombin III adı dəyişdirilənə qədər antitrombin).

Şəkil. Təbii antikoagulyantlardan birinin çatışmazlığı olduqda laxtalanma ilə qanaxma arasındakı normal balans pozulur. Qanda laxtalanma və qanaxma arasında gözəl bir tarazlıq var. Normal qan pıhtılarının meydana gəlməsinə səbəb olan maddələr (adlanır prokoagulyantlartəbii antikoagulyantlar tərəfindən diqqətlə balanslaşdırılır (A) belə ki, qanaxmanın qarşısını almaq üçün kifayət qədər laxtalanma meydana gəlir, ancaq damarı maneə törədən və qanın axmasına mane olan böyük bir qan laxtasını tetikleyecek qədər deyil. Təbii antikoaqulyantlardan birinin çatışmazlığı olduqda (B, aşağı ox), tarazlıq laxtalanma istiqamətinə yönəldilmişdir ki, bu çatışmazlıqları olan şəxslər anormal qan laxtalarının əmələ gəlməsinə meyllidirlər.

Təbii antikoagulyantların çatışmazlığına səbəb nədir?

Düzgün işləməyən təbii antikoagulyantların və ya təbii antikoagulyantların aşağı səviyyələri ya miras qala bilər, ya da müəyyən həyat hadisələri zamanı meydana gələ bilər. Təbii antikoagulyantlar da daxil olmaqla genlər 2 nüsxədə atanızdan, 1iniz ananızdan və 1iniz atanızdan miras qalır. Təbii antikoagulyantlardan birinin çatışmazlığı ilə doğulan insanlar ya analarından, ya da atalarından bir anormal gen miras alırlar. Nadir hallarda insanlar hər iki valideyndən anormal genləri miras ala bilərlər, lakin bu, çox vaxt körpəlikdə diaqnoz qoyulan ciddi laxtalanma problemləri ilə nəticələnir. Təbii antikoagulyantların normal səviyyələrini miras alan insanlar, hamiləlik, qaraciyər xəstəliyi, ağır infeksiya və ya digər xəstəliklər, K vitamini çatışmazlığı və bəzi dərmanlar, məsələn, estrogen, heparin və varfarin kimi müəyyən vəziyyətlərdə çatışmazlıqlar inkişaf etdirə bilərlər. Bundan əlavə, yeni qan laxtalanması da təbii antikoaqulyantların qan səviyyəsini azalda bilər.

Diaqnoz necə qoyulur?

Test qanınızdakı təbii antikoaqulyantların səviyyəsini və aktivliyini ölçmək üçün qan testi ilə həyata keçirilir. Test kəskin laxtalanma epizodundan ən azı bir neçə həftə sonra və warfarin və ya heparinin dayandırılmasından ən azı 3-6 həftə sonra aparılmalıdır. Yanlış pozitiv nəticələr çox yayıldığı üçün anormal nəticələri təsdiqləmək üçün təkrar testlər edilməlidir. Məsələn, doğuşa nəzarət həbləri və hamiləlik çox vaxt yanlış miqdarda S proteininə səbəb olur.

Nəticələr nədir?

Təbii koaqulyantların irsi çatışmazlıqları nadirdir. Protein C çatışmazlığı hər 200-500 nəfərdən ≈1-də baş verir, halbuki protein S çatışmazlığı hər 500 nəfərdən ≈1-də gözlənilir. Antitrombin çatışmazlığı, hər 2000-5000 insandan 1 -də meydana gələn 3 çatışmazlıqdan ən az rast gəlinəndir.

İrsi protein C və ya protein S çatışmazlığı olan insanlarda, çatışmazlığı olmayanlara nisbətən DVT və ya PE inkişaf riski təxminən 2-11 dəfə artır. Bu, hər il bu çatışmazlıqlardan biri ilə hər 100-500 nəfərdən ≈1-də baş verən DVT və ya PE-yə çevrilir. Antitrombin çatışmazlığı DVT və PE inkişaf riski ilə əlaqələndirilir və irsi antitrombin çatışmazlığı olan insanların 50%-ə qədərinin həyatları boyu qan laxtalanması ilə qarşılaşacağı təxmin edilir.

Təbii antikoaqulyantların çatışmazlığı ilk növbədə damarlarda qan laxtalanması riskinin artması ilə əlaqələndirilir və damarlarda qan laxtalanmasının, məsələn, infarkt və insultun inkişafında az və ya heç bir rol oynamır. Bununla birlikdə, son bir araşdırma, protein C və protein S (lakin antitrombin deyil) çatışmazlıqlarının 55 yaşdan kiçik insanlarda arterial qan laxtalanması riskinin artması ilə əlaqəli ola biləcəyini göstərir.

Qan laxtalarının əmələ gəlməsi riskinin artması ilə əlaqəli olsa da, təbii antikoaqulyantların çatışmazlığı olan bir çox (bəlkə də çoxu) insanların çatışmazlığından heç vaxt ağırlaşmalarla qarşılaşmayacağını xatırlamaq vacibdir.

Təbii antikoaqulyantların çatışmazlığı necə müalicə olunur?

Bir DVT və ya PE keçirmisinizsə, çox güman ki, antikoagulyantlarla (qan inceltici) müalicə olunurdunuz. Warfarin hal-hazırda DVT və ya PE-dən sonra uzun müddətli müalicə üçün ən çox təyin olunan antikoagulyantdır, lakin əvvəlcə warfarin olana qədər əlavə enjekte edilə bilən antikoaqulyant (adətən heparin, aşağı molekulyar ağırlıqlı heparin və ya oxşar dərman) ilə verilməlidir. tam effektivdir. Əgər sizdə protein C və ya protein S çatışmazlığı varsa, eyni zamanda başqa bir antikoaqulyant qəbul etmədən heç vaxt warfarin qəbul etməməlisiniz. Warfarin bədənin öz protein C və protein S istehsalını maneə törədir. Buna görə də, protein C və ya protein S çatışmazlığı olan insanlarda yalnız varfarinlə ilkin müalicə müvəqqəti olaraq laxtalanmanı pisləşdirə və ya yeni laxtalanma və ya dəri nekrozu kimi tanınan şiddətli dəri səpgilərinin yaranmasına səbəb ola bilər. 5 gün və ya daha çox heparin, aşağı molekulyar ağırlıqlı heparin və ya fondaparinux kimi əlaqədar bir dərmanla eyni vaxtda müalicə edildikdən sonra tək başına warfarin qəbul etmək təhlükəsizdir.

İlk DVT və ya PE-dən sonra təbii antikoaqulyantlardan birinin çatışmazlığı olan şəxslərdə ikinci laxtalanma riski bu çatışmazlığı olmayanlara nisbətən daha yüksəkdir. İlk qan laxtalanmasından sonra antikoaqulyantla ömürlük müalicə həmişə tövsiyə edilməsə də, antikoaqulyant müalicənin müddəti, təbii antikoaqulyant çatışmazlığının dəqiq növünə, laxtalanma şəraitinizə və digər risk faktorlarına bağlı olacaq. Buna görə antikoagulyasiya müddəti həkiminizlə diqqətlə düşünülməlidir.

Əgər təbii antikoagulyantlardan birində çatışmazlıq varsa, amma heç vaxt qan laxtalanmamışdırsa, o zaman mütəmadi olaraq antikoaqulyantla müalicə olunmayacaqsınız. Bununla belə, gələcəkdə qan laxtalanması riskinizi artıra biləcək digər amilləri azaltmağa və ya aradan qaldırmağa diqqət yetirməlisiniz (Cədvəl 1). Bundan əlavə, əməliyyat və ya hamiləlik kimi xüsusilə yüksək riskli dövrlərdə antikoaqulyantla müvəqqəti müalicə tələb edə bilərsiniz. Belə bir çatışmazlığınız varsa bütün həkimlərinizə bildirməyiniz çox vacibdir.

Cədvəl 1. DVT və PE üçün risk faktorları

DVT dərin damar trombozu PE, ağciyər emboliyasını göstərir.

Təbii antikoagulyantlardan birinin çatışmazlığı olan qadınlar üçün xüsusi mülahizələr nələrdir?

Təbii antikoagulyantların çatışmazlığı hamiləlik dövründə və ya hormon istifadəsi (oral kontraseptivlər və ya menopozal hormon əvəzedici terapiya) zamanı xüsusi diqqət tələb edir. Hormonların istifadəsi ümumi əhalidə qan laxtalanması riskinin artması ilə əlaqələndirilir, lakin təbii antikoaqulyant çatışmazlığı olan qadınlar üçün risk daha da yüksəkdir. Estrogen ehtiva edən dərmanlar ən yüksək risklə əlaqəli görünsə də, yalnız progestin ehtiva edən kontraseptivlər də riski bir qədər artıra bilər. Yalnız progestin olan kontraseptivlərin östrojen və progestin ehtiva edən birləşmiş oral kontraseptivlərə nisbətən daha yüksək uğursuzluq dərəcəsinə və daha yüksək hamiləlik dərəcəsinə malik olduğunu qeyd etmək vacibdir. Bundan əlavə, yalnız progestin olan kontraseptivlər, bəzi qadınların dərman qəbul etməməsinə səbəb ola biləcək nizamsız qanama riskini artırır. Levonorgestrel ifraz edən intrauterin cihaz (Mirena) qan laxtalanması riskinin artması ilə əlaqəli deyil və tez-tez trombofili və ya qan laxtalanma tarixi olan qadınlar üçün tövsiyə olunur. Levonorgestrel intrauterin cihazının da nizamsız qanaxma riski olmasına baxmayaraq, birinci il uğursuzluq dərəcəsi digər kontraseptiv üsullarla müqayisədə hamiləlik riskini xeyli aşağı salır. Qadınlar, hormon istifadəsinə qərar vermədən əvvəl həkimləri ilə birlikdə müxtəlif variantların risklərini və faydalarını gözdən keçirməlidirlər.

Hamiləlik dövründə və doğuşdan sonrakı ilk 4-6 həftə ərzində bütün qadınlarda qan laxtalanma riski artır. Bu nisbət təbii antikoaqulyantlardan birinin çatışmazlığı olmayanlara nisbətən daha yüksəkdir. Erkən və gec dövrlərdə aşağı düşmə riski də ola bilər. Hamiləliyi planlaşdıran təbii antikoaqulyantlardan birinin çatışmazlığı olan qadınlar hamiləlik zamanı və hamiləlikdən sonra müvafiq müalicəni təyin etmək üçün öz mama, hematoloq və/və ya tromboz üzrə mütəxəssis məsləhətçisi ilə sıx əməkdaşlıq etməlidirlər.

Təbii antikoagulyantların çatışmazlığı üçün kimlər test edilməlidir?

Qan laxtalanması inkişaf edərsə və təbii antikoaqulyantlardan birinin çatışmazlığı olan bir ailə üzvünüz varsa və ya ailə tarixçəniz olmadan açıqlanmayan və ya təkrarlanan DVT və ya PE varsa testi nəzərdən keçirə bilərsiniz. Həkiminizlə müzakirə edildikdən sonra testin nəzərdən keçirilə biləcəyi digər vəziyyətlər yarana bilər. Təbii antikoaqulyant çatışmazlığı olan insanların sağlam qohumlarının test edilməsi mübahisəlidir və həkiminizlə diqqətlə müzakirə edilməlidir. Testin üstünlükləri arasında qan laxtasının risk faktorları və simptomları haqqında məlumatlılığın artması ola bilər. Dezavantajlara heç vaxt simptomlar yaratmayan diaqnozla bağlı mümkün narahatlıq, uyğun olmayan testlər üçün sığorta təminatının olmaması və oral kontraseptivlər və ya hormon əvəzedici terapiya kimi müəyyən dərmanların lazımsız olaraq dayandırılması daxildir.

Təbii antikoaqulyantların çatışmazlığı nəticəsində yaranan riski necə minimuma endirmək olar?

Təbii antikoagulyant çatışmazlıqların genetik riski dəyişdirilə bilməsə də, insanlar əlavə risk faktorlarını azaltmaq üçün həyat tərzi dəyişiklikləri edə bilərlər. Qan laxtalanması üçün əsas risk faktoru, məsələn, bəzi irsi trombofiliyalardan daha güclü bir risk yaradan obezlikdir. DVT və PE riskini azaltmaq üçün göstərişlər Cədvəl 2-də verilmişdir.

Cədvəl 2. DVT və ya PE-nin inkişafı riskini minimuma endirmək üçün atılacaq addımlar

DVT dərin ven trombozu PE, ağciyər emboliyası göstərir.

Nəticələr

Təbii antikoagulyant çatışmazlıqlar nadirdir və ya doğuşdan miras alınır, ya da həyat boyu bir zamanlar əldə edilir. Təbii antikoaqulyant çatışmazlıqları DVT və ya PE inkişaf riskini artıra bilən bir çox şərtlərdən biridir (Cədvəl 1), lakin belə çatışmazlığı olan bir çox insan heç vaxt qan laxtalarını inkişaf etdirməyəcək. İrsi risklər dəyişdirilə bilməsə də, fərdin ümumi qan laxtalanma riskini azaltmaq üçün çox şey edilə bilər (Cədvəl 2). Tromboz riskini minimuma endirmək üçün ürək sağlam həyat tərzi çox vacibdir. DVT və ya PE simptomlarının tanınması davamlı yan təsirlərin riskini minimuma endirmək üçün təcili müalicəyə imkan verir. Nəhayət, bir DVT və ya PE halında fərdi riskinizi, profilaktik strategiyalarınızı və terapevtik variantlarınızı anlamaq üçün həkiminizlə işləmək vacibdir.

Əlavə Resurslar

1. Heit J. Trombofiliya: laboratoriya qiymətləndirilməsi və idarə edilməsi ilə bağlı ümumi suallar. Hematologiya Am Soc Hematol Təhsil Proqramı. 2007:127–135.

2. Foy P, Moll S. Trombophilia: 2009 yeniləmə. Curr Treat Options Cardiovasc Med. 200911: 114–128.

3. Middeldorp S, van Hylckama Vlieg A. Trombofili testləri xəstələrin klinik idarə olunmasına kömək edirmi? Br J Hematol. 2008143:321–335.

4. Dalen JE. Venöz tromboemboliyası olan xəstələr trombofiliya üçün yoxlanılmalıdırmı? J Med. 2008121:458–463.


Mücərrəd- Yüksək dozada varfarin, böyük arteriyaların mühitində və siçovulun aortik ürək qapaqlarında elastik lamellərin fokuslu kalsifikasiyasına səbəb olur. Aorta kalsifikasiyası ilk dəfə 2 həftəlik warfarin müalicəsindən sonra müşahidə edildi və müalicənin 3, 4 və 5 həftələrində sıxlıq tədricən artdı. 5-ci həftədə əsas arteriyaların yüksək fokuslu kalsifikasiyası rentgenoqrafiyada və arteriyanın vizual müayinəsi ilə görünə bilər. Varfarinin səbəb olduğu damarların kalsifikasiyası, Gla zülalının (MGP) matrisində görünənə bənzəyir-bu, warfarinin MGP-nin car-karboksilasiyasını inhibə edərək arteriya kalsifikasiyasına səbəb olduğunu və bununla da zülalın ehtimal olunan kalsifikasiya-inhibitor aktivliyini təsirsiz hala gətirdiyini göstərir. . Warfarin müalicəsi kalsifikasiya edən arteriyalarda MGP mRNT və zülal səviyyəsini nəzərəçarpacaq dərəcədə artırdı və serumda MGP səviyyəsini azaltdı. Warfarin müalicəsi sümük böyüməsinə, ümumi çəki artımına və ya serum kalsium və fosfor səviyyələrinə təsir göstərmədi və K vitamininin eyni vaxtda qəbulu səbəbindən protrombin vaxtları və hematokritlər normal idi. Nəticələr göstərir ki, bu işdə hazırlanmış təkmilləşdirilmiş warfarin plus K vitamini müalicə protokolu, arteriyaların və ürək qapaqlarının kalsifikasiyasının qarşısının alınmasında MGP -nin rolunu araşdırmaq üçün faydalı bir model təqdim etməlidir.

Matrix Gla zülalı (MGP 1), K vitamini asılı kalsium bağlayan amin turşusu, γ-karboksiglutamik turşusunun (Gla) 5 qalığını ehtiva edən 10 kDa ifraz olunan bir proteindir. 1 2 MGP əvvəlcə sümük demineralizasiya ekstraktlarında aşkar edilmişdir, lakin indi çoxlu toxuma və hüceyrə növləri ilə ifadə edildiyi məlumdur. MGP mRNA -nın ən yüksək səviyyəsinə malik olan siçovul toxumaları qığırdaq, ürək, böyrək və ağciyərdir, 3 4 və MGP mRNA -nı ifadə edən hüceyrələrə osteoblastlar, kondrositlər, damar hamar əzələ hüceyrələri, pnevmositlər, böyrək hüceyrələri və fibroblastlar daxildir. 3 4 5 6 7 8 Əhənglənməmiş bir neçə toxuma MGP mRNT-ni sümükdən daha yüksək səviyyədə ifadə etsə də, zülalın əhəmiyyətli səviyyələri yalnız sümük və kalsifikasiya olunmuş qığırdaqda aşkar edilmişdir. 4 9 Bu müşahidə göstərir ki, zülal kalsifikasiya yerlərində toplana bilər və kalsifikasiya olunmamış toxumalar tərəfindən ifraz olunan zülalın çox hissəsi, ehtimal ki, plazmaya qaçır, burada MGP növdən asılı olaraq 0,3-1 μq/ml konsentrasiyalarda olur. MGP γ-karboksilləşmə ilə yanaşı bir neçə əlavə posttranslational modifikasiyaların hədəfidir. Dibazik ərazidə qorunmuş xüsusi bir proteolitik bölünmə C-insan, iribuynuzlu və köpək balığı toxumalarından təcrid olunmuş MGP -də terminal bölgə, 10 və fosfoserin qalıqlarının 3 fosforlaşması müşahidə edilmişdir. N.-MGP-də köpəkbalığı, siçovul, inək və insan toxumalarının terminal bölgəsi aşkar edilmişdir. 11

MGP -nin funksiyası bu yaxınlarda siçanda məqsədli gen silinməsi ilə araşdırıldı. 12 Tədqiqatçılar aşkar etdilər ki, MGP çatışmazlığı olan siçanlar doğuşda normaldır, lakin arterial medianın kalsifikasiyası ilk olaraq 1 həftəlik yaşda görünür və 3 həftəlik yaşda bütün medianı əhatə edəcək şəkildə sürətlə irəliləyir. Geniş kalsifikasiya olunmuş arteriyalar kövrəkdir və MGP çatışmazlığı olan siçanların əksəriyyəti 3-6 həftəlik yaşlarında tükənmədən ölür. Sağ qalan heyvanlar, 3 həftəlik yaşdan sonra böyümə lövhəsinin bağlanması, osteopeniya və sümük sınığı ilə birlikdə böyümə lövhəsi qığırdağının kalsifikasiyası da daxil olmaqla sümük tutulma əlamətlərini göstərməyə başlayır.

Hazırkı tədqiqatın məqsədi K vitamini antaqonisti varfarinin siçovulda yumşaq toxumaların kalsifikasiyasına təsirini müəyyən etmək idi. İstifadə olunan prosedurlar, K vitamininə bağlı sümük Gla zülalı (osteokalsin), 13 14 ilə edilən əvvəlki araşdırmalarda, K vitamininin ekstrahepatik toxumalarda varfarinin təsirinə qarşı çıxa bilməyəcəyinə gətirib çıxardı. 15 Bu nəticə, K vitamininin qaraciyər tərəfindən qan laxtalanma faktorlarının sintezinə warfarinin təsirinin qarşısını almaq üçün yaxşı qurulmuş qabiliyyəti ilə kəskin şəkildə ziddiyyət təşkil edir. 16 K vitamininin müxtəlif toxumalarda varfarinin təsirinə qarşı çıxma qabiliyyətindəki fundamental ikiləşmə, heyvanların normal qan laxtalanma müddətini saxlayaraq, ekstrahepatik toxumalar tərəfindən sintez olunan zülalların γ-karboksilasiyasını ciddi şəkildə maneə törətmək üçün kifayət qədər warfarin dozalarında davamlı saxlanmasına imkan verir. 14 17 Biz bildiririk ki, sümük Gla zülalı ilə orijinal tədqiqatlarda istifadə edilən warfarin plus vitamin K protokolunun dəyişdirilmiş versiyası aortada və digər arteriyalarda MGP-nin fenotipinə olduqca oxşar olan elastik lamellərin sürətli, geniş kalsifikasiyasına səbəb olur. çatışmaz siçan.

Metodlar

Materiallar

K vitamini1 (phylloquinone) və warfarin, Sigma Chemical Co. -dan alındı.1 (10 mq/ml) hazırlanmış və steril, folqa ilə örtülmüş qablarda 4 ° C-də saxlanılmışdır. Natrium warfarinin (50 mq/ml) hazırlanan məhlulları 4 ° C -də hazırlanır və saxlanılır. Simonsen albinos siçovulları (Sprague-Dawley siçovullarından əldə edilir) Simonsen Laboratories-dən (Gilroy, Kaliforniya) alınmışdır.

Metodlar

Əhənglənmiş toxumalar qurudulmuş, çəkilmiş və 4°C-də 16 saat ərzində 10% artıq (ağırlıq/həcm) qarışqa turşusu ilə ekstraksiya edilmişdir. Turşu ekstraktlarında və serumdakı MGP səviyyələri əvvəllər təsvir edildiyi kimi radioimmunoassay ilə təyin edilmişdir. 18 Turşu toxuması ekstraktlarında kalsium səviyyələri kresolftalein kompleksi 1 (Sigma) istifadə edərək kolorimetrik olaraq təyin edildi və fosfat səviyyələri əvvəllər təsvir edildiyi kimi kolorimetrik olaraq təyin edildi. 19 Toxumanın kəsilməsi və rənglənməsi Bioloji Test Xidməti tərəfindən həyata keçirilib. Rentgenoqrafiya üçün karotid arteriyalar və qarın aortası nekropsiya zamanı çıxarıldı, damar olmayan toxumadan təmizləndi və Hewlett-Packard modeli 4380N Flexitron rentgen sistemi ilə fotoşəkil çəkildi. Protrombin vaxtları, kalsium reagentləri ilə tromboplastin vaxtından istifadə etməklə və istehsalçının proseduruna (Sigma) riayət etməklə təyin edilmişdir.

Northern blot analizi üçün, ümumi RNT torakal aortalardan və normal siçovul böyrək hüceyrələrindən 3 RNA STAT-60 dəsti (Tel-Test B) ilə təcrid olunmuşdur. Hər nümunədən qırx mikrogram ümumi RNT 1% formaldehid-agaroz jeli ilə parçalanmışdır. MOPS tamponunda və Hybond-N membranına (Amersham) köçürülür. 42% C-də 50% formamid, 5 × SSC, 5 × Denhardt məhlulu və 100 μg/ml denatüre edilmiş somon sperma DNT-də 3 saatlıq pre-hibridizasiyadan sonra, ləkə siçovul üçün təsadüfi astarlı, 32 P-etiketli cDNA probu ilə hibridləşdirilmişdir. 16 saat ərzində 20 MGP. Membran hər biri 1 saat ərzində 65% C-də 0.1% SDS olan 0.1 × SSC ilə yuyulur və sonra rentgen filminə məruz qalır.

Heyvanlara qulluq

Tədqiqat prosedurları işə başlamazdan əvvəl Kaliforniya Universiteti, San Dieqo, Heyvan Subyektləri Komitəsi tərəfindən nəzərdən keçirildi və təsdiq edildi. Kişi Sprague-Dawley siçovullarına 0,67% fosfor və 0,95% kalsium olan gəmirici pəhriz 5001-ə (Purina Mills) pulsuz giriş imkanı verildi. Bu pəhrizdə 500 μg phylloquinone/kq var və əlavə menadion yoxdur. Bütün inyeksiyalar əsasən yuxarıda təsvir edildiyi kimi heyvanların arxasına subkutan yolla vuruldu. 13 14 15 Birinci warfarin enjeksiyonundan iyirmi dörd və 48 saat əvvəl bütün siçovullara 1,5 mq vitamin K dozası verildi.1/100 q bədən çəkisi. Əvvəlki tədqiqatlar göstərdi ki, K vitamininin bu yükləmə dozası varfarin müalicəsinin ilk həftəsində qanaxmanın qarşısını almaq üçün lazımdır. 15 İlk varfarin dozu, 15 mq/100 q və 1,5 mq vitamin K1/100 q siçovulların 42 günlük yaşına çatdıqda səhər saat 8-də verildi. İkinci 15 mq/100 q warfarin dozu axşam saat 8 -də K vitamini ilə müşayiət olunmadan tətbiq edildi. Bu rejim təcrübə bitənə qədər hər gün saxlanıldı. Enjeksiyon yerlərində travmanı azaltmaq üçün bütün inyeksiyalar üçün 25 kalibrli iynələrdən istifadə edildi və dərialtı inyeksiya yerləri arxanın 4 kvadrantı arasında fırlandı. Heyvanlar metofan anesteziyası altında olarkən qanaxma yolu ilə öldürüldü və seçilmiş toxumalar çıxarıldı və sonrakı tədqiqatlar üçün 10% tamponlanmış formalində və ya -70°C-də donduruldu.

İlk 5 həftəlik araşdırma, varfarinlə müalicə qrupunda 10 siçovul və nəzarət qrupunda olan 10 siçovulla eyni dozada K vitamininin gündəlik inyeksiyası ilə aparıldı.1 amma varfarin yoxdur. Növbəti bir araşdırmada, 2 siçovul varfarin üzərində 1 həftə, 2 də 2 həftə saxlanıldı. Üçüncü tədqiqatda 2 siçovul 3 həftə, 2 siçovul 4 həftə və 2 siçovul 5 həftə müddətində warfarin qəbul etdi. Nəhayət, yenidən işlənmiş varfarin protokolu üçün doza rejiminin işlənib hazırlanması zamanı biz 4 heyvanı standart 1,5 mq vitamin K ilə 3 həftə ərzində hər 12 saatdan bir 15 mq varfarin/100 q standart dozada saxladıq.1/Gündə 100 q və ya bu dozanın yarısı.

Nəticələr

Warfarin Plus Vitamin K Protokolunun dəyişdirilməsi

Eksperimental olaraq K vitamini çatışmazlığının arterial kalsifikasiyaya təsirinin ilk tədqiqatında, 42 günlük kişi siçanlar, əvvəlki tədqiqatlarda 14 sümük səviyyəsini aşağı salan gündəlik varfarin və K vitamini dozaları ilə 6 həftə müddətində müalicə edildi. Sümükdə Gla proteini normal səviyyələrin 2% -ə qədərdir. Varfarinlə müalicə olunan siçovulların damarlarında minerallaşmanın olması aortanın kalsium səviyyəsinin artması və ya aortanın, femur arteriyasının və ya karotid arteriyanın histoloji hissələrində von Kossa boyanmasının olması kimi aşkar edilməmişdir (məlumatlar göstərilir). Bu warfarinlə müalicə olunan siçovullarda arterial kalsifikasiyanın artmasının aşkar edilməməsinin mümkün izahı ondan ibarətdir ki, sümükdə sümük Gla zülalının səviyyəsini normal səviyyələrin 2%-ə endirmək üçün hazırlanmış protokol γ-karboksilləşmədə nisbətən əhəmiyyətli bir qüsur yaratmadı. MGP -dən. Başqa bir ehtimal varfarinlə müalicə olunan siçovulların damarlarında əhəmiyyətli kalsifikasiyanın qarşısını almaq üçün normal MGP car-karboksilasiyasının hətta 2% -nin kifayət etməsidir. Hər iki halda da arterial kalsifikasiya probleminin həlli MGP car-karboksilləşmə səviyyəsini daha da azaltmaq olardı. Buna görə də biz warfarinin dozasını 2 dəfə artırdıq və bu dozanı hər 24 saatdan bir yox, hər 12 saatdan bir tətbiq etdik. Ümumi gündəlik varfarin dozu 4 dəfə artdı.

Bu düzəldilmiş varfarin və K vitamini protokolunda 5 həftə saxlanılan siçovullar olduqca sağlam idi. Şəkil 1-də göstərildiyi kimi, dəyişdirilmiş warfarin müalicə protokolu, təcrübənin 5 həftəsində əvvəlcə 6 həftəlik siçovulların çəki qazanma sürətinə heç bir təsir göstərməmişdir. Həm də varfarinlə müalicə olunan və nəzarət siçovulları üçün 3,9 sm olan tibial uzunluğa 5 həftəlik varfarin müalicəsinin təsiri olmamışdır və böyümə lövhəsi birləşməsinin radioqrafik sübutu olmamışdır (radioqrafiyalar göstərilməmişdir). Varfarinin sümük böyüməsinə təsirinin olmaması, əvvəlki araşdırmaların nəticələri ilə uyğundur, bu da varfarinin yalnız 4 aylıq və ya daha böyük siçovullarda böyümə lövhəsinin birləşməsinə səbəb olduğunu göstərdi. 21 4 həftəlik müalicədən sonra aparılan zərdab kimya testləri, serum kalsium və fosfor səviyyələri də daxil olmaqla, ölçülmüş parametrlərin heç birində varfarinlə müalicə olunan və nəzarət qrupları arasında əhəmiyyətli fərq aşkar etməmişdir. Əvvəlki təcrübələrdə olduğu kimi, yüksək dozada K vitamini olan heyvanların eyni vaxtda müalicəsi, varfarinin qaraciyərdə qan laxtalanma faktorlarının karboksilasiyasına təsirinə qarşı çıxa bildi. eksperiment və inyeksiya yerində nəzarətsiz qanaxmanın tək bir halının olmadığını.

Varfarinin damarların kalsifikasiyasına təsiri

42 günlük kişi siçovullarda arterial kalsifikasiyanın zaman müddəti araşdırılmışdır. 10 təcrübi heyvana hər 12 saatdan bir warfarin, hər 24 saatdan bir K vitamini verildi. 10 nəzarət siçanına hər 24 saatda yalnız K vitamini verildi. Hər qrupdan hər həftə iki heyvan öldürülür, aorta, ürək, ağciyərlər, böyrəklər, yuxu və bud arteriyaları formalinlə bərkidilirdi. 1 həftəlik warfarin müalicəsindən sonra abdominal aortanın kəsiklərinin fon Kossa ilə boyanması zamanı heç bir kalsifikasiya aşkar edilməmişdir. Müalicənin 2 həftəsinə qədər abdominal aortanın uzununa kəsiklərində aorta mediası daxilində xətti strukturlarla məhdudlaşan tünd rəngli kalsifikasiya bölgələri var idi (Şəkil 2). Bu xətti quruluşlar, aortanın elastik lamelləri olaraq, qarın aortasının elastin və mineral üçün ardıcıl hissələrini boyayaraq təsbit edildi. 3 həftəlik müalicədə qarın aortasında kalsifikasiya olunmuş bölgələrin sayı əhəmiyyətli dərəcədə artdı (Şəkil 2). Kalsifikasiya edilmiş hər bir bölgə, hər hansı bir kalsifikasiyadan azad olan aorta mühitinin bölgələri ilə kəsişən minerallar üçün sıx von Kossa boyama sahələri ilə əlaqəli idi. 4 və 5 həftəlik müalicə ilə kalsifikasiya bölgələrində von Kossa boyanmasının intensivliyi daha da artdı və bəzi kalsifikasiya olunmuş bölgələr sonda o qədər sərtləşdi ki, kəsik zamanı parçalanma oldu (Şəkil 2). Bənzər bir zaman kursu və medial kalsifikasiya nümunəsi, varfarinlə müalicə olunan siçovulların koronar, karotid və femur arteriyalarının von Kossa ləkələnmiş hissələrində də müşahidə edilmişdir (mikroqraflar göstərilməmişdir).

Varfarinin səbəb olduğu arterial kalsifikasiyanın zaman axınının olduqca təkrarolunmaz olduğunu gördük. Sonrakı təcrübələrdə, 1, 2, 3, 4 və ya 5 həftə ərzində warfarin üzərində saxlanılan siçovullarda arterial kalsifikasiyanın dərəcəsini və 4 ay müddətində hər bir nöqtədə 2 siçovul ilə edilən təcrübələrin nəticələrini araşdırdıq. Şəkil 2 -də təsvir edilən dövrdən fərqlənmirdi. Ayrı bir təcrübədə biz K vitamininin saxlanma dozasının 2 dəfə azaldılmasının varfarinlə müalicənin 3 həftəsində kalsifikasiya dərəcəsinə təsirini araşdırdıq. Varfarində 4 heyvan saxlanıldı, bunlardan 2 -si standart K vitamini dozası və 2 -si bu dozanın yarısı idi. 2 qrupda abdominal aortanın kalsifikasiyası, K vitamininin qaraciyərdənkənar toxumalarda warfarinin təsirinin qarşısını almaq üçün əvvəllər sənədləşdirilmiş iqtidarsızlığından gözlənildiyi kimi fərqlənmirdi. 15 K vitamininin standart dozasının yarısını alan qrupda protrombin vaxtları 1,2 dəfə 1,6 dəfə uzadıldığı üçün burada bildirilən bütün digər təcrübələrdə bədən çəkisi 1,5 mq olan K vitamininin standart dozasını istifadə etdik.

Varfarinlə müalicə olunan siçovulda arterial kalsifikasiyanın təsviri ya parçalayıcı mikroskopla toxumaların vizual müayinəsi və ya arteriyaların rentgenoqrafiyasının müayinəsi ilə əldə edilə bilər. Kalsifikasiyanın vizual aşkarlanması, ümumiyyətlə şəffaf bir tərəfi olan karotid arteriyada ən asandır. Şəkil 3-də göstərildiyi kimi, varfarinlə müalicə olunan siçovullarda karotid arteriyanın kalsifikasiyası, əks halda yarı şəffaf toxuma fonunda kəsikli, ağardıcı çöküntülər kimi görünür. Bu ağ bölgələr, arteriya ətrafında toxuma manipulyasiya edildikdə çətin görünən düzensiz bantlar əmələ gətirir. Şəkil 3-də göstərilən karotid arteriya sabitləndikdən və uzununa kəsildikdən sonra kalsifikasiya Şəkil 2-də göstərilənlərə bənzər fokus çöküntüləri kimi ortaya çıxdı. Buna görə də belə nəticəyə gəlirik ki, uzununa kəsiklərdə müşahidə olunan fokus kalsifikasiyası, bəzi hallarda, kalsifikasiyanın çevrəvi zolaqlarından keçən kəsikləri təmsil edə bilər. Kalsifikasiya, 5 həftəlik warfarin müalicəsi ilə aortada və karotid arteriyada radioqrafik olaraq asanlıqla aşkar edilə bilər (Şəkil 4). Hər bir halda, rentgenoqrafiyada görünən kalsifikasiya kəskin şəkildə kəsilir, kalsifikasiya sahələri arteriyanın görünən kirəclənməmiş bölgələri ilə ayrılır. Karotid arteriya və aortanın rentgenoqrafiyası da göstərir ki, kalsifikasiya çox vaxt punktat ocaqlar kimi deyil, nizamsız zolaqlar kimi görünür.

Aortada kimyəvi analizlər aparıldı və 4 həftə saxlanılan siçovullardan əlavə toxumalar, yenidən nəzərdən keçirilmiş warfarin plus K vitamini protokolu ilə aparıldı. Cədvəl 1-də göstərildiyi kimi, warfarin müalicəsi aortanın turşu ekstraktlarında kalsiumun ümumi səviyyəsini ≈4 dəfə artırdı. Turşu ekstraktlarında fosfat səviyyələri oxşar dərəcədə artırıldı (məlumatlar göstərilməyib). Warfarin müalicəsi böyrəklərdə kalsium səviyyəsinin 4 qat artmasına da səbəb oldu (Cədvəl 1).

Warfarinin MGP İfadəsinə təsiri

Varfarin müalicəsinin arteriyalarda MGP ifadəsinə təsiri 2 şəkildə qiymətləndirildi. MGP mRNA səviyyələrinin Northern blot analizi, yalnız warfarin və K vitamini və ya K vitamini ilə 4 həftə müalicə olunan siçovulların aortalarından təcrid olunmuş RNT üzərində aparıldı. Şəkil 5-də göstərildiyi kimi, varfarin müalicəsi, varfarinlə müalicə olunan siçovulların aortasında MGP mRNA ifadəsinin səviyyəsini əhəmiyyətli dərəcədə artırdı. MGP antigen səviyyələri, 4 həftə ərzində varfarin və nəzarət protokollarında saxlanılan siçovulların aortasının turşu demineralizasiya ekstraktlarının radioimmunoassay yolu ilə də müəyyən edilmişdir. Cədvəl 1-də göstərildiyi kimi, varfarin müalicəsi, varfarinlə müalicə olunan heyvanların aortasında MGP səviyyəsini 13 dəfə artırdı.

Varfarinlə müalicə olunan siçovulların kalsifikasiya olunmuş aortalarında MGP antijeninin dramatik şəkildə yığılması, zülalın γ-karboksilləşməsinin kalsifik toxumada yığılması üçün vacib olmayacağını göstərir. Bu fərziyyəni daha da yoxlamaq üçün 4 həftəlik warfarin müalicəsi zamanı sümük uzanması zamanı əmələ gələn metafiz seqmentində MGP səviyyəsini araşdırdıq. Cədvəl 1-də göstərildiyi kimi, MGP antijeni warfarin müalicəsi zamanı əmələ gələn sümük kalsifikasiyası bölgələrində toplanmışdır, lakin mineral kalsiumun vahidinə düşən MGP səviyyəsi nəzarət sümük toxumasının səviyyəsi ilə müqayisədə 5 dəfə azalmışdır. MGP səviyyələrində oxşar bir azalma, 4 həftə ərzində warfarin ilə müalicə olunan siçovulların metafizinin bu bölgəsindən olan turşu çıxarılmış zülalların SDS jellərində də müşahidə edildi (məlumatlar göstərilməyib).

Varfarinin səbəb olduğu kalsifikasiya damar toxumalarında MGP mRNA və antijen səviyyəsini artırdığı üçün qanda MGP antigen səviyyəsində də artım olacağı gözlənilə bilər. Cədvəl 2-də göstərildiyi kimi, varfarinlə müalicə olunan siçovullarda serum MGP səviyyəsi əslində demək olar ki, 3 dəfə aşağı idi. Bu azalma, serum MGP -nin 5 həftəlik warfarin müalicəsində dəyişmədiyinə və buna görə də arterial kalsifikasiyaya aid olmadığına görədir. Çox güman ki, serum MGP səviyyəsinin azalması ya karboksil edilməmiş zülalın təmizlənməsinin artması, ya da siçovullarda bildirilən protrombinin sekresiyasındakı varfarinin səbəb olduğu hüceyrələrdən MGP ifrazının azalması ilə əlaqədardır. hepatositlər. 22 23

Warfarinin ürəyin, ağciyərin və böyrəyin kalsifikasiyasına təsiri

MGP mRNT-nin ən yüksək səviyyələri bu yaşda olan siçovulların ürəyində, ağciyərində və böyrəyində aşkar edildiyinə görə, 3 bu toxumaların hər birinin bəzi hallarda kalsifikasiyaya meylli ola biləcəyi qənaətinə gəlmək məntiqli görünür. Varfarin müalicəsinin bu toxumaların kalsifikasiyasına təsirini qiymətləndirmək üçün 4 həftə ərzində yalnız warfarin və K vitamini və ya K vitamini ilə müalicə olunan siçovullardan nekropsiyada ürək, ağciyər və böyrəklər götürülmüşdür. Hər bir toxumanın hissələri daha sonra minerallaşma sahələrini aşkar etmək üçün von Kossa boyanmasına məruz qaldı. Böyrəkdə kalsifikasiya böyrək hilumundakı arteriyaların elastik lamellərində aşkar edilmişdir, lakin başqa bir quruluşda yoxdur (göstərilməyib). Ürəkdə kalsifikasiya yalnız koronar arteriyanın elastik lamellərində (göstərilməmişdir) və aorta ürək qapağında aşkar edilmişdir (Şəkil 6). Ağciyərdə bir sıra arteriyaların elastik lamellərində kalsifikasiya aşkar edilmişdir, lakin digər strukturlarda yoxdur. Varfarinlə müalicə olunan siçovulların digər yumşaq toxumalarının kalsifikasiyasını histoloji üsullarla qiymətləndirməsək də, qeyd etmək lazımdır ki, əgər varsa, bu cür kalsifikasiyalar müalicə olunan siçovulların bütün heyvan radioqrafiyalarında aşkarlanacaq qədər geniş deyildir. Warfarin 5 həftə.

Müzakirə

Siçovullarda Warfarinin təsirinin MGP çatışmazlığı olan siçanın fenotipi ilə müqayisəsi

Yuxarıda qeyd edildiyi kimi, siçanlarda MGP geninin məqsədyönlü şəkildə silinməsi əsas arteriyaların kalsifikasiyasına səbəb olur ki, bu da ilk dəfə 1 həftəlik yaşda aşkar edilə bilər. 12 Bu kalsifikasiya, arterial medianın elastik lamelləri içərisində başlayır və damarların kövrək və yırtılmış sərt borular halına gəlməsinə qədər davam edir və 3-6 həftəlik MGP çatışmazlığı olan siçanların əksəriyyətində soyulma nəticəsində ölümə səbəb olur. Traxeya halqası qığırdağı MGP çatışmazlığı olan siçanlarda 2-3 həftəyə qədər kalsifikasiya olunur. 3 həftəlik yaşdan sonra sağ qalan siçanlar qismən böyümə plitəsinin qığırdaqının anormal kalsifikasiyası səbəbindən daha yavaş böyüyür və nəticədə osteopeniya və sümük sınıqları olur. 12

MGP çatışmazlığı olan siçanlarda erkən görünən nəzərə çarpan fenotipik xüsusiyyətlərin əksəriyyəti warfarinlə müalicə olunan siçovullarda da bir qədər zəifləmiş dərəcədə aşkar edilir. Eyni arteriyalar warfarinlə müalicə olunan siçovullarda da əhənglənir və kalsifikasiya da aorta mediasının elastik təbəqəsində başlayır. Kalsifikasiya, varfarinlə müalicə olunan siçovullarda daha yavaş irəliləyir və bütün arteriya mühitini əhatə edən davamlı bir kalsifikasiya vərəqi meydana gətirən MGP çatışmazlığı olan siçanlarda görülən kalsifikasiyadan fərqli olaraq, fokuslu və fasiləlidir. Siçovullarda varfarinin səbəb olduğu kalsifikasiyanın susdurulma dərəcəsi, istifadə etdiyimiz varfarin dozaları ilə MGP-nin car-karboksilləşməsinin tamamilə inhibe edilməməsi ilə əlaqədardır. Bununla belə, bu warfarin dozalarında zülalın əslində tamamilə γ-karboksilləşməməsi və γ-karboksillənməmiş zülalın kalsifikasiya inhibitoru kimi bəzi qalıq fəaliyyətini saxlaması da mümkündür. MGP çatışmazlığı olan siçanın fenotipi ilə varfarinlə müalicə olunan siçovul arasındakı əsas fərq, 3 həftəlik yaşdan sonra siçan fenotipinə xas olan warfarin ilə müalicə olunan siçovullarda azalmış sümük artımının, osteopeniyanın və qırıqların olmamasıdır. Bu fərqin mümkün izahı varfarinin istehsal etdiyi MGP γ-karboksilləşmə qüsurunun sümük metabolizminə heç bir təsir göstərməməsidir. Mövcud araşdırmada istifadə olunan siçovulların yaşının ilk 3 həftəsindəki siçanlara daha çox bənzəməsi də mümkündür ki, bu dövrdə MGP çatışmazlığı olan siçanda sümük böyüməsi anomaliyalarının müşahidə olunmadı. 12 Bu ehtimal, warfarinlə müalicə edilən siçovulların əvvəlki tədqiqatlarının nəticələri ilə dəstəklənir, bu da aşkar etdi ki, varfarin müalicəsi böyümə plitəsinin qığırdaqlarının anormal kalsifikasiyasına və MGP çatışmazlığı olan siçanlarda müşahidə olunanlarla eyni olan uzununa sümük böyüməsinin müşayiəti dayandırılmasına səbəb olur. yalnız 4 aylıq və ya daha böyük siçovullarda. 14 21

Həm MGP çatışmazlığı olan siçan fenotipinin, həm də varfarinlə müalicə olunan siçovul sindromunun təəccüblü bir xüsusiyyəti, MGP-ni yüksək nisbətdə ifadə etdiyi bilinən digər toxuma yerlərində kalsifikasiya dəlillərinin olmamasıdır. Ehtimallardan biri, təbiətdə qarşılaşacaqları stres olmadığı təqdirdə diqqətlə hazırlanmış pəhrizlərdə saxlanılan gəmiricilərin əksər yumşaq toxumaları kalsifikasiya etmək meylinin çox az olmasıdır. Bu hipotezin testlərindən biri, kalsium və fosfat səviyyəsinin dəyişdirilməsi kimi pəhriz manipulyasiyalarına məruz qalan, varfarinlə müalicə olunan heyvanlarda seçilmiş yumşaq toxumaların kalsifikasiyasını yoxlamaq olacaq. Bu baxımdan böyrək kalsifikasiyasının uzun müddətdir gəmiricilərlə bağlı problem olduğunu və burada istifadə edilən diyetlərdə bu problemin aradan qaldırılmasının pəhrizin kalsium və fosfat tərkibinin diqqətlə tənzimlənməsini tələb etdiyini qeyd etmək yerinə düşər. 24 25 26 Buna görə də ola bilər ki, tərkibində müxtəlif kalsium və fosfat olan pəhrizlər və kalsiumun fosfata fərqli nisbətləri varfarinlə müalicə olunan siçovulda böyrəklərin və digər yumşaq toxumaların sürətlə kalsifikasiyasına səbəb olacaq. MGP-nin arteriyalardan başqa toxumalarda kalsifikasiya inhibitoru kimi fəaliyyət göstərdiyi hipotezinin başqa bir sınağı, uremiya, toxuma travması və xərçəng kimi insanlarda olmayan damar sistemlərində sistemik və ya fokal kalsifikasiyaya səbəb olduğu bilinən stresslərə warfarinlə müalicə olunan siçovullara məruz qalacaq.

Arterial Kalsifikasiya və MGP Fəaliyyət Mexanizmi

MGP çatışmazlığı olan siçanlar ilə əvvəlki tədqiqatlar və warfarinlə müalicə olunan siçovullarla aparılan cari tədqiqat MGP-nin in vivo olaraq kalsifikasiya inhibitoru kimi fəaliyyət göstərdiyinə dair güclü sübutlar təqdim edir. Bildiyimizə görə, in vivo olaraq bu funksiyanı yerinə yetirən başqa heç bir zülal müəyyən edilməmişdir və heç bir başqa zülalın hər hansı toxumanın artan kalsifikasiyasına səbəb olan hədəf silinməsi yoxdur. Arteriyaların kalsifikasiyasının heyvanlarda o qədər geniş olması və ya bu geni ifadə etməməsi, ya da bu proteinin γ-karboksilatlandıra bilməməsi, damar toxumasında ekvivalent olaraq aktiv bir kalsifikasiya inhibitorunun olması və MGP-nin sadəcə bir ehtiyat funksiyasına malik olması hipotezini qəti şəkildə müdafiə edir. bu toxumanın kalsifikasiyasının qarşısını alır. Daha çox ehtimal olunur ki, MGP arteriyaların kalsifikasiyasının normal olaraq in vivo inhibe edildiyi prosesdə mərkəzi rol oynayır.

MGP çatışmazlığı olan siçanlarda və varfarinlə müalicə olunan siçovullarda arteriya mühitinin elastik lamellərində kalsifikasiyanın yaranması, damarların elastik lamellərinin in vivo kalsifikasiyaya meylli olduğunu göstərir. Bu fərziyyə, elastik lamellərin insanlarda arterial kalsifikasiyanın ilk yerləri olduğunu və bu elastik lamellərin içərisində kalsifikasiyanın toplanmasının həyatın ikinci ongünlüyündə başladığını və yaşla birlikdə tədricən artdığını göstərən tədqiqatlarla dəstəklənir. 27 28 29 30 31 32 Elastin həmçinin in vitroda kalsifikasiyanın güclü və təkrarlana bilən təşəbbüskarı olduğu göstərilmişdir. 33 34 35 36 37 38 39 Elastinin in vitro kalsifikasiyası kalsium və fosfatın fizioloji konsentrasiyalarında serum və neytral tamponlu məhlullarda baş verir. Bu tapıntı kalsium və fosfatın suprafizioloji konsentrasiyalarına və ya β-qliserofosfat agentinə əsaslanan makromolekul və ya hüceyrə kulturasının səbəb olduğu əhənglənmə ilə bağlı əksər tədqiqatların nəticələrindən kəskin şəkildə fərqlidir.

Varfarinlə müalicə olunan siçovulların aortasında kalsifikasiyanın fokus xarakteri MGP-nin normal olaraq arterial kalsifikasiyanı in vivo inhibə etdiyi mexanizm haqqında fikir verə bilər.MGP çatışmazlığı olan siçanlarda fokal minerallaşma müşahidə edilmir, ehtimal ki, kalsifikasiyanı maneə törətmək qabiliyyəti o qədər azdır ki, elastin tərəfindən əmələ gələn çoxlu kristal nüvələrin hamısı böyüyə və bununla da medial kalsifikasiyanın möhkəm təbəqəsini meydana gətirə bilər. Varfarinlə müalicə olunan siçovullarda kalsifikasiyanı maneə törətmək qabiliyyəti, ehtimal ki, MGP-nin mineral səthə birbaşa bağlanmasını əhatə edən bir proseslə əksər kristal nüvələrini təsirsiz hala gətirmək üçün kifayət qədər kifayət edəcəkdir. Bununla belə, bir neçə nüvə böyüyəcək və kritik kalsifikasiya ölçüsünə çatacaq ki, bu zaman toxum kristallarının əmələ gəlməsi qalıq MGP fəaliyyətinin kalsifikasiya zəncirvari reaksiyasını maneə törətmək qabiliyyətini üstələyir və əhənglənmə elastik lamellərin içərisində və nəhayət, bu yerdə fokuslu şəkildə yayılır. Sayt.

Mövcud məlumatlara ən uyğun olan ətraflı MGP mexanizmi, zülalın hidroksiapatit kristal nüvələrinə sıx və seçici şəkildə bağlandığı və böyüməsinin və qız kristallarının toxum yetişdirmə qabiliyyətinin qarşısını aldığı mexanizmdir. MGP ilə örtülmüş kristalların elastin nüvələnmə sahələrinin yaxınlığındakı hüceyrələr tərəfindən tanınması və hüceyrələrin bu örtüklü kristalların bir hissəsini təmizləyib hüceyrə daxilində həll etməsi də mümkündür. MGP-nin kalsifikasiyanı inhibe edən aktivliyi, ehtimal ki, MGP 10-un karboksil-terminal işlənməsini və qismən fosforlaşmanın 3 qorunan yerində fosfoserinin mövcudluğunu izah edə biləcək yüksək dərəcədə tənzimlənəcəkdir. 11 Bu inhibitor fəaliyyət, zülalın mineral nüvələrlə qeyri -adi dərəcədə güclü birləşməsi ilə idarə olunmalıdır. Biz güman edirik ki, bu assosiasiya qonşu, mineralla bağlı MGP molekulları arasında güclü yanal qarşılıqlı təsirləri ehtiva edir və bu yanal qarşılıqlı təsir MGP-nin öz-özünə birləşmə qabiliyyətini əks etdirir. Biz əvvəllər göstərmişdik ki, MGP öz-özünə assosiasiyaya meylli olduğuna görə in vitro yüksək dərəcədə həll olunmur və zülalın bu xüsusiyyəti MGP-də köpəkbalığından insana qədər müxtəlif növlərdə qorunur. 1 9

Varfarinin Arteriyalarda MGP İfadəsinə təsiri

Mövcud araşdırma, varfarinin MGP mRNA ifrazının artmasına və aortada MGP antigeninin yığılmasına səbəb olduğunu göstərdi. Aortada MGP mRNT-nin artmasının ən çox ehtimal olunan izahı aorta mediasının kalsifikasiyasına cavab olaraq damar hamar əzələ hüceyrələri tərəfindən protein sintezinin artmasıdır. Damar hamar əzələ hüceyrələrinin MGP mRNA -nı hüceyrə mədəniyyətində 6 və aterosklerotik lövhələrdə kalsifikasiya yerlərində ifadə etdiyi bilinir. 40 41 Siçovulların aort mühitinin anatomiyasında, hər elastik lamelin arasında damar hamar əzələ hüceyrələri bir -birinə qarışır. Kalsifikasiya elastik lamelin içərisində başladığından, damar hamar əzələ hüceyrələrinin kalsifikasiya edən elastinin yaxınlıqdakı bölgələrinin varlığını hiss etməsi və kalsifikasiyanın daha da böyüməsini dayandırmaq üçün artan MGP ifadəsi ilə cavab verməsi mümkündür. Arteriyanın hamar əzələ hüceyrələrində MGP mRNA -nın hüceyrə səviyyələrini, bu hüceyrələrin elastik lamelləri aktiv şəkildə kalsifikasiya etməsi və hüceyrələrin yaxınlıqdakı kalsium yığılma yerlərini hiss etmə mexanizmlərini əlaqələndirmək üçün araşdırmalara ehtiyac var.

Varfarinlə 4 həftəlik müalicədən sonra aortada MGP antigen səviyyəsinin 13 qat artması, ehtimal ki, aortada damar hamar əzələ hüceyrələri tərəfindən ifraz olunan MGP-dən qaynaqlanır və ehtimal ki, MGP kalsifikasiyanın özünə bağlı idi. Bu son hipotez, MGP -nin aortadan yalnız toxumanın demineralizasiyası ilə sərbəst buraxıla biləcəyi ilə təsdiqlənir. MGP faktiki olaraq arterial kalsifikasiya zamanı kristalların səthində toplanırsa, aortanın MGP tərkibini milliqram quru çəkiyə deyil, mineral kalsium vahidinə görə ifadə etmək daha məqsədəuyğun ola bilər. Bu şəkildə ifadə edildikdə, kalsifikasiya edən aortanın MGP tərkibi sümükdən (Cədvəl 1) və ya bu günə qədər araşdırılmış hər hansı bir toxumadan 20 qat yüksəkdir. 4 Bu müşahidənin ən sadə izahı budur ki, MGP -nin lokal konsentrasiyası arterial minerallaşma sahələrinin yaxınlığında sümükdən daha yüksək səviyyədə saxlanıla bilər.

Zülalın ehtimal olunan γ-karboksilləşməsinə baxmayaraq, MGP-nin varfarinlə müalicə olunan siçovulun sümük metafizində və aortasında (Cədvəl 1) yığılması faktı göstərir ki, MGP-nin γ-karboksilləşməsi toxumaların kalsifikasiyaya bağlanması və bəlkə də bu toxumalarda apatit. Bu fərziyyəni dəstəkləmək üçün MGP-nin in vitro termal dekarboksilləşməsinin zülalın serumdan hidroksiapatitə bağlanma qabiliyyətinə təsir göstərmədiyini gördük. Bu toxumada hidroksiapatitə bağlanma qabiliyyətinə görə γ-karboksil edilməmiş MGP kalsifikasiya edən aortada yığılırsa, qeyri-karboksilatlı zülalın mineral artımını niyə dayandıra bilmədiyi aydın deyil.

Warfarin Dozu və Arteriya Kalsifikasiyası

Hər 24 saatda bir dəfə verilən warfarin dozası ilə arteriya kalsifikasiyasının tam olmaması ilə bu dozanın iki dəfə hər 12 saatda yeridilməsi ilə arteriyaların geniş və sürətli kalsifikasiyası arasındakı dramatik fərq qismən varfarinin plazmadan sürətli təmizlənməsi ilə əlaqədar ola bilər. siçovul. Əvvəlki tədqiqatlar göstərdi ki, varfarin siçovulların plazmasından 5 saat yarıdan təmizlənir və varfarin təmizlənməsinin yarısı heyvanın yaşından və cinsindən təsirlənmir. 42 Varfarin klirensinin yarı vaxtı da varfarin dozasından təsirlənmir, 43 və RS Varfarinin enantiomerləri təxminən eyni nisbətdə təmizlənir. 44 Varfarinin plazmadan sürətli təmizlənməsi səbəbindən preparatın bir dəfə subkutan yeridilməsindən qısa müddət sonra əldə edilən varfarinin konsentrasiyası 12 saatda bu dəyərin 20%-nə və 24 saat ərzində bu dəyərin >4%-ə qədər düşəcək. Warfarin plus K vitamini protokolunun əvvəlki versiyasında istifadə edildiyi kimi, gündəlik enjeksiyon cədvəli, 13 14 15 21, bu səbəbdən dərmanın plazma konsentrasiyasında nəzərə çarpan salınımlar meydana gətirəcək. Əgər warfarinin ekstrahepatik toxumalarda zülalların γ-karboksilləşməsinə təsiri preparatın plazma konsentrasiyasına mütənasibdirsə, gündəlik inyeksiya protokolu warfarinin qəbulundan qısa müddət sonra γ-karboksilləşmənin ciddi pozulmalarına səbəb olacaq və bunun ardınca gama-karboksilləşmə zamanı əhəmiyyətli dərəcədə sağalacaq. növbəti inyeksiya 24 saat ərzində. Burada istifadə edilən 12 saatlıq inyeksiya protokolu, əksinə, inyeksiyadan qısa müddət sonra varfarinin konsentrasiyası ilə bu səviyyənin 20%-ni təşkil edən konsentrasiya arasında 12 saatlıq salınmaya səbəb olacaq və buna görə də varfarinin aşağı plazma səviyyələrində əhəmiyyətli dərəcədə daha az vaxt verəcəkdir. ekstrahepatik protein γ-karboksilləşmə statusunun bərpası.

Kalsifikasiya nüvələrinin böyük mineral yataqlarına davamlı böyüməsinin əslində maksimum 24 saatlıq dövrdə plazmadakı minimum varfarin səviyyəsindən daha çox asılı olduğuna dair bir fikir söyləmək olar. Bunun səbəbi, minerallaşma prosesinin, zəncirvari bir reaksiya kimi, böyüməni davam etdirmək üçün davamlı bir kristal nüvəsi əmələ gətirməsi lazım olan bir avtokatalitik prosesdir. MGP car-karboksilləşmə səviyyəsi, kalsifikasiya sahəsinin yaxınlığında ifraz olunan MGP aktivliyinin, minerallaşma zəncirvari reaksiyasını davam etdirmək üçün lazım olan kristal nüvələrinin əmələ gəlməsinin səviyyəsini azaltmaq üçün kifayət edəcək səviyyəyə qalxdıqda, mineral fazanın böyüməsi dayandırmaq. Normalda γ-karboksillənmiş MGP artıq güman ki, mineral səthləri örtür və bununla da təsirsiz hala gətirir, sonrakı warfarin dozası bu sahədə mineral böyüməsini bərpa edə bilməz. Arterial kalsifikasiyaya səbəb olmaq üçün lazım olan gündəlik varfarin dozası, hər 24 saat müddətində dərmanın plazma konsentrasiyasını müəyyən bir dəyərdən yüksək tutmaq ehtiyacı ilə təyin ediləcəkdir.

K vitamini dozası, qan laxtalanması və arteriya kalsifikasiyası

Hər 24 saatda verilən müəyyən bir warfarin dozasından, hər 12 saatda verilən dozanın iki qatına qədər dəyişməsi, warfarinin qan laxtalanmasına təsirini aradan qaldırmaq üçün lazım olan K vitamininin dozasını təsir edir. Heyvanlar yeni, daha yüksək varfarin dozası rejimində və əvvəlki 0,75 mq/100 g K vitamini dozasında saxlanıldıqda, qan laxtalanma müddəti normaldan daha uzun idi və bəzən dərialtı enjeksiyon yerləri ətrafında qanaxma hadisələri olurdu. Bu K vitamini dozasının ikiqat artırılması normal pıhtılaşma müddətini bərpa etdi və enjeksiyon yerlərində qanaxmanı aradan qaldırdı. K vitamininin qaraciyər tərəfindən qan laxtalanma faktorlarının γ-karboksilasiyasına təsiri varfarinin təsirinə qarşı durma qabiliyyəti əvvəlki tədqiqatlarda müəyyən edilmişdir. 15 16

Bunun əksinə olaraq, K vitamini dozasının ikiqat artırılması, yeni, daha yüksək varfarin dozası rejiminin istehsal etdiyi arteriya kalsifikasiyasının dərəcəsini əhəmiyyətli dərəcədə təsir etməmişdir. K vitamininin warfarinin sümükdəki osteoblastlar tərəfindən sümük Gla zülalının sintezinə təsirini dayandıra bilməməsi əvvəlki tədqiqatlarda qeyd edilmişdir, 15 və belə bir fərziyyə irəli sürülmüşdür ki, K vitamini varfarinin təsirinə yalnız qan laxtalanma faktoru olan yerlərdə müqavimət göstərə bilər. hepatositlərdə sintez. 15 Bu araşdırmanın nəticələri bu hipotezi dəstəkləyir və arteriyaların və sümük hüceyrələrinin, hətta yüksək dozada K vitamininin təsir edə bilməyəcəyi bir şəkildə warfarin tərəfindən inhibe edilən bir epoksid redüktaz geri dönüş mexanizmini paylaşdığını göstərir.

MGP -nin qüsurlu karboksilasiyası insanlarda yumşaq toxumaların kalsifikasiyasını sürətləndirirmi?

Hazırkı tədqiqatın nəticələri göstərir ki, insanlarda MGP-nin γ-karboksilləşməsində bir qüsur arteriyaların və ürək qapaqlarının kalsifikasiyasını sürətləndirə bilər. K vitamini qəbulunun arterial kalsifikasiya üçün mümkün əhəmiyyəti, K vitamininin daha az miqdarda qəbulunun insanlarda aorta kalsifikasiyasının artması ilə əlaqəli olması ilə bağlı son hesabatla təsdiqlənir. 45 MGP-nin qüsurlu car-karboksilləşməsinin arterial kalsifikasiyaya kömək etdiyi hipotezini daha da yoxlamaq və bu qüsuru aradan qaldırmaq üçün lazım olan K vitamini qəbulunu təyin etmək üçün hazırda hidroksiapatitə bənzər plazma MGP-nin karboksilləşmə vəziyyətini ölçmək üçün analizlər hazırlayırıq. zərdabda sümük Gla zülalının γ-karboksilləşmə vəziyyətini təyin etmək üçün əvvəllər hazırladığımız bağlama analizi. 13

Şəkil 1. Warfarin müalicəsinin böyüməyə təsiri. Altı həftəlik kişi Sprague-Dawley siçovullarına hər 24 saatda yalnız K vitamini və ya hər 24 saatda K vitamini və hər 12 saatda bir varfarin vuruldu. Məlumatlar hər qrupdakı siçovullar üçün təyin olunan orta çəkilərdir. (Ətraflı məlumat üçün Metodlara baxın.)

Şəkil 2. Warfarin müalicəsinin aortanın kalsifikasiyasına təsiri. Bölmələrdə hər 12 saatda bir varfarin və hər 24 saatda 2, 3, 4 və 5 həftə ərzində K vitamini ilə müalicə olunan siçovulların qarın aortası göstərilir. Qarın aortasının böyrək budağı ilə iliak bifurkasiyası arasında olan seqmenti nekropsiya zamanı çıxarıldı və 10% tamponlanmış formalinlə fiksasiya olundu və minerallaşma sahələrini aşkar etmək üçün uzununa kəsiklər fon Kossa boyası ilə boyandı.

Şəkil 3. 4 həftəlik warfarin müalicəsindən sonra karotid arterin (yerində) fotoşəkili (diseksiyalı mikroskop vasitəsilə çəkilmişdir). Dairəvi kalsifikasiyanın ağ lentlərinə diqqət yetirin. (Arteriyanın yaxınlığındakı xətlər heyvanın ilkin parçalanmasından gələn palto tükləridir.)

Şəkil 4. 5 həftə ərzində warfarin ilə müalicə olunan bir siçandan alınan aorta və karotid arteriyaların rentgenoqrafiyası. Nekropsiya zamanı qarın aortası və hər iki yuxu arteriyası çıxarılıb və rentgenoqrafiya aparılıb. Hər bir arteriyada minerallaşmanın nöqtə nöqtələrinə diqqət yetirin.

Şəkil 5. 4 həftə ərzində yalnız warfarin və K vitamini və ya K vitamini ilə müalicə olunan siçovulların aortasında MGP mRNA səviyyəsinin Northern blot analizi. RNT torakal aortadan çıxarıldı və hər bir aortadan 40 mkq ümumi RNT 1,4% formaldehid-agaroz geli üzərində işlədilib, Nytran membranında ləkələndi və 32 P etiketli MGP cDNA və 32 P etiketli ilə hibridləşdirildi. GAPDH üçün cDNA. Zolaq 1, MGP mRNA -nın bol qaynağı olan normal siçovul böyrək hüceyrələrindən ümumi RNT. 3 46 2-5 şeridli, 2 varfarinlə müalicə olunan və 2 nəzarət siçanının torakal aortasından ümumi RNT.

Şəkil 6. Warfarin müalicəsinin aorta ürək qapağının kalsifikasiyasına təsiri. 4 həftə ərzində yalnız warfarin və K vitamini və ya K vitamini ilə müalicə olunan siçovulların nekropsiyasında ürəklər çıxarılıb. Bölmələr daha sonra hər bir ürək boyunca kəsilmiş və mineralizasiya sahələrini aşkar etmək üçün von Kossa ləkəsi ilə boyanmışdır. Kalsifikasiyanın yeganə bölgələri varfarinlə müalicə olunan siçovulların aorta ürək qapağında (bu rəqəm) və koronar arteriyalarda (göstərilməmişdir) aşkar edilmişdir.

Cədvəl 1. Siçovul toxumalarında kalsium və MGP səviyyəsinə dəyişdirilmiş dəyişdirilmiş Warfarin müalicə protokolunun təsiri

ND müəyyən edilmədiyini göstərir. Siçovullar 4 həftə ərzində warfarin plus vitamin K və ya vitamin K ilə müalicə olundu. Nekropsiya zamanı hər bir siçovuldan döş aortası, böyrək, ağciyər və proksimal tibiyanın metafiz və epifizi çıxarıldı, qurudulub və çəkisi ölçüldü. Hər bir toxuma 10% formik turşunun 10 qat artıqlığı (ağırlıq/həcm) ilə demineralizasiya edildi və turşu ekstraktları kalsium və MGP üçün analiz edildi (Metodlara baxın). Nəticələr hər qrupdan 2 heyvan üçün ortalama dəyərlərdir.

Cədvəl 2. Dəyişdirilmiş Varfarin Müalicə Protokolunun Serumdakı MGP səviyyəsinə təsiri

Dəyərlər ortalama ± SD -dir. MGP səviyyəsi 1-5 həftə ərzində warfarin plus vitamin K və ya vitamin K ilə müalicə olunan siçovulların serumunun radioimmunoassay yolu ilə müəyyən edilmişdir.

Bu iş qismən ABŞ İctimai Sağlamlıq Xidməti (qrant AR27029) tərəfindən dəstəkləndi. Kien Trinhə Northern blot prosedurlarına və Amanda Wallaceə heyvan müalicəsinə kömək üçün təşəkkür edirik.


Fermentlər reaksiyada istifadə edilmədən reaksiya sürətini artırmaq üçün biokimyəvi reaksiyada katalizator rolunu oynayan zülallardır. Vücudunuzda həzm və enerji istehsalı kimi həyati funksiyaları yerinə yetirmək üçün minlərlə ferment növü işləyir. Bioloji və kimyəvi reaksiyalar çox yavaş baş verə bilər və canlı orqanizmlər reaksiya sürətini daha əlverişli sürətə çatdırmaq üçün fermentlərdən istifadə edirlər. Fermentlərin çoxlu bölgələri var ki, onları aktivləşdirmək və söndürmək üçün ko-faktorlar tərəfindən aktivləşdirilə bilər. Ko-faktorlar adətən müxtəlif qida mənbələri vasitəsilə istehlak edilən vitaminlərdir və fermentdə aktiv sahəni açır. Aktiv sahələr reaksiyaların bir ferment üzərində reallaşdığı yerlərdir və yalnız bir zülal və ya şəkər ola biləcək bir substrat üzərində hərəkət edə bilər. Bu barədə düşünməyin yaxşı bir yolu kilid və açar modelidir. Yalnız bir açar kilidi düzgün aça bilər. Eynilə, yalnız bir ferment bir substrata yapışa bilər və reaksiyanı daha sürətli reallaşdıra bilər.

Vücudunuzda hər biri bir xüsusi protein məhsulu üçün reaksiyanı sürətləndirən təxminən 3000 unikal ferment var. Fermentlər beyin hüceyrələrinizin daha sürətli işləməsinə və əzələlərinizin hərəkət etməsinə enerji verməyə kömək edə bilər. Şəkəri parçalayan amilazalar, zülalları parçalayan proteazlar və yağları parçalayan lipazlar da daxil olmaqla həzm sistemində böyük rol oynayırlar. Bütün fermentlər təmas üzərində işləyir, buna görə də bu fermentlərdən biri düzgün substratla təmasda olduqda dərhal işə başlayır.


Western Blotting

Antikorlar, protein ifadəsinin səviyyələrini təyin etmək və təmizlənmə zamanı zülalları analiz etmək üçün faydalı olan Western blotting adlı bir üsulda istifadə edilə bilər. Bu üsul ümumiyyətlə aşağıdakı addımları əhatə edir:

  1. Zülal nümunəsi poliakrilamid gel elektroforezinə məruz qalır.
  2. Bundan sonra gel bir nitroselüloz təbəqəsinin üzərinə qoyulur və geldəki protein elektroforetik olaraq nitroselüloza köçürülür.
  3. Sonra nitroselüloz zülalları qeyri-spesifik bağlamaq qabiliyyətini "blok" etmək üçün jelatində isladılır.
  4. Nitroselüloz daha sonra maraqlanan protein üçün spesifik antikorla inkübe edilir.
  5. Nitroselüloz daha sonra birinci antikor üçün spesifik olan ikinci antikorla inkubasiya edilir. Məsələn, əgər birinci antikor dovşanlarda yetişdirilibsə, ikinci antikor "keçi anti-dovşan immunoqlobulini" adlandırıla bilər. Bunun mənası budur ki, dovşan immunoglobulinlərindən keçilərdə bir antikor reaksiyası ortaya çıxarmaq üçün istifadə edilmişdir. Keçi antikorları (poliklonal), dovşan antikorlarında qorunan bölgəni tanıyanları ehtiva edəcək. Fc bölgəsi qorunduğundan, nitroselüloz kağızı da daxil olmaqla, hər hansı və bütün dovşan antikorlarına bağlanacaq.
  6. İkinci antikor tipik olaraq xromogen bir substratla təmin edildikdə rəng reaksiyasına səbəb olacaq kovalent şəkildə bağlanmış bir fermentə sahib olacaqdır.
  7. İstənilən zülalın molekulyar çəkisi və miqdarı digər zülalların kompleks bir qarışığından (məsələn, xam hüceyrə ekstraktı) xarakterizə edilə bilər.

Yuxarıda göstərilənlərin bir variantında, protein nümunəsi birbaşa nitroselüloz kağız üzərində ləkələnə bilər. nöqtə ləkəsi ) əvvəlcə bir gel işləmədən. Bu, məsələn, antikor monoklonaldırsa və yerli strukturdan asılı olan epitopu tanıyırsa (SDS SƏHİFƏSİ işlədildikdə məhv ediləcək) arzuolunan ola bilər.

Müxtəlif istifadələrinə əlavə olaraq, antikorlar zülalları təmizləmək üçün də istifadə edilə bilər.

  • Nisbətən böyük miqdarda bir antikor əldə edilə bilərsə, kovalent olaraq xromatoqrafiya qatranına (məsələn, sefadeks muncuqlarına) bağlana bilər.
  • Belə bir sütunun üzərində xam hüceyrə ekstraktı keçirilsə, yalnız maraqlanan protein bağlanmalı və qalan hər şey içindən keçəcəkdir.
  • Bağlı zülal daha sonra tökülə bilər. Bu, adətən orta dərəcədə aşağı pH şəraitində (sirkə turşusu istifadə etməklə) əldə edilir. Nə qədər ki, maraq doğuran zülal bu cür şərtlərlə geri dönməz şəkildə denatürasiya olunmur, üsul kifayət qədər yaxşı işləyəcək.
  • Bir potensial tələ, mutant zülalları təmizləmək üçün istifadə olunan monoklonal antikorları ehtiva edir. Epitopu ehtiva edən zülal bölgələri, antikorun bağlanma qabiliyyətini pozmadan dəyişdirilə bilməz. Beləliklə, monoklonal antikorların təmizlənmə sxemində istifadəsi onun müəyyən mutantların təmizlənməsində istifadəsini istisna edə bilər.

Zülalların təmizlənməsi bir sıra kimi düşünülə bilər fraksiya mərhələləri nəzərdə tutulmuşdur ki:

  • Maraqlanan zülal demək olar ki, yalnız bir fraksiyada (və yaxşı məhsuldarlıqla) olur.
  • Çirkləndiricilərin əhəmiyyətli bir miqdarı fərqli bir fraksiyada tapıla bilər

Təmizləmə zamanı bir çox parametrləri izləmək lazımdır, o cümlədən:

  1. Ümumi nümunə həcmi
  2. Ümumi zülal nümunəsi (A ilə qiymətləndirilə bilər280 1.4

Bu əsas məlumat təmizləmənin hər bir addımı zamanı aşağıdakı məlumatları izləməyə imkan verəcək:

  1. % gəlir hər təmizləmə addımı üçün
  2. Xüsusi fəaliyyət İstədiyiniz zülalın miqdarı (vahid/mq ümumi protein)
  3. Təmizləmə güclənməsi hər addımın (məsələn & quot; 3,5 dəfə təmizlənməsi)

Bir təmizləmə sxemi tərtib edərkən ümumiyyətlə balanslaşdırmalısınız təmizlənmə ilə məhsuldarlıq .

  • Məsələn, yaxşı məhsuldarlıqla 90% təmiz material əldə etmək nisbətən sadə ola bilər.
  • Bununla birlikdə, bu məhsuldarlığı daha yaxşı bir neçə faiz artırmaq çətin ola bilər.
  • Təmizlənmiş zülalın planlı tətbiqi hədəf saflığını təyin edir .
  • Zülal amin turşusu ardıcıllığı məlumatını təyin etmək üçün istifadə ediləcəksə, bəlkə də 90% məqbuldur. Bununla birlikdə, material klinik sınaqlarda istifadə ediləcəksə, 99.99+% hədəf təmizliyi ola bilər.

Təmizləmədə ilkin addımlar

Şəkil 4.1.1:Təmizləmə addımları

  • Yalnız təmizləməyə çalışdığınız zülalın ümumi fiziki və kimyəvi xüsusiyyətləri haqqında deyil, həm də çirkləndirici komponentlər.
  • Məsələn, bir çoxları E. coli zülallar ümumiyyətlə aşağı molekulyar çəki (& lt50,000 Da) və bir qədər turş izoelektrik nöqtədə

Adətən təmizlənmənin ilkin addımları həll olunan zülallar və digər hüceyrə komponentləri arasındakı ümumi fiziki və/və ya kimyəvi fərqlərdən istifadə edir.

  • Məsələn, həll olunan zülalları ümumi hüceyrə zibilindən və bütöv hüceyrələrdən ayırmaq olar sentrifuqalama.
  • Beləliklə, hüceyrə tərkibinin sərbəst buraxılmasına imkan vermək üçün hüceyrələr fiziki olaraq pozulur (homogenləşmə və ya hüceyrə presi ilə). Bundan sonra ümumiyyətlə həll olunan komponentləri həll olunmayanlardan ayırmaq üçün sentrifuqalama aparılır.
  • Məhz bu nöqtədə təmizlənməni izləmək üçün məlumatların toplanması başlayır.

kimi böyük katyonik birləşmələrin əlavə edilməsi ilə bəzən nuklein turşuları nümunədən asanlıqla çıxarıla bilər polietilen imin , və ya streptomisin sulfat .

  • Nuklein turşuları bu birləşmələrə elektrostatik qarşılıqlı təsirlər və kompleks vasitəsilə bağlanır çökür və mərkəzdənqaçma yolu ilə çıxarıla bilər.
  • Eyni ümumi nəticəni ion mübadiləsi qatranlarına qarışdıraraq əldə etmək olar anion dəyişdiriciləri (yəni qatranlar katyonik qruplar ehtiva edir) və sonra süzmək və ya çıxarmaq üçün santrifüj etmək. Hər iki metodda olduğu kimi, arzu olunan proteinin olduğu təsdiqlənməlidir yox həm də bağlıdır.

Zülalların xam fraksiyalarına müxtəlif miqdarda çöküntülərin əlavə edilməsi ilə əldə edilə bilər, məsələn ammonium sulfat , və ya polietilen glikol (PEG).

  • Bu tip təmizləmə mərhələsi üçün, çöküntünün konsentrasiyası funksiyası olaraq məhlulda (və qranullarda) qalan ümumi zülalın və istədiyiniz zülalın miqdarını izləmək üçün ilkin təcrübə aparılır.

Ammonium sulfat (% doymuş)

Şəkil 4.1.2:Çöküntü konsentrasiyasının bir funksiyası kimi zülalların fəaliyyəti

  • Bu xüsusi nümunədə şanslıyıq: təxminən 30% ammonium sulfat nümunəmizdəki ümumi protein konsentrasiyasının təxminən 80% -ni çökə bilərik, amma arzu etdiyimiz zülal üçün aktivlik analizimiz arzu etdiyimiz zülalın təxminən 95% -nin hələ də həll olduğunu göstərir .
  • 80% ammonium sulfatda istədiyimiz zülalın hamısı çökdü. Beləliklə, bu nəticələrdən aşağıdakıları edərdik:
  1. Nümunəmizə ammonium sulfatı 30% doyma konsentrasiyasına əlavə edin
  2. Santrifüj edin və qranulları atın
  3. 80% doyma üçün ammonium sulfat əlavə edin
  4. Santrifüj edin və pelleti saxlayın. Proteini həll etmək üçün pelleti tamponda yenidən dayandırın.
  • Təxminən 95% məhsuldarlıqla təxminən 5 qat təmizlənmə gözləyərdik.

Açılmamış protein cavabı

Endoplazmik retikulum (ER) transmembran, sekretor və ER-rezident zülalların qatlanması və olgunlaşması üçün əsas yerdir. ER homeostazını dəyişdirən pozğunluqlar bütün canlı hüceyrələr üçün təhlükə olan açılmamış zülalların (UP) yığılmasına səbəb ola bilər. Stresin öhdəsindən gəlmək üçün hüceyrələr hüceyrədaxili siqnal yolunu aktivləşdirirlər - açılmamış protein reaksiyası (UPR). UPR inteqrasiya olunmuş hüceyrədaxili siqnal yoludur və ER lümenində zülalın qatlanma vəziyyəti haqqında məlumatı sitoplazmaya və nüvəyə ötürür. UPR, UPR genlərinin transkripsiya induksiyasını (qırmızı oxlar), qlobal protein sintezinin (qara oxlar) və ER ilə əlaqəli tənəzzülün (ERAD) (yaşıl oxlar) translational zəifləməsini əhatə edir. Bu fərqli nəticələr sağ qalmaq üçün adaptiv reaksiyalar təmin edir. Zülal qatlanma qüsuru düzəldilməzsə, hüceyrələr apoptoza məruz qalır (açıq-mavi oxlar). UPR-nin üç əsas çeviricisi PERK, IRE1 və ATF6-dır. Şəkil 1

PERK, ER stresinə cavab olaraq tərcümənin başlanğıc faktoru 2-nin (eIF2α) α-alt bölməsini fosforlaşdıran ER transmembran protein kinazdır. eIF2α-nın fosforilasiyası tərcümə başlanğıc komplekslərinin əmələ gəlməsini azaldır ki, bu da AUG başlanğıc kodonlarının tanınmasının azalmasına və buna görə də ümumi tərcümə zəifləməsinə gətirib çıxarır. Bu tərcümə nəzarəti ER-də açılmamış zülalların sayını azaltmaq üçün səmərəli mexanizm təmin edir. Paradoksal olaraq, eIF2 üçün daha aşağı tələbi olan selektiv mRNT-lərin tərcüməsi və tərcümənin başlanğıc kompleksi, məsələn, aktivləşdirici transkripsiya faktoru ATF4-ü kodlayan mRNT kimi gücləndirilir. GADD34 transkripsiyası UPR tərəfindən ATF4 vasitəsi ilə induksiya edilir və protein məhsulu eIF2α-P-ni fosforlaşdırmaq və translational zəifləməni tərsinə çevirmək üçün protein fosfataz 1 (PP1) cəlb edir.

ATF6 ER transmembran aktivləşdirən transkripsiya faktorudur. ER stresində, ATF6α və ATF6β Golgi bölməsinə keçir, burada S1P və S2P proteazları ilə parçalanaraq sitozolik bir hissə verir. Pulsuz ATF6 fraqmenti transkripsiyanı aktivləşdirmək üçün nüvəyə köçür.

IRE1 bir ER transmembran glikoproteindir və sitoplazmik sahədə həm kinaz, həm də RNaz aktivliklərini ehtiva edir. ER stressi onun autofosforilasiyasına və sonra RNaz aktivliyinin aktivləşməsinə səbəb olur. Məməlilərdəki IRE1α və IRE1β substratı, XBP1 mRNA, əsas lösin-fermuar ehtiva edən transkripsiya faktorunu kodlaşdırır. XBP1 mRNA -nın birləşməsi, yetkin XBP1 mRNA yaratmaq üçün IRE1 -in RNase aktivliyi ilə başlanır. ATF6 və PERK yolları aşağı eukariotlarda qorunmadığı halda, IRE1 siqnal yolu bütün məlum eukaryotik hüceyrələrdə qorunur.

Aşağıdakı IRE1, PERK və ATF6 effektorlarından gələn siqnal, UPR hədəf genlərinin transkripsiyasını aktivləşdirmək üçün nüvədə birləşir. Məməlilərin ER stres elementi (ERSE), UPR hədəf genlərinin çoxunda deyil, hamısında da var. ATF4 ilə birlikdə ERSE-yə bağlanan XBP1, ATF6 və CAAT bağlayıcı faktor (CBF) hədəf genlərin transkripsiya induksiyasını aktivləşdirir. ATF6, UPR üçün müsbət rəy verən XBP1 transkripsiyasına da səbəb olur. Xüsusilə, molekulyar şaperonların və qatlanan katalizatorların tənzimlənməsi ER -nin qatlanma qabiliyyətini artıraraq hüceyrələrin sağ qalması üçün qoruyucu təsir göstərir. Bundan əlavə, mayada aktivləşdirilmiş Ire1p kimi genlərin transkripsiyasına səbəb olur INO1ER həcmini artırmaq üçün fosfolipid biosintezinə vasitəçilik edir.

UPR həmçinin ERAD-a vasitəçilik edən zülalları kodlayan genlərin transkripsiyasını induksiya edir. UPR-nin bu mühüm komponenti ER lümenində açılmamış zülalların parçalanmasını və təmizlənməsini stimullaşdırır. UP konsentrasiyasını azaltmaq üçün sekretor yolunu yenidən quran zülalları kodlayan bir neçə hədəf gen görünür.

BiP, ER şaperonu, üç proksimal ER stress çeviricisinin - IRE1, PERK və ATF6-nın aktivləşdirilməsinin əsas tənzimləyicisidir. Bütün çeviricilərdə BiP ilə qarşılıqlı əlaqədə olan bir lümenal sahə var. Normal şəraitdə BiP IRE1, PERK və ATF6 aktivləşdirilməsinin mənfi tənzimləyicisi kimi xidmət edir. ER stressi zamanı BiP UP-lərə bağlanır və beləliklə, BIP-nin transduserlərdən buraxılmasına imkan verir. IRE1 və PERK-dən BiP buraxılması onların homodimerləşməsinə və aktivləşməsinə imkan verir. ATF6 -dan BiP sərbəst buraxılması, tənzimlənən intramembran proteolizi üçün Golgi bölməsinə daşınmasına icazə verir. BiP ilə tənzimlənən bu aktivləşdirmə, ER-nin qatlanma qabiliyyətini hiss etmək üçün birbaşa mexanizm təmin edir.

UPR-nin uzun müddət aktivləşməsi apoptotik hüceyrə ölümünə səbəb olur, burada IRE1 proapoptotik funksiyanı yerinə yetirir. Aktivləşdirilmiş IRE1, apoptoz-siqnal kinaz 1 (ASK1) aktivləşdirmək üçün Jun N-terminal inhibitor kinaz (JIK) və TRAF2-ni işə götürür, bu da öz növbəsində JNK və mitokondriya/Apaf1-ə bağlı kaspazları aktivləşdirir. Procaspase-12 (pCSP-12), ER ilə əlaqəli apoptozun proksimal effektorudur. PCSP-12-dən TRAF2 buraxılışı CSP-12-nin qruplaşdırılmasına və aktivləşdirilməsinə imkan verir. Aktivləşdirilmiş CSP-12 CSP-9-u aktivləşdirir və bu da CSP-3-ni aktivləşdirir və apoptoza səbəb olur. ER stressi zamanı aktivləşdirilmiş CSP-7, aktiv CSP-12 yaratmaq üçün pCSP-12-ni parçalaya bilər. Əlavə olaraq, UPR aktivləşdirilməsi PERK və ATF4 yolları vasitəsilə CHOP/GADD153 ifadəsinə səbəb olur. CHOP, apoptozu gücləndirən proapoptotik transkripsiya faktorudur. Nəhayət, uzun müddətli ER stresinə cavab olaraq, PERK vasitəsi ilə siklin D1 tərcüməsinin zəifləməsi G1 fazasında hüceyrə dövranının dayandırılmasına gətirib çıxarır. Bu, hüceyrələrin hüceyrə dövrü boyunca irəliləməsinin qarşısını almaq üçün ER yoxlama nöqtəsi təmin edir.

Son illərdə UPR-nin komponentləri və mexanizmlərinin başa düşülməsində böyük irəliləyiş əldə edilmişdir. Cari tədqiqatlar UPR-nin patoloji və fizioloji rollarının aspektlərinə diqqət yetirir.


Videoya baxın: Assay for active Protein C in blood - product ADG855 (Dekabr 2022).