Məlumat

Antikor reaksiyasını ölçən seroloji analizlər

Antikor reaksiyasını ölçən seroloji analizlər


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Bir insanda bir bakteriyaya uyğun bir immun cavabın qarşısını ala biləcəyini nəzərə alsaq, yoluxmuş insanlarda meydana çıxdığı bilinən bütün antikorların istehsal edilməməsi və ya bir bakteriyaya xas olan kifayət qədər antikor istehsal etməməsi də daxil olmaqla- sistemik infeksiya aşkarlanması üçün əsas kimi antikor istifadə seroloji testlər xas qüsurlu? Bu halda mən test və səlahiyyətli laboratoriya metodologiyasının müvafiq tətbiqini fərz edirəm. Ancaq eyni dərəcədə vacibdir, müəyyən bir antikor testinin effektivliyini nəzərə almaq üçün müntəzəm olaraq hansı meyarlardan istifadə edilə bilər.


Seroloji testlər üçün istifadə olunan antikorlar in vitro şəkildə aparılır və patogenin aradan qaldırılması üçün təsirli olması tələb olunmur. Yoluxmuş bir şəxs üçün, antikorlar neytrallaşdırmada, opsonizasiyada və ya tamamlayıcı sistemin aktivləşdirilməsində rol oynaya bilər (daha ətraflı məlumat üçün Janeway -ın İmmunobiologiyasını yoxlayın). Antikorların mövcud olmasının və bu yollarda təsirli bir reaksiya verməməsinin bir çox səbəbi var.

Məsələn, E. Coli O157:H7 Şiqa toksini istehsal edir və nəcisdə toksinin olub-olmadığını yoxlamaq üçün immunoanalizlər mövcuddur (1). Xəstəliyə səbəb olmaq üçün yalnız az miqdarda toksin lazımdır. Xəstəliyi olan şəxslərdə toksin əleyhinə antikorlar görüldü, bu toksinin immun cavab üçün kifayət qədər güclü bir problem olmadığını irəli sürdü (2).

Hər bir immunoassay üçün ayrı-ayrılıqda gedə bilərsiniz və hədəflərinin niyə müalicəyə çevrilməsinin çətin olduğunu görə bilərsiniz.


Sistemli bir infeksiyanın aşkarlanması üçün əsas olaraq antikorlardan istifadə edilən bütün seroloji testlər qüsurludurmu?

Yox

Hər bir diaqnostik test bir fərdin kliniki xüsusiyyətləri kontekstində və bu test haqqında məlumatlara uyğun olaraq şərh edilməlidir. Antikorlar üçün zərdab testləri fərqli deyil. Bunun müzakirəsi üçün Cecil Medicine Fəsil 8 və 9-a baxın. Əsas keçid:

Əksər testlər diaqnoz və ya proqnozla bağlı qəti cavab vermir, əksinə qeyri-müəyyənliyi azaldır

Pasif immunizasiya halları istisna olmaqla (məsələn, IVIG transfuziyası), zərdab nümunəsində spesifik bir antikorun olması həm bir antigenə məruz qaldığını, həm də immun reaksiyasını göstərir. Bunun nə demək olduğu fərddən və imtahandan asılıdır. Aktiv və ya xroniki infeksiyanın diaqnozu üçün ümumiyyətlə seçim testi olmasa da, bəzi antikor testləri bir çox insanda infeksiyanın əla göstəricisidir. Yaxşı bir nümunə HİV-ə qarşı antikor ola bilər.

Hər hansı bir diaqnostik testdə olduğu kimi (yenə də Cecil -ə baxın), HİV əleyhinə antikor bir standarta nisbətlə qiymətləndirildi, bu bizə həssaslıq (test mövcud olduqda xəstəliyi aşkar etməkdə nə qədər yaxşıdır) və spesifikliyi (testi istisna etməkdə nə qədər yaxşıdır) xəstəlik olmadıqda). Mükəmməl deyil (karyeramda bir yanlış pozitiv gördüm) və məruz qaldıqdan sonra ilk bir neçə həftədə faydalı olmur, amma ümumiyyətlə əla diaqnostik testdir.

Antikor testləri bir çox başqa şeylər üçün istifadə olunur və yenə də hər hansı bir diaqnostik testdə olduğu kimi, bu məqsədlə qiymətləndirilir. Bu testlərin yoluxucu xəstəliklərdə istifadəsinə sadiq qalaraq, Hepatit B antikor testləri maraqlı bir nümunədir, çünki fərqli antigenlərə qarşı antikor fərqli mənalar ifadə edir. Səthi antikor, məsələn, ya ifşa və klirensdən, ya da immunizasiyadan toxunulmazlığı göstərir. Əsas antikor, peyvənddə əsas antigen olmadığı üçün virusun özünə məruz qaldığını göstərir. Əksər antikor testlərində olduğu kimi, antikor sinfi də sizə faydalı məlumat verə bilər. IgM antikorları tipik olaraq ilkin immun reaksiyanı təmsil edir, burada IgG antikorları sonrakı cavabı və ya klirensi və ya xroniki infeksiyanı təmsil edir.


Sistemik infeksiyanın aşkarlanması üçün əsas kimi antikorlardan istifadə edilən bütün seroloji testlər xasiyyətcə qüsurludurmu?

Nəzəri olaraq düşünürsən. Seroloji analizlər nəzəri deyil, empirikdir.

Hər hansı bir analiz xarakterizə edildikdə, müəyyən bir nəticə ilə əlaqələndiriləcəkdir. Seroloji analizlər fərqli deyil. Hədəf olunan fenomenlə güclü bir əlaqə olduğu müddətcə, nəzəri olaraq "qüsurlu" olmalarının heç bir əhəmiyyəti yoxdur (bu nə deməkdirsə); Bilmək istədiyini söyləsələr, deməli, onlar funksionaldır.

Əgər hər dəfə seroloji analizdə 40 və ya daha yüksək göstəricilər oxunsa, fərdin yoluxduğu göstərilə bilər və hər dəfə 40-dan az olduqda fərd qorunmursa, o zaman analizdə hansı nəzəri problemlərin ola biləcəyinin əhəmiyyəti yoxdur. infeksiyanı proqnozlaşdırmaq üçün istifadə edilə bilər. Bu baxımdan, hər dəfə bir keramika müqəddəsinin infeksiya ilə əlaqəli duz gözyaşları ağladığı təqdirdə, nəzəriyyə nə qədər qüsurlu olursa olsun, müqəddəs test klinikada mükəmməl keçərdi.

Testinizi infeksiyanın olması ilə necə əlaqələndirirsiniz və ya hər hansı bir şey? Tipik olaraq, çox vaxt aparan və ya müntəzəm olaraq işlətmək çətin və ya bahalı olan qızıl standart testlər var və seroloji analizin təsdiqlənməsi üçün buna istinad ediləcək və sonra inşallah hər hansı tənzimləyici orqan tərəfindən təsdiqlənər ( ABŞ -da, tez -tez FDA).

Nəzəri səbəbləri praktiki mülahizələrlə qarışdırmayın.


Multipleks Serologiyadan Serolomikaya-SARS-CoV-2 Proteomuna Qarşı Antikor Cavabına Yeni Bir yanaşma

Yaranan SARS-CoV-2 pandemiyası, SARS-CoV-2 epidemiologiyasını qiymətləndirmək üçün xüsusi və həssas yüksək məhsuldarlıqlı seroloji analizlərə təcili ehtiyac yaradır. Bu səbəbdən, SARS-CoV-2 proteomuna antikor reaksiyalarının aşkarlanması üçün floresan-boncuk əsaslı SARS-CoV-2 multipleks seroloji analizinin inkişaf etdirilməsini məqsəd qoymuşuq. SARS-CoV-2 proteomunun proteinləri və SARS-CoV-1 protein N və ümumi soyuqdəymə Coronavirusları (ccCoVs) rekombinant şəkildə ifadə edildi. E. coli və ya HEK293 hüceyrələri. Testin performansı bir COVID-19 kohortunda qiymətləndirildi (n = Heidelberg'dən 48 xəstəxanaya yerləşdirilmiş xəstə) həmçinin n = ESTHER tədqiqatından yaşa və cinsə uyğunlaşdırılmış 85 pandemiya öncəsi nəzarət. Təhlilin təsdiqi evdə hazırlanmış immunofluoressensiya və kommersiya fermentlə əlaqəli immunosorbent (ELISA) analizləri ilə müqayisəni əhatə edir. SARS-CoV-2 N və sünbül zülalının reseptor bağlayan domeninə ikili sero-pozitivliyi ilə simptomların başlanmasından 14 gün sonra COVID-19 xəstələrində 100% (95% CI: 86-100%) həssaslıq əldə edildi. Bu alqoritmlə əldə edilən spesifiklik 100% idi (95% CI: 96-100%). CcCoVs N-ə antikor reaksiyaları olduqca yüksək idi və SARS-CoV-2 N ilə əlaqəli deyildi. Əlavə SARS-CoV-2 zülallarının daxil edilməsi, həmçinin M, A və G immunoglobulin (Ig) siniflərinin ayrıca qiymətləndirilməsi. xəstəliyin gedişi və antikor reaksiyasının gedişi ilə bağlı araşdırma analizləri. Bu yeni hazırlanmış SARS-CoV-2 multipleks seroloji təhlili, SARS-CoV-2 sero-pozitivliyini təyin etmək üçün yüksək həssaslıq və spesifikliyə nail oldu. Yüksək ötürmə qabiliyyəti böyük əhali əsaslı tədqiqatlarda epidemioloji SARS-CoV-2 tədqiqatına imkan verir. Panelə əlavə patogenlərin daxil edilməsi və Ig izotiplərinin ayrı-ayrılıqda qiymətləndirilməsi əlavə olaraq SARS-CoV-2 sero-yayılmasından kənar tədqiqat suallarını həll etməyə imkan verəcəkdir.

Açar sözlər: SARS-CoV-2 multipleks serologiyası.

Maraqların toqquşması bəyanatı

Müəlliflər maraqların toqquşması olmadığını bəyan edirlər.

Rəqəmlər

Sxematik tədqiqat diaqramı. Covid19 halları…

Şematik öyrənmə diaqramı. COVID-19 hadisələri mart ayları arasında Heidelberg Universitet Klinikalarında işə qəbul edildi ...

SARS-CoV-2 zülallarına antikor reaksiyaları...

SARS-CoV-2 zülallarına antikor reaksiyaları n = 85 pandemiya əleyhinə nəzarət və n…

SARS-CoV-2 zülallarına antikor reaksiyaları...

SARS-CoV-2 zülallarına N, S1, S2 və onların müvafiq alt parçalarına (N-EP3,…


SARS-CoV-2-ə Antikor Cavabının Ölçülməsi

SARS-CoV-2 peyvəndləri dünyanın hər tərəfinə yayıldıqca, klinisyenlərin zaman keçdikcə bədənin immun reaksiyasını ölçə bilməsi, qorunmanın nə qədər təsirli olduğunu və nə qədər davam etdiyini başa düşməsi daha da əhəmiyyətlidir. Antikor testləri, infeksiyadan və ya peyvənddən sonra antikor cavabını təsdiqləməyə və ölçməyə kömək edən COVID-19 ilə mübarizədə çox vacib bir rol oynayır.

Pandemiyada antikor testlərinin necə istifadə edildiyini öyrənmək üçün Texnologiya şəbəkələri Beckman Coulter-də İmmunoassay və Klinik Kimya üzrə Avropa Baş Meneceri Heather-Read Harper ilə danışdı. Heather, kəmiyyət antikor testlərinin üstünlüklərini də vurğuladı və həm IgG, həm də IgM -nin aşkarlanmasının niyə dəyərli ola biləcəyini müzakirə etdi.

Anna MacDonald (AM): Antikor testlərinin COVID-19 ilə mübarizədə oynadığı bəzi rolları izah edə bilərsinizmi?

Heather Read-Harper (HRH):
Seroloji testlər olaraq da bilinən antikor testləri, bir insanın immun vəziyyətinin mərhələlərini izah edir və antikorların varlığını axtarır. Adətən qanda ölçülən iki növ antikor var: IgM antikorları, ümumiyyətlə, orqanizmin virusa qarşı ilk müdafiə xəttidir, IgG antikorları isə virusa qarşı daha davamlı immun cavab verir.

Antikor testləri, bir insanın SARS-CoV-2 virusuna qarşı inkişaf etdirdiyi toxunulmazlıq səviyyəsini anlamaqda kritik rol oynayır. Bu cür anlayış, məsələn, yoluxma riski daha çox olanları və əvvəllər yoluxmuş və təhlükəsiz şəkildə işə və ya universitetə ​​qayıda bilənləri müəyyən etməyə kömək edə bilər.

Daha geniş miqyaslı test həmçinin əhalinin toxunulmazlıq statusu haqqında ümumi məlumat verə bilər və potensial olaraq bu virusun gələcək idarə olunmasına kömək edə bilər.

Peyvənd proqramları uğurla davam edərkən, bu analizlər fərdin zamanla peyvəndlərə qarşı immun reaksiyasını və toxunulmazlığın nə qədər davam edə biləcəyini başa düşməkdə mühüm rol oynamaq potensialına malikdir.

AM: Hər bir antikor növünün aşkarlanmasının üstünlükləri nələrdir?

HRH:
İnfeksiyadan sonrakı ilk günlərdə yalnız virus aşkar edilə bilər. Bu zaman çoxalır və başqalarına asanlıqla ötürülür. Bu nöqtədə, virusu aşkar etmək üçün molekulyar diaqnostik PCR əsaslı testlər və antigen testlərindən istifadə edilə bilər. Şəxsin immun sistemi infeksiyanın kəskin mərhələsinin bir hissəsi olaraq viral yükə cavab verməyə başlayır. Bu, virusla mübarizə üçün IgM antikorları istehsal edildikdə və artdıqda və daha yeni bir infeksiyaya yoluxmuş xəstələri müəyyən etmək üçün istifadə edilə bilər. Təxminən bir həftə sonra infeksiyanın sağalma mərhələsinə çatır və IgG istehsal olunur və artır, IgM isə azalmağa başlayır. Bununla birlikdə, tələb olunan vaxt bir fərddən digərinin reaksiyasına görə dəyişir.

İnfeksiyanın bu prinsiplərinə riayət etməklə biz fərdin immunitet statusunu və infeksiya mərhələsini başa düşmək üçün həm IgM, həm də IgG analizlərindən istifadə edə bilərik, baxmayaraq ki, IgG gələcək infeksiyanın təsirini azaltmaq üçün lazımi toxunulmazlığı təmin edir.

AM: Beckman Coulter bu yaxınlarda Access SARS-CoV-2 IgG II antikor analizini işə saldı. Testin necə işlədiyinə ümumi bir fikir verə bilərsinizmi?

HRH:
Access SARS-CoV-2 IgG II təhlili, əvvəlki infeksiyaya cavab olaraq koronavirusun sünbül zülalının reseptor bağlayıcı sahəsinə yönəldilmiş IgG antikorlarını ölçür. Xəstə nümunələrindən IgG antikorlarını tutmaq üçün maqnit hissəciklərində hərəkətsizləşdirilmiş virus antigenlərindən istifadə edir və etiketli anti-IgG antikorlarından istifadə edərək onları aşkar edir.

Təhlil sonra 2.00-450 AU/mL arasında dəyişən ədədi nəticə, həmçinin SARS-CoV-2 IgG antikorları üçün keyfiyyətli nəticə verir. Test, simptomun başlanmasından 15-60 gün sonra təsdiqlənmiş 99.9% spesifiklik və 98.9% həssaslığa malikdir. Access SARS-CoV-2 IgG II analizi Təsadüfi Giriş Rejimində (RAM) istifadə oluna bilər və toplu işlənmədən mövcud iş axınlarına problemsiz şəkildə inteqrasiya oluna bilər. Təhlil, böyük laboratoriyalar üçün nəzərdə tutulmuş yüksək məhsuldarlıq DxI 800, orta ölçülü laboratoriyalar üçün DxI 600 və kiçik laboratoriyalar və səhiyyə klinikaları üçün Access 2 analizatorları da daxil olmaqla müxtəlif Beckman Coulter analizatorları ilə də istifadə edilə bilər.

AM: Niyə hədəf olaraq seçilmiş sünbül zülalının reseptor bağlayıcı sahəsinə yönəldilmiş IgG antikorları təyin edildi?

HRH:
Koronavirusun dörd növ proteini var: membran, zərf, nukleokapsid və sünbül. Koronavirusun əsas səthi zülalı olan və sünbül zülalıdır və ev sahibi hüceyrələrə daxil olmağa vasitəçilik edir. Sünbül zülalının reseptor bağlama sahəsi (RBD), angiotensinə çevrilən ferment 2 və ya ACE2 adlanan tənəffüs hüceyrələrindəki bir reseptora güclü bağlanır. ACE2 insan hüceyrəsinin giriş reseptorudur və viral hüceyrə membranı insan hüceyrə membranı ilə birləşdikdən sonra virusun genomu insan hüceyrələrinə daxil olaraq infeksiyaya başlayır.

Güman edilir ki, sünbül zülalının RBD-yə bağlanan IgG antikorları virusa qarşı immun reaksiyanı başa düşmək üçün açar ola bilər. in vitro Tədqiqatlar göstərdi ki, bu antikorların mövcudluğu SARS-CoV-2 infeksiyasının zərərsizləşdirilməsini göstərə bilər və virusu hüceyrələrə yoluxdura bilməz.

Beckman Coulter SARS CoV-2 IgM və IgG II analizləri potensial olaraq qoruyucu olan antikorları aşkar etmək üçün sünbül zülalının reseptor bağlayan sahəsinə yönəldilir.

AM: Kəmiyyət antikor testinin üstünlükləri hansılardır?

HRH:
Bu pandemiyanın başlanğıcında mövcud olan bir çox seroloji analiz keyfiyyətli xarakter daşıyırdı. Bu, yalnız müsbət və ya mənfi nəticə əldə etmək demək idi. Buna görə də nəticələr yalnız klinisyenlərə xəstənin virusa məruz qalıb-qalmaması barədə məlumat verdi. Nəticə zamanla immun reaksiyası haqqında aydın bir şəkil vermədi.

Kəmiyyət analizləri, qandakı antikorların səviyyəsini ölçə bilən bir rəqəm verir. Beckman Coulter-in SARS CoV-2 IgG II kimi təhlilləri klinisyenlərə kəmiyyət bazası quraraq xəstənin antikor səviyyəsindəki tendensiyaları izləməyə və beləliklə zamanla fərdin virusa qarşı immun reaksiyasının nisbi dəyişməsini qiymətləndirməyə imkan verir.

Heather-Read Harper, Texnologiya Şəbəkələri üzrə Elm Yazıçısı Anna MacDonald ilə danışırdı.


Metodlar

Məlumat və nümunə götürmə

Malyariya infeksiyasının dinamikasını və illik kütləvi dərman qəbulunun (MDA) təsirini başa düşmək üçün 2013-2015-ci illərdə beş inzibati regionda - Qərb Sahilində (WCR), Şimal Bankda (NBR), Aşağıda yerləşən 12 kənddə perspektivli kohort tədqiqatı aparılmışdır. Çay (LRR), Mərkəzi Çay (CRR) və Üst Çay (URR) Bölgələri- Mwesigwa et al [13]. Plazmodium falciparum (Pf) Polimeraz zəncirvari reaksiya (PCR) ilə ölçülən yayılma, Mərkəzi Çay və Yuxarı Çay Bölgələrində müvafiq olaraq 2.27 ilə 19.60% arasında dəyişmişdir (Şəkil 1). Araşdırmaya 6 aydan yuxarı sakinlər cəlb edildi və hər il iyundan dekabr ayına qədər malyariya yayılma mövsümündə, 2014 -cü ilin aprelində quraqlıq mövsümündə və MDA -nın may və iyun 2014 və 2015 -ci illərdə tətbiqindən əvvəl aylıq sorğular keçirildi. (Şəkil 2). Hemoglobinin qiymətləndirilməsi və filtr kağızında (Whatman 3 Corporation, Florham Park, NJ, ABŞ) molekulyar və seroloji analiz üçün fərdi barmaq vurma qan nümunələri toplandı. Klinik malyariya hallarına tibb müəssisələrində simptomları olan şəxslər (məsələn, pasif halların aşkarlanması) və ya əvvəlki 24 saat ərzində hərarətli və ya aksiller temperaturu ≥ 37.5 ° C olan və tibb bacıları tərəfindən kəndlərdə təsbit edilmiş şəxslər və müsbət sürətli diaqnostik test (RDT) daxildir. nəticə (Paracheck Pf, Orchid Biomedikal Sistemi, Hindistan).

PCR yayılması ilə bölgələr və təhsil kəndləri ilə malyariya ötürülməsi dinamikasının öyrənilməsi xəritəsi

Tədris qrafikləri. Malaria Transmission Dynamics Study qrafiki qara və yaşıl rəngdə göstərilmişdir. Qərbi Sahil və Yuxarı Çay Bölgələri üçün mavi rənglə göstərilən seroloji tədqiqat qrafiki (müvafiq olaraq aşağı və orta ötürülmə parametrləri). Seroloji analiz, Qərbi Sahil Bölgəsindəki N'demban və Besse kəndlərində aylıq bütün kənd tədqiqatlarının nümunələri üzərində aparıldı (a), Yuxarı Çay Bölgəsində Njaiyal və Madina Samako (b) və Malyariya Transmissiya Dinamikası Araşdırması zamanı müsbət sürətli diaqnostik test (RDT) və ya polimeraza zəncirvari reaksiya (PCR) testi olan şəxslərdən uzunlamasına nümunələr. Aylıq tədqiqatlardan alınan Luminex MAGPIX nümunələrində seroloji analiz nümunələri işləndi, mikroskopiya, sürətli diaqnostik testlər (RDT) və polimeraz zəncirvari reaksiya (PCR) istifadə edilərək təhlil edildi.

Burada təqdim olunan seroloji tədqiqat Malyariya Transmissiya Dinamikasının Tədqiqatının alt toplusudur və bütün mövcud nümunələri (n = 4599) cəmi 1795 fərddən ibarət olan dörd kənddə aylıq sorğu seçimindən (Şəkil 2). Qərbi Sahil Bölgəsində (Besse və N'Demban), seroloji analiz üçün işlənmiş nümunələr 2013 -cü ilin iyul ayında ötürülmə mövsümünün əvvəlində aparılan araşdırmalardan alınmışdır (N. = 534) və 2013-cü ilin dekabrında mövsümün sonunda (N. = 524). Yuxarı Çay Bölgəsində (URR) seroloji təhlilə 2013 -cü ilin iyul ayında Njaiyal və Madina Samakoda toplanan bütün nümunələr daxil edilmişdir (N. = 778), dekabr 2013 (N. = 628), aprel (quru mövsüm) 2014 (N. = 799) və dekabr 2014 (N. = 737) (Cədvəl 1). Bu bölgələr, ötürülmə mövsümünün əvvəlində və sonunda aylar seçilərək, iki ötürmə intensivliyinin həddini aşır. Klinik PCD hallarından nümunələr tədqiqat iştirakçısının identifikasiya kodu ilə müntəzəm aylıq sorğular zamanı toplanmış eyni şəxslərdən nümunələrlə əlaqələndirildi. Fərdi səviyyəli antikor reaksiyaları ilə eyni vaxtda klinik və ya Pf Qərb Sahili Bölgəsi və Yuxarı Çay Bölgəsində yuxarıda göstərildiyi kimi infeksiyaya yoluxma, bütün kənd aylıq sorğu nümunələri, RDT və ya PCR testinin müsbət nəticəsi olan və ya hər hansı bir nöqtədə klinik simptomları olan 316 şəxsdən 1244 uzunlamasına nümunənin əlavə bir alt dəsti ilə birləşdirilmişdir. Malyariya Transmissiya Dinamikası Araşdırması zamanı (Şəkil 2). Bu fərdlər üçün, tədqiqatdan əldə edilən bütün nümunələr, müsbət bir RDT və ya PCR test nəticəsindən əvvəl və sonra seroloji cavablarını uzunlamasına tutmaq üçün işlənmişdir.

Bu araşdırma Qambiya Hökuməti/MRC Birgə Etik Komitəsi (SCC1318) tərəfindən təsdiq edilmişdir. Şifahi razılıq əvvəlcə kənd həssaslaşdırma yığıncaqlarında alındı, sonra bütün iştirakçılar üçün fərdi yazılı məlumatlandırılmış razılıq alındı. Valideynlər/qəyyumlar 17 yaşdan kiçik uşaqlar üçün yazılı razılıq vermiş və 12-17 yaş arası uşaqlardan razılıq alınmışdır.

Antigen seçimi və dizaynı

Antigenlər, uşaqlarda malyariya infeksiyası ilə əlaqəyə əsaslanan bir in vitro transkripsiya və tərcümə (IVTT) protein mikroarrayı üzrə 856 namizəddən ibarət ilkin ekrandan seçilmişdir [11]. Antigenlər yaradıldı və ifadə edildi Escherichia coli (E. coli) glutatyon S-transferaz (GST) etiketli füzyon zülalları kimi [20,21,22] istisna olmaqla PfAMA1 ilə ifadə olunur Pichia pastoris histidin etiketli bir protein olaraq [15]. Protein təmizlənməsi, müvafiq olaraq GST və His etiketli zülallar üçün yaxınlıq kromatoqrafiyası (Glutathione Sepharose 4B, GE Healthcare Life Sciences) və ya HisPur Ni-NTA (Invitrogen) və konsentrasiyası, keyfiyyəti və təmizliyi bir Bradford vasitəsi ilə qiymətləndirildi. analiz və SDS-PAGE. Transformasiya olunmamış kulturadan bakterial lizat E. coli fon reaktivliyini aradan qaldırmaq üçün analiz tamponlarında istifadə edilmişdir E. coli malyariya üçün xarakterik olmayan zülallar.

Əlavə olaraq, GST etiketli füzyon zülallarına qarşı potensial malyariya reaktivliyini nəzərə almaq üçün, GST-spesifik immunoglobulin (IgG) reaksiyalarını ölçmək və qeyri-spesifik bağlanma üçün düzəltmək üçün GST ilə əlaqəli boncuklar daxil edilmişdir. Laboratoriya işlənməsindən sonra, malyariyaya xas olmayan spesifik bağlanmanı göstərmək üçün eşik olaraq təyin olunan 1000 median floresans intensivliyindən (MFI) yuxarıda GST antikor cavabları olan 71 iştirakçı nümunəsi var idi və sonrakı analizlərdən xaric edildi. Tetanus toksoidi (TT, Massachusetts Biologic Laboratories) də peyvənd edilmiş Qambiyalıların bu protein hədəfinə antikor reaksiyaları göstərəcəyini güman edərək, daxili müsbət nəzarət kimi daxil edilmişdir. Antigen konstruksiyalarının və birləşmə şərtlərinin xülasəsi Cədvəl 2-də ətraflı verilmişdir.

Laboratoriya prosedurları

Antigenə spesifik antikor cavabları, Wu et al. 2019 [23]. Plazma 6 mm qurudulmuş qan ləkələrindən (4 μl tam qan ekvivalenti) ayrıldı və bir gecə otaq temperaturunda fosfat tamponlu duzlu su (PBS) (pH 7.2), 0.05% sodyum azid və 0.05% Tween-20, ilkin 1:50 nümunə qatılaşdırılmasını verir. Təhlilin işlənməsindən bir gün əvvəl nümunələr, 1:50 nisbətində əvvəlcədən seyreltilmiş 10 μl nümunəsi və qeyri-spesifik bağlanmanın qarşısını almaq üçün 90 μl Tampon B-ni istifadə edərək son 1: 500 nisbətində seyreltildi (1xPBS, 0.05% Tween, 0.5 % inək serum albümini (BSA), 0,02% sodyum azid, 0,1% kazein, 0,5% polivinil spirti (PVA), 0,5% polivinil pirolidon (PVP) və 1500 μg/ml E. coli çıxarış). Mənfi və müsbət nəzarətlər də 1 gün əvvəl Tampon B-də inkubasiya edildi, mənfi nəzarətlər 1: 500 nisbətində seyreltildi və 6 nöqtəli 5 qat ardıcıl seyreltmə ilə Qambiya yığılmış müsbət nəzarətlər (1: 10–1: 31,250). Müsbət nəzarət, Qambiya bölgəsindəki malyariya hiper-immun fərdlərindən 22 serum nümunəsindən ibarət idi və mənfi nəzarət kimi Avropa malyariya xəstəliyindən əziyyət çəkən yetkinlərin on fərdi plazma nümunəsi istifadə edildi.

Nümunələr Mwesigwa et al tərəfindən təsvir edildiyi kimi diaqnostik PCR üçün hazırlanmışdır. [13]. Qısaca desək, avtomatlaşdırılmış QIAxtractor robotu (Qiagen) istifadə edərək, 6 mm-lik üç DBS-dən DNT çıxarıldı. Çarpaz çirklənmə və DNT hasilatı səmərəliliyinə nəzarət etmək üçün müvafiq olaraq mənfi və müsbət (3D7) nəzarətlər daxil edilmişdir. DBS toxuma həzm tamponunda 60 °C-də 1 saat ərzində inkubasiya yolu ilə parçalandı və həzm olunan eluatlar tutma lövhələrinə tətbiq edildi, yuyuldu və DNT 80 μl-ə salındı. Çıxarılan DNT (4 μl), çoxsaylı nüsxəni gücləndirərək yuvalı bir PCR-də istifadə edildi Plazmodium cinsə və növə aid primerlərdən istifadə edərək ribozomal RNT gen ardıcıllığı [24]. Bütün PCR məhsulları QIAxcel kapilyar elektroforez sistemindən (Qiagen) istifadə edərək, skrininq kartuşu və 15-1000 bp hizalama markerindən istifadə edərək işlədilib. Nəticələr həm QIAxcel ikili qiymətləndirmə funksiyasından istifadə etməklə, həm də gel şəkillərinin vizuallaşdırılması ilə əl ilə ixrac edildi və ikiqat xal verildi və uyğunsuzluqlar üçüncü müstəqil oxucu tərəfindən qiymətləndirildi. Bütün oxucular iştirakçı sorğu məlumatlarına göz yumdu.

Statistik təhlillər

Məlumat təhlili, sero-insidansın potensial markerləri olaraq beş antigenə qədər ümumi IgG səviyyələrinə [11]-erkən transkripsiyalı membran zülalı 5 (Etramp5.Ag1), gametosit ixrac zülalı 18 (GEXP18), istilik şoku zülalı 40 (HSP40.Ag1) , eritrosit bağlayan antigen 175 RIII-V (EBA175) və retikulosit bağlayıcı zülal homolog 2 (Rh2.2030). Uzun ömürlü antikor reaksiyası ilə əlaqəli üç antigen-P. falciparum merozoit səthi antigen 1 19-kDa karboksi-terminal bölgəsi (PfMSP119), P. falciparum apikal membran antigeni 1 (PfAMA1) və P. falciparum glutamatla zəngin zülal, bölgə 2 (PfGLURP.R2)—müqayisə kimi daxil edilmişdir, bunlar tarixən zamanla sero-konversiya nisbətlərini qiymətləndirmək üçün istifadə edilmiş [8, 9] və əvvəllər Qambiyada da öyrənilmişdir [6, 7]. Uzunömürlü antikorlarla əlaqəli antigenlər üçün (PfMSP119, PfAMA1, PfGLURP.R2), əvvəllər malyariyaya məruz qalan, lakin bu yaxınlarda yoluxmamış bir endemik bölgədə yaşayan fərdlər hələ də endemik olmayan bölgələrdə malyariya xəstəliyindən xeyli yüksək qalıq antikor səviyyələrinə malik ola bilərlər. Buna görə median floresans intensivliyi (MFI) vahidlərində ifadə olunan mənfi və müsbət antikor səviyyələrinin paylanmasını təyin etmək üçün iki komponentli Gauss qarışıq modeli istifadə edilmişdir. Sero-pozitivlik hədləri orta log MFI dəyərləri və mənfi paylanmanın iki standart sapması kimi müəyyən edilmişdir [25]. Qarışıq modelləri 'istifadə edərək təxmin edildinormalmixEM'Funksiyasını yerinə yetirirmixtoolsV versiyası 3.6.1 -də v1.0.4 paketi. Qısa ömürlü antikorlarla əlaqəli antigenlər üçün, antikor səviyyələrinin infeksiyadan sonra daha sürətli çürüməsi səbəbindən populyasiyada antikor cavablarının bimodal paylanmasının statistik sübutunun güclü olmadığı-Etramp5.Ag1, GEXP18, HSP40.Ag1, EBA175 və Rh2 .2030— sero-pozitivlik həddi, mənfi nəzarət kimi istifadə edilən malyariyaya yoluxmamış 71 Avropa qan donorunun orta log MFI və üç standart kənarlaşma ilə müəyyən edilmişdir.

Antikor reaksiyası ilə klinik malyariyanın (sağlamlıq müəssisəsi və ya cəmiyyətdəki tibb bacıları vasitəsi ilə passiv olaraq aşkar edilən) və ya asemptomatik olma ehtimalı arasında fərdi səviyyəli əlaqə P. falciparum infeksiya (aylıq sorğu nümunələrindən PCR istifadə edərək aktiv şəkildə aşkar edilmiş) ümumiləşdirilmiş qiymətləndirmə tənliklərindən (GEE) istifadə edilməklə qiymətləndirilmişdir. Təhlil, yaş qrupu (1-5 yaş, 6-15 yaş və 15 yaşdan yuxarı) və uzun müddət davam edən insektisidlə müalicə olunan ağların (LLIN) son 24 saat ərzində düzəldilməsi və mürəkkəb səviyyədə qruplaşdırılmasına icazə verilməsi, burada birləşmə, əsas iqamətgah ətrafında mərkəzdə yerləşən ev təsərrüfatlarının toplusudur. Antikor reaksiyası ilə infeksiya ehtimalı arasındakı əlaqənin böyüklüyü yaş qrupu ilə qarşılıqlı əlaqə üçün qiymətləndirilmişdir. Uzunlamasına nümunələrin alt çoxluğuna əsasən, antikor reaksiyası ilə əvvəlki 4 ayda son infeksiya arasında fərdi səviyyəli əlaqə (eyni zaman nöqtəsində mövcud infeksiyadan fərqli olaraq) yaş qrupu, LLIN istifadəsi üçün düzəliş edilmiş GEE modeli ilə də qiymətləndirilmişdir. və təsadüfi təsirlər, yuxarıda göstərildiyi kimi, mürəkkəb səviyyədə.

Bir GEE modelindən istifadə edərək, klinik malyariya və ya asemptomatik infeksiyanın fərdi səviyyəli ehtimalları, sero pozitiv fərdlə eyni birləşmədə yaşamaqla əlaqəli olaraq qiymətləndirildi. Eynilə, fərdi infeksiya ehtimalları ilə mürəkkəb səviyyəli sero-prevalans arasındakı əlaqə (& lt% 50 və ya gt 50%), yaş qrupu və LLIN istifadəsi və birləşmə səviyyəsində təsadüfi təsirlər üçün uyğunlaşdırılmış qarışıq effektli ümumiləşdirilmiş xətti model ilə qiymətləndirildi. bu da ötürmə intensivliyində coğrafi fərqlərin potensial təsirini nəzərə alır. Kiçik birləşmələrin sero-yayılması ilə təxminlərin qərəzli olmamasını təmin etmək üçün analiz, tərkibindəki fərdlərin sayına görə (sero-statusu qiymətləndirilən) ölçülmüş və ən azı dörd fərd olan birləşmələr daxil edilmişdir. Modellər, R versiyası 3.14 -də 'geeM' və 'lme4' paketlərindən istifadə etməklə uyğun idi.

2013-cü ilin iyul və dekabr aylarında Qərb Sahil Bölgəsində və Yuxarı Çay Bölgəsində 2-10 yaşlı uşaqlar arasında kənd səviyyəsində sero-prevalansı (n = 1001) hər yaş klinikası ilə müqayisə edildi P. falciparum Mwesigwa et al. [13]. Aylıq klinik və P. falciparum infeksiya insidans nisbətləri müvafiq olaraq yeni klinik hadisələrin sayı və ya P. falciparum infeksiyalar (əvvəlki aylıq sorğuda PCR-mənfi olan PCR-pozitiv şəxslər) risk qrupundakı ümumi insan illərinə (PYAR) bölünür. Bu yaş aralığı, illik parazit indeksi (API) kimi digər rutin nəzarət ölçüləri ilə uyğunlaşdırmaq üçün seçilmiş, bu yaş qrupunu gözətçi əhali olaraq istifadə edir. Hər bir antijen üçün kənd səviyyəsindəki insidensiya dərəcələri ilə sero-yayılma arasındakı əlaqənin gücü Pearson korrelyasiya əmsalı ilə qiymətləndirilmişdir. 2014 -cü ilin aprel və dekabr ayları məlumatları klinik insidans və Pf bu sorğulardan yoluxma nisbətləri hələ bildirilməyib.


SARS-CoV-2 Multipleks Seroloji Təhlillər

ProcartaPlex Seroloji Testləri

SARS-CoV-2 infeksiyası zamanı IgA, IgM və IgG antikorlarını yaradan immun cavabını stimullaşdırmaq üçün əsas antigen kimi xidmət edən zülallara nukleokapsid (N), sünbül (S) zülalı və sünbül zülalının alt bölgələri daxildir. reseptor bağlama sahəsi (RBD) və S1 bölgələri olaraq. Nukleokapsid (N) zülalı SARS-CoV-1 və SARS-CoV-2 (1) arasında ən yüksək homologiyaya (90%) malikdir. SARS-CoV-2 pandemiyasının erkən mərhələsində mövcud olan seroloji test dəstləri, əhəmiyyətli çapraz reaktivlik nümayiş etdirən Nukleokapsid əleyhinə antikorları aşkar etmək üçün hazırlanmışdır və beləliklə SARS-CoV-1-ə məruz qalan subyektlər üçün daha yüksək yanlış pozitiv oxunuşlar əldə etmişdir (1) . SARS-CoV sünbül (S) zülalı, tacı bənzər (buna görə də korona) bir görünüş meydana gətirmək üçün trimerize bir quruluşa yığılır və S1 və S2 alt hissələrindən ibarətdir. S1 daxilində, C-terminal alt domenində yerləşən reseptor bağlama sahəsi (RBD), N-terminal domenindən SARS-CoV və SARS-CoV-2 arasında daha yüksək eyniliyə malikdir (74%) SARS-CoV-2, ACE2-ni SARS-CoV (2) kimi ana hüceyrələrə daxil olmaq üçün reseptoru kimi istifadə edə bilər. RBD, SARS-CoV-2 sünbül zülalının immunodominant yerlərindən biri kimi müəyyən edilmişdir, sünbül zülalına qarşı antikorlar zərərsizləşdirmə ilə yaxşı əlaqələndirilir. Bundan əlavə, yanlış müsbət nəticələri istisna etmək üçün endemik və mövsümi koronaviruslarla seroloji çarpaz reaktivliyi yoxlamaq vacibdir. Human Coronavirus Ig Total 11-Plex ProcartaPlex Panel dörd SARS-CoV-2 antikorunun (Spike trimer, S1 subunit, RBD və Nucleocapsid), altı koronavirus ştammının (SARS-CoV-1, MERS, CoV-NL63, CoV) skrininqinə imkan verir. -KHU1, CoV-229E, CoV-OC43 ) və Luminex xMAP texnologiyasından istifadə edərək bir quyuda bir mənfi nəzarət. Bir analizdə anti-SARS-CoV-2 antikorlarının və əlaqəli koronavirus antikorlarının eyni vaxtda aşkarlanması plazma və ya serum nümunələrindən istifadə edərək tam, vahid məlumat dəstini təmin etmək üçün vaxta qənaət edə bilər.

Şəkil 1. SARS-CoV-2 antigenləri üçün 39 Covid PCR (+) və 168 sağlam PCR (-) nəzarətindən əldə edilən skrininq nəticələri. Nəticələr spike timer üçün aşkar edilmiş antikor səviyyələrini göstərir, S1, RBD və Nucleokapsid antigenləri PCR (+) üçün yüksək antikor səviyyələrinin və PCR (-) nümunələri üçün aşağı antikor səviyyələrinin gözlənilən nəticələrinə uyğun gəlir.


SARS-CoV-2 Test Sənədləri və mənbələri

Sənədlər

Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Seroloji Təhlil Təlimat Təlimatı (PDF 601 KB)

Bu təlimat kitabçası ilə təfərrüatlı təlimatlar, iş axını, dəstin məzmunu, saxlama və nasazlıqların aradan qaldırılması üçün göstərişlər ilə təhlil haqqında daha çox məlumat əldə edin.

Bio-Plex Pro İnsan SARS-CoV-2 Seroloji Analizləri Sürətli Bələdçi (PDF 68 KB)

Bu sürətli bələdçi ilə tam 96 quyulu Bio-Plex SARS-CoV-2 Seroloji Analiz plakasının necə hazırlanacağını və işlədiləcəyini öyrənin.

Bio-Plex Pro İnsan SARS-CoV-2 N/RBD/S1/S2 4-Plex Panel Məhsul Məlumat Vərəqi (PDF 439 KB)

Bu məhsul məlumat vərəqi ilə analiz xüsusiyyətləri və çarpaz reaktivlik nəticələri kimi məhsul təfərrüatlarını əldə edin.

Bio-Plex Pro İnsan IgG SARS-CoV-2 Yarı Kəmiyyət Analizi Protokolu (PDF 96 KB)

Bio-Plex İnsan IgG SARS-CoV-2 N/RBD/S1/S2 Seroloji Analizləri ilə istifadə üçün bu yarı kəmiyyət protokolu ilə nəticələr çıxarın.

Bio-Plex Multiplex Sistemləri Broşürü (PDF 15.9 MB)

Bio-Plex multiplex immunoassays, alətlər və proqram təminatı ilə daha çox şey kəşf edərkən nəticələrə və nümunələrə vaxtı necə azalda biləcəyinizi öyrənin.

Standart Əyri Tətbiq Qeydindən istifadə edərək Kəmiyyət Bio-Plex Pro İnsan IgG SARS-CoV-2 Seroloji Analizləri (PDF 420 KB)

Bu tətbiq qeydindəki Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 Seroloji Analizlərindən istifadə edərək, VIARTROL SARS-CoV-2 Seroloji Nəzarətinin SARS-CoV-2 və ndashspecific IgG antikorlarının miqdarını ölçmək üçün bir istinad materialı olaraq necə təsdiqləndiyini öyrənin.

Bio-Plex Analitik Bələdçisi (PDF 2.2 MB)

Bio-Plex platformasında mövcud olan müxtəlif multipleks immunoassayları və panelləri araşdırın. Evaluate assay performance characteristics and sample data to choose the panel that fits your application.

Webinars

Role of Aberrant Cytokine Activity in Host Immune Response to COVID-19

In this webinar, we discuss early research and nascent hypotheses regarding the pathophysiology of SARS-CoV-2 induced COVID-19 disease by evaluating cytokine and chemokine profiles, the role of chronic inflammation in comorbidities, and the arc of immune resolution of historical virulent pathogens, such as SARS and MERS.

Multiplex Immunoassays in Vaccine Research and Development

Get the most data out of your sample, without spending time on individual ELISAs. Learn how multiplex assays are being used on the front lines to understand patient immune response during infection, and discuss the most commonly asked questions around targets, panels, and multi-plate data analysis.

Vaccine Development and Manufacturing

Tips for overcoming developmental hurdles, technologies that can shorten timelines, and novel tools for manufacturing and quality control.

Immunological Response Factors to SARS‑CoV‑2 in Acquired Immunity

In this webinar, we will be discussing the immune response to SARS‑CoV2, both in the context of natural exposure to the virus as well as induced immunity from vaccination. We will also investigate the relationship between symptom severity and the longevity of acquired immunity.


SARS-CoV-2 Assays To Detect Functional Antibody Responses That Block ACE2 Recognition in Vaccinated Animals and Infected Patients

FIG 1 ACE2 receptor expression and affinity. (A) Overview of soluble ACE2 receptor design (ACE2-IgHu). (B) Affinity of SARS CoV-2 receptor binding domain for immobilized ACE2-IgHu assessed by SPR (27 nM) curves are concentrations of RBD X, Y, and Z. (C) Affinity of ACE2-IgHu for immobilized SARS CoV-2 full-length spike protein assessed by ELISA. Optimal concentration of ACE2-IgHu for competition assays (∼EC90, red arrow) requires high signal without excess receptor present. FIG 2 ACE2 receptor competition assay development. (A) Competition ELISA schematic displaying immobilized anti-His pAb (red) capturing His6×-tagged SARS-CoV-2 spike protein (rainbow). Premixed ACE2-IgHu (green, blue) at a constant concentration with a dilution series of competitors (green, red) is added, and anti-human HRP (green) determines the amount of ACE2-IgHu remaining in the presence of competitors through a colorimetric readout. (B) Four constant concentrations of ACE2-IgHu were tested with various concentrations of the ACE2-IgMu competitor to establish an optimal ACE2-IgHu concentration which displays a full blocking curve (red, 0.10 μg/ml) from the competitor dilution series while retaining a wide range in signal. (C) Pseudovirus neutralization curves for a control antibody (non-SARS-CoV-2) in red and for ACE2-IgHu in blue.

Animal IgG and serological competition.

FIG 3 Animal IgG and serological competition. (A) IgG and serological competition schematic. Anti-His pAb captures SARS-CoV-2 spike protein. Immunized sera or IgG from small animals are used as competitors to block ACE2-IgHu receptor binding when premixed. ACE2-IgHu remaining is determined from an anti-human-HRP colorimetric readout. (B) IgGs present in a vaccinated BALB/c mouse block ACE2-IgHu binding with greater effect when the full-length SARS-CoV-2 S1-S2 spike protein is immobilized versus the S1 subunit by itself. (C) Area under the concentration-time curve (AUC) schematic displaying the larger area for uninhibited ACE2 binding versus the area from curves showing competition with ACE2. (D) AUC of IgGs purified from immunized rabbit sera (IgGr low dose, blue IgGr high dose, red) versus naive IgGr or day 0 IgGr. (E) AUC of sera from immunized rabbits (low dose rabbit sera, blue high dose rabbit sera, red) versus naive rabbit sera or day 0 rabbit sera. (F) AUC of sera from immunized guinea pigs at week 2 (dark blue) and individual animals (blue), naive sera (gray), and pooled day 0 sera from all animals (black). The pooled immunized curve displayed a comparable AUC to the average AUC from all individual immunized animals.

Primate serological competition.

FIG 4 Primate serological competition. (A) Competition ELISA schematic displaying immobilized His6×-tagged SARS-CoV-2 spike protein (rainbow). Preblocking of the spike protein with primate sera (blue) at various concentrations was added followed by ACE2-IgMu (green, blue) at a constant concentration. Anti-mouse HRP (green) determines the amount of ACE2-IgMu remaining in the presence of competitors through a colorimetric readout. (B) Affinity of ACE2-IgMu for immobilized SARS-CoV-2 S1+S2 full-length spike protein assessed by ELISA. Optimal concentration of ACE2-IgMu for competition assays (red arrow, 0.4 μg/ml) requires high signal without excess receptor present. (C) Optimal ACE2-IgMu concentration which displays a full blocking curve (0.40 μg/ml) from the competitor dilution series (ACE2-IgHu) while retaining a wide range in signal. (D) NHP sera pooled from five vaccinated animals were used as competitors in the primate competition assay. The AUC from vaccinated NHP sera (blue) versus day 0 NHP sera (black). (E) Human sera from nine SARS-CoV-2-positive COVID-19 patients were tested in the primate competition assay and compared with 16 naive human sera collected prepandemic. The AUC of the COVID-19 patient serum (purple) is significantly decreased compared to the prepandemic human serum (gray). The median is shown as a solid black line, and quartiles are shown as dashed black lines. (F) Human sera were analyzed by a pseudovirus neutralization assay. The samples and the coloring are the same as in (E). Statistics include a two-tailed t test with P values indicated. FIG 5 ACE2 receptor blocking correlates with pseudovirus neuralization. A symbol represents each of the individual datapoints where we had a paired AUC blocking and pseudovirus ID50 values. The human samples are in triangles, the mice in circles, individual Guinea pigs in squares, Guinea pig pools in diamonds, and rabbit pools in hexagons. SARS-CoV-2 spike-experienced samples are shown in color. Naïve samples and healthy donors are shown in gray. Least-squares fit line is shown with P value and R squared from Prism.

SPR-based assay for ACE2 receptor blocking.

FIG 6 ACE2 receptor competition assay development. (A) Overview of SPR experiment depicting SARS-CoV-2 RBD capture by streptavidin-biotin interaction, sera injected as analyte, and ACE2 injected as second analyte. (B) Sensorgram for ACE2 blocking SPR assay with ACE2-IgHu injected as sample (ACE2nümunə) as indicated and ACE-IgHu injected as receptor (ACE2reseptor) as indicated. Sample responses were referenced to blank injections. Each curve corresponds to a 3-fold dilution of ACE2nümunə starting at 1,500 nM as indicated on the right, and the ACE2reseptor was injected at a constant concentration of 100 nM to all curves. (C) Response in RUs measured at the end of sample (ACE2nümunə) injection (blue) and receptor (ACE2reseptor) injection (red) at each concentration of sample. (D) ACE2 inhibition curve derived from RUs at each concentration.

Təşəkkürlər

We thank all the participants involved in the study Bernie McCudden and Jenny Mitchell for support with the cohort and Jill Garlick, Janine Roney, Anne Paterson and the research nurses at the Alfred Hospital. This work was supported by the Australian National Health and Medical Research Council (NHMRC) Leadership Investigator Grant to KK (#1173871), NHMRC Program Grant to DLD (#1132975), Research Grants Council of the Hong Kong Special Administrative Region, China (#T11-712/19-Ncdf) to KK, the Jack Ma Foundation to KK, KS and AWC, the Medical Research Future Fund (#2005544) to KK, SJK, AKW and AWC, the a2 Milk Foundation to KS, MRFF Award (#1202445) to KK, NHMRC Program Grant (#1071916) to KK. KK was supported by NHMRC Senior Research Fellowship (1102792), DLD by a NHMRC Principal Research Fellowship (#1137285) and KS by an NHMRC Investigator grant (#1177174). THON is supported by NHMRC EL1 Fellowship (#1194036). LH is supported by the Melbourne International Research Scholarship (MIRS) and the Melbourne International Fee Remission Scholarship from The University of Melbourne. JRH and WZ are supported by the Melbourne Research Scholarship from The University of Melbourne. XJ is supported by China Scholarship Council-University of Melbourne joint Scholarship. CES has received funding from the European Union's Horizon 2020 research and innovation programme under the Marie Skłodowska-Curie grant agreement (#792532). CES and KS received funding from the Doherty Collaborative Seed Grant. KK and AWC were supported by the University of Melbourne Dame Kate Campbell Fellowship. The Melbourne WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Influenza is supported by the Australian Government Department of Health.


SARS-CoV-2 Serology Testing in the Setting of Vaccination

To enable an effective vaccination strategy, we advocate for the use of accessible, automated, high-throughput SARS-CoV-2 serology testing to help confirm efficacy and promote public health. Siemens Healthineers formulated a position paper based on input from experts in the infectious disease, immunology and vaccine development fields and the currently available body of literature.

“In clinical practice, my patients who have either had the Covid-19 infection or have been vaccinated have been extremely interested in measuring their antibody response. I explain to them that this is the best surrogate we currently have to predict if they will likely be protected from future infection. Having had the vaccine myself and subsequently testing my own blood, I was immensely relieved to see I had developed anti-spike protein antibodies. It felt like I had put on an anti-Covid-19 Kevlar suit.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

"The position statement that you have here is timely. We need to have this discussion and preparation ahead of vaccinating the general population. Serology status is incredibly important due to asymptomatic carriers, and as these vaccines are introduced the need for robust neutralizing antibody testing would become even more important to understand where we are both before and after vaccination."

University of Cambridge (UK), Department of Medicine/CITIID

“As an immunologist and clinician, I certainly see the value of serology testing in understanding the immune response to vaccines, as outlined in the position paper. With every Covid-19 vaccine targeting the spike protein, it just makes sense that measuring the immune response against spike protein is the focus going forward with serology testing. Further, scientifically I think we’re going to see a quantitative threshold for Covid-19 antibody levels that becomes apparent in which the Covid-19 immune response weakens enough that the risk of infection returns. In this respect, measuring Covid-19 antibodies after a natural infection or after vaccination will determine if someone has reached that protective threshold and remeasuring antibody levels over time will determine the need to reimmunize. In some cases, if people who have had Covid-19 infection or those who have been immunized didn’t produce sufficient antibodies, they may need to be revaccinated sooner rather than later.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

“In clinical practice, my patients who have either had the Covid-19 infection or have been vaccinated have been extremely interested in measuring their antibody response. I explain to them that this is the best surrogate we currently have to predict if they will likely be protected from future infection. Having had the vaccine myself and subsequently testing my own blood, I was immensely relieved to see I had developed anti-spike protein antibodies. It felt like I had put on an anti-Covid-19 Kevlar suit.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

"The position statement that you have here is timely. We need to have this discussion and preparation ahead of vaccinating the general population. Serology status is incredibly important due to asymptomatic carriers, and as these vaccines are introduced the need for robust neutralizing antibody testing would become even more important to understand where we are both before and after vaccination."

University of Cambridge (UK), Department of Medicine/CITIID

“As an immunologist and clinician, I certainly see the value of serology testing in understanding the immune response to vaccines, as outlined in the position paper. With every Covid-19 vaccine targeting the spike protein, it just makes sense that measuring the immune response against spike protein is the focus going forward with serology testing. Further, scientifically I think we’re going to see a quantitative threshold for Covid-19 antibody levels that becomes apparent in which the Covid-19 immune response weakens enough that the risk of infection returns. In this respect, measuring Covid-19 antibodies after a natural infection or after vaccination will determine if someone has reached that protective threshold and remeasuring antibody levels over time will determine the need to reimmunize. In some cases, if people who have had Covid-19 infection or those who have been immunized didn’t produce sufficient antibodies, they may need to be revaccinated sooner rather than later.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

“In clinical practice, my patients who have either had the Covid-19 infection or have been vaccinated have been extremely interested in measuring their antibody response. I explain to them that this is the best surrogate we currently have to predict if they will likely be protected from future infection. Having had the vaccine myself and subsequently testing my own blood, I was immensely relieved to see I had developed anti-spike protein antibodies. It felt like I had put on an anti-Covid-19 Kevlar suit.”

Latinis Rheumatology, LLC, Kansas City (Harrisonville, MO and Leawood, KS)

Serology tests can inform vaccination utilization and status of vaccine response at multiple junctures:

  • Data to establish a threshold for protection or immunity
  • Post-vaccination initial response 1
  • Duration of vaccination response 2

Appropriate characteristics of a serology assay in the assessment of need to vaccinate and vaccine response:

  • Quantitative results
  • Spike protein receptor-binding domain (S1 RBD) neutralizing IgG antibody detection
  • Very high specificity (≥99.5%)

Neutralization of the SARS-CoV-2 virus with S1-RBD

Neutralizing Antibodies: Why the Spike Protein?

SARS-CoV-2 serology assays that utilize the receptor-binding domain (RBD) of the S1 spike antigen detect neutralizing antibodies that block the virus entry into cells. 3-8 S1-RBD-specific assays are likely to prove advantageous over S1 and whole spike, especially if using a quantitative assay, as neutralizing versus binding antibodies might be expected to be enriched and therefore better correlate to immunity.

The utilization of the S1-RBD is aligned with the multiple vaccines in development that target or include the SARS-CoV-2 S1 RBD, with the goal of producing neutralizing (and therefore likely protective) antibodies in vaccinated subjects. 9 The spike protein and particularly the RBD are the most common target of vaccine designs.


SARS-CoV-2 Multiplex Serology Assays

ProcartaPlex Serology Assays

The proteins that serve as primary antigens to stimulate an immune response producing IgA, IgM, and IgG antibodies during SARS-CoV-2 infection include the nucleocapsid (N), the spike (S) protein, and sub-regions of the spike protein such as the receptor binding domain (RBD) and the S1 regions. The Nucleocapsid (N) protein has the highest homology (90%) between SARS-CoV-1 and SARS-CoV-2 (1). Serology test kits available during the early phase of the SARS-CoV-2 pandemic were developed to detect antibodies against the Nucleocapsid, which displayed significant cross-reactivity, and thus higher false positive readings for subjects exposed to SARS-CoV-1 (1). The SARS-CoV spike (S) protein assembles into a trimerized structure to form a crown-like (hence corona) appearance and is composed of a S1 and S2 subunit. Within S1, the receptor binding domain (RBD), which is located in the C-terminal subdomain, has higher identity (74%) between SARS-CoV and SARS-CoV-2 than the N-terminal domain, consistent with the view that SARS-CoV-2 may use ACE2 as its receptor for entry into host cells like SARS-CoV (2). The RBD has been identified as one of the immunodominant sites of the SARS-CoV-2 spike protein, with antibodies against the spike protein correlating well with neutralization. In addition, it is important to test serologic cross-reactivity with endemic and seasonal coronaviruses to rule out false-positive results. The Human Coronavirus Ig Total 11-Plex ProcartaPlex Panel enables screening of four SARS-CoV-2 antibodies (Spike trimer, S1 subunit, RBD, and Nucleocapsid), six coronavirus strains (SARS-CoV-1, MERS, CoV-NL63, CoV-KHU1, CoV-229E, CoV-OC43 ), and one negative control in a single well using Luminex xMAP technology. Simultaneous detection of anti-SARS-CoV-2 antibodies and related coronavirus antibodies in one assay can save time to provide a complete, holistic data set using plasma or serum samples.

Figure 1. Screening results from 39 Covid PCR (+) and 168 healthy PCR (-) controls for SARS-CoV-2 antigens. Results show antibody levels detected for spike timer, S1, RBD, and Nucleocapsid antigens correspond to the expected results of high antibody levels for PCR (+) and low antibody levels for PCR (-) samples.


İstinadlar

Naji H (2020) 2019 yeni koronavirus 2019-nCoV-nin ortaya çıxması. Eur J Med Sağlamlıq Elmi. https://doi.org/10.24018/ejmed.2020.2.1.169

Chan JFW, Li KSM, To KKW et al (2012) Yeni insan betakoronavirusu 2c EMC/2012 (HCoV-EMC) kəşfi başqa bir SARS kimi pandemiyanın başlanğıcıdırmı? J Infect 65:477–489. https://doi.org/10.1016/j.jinf.2012.10.002

Lim YX, Ng YL, Tam JP, Liu DX (2016) İnsan koronavirusları: virus -ana qarşılıqlı təsirlərinin nəzərdən keçirilməsi. Xəstəliklər. https://doi.org/10.3390/diseases4030026

Jones BA, Grace D, Kock R et al (2013) Zoonozun yaranması kənd təsərrüfatının intensivləşməsi və ətraf mühitin dəyişməsi ilə bağlıdır. Proc Natl Acad Sci 110: 8399-8404. https://doi.org/10.1073/pnas.1208059110

Kahn JS, McIntosh K (2005) Tarix və koronavirus kəşfindəki son inkişaflar. Pediatr Yoluxucu Dis J 24: S223 -S227. https://doi.org/10.1097/01.inf.0000188166.17324.60

Fehr AR, Perlman S (2015). Koronaviruslar: onların təkrarlanması və patogenezinin icmalı. Koronaviruslarda. Molekulyar biologiyada metodlar. Humana Press, New York, s. 1-23

Sun C, Chen L, Yang J et al (2020) SARS-CoV-2 və SARS-CoV sünbül-RBD quruluşu və reseptor bağlayıcı müqayisəsi və antikor və peyvəndin neytrallaşdırılmasına potensial təsirləri. bioRxrv. https://doi.org/10.1101/2020.02.16.951723

Schmaljohn AL (2013) Neytrallaşdırıcı aktivliyi olmayan qoruyucu antiviral antikorlar: presedentlər və anlayışların təkamülü. Curr HIV Res 11:345–353. https://doi.org/10.2174/1570162x113116660057

Bosch BJ, De HCAM, Rottier PJM (2004) Yaşıl flüoresan zülal ilə karboksi terminalında uzadılmış Coronavirus sünbül qlikoproteini montaj qabiliyyətinə malikdir. J Virol 78:7369–7378. https://doi.org/10.1128/JVI.78.14.7369

Fan H, Ooi A, Tan YW et al (2005) Koronavirus infeksiyalı bronxit virusunun nukleokapsid zülalı: N-terminal sahəsinin kristal quruluşu və multimerizasiya xüsusiyyətləri. Struktur 13:1859–1868. https://doi.org/10.1016/j.str.2005.08.021

Jiang S, Hillyer C, Du L (2020) SARS-CoV-2 və digər insan koronaviruslarına qarşı neytrallaşdırıcı antikorlar. Trendlər Immunol 41:355–359. https://doi.org/10.1016/j.it.2020.03.007

di Gabriella M, Cristina S, Concetta R et al (2020) SARS-Cov-2 infection: response of human immune system and possible implications for the rapid test and treatment. Int Immunopharmacol 84: 106519. https://doi.org/10.1016/j.intimp.2020.106519

Lin Q, Zhu L, Ni Z et al (2020) SARS-CoV-2 üçün zərdab neytrallaşdıran antikorların müddəti: SARS-CoV infeksiyasından dərslər. J Microbiol Immunol Infect. https://doi.org/10.1016/j.jmii.2020.03.015

Vashist SK (2020) COVID-19 üçün in vitro diaqnostik analizlər: son irəliləyişlər və ortaya çıxan tendensiyalar. Diaqnostika 10: 202. https://doi.org/10.3390/diagnostics10040202

Zhou P, Lou YX, Wang XG və digərləri (2020) Yarasa mənşəli yeni bir koronavirusla əlaqəli bir sətəlcəm epidemiyası. Təbiət 579: 270-273. https://doi.org/10.1038/s41586-020-2012-7

Park TJ, Hyun MS, Lee HJ və digərləri (2009) Şiddətli kəskin tənəffüs sindromunun sürətli diaqnozu üçün öz-özünə yığılmış füzyonlu protein əsaslı səthi plazmon rezonans biosensor. Talanta 79:295–301. https://doi.org/10.1016/j.talanta.2009.03.051

Park TJ, Lee S-K, Yoo SM et al (2011) Funksionallaşdırılmış fotonik nanokristalların istehsalından istifadə edərək əks etdirən biosensorun inkişafı. J Nanosci Nanotexnol 11: 632-637. https://doi.org/10.1166/jnn.2011.3269

Woo PCY, Lau SKP, Wong BHL və digərləri (2004) SARS koronavirusu səbəbiylə pnevmoniya olan xəstələrdə ağır kəskin respirator sindrom (SARS) coronavirus nukleokapsid zülalına qarşı immunoqlobulin G (IgG), IgM və IgA antikorlarının uzununa profili. Clin Diagn Lab Immunol 11:665–668. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.4.665

Siracusano G, Pastori C, Lopalco L (2020) COVID-19 xəstələrində humoral immun reaksiyalar: sənətin vəziyyətinə bir pəncərə. Ön İmmunol 11: 1049. https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.01049

Zhang N, Wang L, Deng X et al (2020) İnsanlarda respirator virus infeksiyasının aşkarlanmasında son nailiyyətlər. J Med Virol 92:408-417. https://doi.org/10.1002/jmv.25674

van der Hoek L (2007) İnsan koronavirusları: nəyə səbəb olur? Antivir Ther 12:651–658

Carlos WG, Dela Cruz CS, Cao B və digərləri (2020) Novel Wuhan (2019-nCoV) koronavirusu. Am J Respir Crit Care Med 201: P7 – P8. https://doi.org/10.1164/rccm.2014P7

Lam CWK, Chan MHM, Wong CK (2004) Ağır kəskin respirator sindrom: klinik və laboratoriya təzahürləri. Clin Biochem Rev 25:121–132

Wong TW (2006) "" SARS epidemiyası təkrarlanacaqmı? "Mütəxəssislərin fikirlərinin retrospektiv təhlili. J Epidemiol Community Heal 60:87

Rabaan AA (2017) Yaxın Şərq tənəffüs sindromu koronavirusu: beş il sonra. Mütəxəssis Rev Respir Med 11: 901-912. https://doi.org/10.1080/17476348.2017.1367288

Hu B, Ge X, Wang L-F, Shi Z (2015) İnsan koronaviruslarının yarasa mənşəli. Virol J 12: 221. https://doi.org/10.1186/s12985-015-0422-1

Chan JF-W, Kok K-H, Zhu Z və digərləri (2020) Wuhan'ı ziyarət etdikdən sonra atipik sətəlcəm olan bir xəstədən təcrid olunmuş 2019-cu il insan-patogen koronavirusun genomik xarakteristikası. Emerg Mikroblar yoluxdurur 9:221–236. https://doi.org/10.1080/22221751.2020.1719902

Lu H, Stratton CW, Wei Y (2020) Wuhan SARS-CoV-2 - Çin üçün növbəti nə var. J Med Virol 92: 546-547. https://doi.org/10.1002/jmv.25738

Kwong KCNK, Mehta PR, Shukla G, Mehta AR (2020) COVID-19, SARS və MERS: nevroloji perspektiv. J Clin Neurosci. https://doi.org/10.1016/j.jocn.2020.04.124

Ümumdünya Səhiyyə Təşkilatı (2020) ÜST Koronavirus Xəstəliyi (COVID-19) İdarə Paneli. https://covid19.who.int/

Zheng J (2020) SARS-CoV-2: qlobal bir təhlükə yaradan yeni ortaya çıxan bir koronavirus. Int J Biol Sci 16:1678–1685. https://doi.org/10.7150/ijbs.45053

Lu R, Zhao X, Li J et al (2020) 2019-cu il yeni koronavirusun genomik xarakteristikası və epidemiologiyası: virusun mənşəyi və reseptor bağlanması üçün təsirlər. Lancet 395: 565-574. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)30251-8

Wong HYF, Lam HYS, Fong AH-T və digərləri (2020) COVID-19 pozitiv xəstələrdə sinə rentgenoloji tapıntılarının tezliyi və paylanması. Radiologiya. https://doi.org/10.1148/radiol.2020201160

Kim S-H, Ko J-H, Park GE et al (2017) MERS-CoV infeksiyasının immun çatışmazlığı olan ev sahiblərində atipik təqdimatları. J İnfeksion Kemoterapi 23: 769-773. https://doi.org/10.1016/j.jiac.2017.04.004

Zeng Q, Chen L, Cai X et al (2003) SARS diaqnozunda Sinə X-ray və CT. Chin J Radiol 37: 600-603

Zhu X, Wang X, Han L et al (2020) COVID-19 diaqnostikası üçün nanohissəciklərə əsaslanan biosensor ilə birləşdirilmiş tərs transkripsiya dövrəsi vasitəçiliyi ilə izotermik gücləndirmə. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20037796

Hirotsu Y, Mochizuki H, Omata M (2020) İkiqat Söndürmə Zondları, kəskin bir kəskin tənəffüs sindromu koronavirus 2 (SARS-CoV-2) aşkarlama həssaslığını bir addımlı RT-PCR ilə yaxşılaşdırdı. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20037903

Qiu G, Gai Z, Tao Y və başqaları (2020) Yüksək dəqiqlikdə kəskin kəskin tənəffüs sindromu coronavirus 2 aşkarlanması üçün iki funksiyalı plazmonik fototermal biosensorlar. ACS Nano. https://doi.org/10.1021/acsnano.0c02439

Diao B, Wen K, Chen J et al (2020) Nukleokapsid zülalının aşkarlanması ilə kəskin respirator sindromlu coronavirus 2 infeksiyasının diaqnozu. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.07.20032524

Layqah LA, Eissa S (2019) Bir sıra qızıl nanohissəciklərlə dəyişdirilmiş karbon elektrodlarından istifadə edərək, Yaxın Şərq tənəffüs sindromu ilə əlaqəli korona virusu üçün elektrokimyəvi immunosensor. Microchim Acta 186: 224. https://doi.org/10.1007/s00604-019-3345-5

Meyer B, Drosten C, Müller MA (2014) Yaranan koronaviruslar üçün seroloji analizlər: çətinliklər və tələlər. Virus Res 194:175–183. https://doi.org/10.1016/j.virusres.2014.03.018

Liu L, Liu W, Zheng Y et al (2020) Xəstəxanaya yerləşdirilən 238 xəstədə ağır kəskin respirator sindromlu koronavirus 2 (SARS-CoV-2) üçün seroloji analiz üzrə ilkin araşdırma. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.06.20031856

Cheng MS, Toh C-S (2013) Virusların ultrahəssas aşkarlanması üçün yeni biosensinq metodologiyaları. Analitik 138: 6219-6229. https://doi.org/10.1039/C3AN01394D

Huang X, Wei F, Hu L et al (2020) COVID-19-un epidemiologiyası və klinik xüsusiyyətləri. Arch Iran Med 23:268-271. https://doi.org/10.34172/aim.2020.09

Abbasi J (2020) COVID-19 üçün antikor testinin vədi və təhlükəsi. JAMA. https://doi.org/10.1001/jama.2020.6170

Ksiazek TG, Erdman D, Goldsmith CS et al (2003) Şiddətli kəskin tənəffüs sindromu ilə əlaqəli yeni bir koronavirus. N Engl J Med 348:1953–1966. https://doi.org/10.1056/NEJMoa030781

Leung DTM, Tam FCH, Ma CH və digərləri (2004) Şiddətli kəskin tənəffüs sindromu (SARS) olan xəstələrin antikor reaksiyası viral nukleokapsidi hədəf alır. J Infect Dis 190:379–386. https://doi.org/10.1086/422040

Tan Y-J, Goh P-Y, Fielding BC et al (2004) Ağır kəskin respirator sindromlu koronavirus rekombinant zülallarına qarşı antikor reaksiyalarının profilləri və onların diaqnostik markerlər kimi potensial istifadəsi. Clin Diagn Lab Immunol 11: 362-371. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.2.362

Wu H-S, Chiu S-C, Tseng T-C et al (2004) SARS ilə əlaqəli seroloji və molekulyar bioloji üsullar. Emerg Infect Dis 10:304–310. https://doi.org/10.3201/eid1002.030731

Amanat F, Stadlbauer D, Strohmeier S et al (2020) İnsanlarda SARS-CoV-2 serokonversiyasını aşkar etmək üçün bir seroloji analiz. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20037713

Khan S, Nakajima R, Jain A et al (2020) Koronavirus antigen mikroarrayından istifadə edərək ümumi insan koronavirusları və SARS-CoV-2 arasında seroloji çarpaz reaktivliyin təhlili. bioRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.24.006544

Lin D, Liu L, Zhang M et al (2020) COVID-19 yayılması zamanı 2019 yeni koronavirus (SARS-CoV-2) infeksiyalarının diaqnozunda seroloji testin qiymətləndirilməsi. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.27.20045153

Zhang P, Gao Q, Wang T et al (2020) Yeni koronavirus xəstəliyinin 2019 (COVID-19) seroloji diaqnozu üçün rekombinant nukleokapsid və sünbül zülallarının qiymətləndirilməsi. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.03.17.20036954

Maache M, Komurian-Pradel F, Rajoharison A et al (2006) SARS-a antikorun aşkarlanması üçün sünbülün iki alt bölməsinin (S1 və S2) istifadəsi ilə rekombinant ağır kəskin respirator western blot analizində yanlış müsbət nəticələr düzəldildi. CoV. Clin Diagn Lab Immunol 13:409–414. https://doi.org/10.1128/CVI.13.3.409

Xiang J, Yan M, Li H və digərləri (2020) Pnevmoniya (COVID-19) epidemiyasına səbəb olan yeni koronavirusun (SARS-Cov-2) aşkarlanması üçün fermentlə əlaqəli immunoassay və kolloid qızıl-immunokromatoqrafik analiz dəstinin qiymətləndirilməsi. medRxiv. https://doi.org/10.1101/2020.02.27.20028787

Hoy CFO, Kushiro K, Yamaoka Y et al (2019) Anti-MERS-CoV antikor aşkarlanması üçün sürətli multiplex mikrofiber əsaslı immunoassay. Sens Bio Sens Res. https://doi.org/10.1016/j.sbsr.2019.100304

Aydın S (2015) ELISA-nın qısa tarixi, prinsipləri və növləri və ELISA istifadə edərək peptid/protein analizləri ilə bağlı laboratoriya təcrübəmiz. Peptidlər 72: 4-15. https://doi.org/10.1016/j.peptides.2015.04.012

Wang Y-D, Li Y, Xu G-B və digərləri (2004) ELISA və Western blotlu SARS-ə yoluxmuş donorlardan zərdabda SARS-CoV əleyhinə antikorların aşkarlanması. Clin Immunol 113:145-150. https://doi.org/10.1016/j.clim.2004.07.003

Carattoli A, Di BP, Grasso F et al (2005) SARS diaqnozu üçün rekombinant protein əsaslı ELISA və immuno-sitokimyəvi analiz. J Med Virol 76: 137-142. https://doi.org/10.1002/jmv.20338

Woo PCY, Lau SKP, Wong BHL və digərləri (2005) SARS koronavirus sətəlcəminin serodiaqnozu üçün şiddətli kəskin tənəffüs sindromu (SARS) koronavirus sünbüllü polipeptid fermenti ilə əlaqəli immunosorbent təhlili (ELISA) və SARS koronavirus nukleokapsid protein ELISA-nın diferensial həssaslıqları. J Clin Microbiol 43:3054–3058. https://doi.org/10.1128/JCM.43.7.3054

Fukushi S, Fukuma A, Kurosu T et al (2018) MERS-koronavirus sünbül zülalına qarşı yeni monoklonal antikorların xarakteristikası və onların rəqabətli ELISA ilə növlərdən asılı olmayan antikor aşkarlanmasında tətbiqi. J Virol Metodları 251:22–29. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2017.10.008

Zhao J, Yuan Q, Wang H et al (2020) 2019 yeni koronavirus xəstəliyi olan xəstələrdə SARS-CoV-2-ə antikor cavabları. Clin Infect Dis. https://doi.org/10.1093/cid/ciaa344

González-Martínez MÁ, Puchades R, Maquieira Á (2018) İmmunoanalitik texnika: fermentlə əlaqəli immunosorbent təhlili (ELISA). Qida identifikasiyası üçün müasir üsullar. Akademik Mətbuat, Nyu York, səh 617-657

García-González E, Aramendía M, Álvarez-Ballano D et al (2016) Çoxlu hormon immunoassaylarına müdaxilə edən endogen antikorları ehtiva edən serum nümunəsi. Müdaxiləni aşkar etmək üçün laboratoriya strategiyaları. Təcrübə Lab Med 4:1-10. https://doi.org/10.1016/j.plabm.2015.11.001

Guan M, Chan KH, Peiris JSM et al (2004) Şiddətli kəskin tənəffüs sindromunun seroloji diaqnozu üçün bir fermentə bağlı immunosorbent analizinin və immunokromatoqrafik testin qiymətləndirilməsi və təsdiqlənməsi. Clin Diagn Lab Immunol 11:699–703. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.4.699

Guan M, Chen HY, Foo SY və başqaları (2004) SARS xəstələrində Ağır Kəskin Tənəffüs Sindromu (SARS) koronavirusuna immunoqlobulin G antikorlarının aşkarlanması üçün rekombinant protein əsaslı fermentlə əlaqəli immunosorbent analizi və immunokromatoqrafik testlər. Clin Diagn Lab Immunol 11:287–291. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.2.287

Liu X, Shi Y, Li P et al (2004) Ehtimal olunan SARS xəstələrində ağır kəskin tənəffüs sindromu (SARS) ilə əlaqəli koronavirusun nukleokapsid zülalına qarşı antikorların profili. Clin Diagn Lab Immunol 11:227–228. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.1.227

Che X-Y, Qiu L-W, Liao Z-Y et al (2005) Şiddətli kəskin tənəffüs sindromu ilə əlaqəli koronavirus və insan koronavirusları 229E və OC43 arasında antigenik çarpaz reaktivlik. J Yoluxucu Dis 191: 2033-2037. https://doi.org/10.1086/430355

Smith-Norowitz TA, Kusonruksa M, Wong D et al (2012) Sonrakı H1N1 infeksiyası ilə A qripinə qarşı peyvənd edildikdən sonra uşaq və böyüklərin serumunda IgE anti-qrip A HIN1 virusu antikorlarının uzun müddətli davamlılığı: bir nümunə araşdırması. J Inflamm Res 5: 111–116. https://doi.org/10.2147/JIR.S34152

Martins-Qomes C, Silva AM (2018). Teratogen agentlər tərəfindən induksiya edilən in vitro protein ifadəsinin təhlili üçün Western blot metodologiyaları. Teratogenlik testi. Molekulyar biologiyada metodlar. Humana Press, Nyu York, səh 191-203

Mahmood T, Yang P-C (2012) Western blot: texnika, nəzəriyyə və problemlərin həlli. N Am J Med Sci 4: 429-434. https://doi.org/10.4103/1947-2714.100998

Qiu D, Tannock GA, Barry RD, Jackson DC (1992) Qrip virion zülallarına antikor reaksiyalarının Western blot analizi. Immunol Cell Biol 70: 181-191. https://doi.org/10.1038/icb.1992.23

Castejon MJ, Yamashiro R, Oliveira CAF, Veras MASM (2017) Filtr kağızı (DBS) üzərində toplanan qan nümunələrində anti-HİV antikorlarının aşkarlanması üçün western blotun təsdiqlənməsi. J Bras Patol və Med Laboratoriyası 53: 5-12. https://doi.org/10.5935/1676-2444.20170002

Kurien BT, Scofi RH (2015) Western blotting: giriş. Molekulyar biologiyada metodlar. Humana Press, Nyu York, səh 17-30

He Q, Chong KH, Chng HH et al (2004) Şiddətli kəskin tənəffüs sindromuna səbəb olan koronavirusa qarşı antikorların aşkarlanması üçün qərb ləkə analizinin hazırlanması. Clin Diagn Lab Immunol 11: 417-422. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.2.417

Wang Y, Chang Z, Ouyang J et al (2005) SARS xəstələrində SARS ilə əlaqəli koronavirusun nukleokapsid və sünbül zülallarına IgG antikorlarının profilləri. DNA Hüceyrəsi Biol 24: 521-527. https://doi.org/10.1089/dna.2005.24.521

Guan M, Chen HY, Tan PH və başqaları (2004) Şiddətli kəskin respirator sindromun serodiaqnozu üçün təsdiqedici test kimi qərb immunoblot analizində rekombinant zülal ilə birləşdirilmiş viral lizat antigeninin istifadəsi. Clin Diagn Lab Immunol 11: 1148–1153. https://doi.org/10.1128/CDLI.11.6.1148

Odell ID, Cook D (2013) İmmunofluoressensiya üsulları. J Investig Dermatol 133: e4. https://doi.org/10.1038/jid.2012.455

Dilnessa T, Zeleke H (2017) Hüceyrə mədəniyyəti, sitopatik təsir və virus infeksiyasının immunofluoressensiya diaqnozu. J Microbiol Mod Technol 2: 102

Bossuyt X, Cooreman S, De Baere H et al (2013) Avtomatik dolayı immunofloresans analizi ilə antinükleer antikorların aşkarlanması. Clin Chim Acta 415: 101-106. https://doi.org/10.1016/j.cca.2012.09.021

Zhu H, Hu S, Jona G və digərləri (2006) Koronavirus zülalı mikroarrayından istifadə edərək kəskin kəskin tənəffüs sindromu diaqnozu. Proc Natl Acad Sci 103:4011–4016. https://doi.org/10.1073/pnas.0510921103

Reusken C, Mou H, Godeke GJ et al (2013) Protein mikroarrayı ilə ortaya çıxan insan koronavirusları üçün xüsusi serologiya. Eurosurveillance 18: 20441. https://doi.org/10.2807/1560-7917.ES2013.18.14.20441

Chan PKS, Ng K-C, Chan RCW et al (2004) SARS-in seroloji diaqnostikası üçün immunofluoressensiya analizi. Yaranan İnfeksion Dis 10: 530-532. https://doi.org/10.3201/eid1003.030493

Manopo I, Lu L, He Q et al (2005) SARS-CoV-ə antikor reaksiyalarının aşkarlanması üçün təhlükəsiz və həssas Spike protein əsaslı immunofloresans analizinin qiymətləndirilməsi. J Immunol Metodları 296: 37-44. https://doi.org/10.1016/j.jim.2004.10.012

Koczula KM, Gallotta A (2016) Yanal axın analizləri. Əsərlər Biochem 60: 111-120. https://doi.org/10.1042/EBC20150012

Wong RC, Tse HY (2008) Yanal axın immunoassay. Humana Press, New York

Bahadır EB, Sezgintürk MK (2016) Yanal axın analizləri: prinsiplər, dizaynlar və etiketlər. Trends Anal Chem 82:286–306. https://doi.org/10.1016/j.trac.2016.06.006

Zhao L, Sun L, Chu X (2009) Chemiluminescence immunoassay. Trendlər Anal Kimya 28: 404-415. https://doi.org/10.1016/j.trac.2008.12.006

Cai X-F, Chen J, Hu J-L və başqaları (2020) Korona virus xəstəliyinin 2019 (COVID-19) seroloji diaqnostikası üçün peptid əsaslı maqnit kimyalüminessensiya fermenti immunoanalizi. J Yoluxucu Disk. https://doi.org/10.1101/2020.02.22.20026617

Qu J, Wu C, Li X et al (2020) Şiddətli kəskin tənəffüs sindromu koronavirus 2 (SARS-CoV-2) əleyhinə IgG və IgM antikorlarının profili. Clin Infect Dis. https://doi.org/10.1093/cid/ciaa489

Turner APF (2013) Biosensorlar: hiss və həssaslıq. Chem Soc Rev 42:3184–3196. https://doi.org/10.1039/c3cs35528d

Caygill RL, Blair GE, Millner PA (2010) İnsan patogenlərini aşkar etmək üçün viral biosensorlara baxış. Anal Chim Acta 681: 8-15. https://doi.org/10.1016/j.aca.2010.09.038

Lakshmipriya T, Gopinath SCB (2019) Biosensorlara və biomolekullara giriş. Biomolekulyar hədəfləmə üçün nanobiosensorlarda. Elsevier, New York, s. 1–21

Hsueh P-R, Hsiao C-H, Yeh S-H et al (2003) Mikrobioloji xüsusiyyətlər, seroloji reaksiyalar və şiddətli kəskin tənəffüs sindromunda klinik təzahürlər, Tayvan. Yaranan Yoluxucu Dis 9: 1163–1167. https://doi.org/10.3201/eid0909.030367

Peiris JSM, Lai ST, Poon LLM və başqaları (2003) Koronavirus ağır kəskin respirator sindromun mümkün səbəbi kimi. Lancet 361: 1319–1325. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(03)13077-2

Shi Y, Yi Y, Li P et al (2003) Bir antijen tutan fermentlə əlaqəli immunosorbent analizində SARS koronavirusu nukleokapsid antikorlarının aşkarlanması ilə şiddətli kəskin tənəffüs sindromunun (SARS) diaqnozu. J Clin Microbiol 41:5781–5782. https://doi.org/10.1128/JCM.41.12.5781

Okba NMA, Müller MA, Li W et al (2020) COVID-19 xəstələrində SARS-CoV-2 spesifik antikor cavabları. Emerg Infect Dis. https://doi.org/10.1101/2020.03.18.20038059

Perera RAPM, Mok CKP, Tsang OTY və digərləri (2020) Şiddətli kəskin tənəffüs sindromu koronavirus 2 (SARS-CoV-2) üçün seroloji analizlər, Mart 2020. Eurosurveillance 25: 2000421. https://doi.org/10.2807/1560-7917

EUROIMMUN AG (2020) Anti-SARS-CoV-2 ELISA (IgG) istifadə üçün təlimat

InBios International Inc. (2020) InBios SCoV-2 Detect TM IgG ELISA İstifadə Təlimatları

Beijing Wantai Biological Pharmacy Enterprise Co. Ltd. (2020) WANTAI SARS-CoV-2 Ab ELISA

Bio-Rad Laboratories Inc (2020) Platelia SARS-CoV-2 Total Ab

Shanghai Fosun Long March Medical Science Co., Ltd.-dən "Fosun COVID-19 IgG/IgM Rapid Antikor Detection Kit" üçün Seroloji Test Qiymətləndirmə Hesabatı.