Məlumat

F7. Əlaqələr və İstinadlar - Biologiya

F7. Əlaqələr və İstinadlar - Biologiya


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

F7. Bağlantılar və İstinadlar

Əzələ spesifik SMN azalması, onurğa əzələsi atrofiyası modellərində motor neyrondan asılı olmayan xəstəliyi ortaya qoyur

2 Motor Neyron Biologiyası və Xəstəlikləri Mərkəzi, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, Nyu-York, Nyu-York, ABŞ.

3 Biologiya Elmləri Bölməsi, Cənubi Kaliforniya Universiteti, Los Anceles, Kaliforniya, ABŞ.

4 Nevrologiya şöbəsi və

5 Pediatriya Bölümü, Columbia Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

6 Rochester Tibb Mərkəzi, Farmakologiya və Fiziologiya Bölümü, Rochester, New York, ABŞ.

Yazışmaları ünvanlayın: Umrao R. Monani, P&S, Room 5-422, 630 W. 168th Street, New York, New York 10032, USA. Telefon: 212.342.5132 E-poçt: [email protected]

Kim, J. tərəfindən məqalələr tapın: JCI | PubMed | Google Alimi | />

1 Patologiya və Hüceyrə Biologiyası Bölümü və

2 Motor Neyron Biologiya və Xəstəliklər Mərkəzi, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

3 Biologiya Elmləri Bölümü, Cənubi Kaliforniya Universiteti, Los Angeles, Kaliforniya, ABŞ.

4 Nevrologiya şöbəsi və

5 Pediatriya Bölümü, Columbia Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

6 Farmakologiya və Fiziologiya Departamenti, Roçester Tibb Mərkəzi Universiteti, Roçester, Nyu-York, ABŞ.

Ünvan yazışmaları: Umrao R. Monani, P & ampS, Room 5-422, 630 W. 168th Street, New York, New York 10032, USA. Telefon: 212.342.5132 E-poçt: [email protected]

1 Patologiya və Hüceyrə Biologiyası Bölümü və

2 Motor Neyron Biologiya və Xəstəliklər Mərkəzi, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

3 Biologiya Elmləri Bölməsi, Cənubi Kaliforniya Universiteti, Los Anceles, Kaliforniya, ABŞ.

4 Nevrologiya şöbəsi və

5 Pediatriya Bölümü, Columbia Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

6 Rochester Tibb Mərkəzi, Farmakologiya və Fiziologiya Bölümü, Rochester, New York, ABŞ.

Yazışmaları ünvanlayın: Umrao R. Monani, P&S, Room 5-422, 630 W. 168th Street, New York, New York 10032, USA. Telefon: 212.342.5132 E -poçt: [email protected]

1 Patologiya və Hüceyrə Biologiyası Kafedrası və

2 Motor Neyron Biologiyası və Xəstəlikləri Mərkəzi, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, Nyu-York, Nyu-York, ABŞ.

3 Biologiya Elmləri Bölməsi, Cənubi Kaliforniya Universiteti, Los Anceles, Kaliforniya, ABŞ.

4 Nevrologiya şöbəsi və

5 Pediatriya Departamenti, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, Nyu-York, Nyu-York, ABŞ.

6 Rochester Tibb Mərkəzi, Farmakologiya və Fiziologiya Bölümü, Rochester, New York, ABŞ.

Ünvan yazışmaları: Umrao R. Monani, P & ampS, Room 5-422, 630 W. 168th Street, New York, New York 10032, USA. Telefon: 212.342.5132 E -poçt: [email protected]

Faleiro, M. tərəfindən məqalələr tapın: JCI | PubMed | Google Alimi

1 Patologiya və Hüceyrə Biologiyası Kafedrası və

2 Motor Neyron Biologiya və Xəstəliklər Mərkəzi, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

3 Biologiya Elmləri Bölümü, Cənubi Kaliforniya Universiteti, Los Angeles, Kaliforniya, ABŞ.

4 Nevrologiya şöbəsi və

5 Pediatriya Bölümü, Columbia Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

6 Rochester Tibb Mərkəzi, Farmakologiya və Fiziologiya Bölümü, Rochester, New York, ABŞ.

Ünvan yazışmaları: Umrao R. Monani, P & ampS, Room 5-422, 630 W. 168th Street, New York, New York 10032, USA. Telefon: 212.342.5132 E -poçt: [email protected]

Chiriboga, C. tərəfindən məqalələr tapın: JCI | PubMed | Google Alimi

1 Patologiya və Hüceyrə Biologiyası Bölümü və

2 Motor Neyron Biologiya və Xəstəliklər Mərkəzi, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

3 Biologiya Elmləri Bölümü, Cənubi Kaliforniya Universiteti, Los Angeles, Kaliforniya, ABŞ.

4 Nevrologiya şöbəsi və

5 Pediatriya Departamenti, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, Nyu-York, Nyu-York, ABŞ.

6 Rochester Tibb Mərkəzi, Farmakologiya və Fiziologiya Bölümü, Rochester, New York, ABŞ.

Ünvan yazışmaları: Umrao R. Monani, P & ampS, Room 5-422, 630 W. 168th Street, New York, New York 10032, USA. Telefon: 212.342.5132 E-poçt: [email protected]

Wei-Lapierre, L. tərəfindən məqalələr tapın: JCI | PubMed | Google Alimi

1 Patologiya və Hüceyrə Biologiyası Kafedrası və

2 Motor Neyron Biologiya və Xəstəliklər Mərkəzi, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

3 Biologiya Elmləri Bölümü, Cənubi Kaliforniya Universiteti, Los Angeles, Kaliforniya, ABŞ.

4 Nevrologiya şöbəsi və

5 Pediatriya Bölümü, Columbia Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

6 Rochester Tibb Mərkəzi, Farmakologiya və Fiziologiya Bölümü, Rochester, New York, ABŞ.

Yazışmaları ünvanlayın: Umrao R. Monani, P&S, Room 5-422, 630 W. 168th Street, New York, New York 10032, USA. Telefon: 212.342.5132 E -poçt: [email protected]

Dirksen, R. tərəfindən məqalələri tapın: JCI | PubMed | Google Alimi

1 Patologiya və Hüceyrə Biologiyası Kafedrası və

2 Motor Neyron Biologiya və Xəstəliklər Mərkəzi, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

3 Biologiya Elmləri Bölməsi, Cənubi Kaliforniya Universiteti, Los Anceles, Kaliforniya, ABŞ.

4 Nevrologiya şöbəsi və

5 Pediatriya Departamenti, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, Nyu-York, Nyu-York, ABŞ.

6 Rochester Tibb Mərkəzi, Farmakologiya və Fiziologiya Bölümü, Rochester, New York, ABŞ.

Ünvan yazışmaları: Umrao R. Monani, P & ampS, Room 5-422, 630 W. 168th Street, New York, New York 10032, USA. Telefon: 212.342.5132 E-poçt: [email protected]

1 Patologiya və Hüceyrə Biologiyası Kafedrası və

2 Motor Neyron Biologiya və Xəstəliklər Mərkəzi, Kolumbiya Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

3 Biologiya Elmləri Bölümü, Cənubi Kaliforniya Universiteti, Los Angeles, Kaliforniya, ABŞ.

4 Nevrologiya şöbəsi və

5 Pediatriya Bölümü, Columbia Universiteti Tibb Mərkəzi, New York, New York, ABŞ.

6 Rochester Tibb Mərkəzi, Farmakologiya və Fiziologiya Bölümü, Rochester, New York, ABŞ.

Yazışmaları ünvanlayın: Umrao R. Monani, P&S, Room 5-422, 630 W. 168th Street, New York, New York 10032, USA. Telefon: 212.342.5132 E-poçt: [email protected]

10 fevral 2020-ci ildə nəşr olundu - Ətraflı məlumat

Sağ qalma motor neyronunun (SMN) zülalının çatışmazlığı tez-tez ölümcül olan infantil başlanğıc motor neyron pozğunluğunu, onurğa əzələlərinin atrofiyasını (SMA) tetikler. Proteinin artırılması, SMA-nın müalicəsi vasitələrindən biridir və bu yaxınlarda FDA-nın intratekal olaraq SMN-ni gücləndirən oligonükleotidi təsdiqləməsinə səbəb oldu. Bu və digər SMA müalicələrinin ortaya çıxmasına baxmayaraq, xəstəliklə əlaqəli iflicin, SMN artırıcı maddələrin sinir sisteminə məhdud şəkildə verilməsi ilə effektiv şəkildə hədəflənə bilən və ya daha geniş qüsurlardan qaynaqlanan funksional olmayan motor neyronlardan qaynaqlandığı aydın deyil. sistemli SMN doldurulması üçün mübahisə edən motor vahidinin. Yalnız bir toxumada zülalın seçici şəkildə tükəndirilməsi ilə əlaqəli bir periferik orqanda-skelet əzələsində aşağı SMN-nin xəstəliyə səbəb olan təsirlərini araşdırdıq. SMN-dən məhrum olan əzələnin ciddi şəkildə zədələndiyini gördük. Xəstəliyin fenotipi dərhal aydın olmasa da, proteinin davamlı aşağı səviyyələri nəticədə əzələ lifi qüsurları, sinir-əzələ birləşmə anomaliyaları, pozulmuş motor performansı və vaxtından əvvəl ölümlə nəticələndi. Əzələ patologiyası başladıqdan sonra SMN -nin bərpası xəstəliyi geri çevirdi. Nəticələrimiz SMA-da əzələlərin bilavasitə rolu üçün hələ də ən tutarlı sübutları təqdim edir və disfunksiyalı motor vahidinin bu aspektini müalicə etmək üçün xəstəlik üçün optimal terapiyanın hazırlanmalı olduğunu iddia edir.

Motor neyron 1-in sağ qalmasında homozigot mutasiyalar (SMN1) gen SMN zülalının səviyyəsinin azalması ilə nəticələnir və uşaqlıqda başlayan sinir-əzələ xəstəliyinə, onurğa əzələlərinin atrofiyasına (SMA) səbəb olur ( 1 – 3 ). SMN-nin tam itkisi embrion öldürücüdür (4). Həqiqətən də, SMA olan xəstələr qanda zülalın miqdarını dəyişmir SMN1 paraloq adlanır SMN2. Bilməməsi SMN2 kompensasiya etmək SMN1 paraloqun 7-ci ekzonunda səssiz C→T keçidindən qaynaqlanır. Tək baza dəyişikliyi, exon 7 -nin SMN transkriptlərinə birləşdirilməsinin səmərəliliyini dəyişir SMN2 əsasən SMNΔ7 izoformunu ifadə edir (5, 6). SMNΔ7 mRNA çox miqdarda ifadə olunur. Bununla belə, müvafiq kəsilmiş zülal qeyri-sabitdir və deqradasiyaya uğrayır (2, 3, 7). Yenə də FL-SMN zülalının aşağı səviyyədə ifadəsi SMN2 embrion inkişafı və canlı doğuş üçün kifayətdir. Bunun əksinə olaraq, erkən doğuşdan sonrakı inkişaf, xüsusən də sinir -əzələ sisteminin inkişaf etməməsi ciddi şəkildə təsirlənir. SMN1. Buna görə, SMA olan xəstələrin çoxu, spinal motor nöron itkisi və proksimal əzələ atrofiyasını ehtiva edən paralitik fenotipi sürətlə inkişaf etdirir (8). Birləşdirmə kaskadının (9) qurulmasında SMN zülalının təmizlik funksiyasını nəzərə alsaq, SMA -da motor neyronların selektiv itkisi əsasən izah olunmamış qalır.

SMA olan xəstələrin əksəriyyəti ciddi şəkildə təsirlənsə də, həqiqətən yüngül xəstəliyə qədər uzanan bir sıra fenotiplər var. Yüngül SMA ümumiyyətlə daha çox sayda ilə əlaqələndirilir SMN2 nüsxə (10, 11). Həqiqətən, bir vəziyyətdə, 8 olan bir xəstə SMN2 nüsxələrin asemptomatik olduğu bildirilir (12). Xəstəliyin dəyişdirici təsiri yüksəkdir SMN2 nüsxələri və beləliklə, SMN zülalı sonradan siçanlar üçün null model siçanlarda birbaşa nümayiş etdirildi. Smn lakin 8 nüsxəsini özündə saxlayır SMN2 gen (13). Bu tip siçanların WT fenotipi hədəf almaq üçün ilk əsl məntiqi təmin etdi SMN2 SMN zülalını müalicə vasitəsi kimi artırmaq. Bu strategiyanın həyata keçirilməsi səyləri, ISS-N1-in aşağı axınında tənzimləyici bir element olduğu göstərildikdə daha da gücləndirildi. SMN2 exon 7 FL-SMN səviyyələrini artırmaq üçün effektiv şəkildə hədəf alına bilər (14, 15). Tənzimləyici elementi hədəf alan, ciddi şəkildə təsirlənmiş SMA model siçanlarının birləşmə dəyişdirmə oligonükleotidləri (SSO) ilə müalicəsinin nəticəsi diqqət çəkdi. Terapevtik oliqo-gücləndirilmiş SMN səviyyələrinin vaxtında tətbiqi sinir-əzələ funksiyasını bərpa etdi və sağ qalma müddətini xeyli uzatdı (16, 17). SSO, ISS-N1-i hədəf almaq və modulyasiya etmək üçün istifadə olunurdu SMN2 gen ifadəsi nəticədə SMA terapevtik dərmanı Spinraza (18) halına gətirildi.

Spinrazanın klinik vədinə baxmayaraq, uzunmüddətli effektivliyi ilə bağlı suallar çoxdur (19, 20). Əsas narahatlıq SMN zülalına olan məkan tələblərindən və dərmanın hazırda intratekal olaraq tətbiq olunma üsulundan qaynaqlanır. Bu cür müalicənin SMN zülalının MSS toxumasına möhkəm bərpası ilə nəticələnəcəyi gözlənilir. Bununla belə, periferik orqanlar, o cümlədən əzələlər, normal protein konsentrasiyalarının potensial faydalı təsirlərindən məhrum qalacaqlar. Aşağı SMN səviyyələrinin motor neyronlarından kənarda pozucu təsirlərə malik olması getdikcə daha aydın görünür (21, 22). Qəti sinir-əzələ SMA fenotipi sayəsində əzələlərdə bu cür təsirlərin potensialı və onların ümumi xəstəliyə töhfəsi xüsusi maraq doğurur. SMA-da əzələlərin rolunu ölçmək üçün aparılan tədqiqatlar fərqli nəticələrə gəldi (23-30). Burada, SMN -dən əzələlərin selektiv şəkildə məhrum edilməsinin xəstəliyin nəticələrini xarakterizə edərək, qeyri -müəyyənliyi hələ də ən birbaşa şəkildə həll etməyi öz üzərimizə götürdük. Skelet əzələsindəki zülaldan seçici olaraq tükənmiş, lakin buna baxmayaraq, 1 və ya 2 nüsxəni ifadə etmək üçün hazırlanmış model siçanların istifadəsi. SMN2 gen - tipik, şiddətli bir SMA genotipi - bu toxumada aşağı SMN -nin dərin zərər verdiyini göstərdik. Tək olan heyvanlarda SMN2 kopya, xəstəliyin başlanğıcı sürətli idi, orta sağ qalma təxminən P21 idi. Bunun əksinə olaraq heyvanlarda xəstəlik 2 nüsxə daşıyır SMN2 gen gec ortaya çıxdı, lakin buna baxmayaraq miyofiberlərə və sinir -əzələ birləşmələrinə (NMJ) morfoloji ziyan, zəif motor performansı və əzələ gücünü optimal şəkildə istehsal edə bilməmək də daxil olmaqla geniş bir əzələ fenotipləri ilə nəticələndi. Mutantlarda xəstəliyə bənzər 1 nüsxə SMN2, bu qüsurlar nəticədə ömrünü təxminən 13 aya qədər qısaltdı. Bu qüsurlara baxmayaraq, simptomatik siçanların skelet əzələlərinə SMN -nin bərpası faydalı oldu. Bu nəticəyə gəlirik ki, əzələ SMN zülalının kritik hüceyrə fəaliyyət sahəsidir və 1 və ya 2 nüsxədən protein ifadə edir. SMN2 Şiddətli, hüceyrəyə müstəqil bir əzələ fenotipinin başlamasının qarşısını almaq üçün gen kifayət deyil. Nəticələrimiz göstərir ki, SMA üçün ən optimal SMN gücləndirici müalicə rejimləri proteini skelet əzələsinə bərpa edənlər olacaqdır.

MyoD-iCre, Smn F7 allelinin güclü, əzələ spesifik inaktivasiyasına təsir göstərir. Skelet əzələlərində SMN-nin tükənməsinin hüceyrəyə müstəqil təsirlərini araşdırmaq üçün, 2 əzələ Cre sürücüsündən, MyoD-iCre və Myf5-Cre (31, 32) hansının araşdırmalarımız üçün daha uyğun olduğunu sınayaraq başladıq. Hər biri E8 (33-35) kimi erkən əzələ progenitor hüceyrələrində ifadəni hərəkətə gətirir və skelet əzələsində xəstəliklə əlaqəli zülalları seçici şəkildə tükəndirmək və ya bərpa etmək üçün istifadə edilmişdir (27, 36). 2 Cre xətlərinin toxuma spesifikliyini müəyyən etmək üçün transgen siçanları induksiya edən heyvanlara ayrıca yetişdirdik. Smn allelin silinməsi (Smn F7 ) exon 7 -nin hər iki tərəfində loxP saytları olan (37, 38). Daha sonra ikiqat transgeniklərin hansı toxumalarının Cre-vasitəçiliyi ilə rekombinasiya sübutunu nümayiş etdirdiyini araşdırmaq üçün PCR-dən istifadə etdik. Gözlənildiyi kimi, ikiqat transgenin hər birinin proksimal və distal əzələlərində silinmiş (Δ7) allelinin mövcudluğunu aşkar etdik. MyoD-iCre Smn F7Myf5-Cre Smn F7 heyvanlar (Şəkil 1A). Bununla belə, digər hesabatlarla uyğun gəlir (27, 39), halbuki rekombinasiya Smn F7 allel skelet əzələsi ilə məhdudlaşır MyoD-iCre Smn F7 siçanların CNS toxumasında da təsbit edildi Myf5-Cre Smn F7 heyvanlar, sonuncu tapıntı bu iş üçün Myf5-Cre xəttini istisna etdi. Bununla belə, biz Cre sürücülərinin hər birinin həyata keçirdiyi nisbi səmərəliliyi ölçməyə davam etdik Smn F7 skelet əzələsində inaktivasiya. Sürücülərin hər birinin nə qədər möhkəm çevrildiyini birbaşa ölçmək üçün Smn F7 allele silinir Smn Δ7 şəklində, biz P7-nin skelet əzələsindən genomik DNT-də Q-PCR istifadə etdik MyoD-iCre Smn F7/+Myf5-Cre Smn F7/+ heyvanlar və qalıqların təxmin edilən nisbi səviyyələri Smn F7 mutantların hər dəstində allel. Əzələ toxumasından DNT MyoD-iCre Smn F7/+ siçanlarda daha aşağı səviyyələr var idi Smn F7 əzələ DNT-dən daha çox allel Myf5-Cre Smn F7/+ siçanlar (Şəkil 1B), MyoD-iCre-nin floxed alleli təsirsiz hala gətirməkdə daha güclü olduğunu göstərir.

Sağlam, əzələ spesifik inaktivasiyası Smn F7 MyoD-iCre ilə allel. (A) Siçan toxumasından genomik DNT -nin PCR analizi Smn F7 allel və ya MyoD-iCre və ya Myf5-Cre. İnaktivləşdirilmiş Smn Δ7 allel yalnız MyoD-iCre siçanlarının əzələlərində aşkar edilir, halbuki Myf5-Cre transgeniklərinin ektopik yerlərində müşahidə olunur. (B) Q-PCR məlumatlarının effektivliyinin müqayisəsi Smn F7 MyoD-iCre və ya Myf5-Cre sürücüsü ilə siçanların əzələlərində inaktivasiya. **P < 0,01, t test, n Hər kohortdan ≥ 4 siçan. (C) Kaplan-Meier'in sağ qalma əyriləri Myf5-Cre Smn F7/-MyoD-iCre Smn F7/– siçan. P & lt 0.01 qruplar arasında, günlük sıralama testi.

Rekombinasiyanın səmərəliliyini təyin etmək üçün ikinci, dolayı vasitə olaraq, yaratmaq üçün xaçlar qurduq MyoD-iCre Smn F7/–Myf5-Cre Smn F7/– mutantlar. Belə mutantlarda SMN zülalının əzələ hüceyrələrində tamamilə ləğv ediləcəyi gözlənilir Smn F7 -ə çevrilir Smn Δ7 . Belə ablasiya hüceyrənin və beləliklə də orqanizmin sağ qalması ilə bir araya sığmadığından (4), müvafiq Cre Smn F7/ - mutantlar və hər hansı nəticədə yaranan heyvanlarda xəstəliyin şiddəti - ömrü ilə qiymətləndirildiyi kimi - rekombinasiya effektivliyinin dolayı, lakin həssas ölçüsüdür. Smn F7 allel. Tam çevrilmədən az verildiyini nəzərə alsaq Smn F7 üçün Smn Δ7 , bizim PCR təcrübələrimizdə aşkar edildiyi kimi, canlı və/və ya ölü doğulanları əldə etmək bizi təəccübləndirmədi Smn Δ7/ - Cre sürücülərinin hər birini daşıyan mutantlar. Bununla birlikdə, MyoD-iCre-nin üstün rekombinasiyaya təsir etdiyini irəli sürən Q-PCR nəticələrimizə uyğun olaraq χ 2 analizi, gözləniləndən xeyli az olduğunu göstərdi MyoD-iCre Smn F7/– doğuş zamanı mutantlar. Əksinə, Myf5-Cre Smn F7/– mutantlar və onların uşaqları proqnozlaşdırılan tezliklərdə doğulublar (Əlavə Cədvəl 1 əlavə materialı bu məqalə ilə onlayn əldə etmək olar https://doi.org/10.1172/JCI131989DS1). Üstəlik, üstünlük (

90% -dən MyoD-iCre Smn F7/– mutantlar ya ölü doğuldu, ya da P0 -da öldü, təxminən 75% Myf5-Cre Smn F7/– siçanlar nəinki yetkinlik yaşına çatdı, həm də cəmi 2 bal güclə böyüdü MyoD-iCre Smn F7/- mutantlar P1 -dən kənarda yaşayırdılar və nə P30 -dan sonra sağ qaldılar (Şəkil 1C). Ümumilikdə məlumatlar, MyoD-iCre transgenik xəttinin Myf5-Cre həmkarından daha möhkəm bir sürücü olduğunu və bu səbəbdən əzələlərdə SMN-in aşağı ifadəsinin hüceyrəyə müstəqil təsirlərini qiymətləndirmək üçün daha ehtiyatlı bir reagent seçim olduğunu irəli sürdü. Əzələlərdə SMN tükəndirəcək MyoD-iCre sürücüsünü seçdiyimizin son təsdiqində Cre transgenli və ya olmayan ROSA-YFP siçanları (40) yaratdıq. Gözlənildiyi kimi, əzələ liflərinin əksəriyyətində güclü bir YFP siqnalı aşkar etdik MyoD-iCre ROSA-YFP, amma yox ROSA-YFP heyvanlar (Əlavə Şəkil 1A). MyoD-iCre ROSA-YFP siçanlarının onurğa beyni, beyin və ya qaraciyər toxumalarında YFP floresans aşkar edilməmişdir (Əlavə Şəkil 1B). Buna görə, qalan tədqiqatlar istifadə edərək aparıldı MyoD-iCre xətt

Əzələdə SMN tükənmiş tək nüsxəli SMN2 mutantlarında şiddətli, sürətlə başlayan xəstəlik müşahidə olunur. SMN-nin tam toxuma ablasiyası snRNP biogenezini pozur və buna görə də öldürücüdür (4). Bundan əlavə, SMN-nin tam ablasiyası insan SMA-nı sədaqətlə modelləşdirə bilmir, burada proteinin qalıq səviyyələri 1 və ya daha çoxdan yaranır. SMN2 nüsxələr.Buna görə, yalnız skelet əzələlərində qalıq SMN ifadə edən mutantlar yaratmaq üçün homozigot olan SMA daşıyıcı siçanları yetişdirdik. SMN2 transgen (13) və MyoD-iCre sürücüsü üçün heterozigot (MyoD-iCre SMN2 +/ +Smn +/– ) ilə Smn F7/F7 heyvanlar. MyoD-iCre SMN2 +/– Smn F7/- mutantlar gözlənilən 12.5%tezliyi ilə alındı, ancaq doğumdan 24 saat sonra bədən çəkisi ilə qiymətləndirildiyi kimi açıq bir fenotip nümayiş etdirdilər (Şəkil 2, A və B). Mutantlar da azalmış hərəkəti nümayiş etdirdilər, motor performans testindən keçə bilmədilər (Şəkil 2C və Əlavə Video 1) və təxminən P14 -ə görə pis vəziyyətdə idilər. Tez -tez arıqlamış, dağınıq və tənəffüs çətinliyi əlamətləri tapmışlar (Əlavə Video 2). Median sağ qalma P21 ətrafında qısaldılmışdır (Şəkil 2D). Gözlənildiyi kimi, P7 mutantlarının skelet əzələ toxumasındakı SMN zülalının səviyyəsi əhəmiyyətli dərəcədə aşağı idi və daşıyıcı SMA siçanlarındakı zülal səviyyələrinin yarısından daha az idi (41) şiddətli (tip 1) mutantlar (Şəkil 2) E və F). Mutantların WT SMN zülalının təxminən 25% -ni ifadə etdiyi və müşahidə edilən açıq xəstəlik fenotipinin həqiqətən də heyvanların əzələ toxumasında zülalın seçici şəkildə azalmasının nəticəsi olduğu qənaətinə gəlirik.

Şiddətli, erkən başlayan xəstəlik MyoD-iCre Smn F7/- daşıyan mutantlar 1 SMN2 kopyalamaq (A) Qrafik mutantların çəkisinin azaldığını göstərir t test, n Hər dəstdən ≥ 10 siçan. (B) Birincisinin daha kiçik ölçüsünü əks etdirən tipik bir mutant və nəzarətçi yoldaş. (C) Mutantlar düzəldici refleks testində zəif çıxış edir t test, n Hər kohortdan ≥ 10 siçan. (D) Kaplan-Meier sağ qalma əyriləri mutantların qısaldılmış ömrünü təsvir edir. P < 0,0001 qruplar arasında, log-rank testi, n = Hər qrupdan 25 siçan. (E.) Western blot a MyoD-iCre SMN2 +/– Smn F7/- mutant. (F) Mutantların skelet əzələsindəki nisbi SMN səviyyələri və müvafiq nəzarət 1-yollu ANOVA, n Hər kohortdan ≥ 3 siçan. (G) P15 mutantlarında əza və tənəffüs əzələ liflərinin ölçüləri nəzərəçarpacaq dərəcədə azalır t test, n ≥ 600 lif n = hər kohortdan 3 siçan. (H) P15 mutantından və interkostal əzələlərin H & amp ilə boyanmış eninə hissələri, toxuma itkisini göstərir və birincisində mərkəzi nüvələri (oxları) olan liflər. Ölçək çubuğu: 20 μm. Kəmiyyəti (Mənmərkəzi nüvələr vəJ) P15 mutantlarının və nəzarətlərinin qabırğalararası əzələlərindəki lif sayıları. t test, n = hər qrupdan 3-5 siçan. *P < 0,05 **P & lt 0.01 ***P Bütün analizlər üçün < 0,001.

Şiddətli, sürətli başlayan açıq fenotipi və SMN zülalının sistemli tükənməsinin motor biriminə məlum olan təsirlərini nəzərə alaraq, daha sonra MyoD-iCre SMN2 +/– Smn F7/- sinir-əzələ patologiyasının sübutu üçün mutantlar. Əvvəlcə distal (gastrocnemius), proksimal (triceps) və tənəffüs (interkostal) əzələlərdə əzələ liflərinin morfologiyasını qiymətləndirdik. Mutantlardakı miofiber sahələri 2 ilə 3 həftəlik yaşlarda hər 3 əzələdə azaldı (Şəkil 2G və Əlavə Şəkil 2, A -C). P15-də qabırğaarası əzələlərin daha ətraflı təhlili göstərdi ki, bu anormallıq əzələ liflərindən məhrum olan və tez-tez monositlərin və ya makrofaqların infiltratlarını və anormal lokallaşdırılmış mərkəzi nüvələri ehtiva edən əhəmiyyətli sayda miyofiberlərlə xarakterizə olunan fərqli degenerativ patoloji ilə müşayiət olunur (Şəkil 2, H və mən). Miyofiberlərin miqdarı, bu tənəffüs əzələsindəki hüceyrələrin təxminən üçdə birinin itirildiyini (Şəkil 2J), əzələnin ciddi disfunksiyasının, nəfəs almağın çətinləşməsinin (həmçinin Əlavə Video 2 -ə baxın) və mutantın son ölümünün səbəb olduğunu göstərdi. heyvanlar. Maraqlıdır ki, bu qüsurlar P7 -də daha az əhəmiyyətli idi, lakin buna baxmayaraq əzələlərin postnatal dejenerasyonunu göstərir. MyoD-iCre SMN2 +/– Smn F7/- mutantlar (Əlavə Şəkil 2, D -F). Üstəlik, anormalliklər skelet əzələləri ilə məhdudlaşdı, çünki MyoD-iCre-nin ifadə edilmədiyi ürək əzələlərinin müayinəsi, miyofiber sahəsi və sol mədəciyin divarının qalınlığı ilə təyin olunan mutantlarda və nəzarətdə heç bir fərq görmədi (Əlavə şəkil) 2, G -I).

SMA motor neyron itkisi ilə təyin olunur. Bu hüceyrələrdə SMN -nin seçici şəkildə tükənməsi onların itkisini tetiklemek üçün kifayətdir (42), lakin nörodejenerativ prosesdə xəstə əzələlərin rolu araşdırılmamışdır. Buna görə də, motor nöron somalarını bədənimizdə ölçdük və xarakterizə etdik MyoD-iCre SMN2 +/– Smn F7/- mutantlar. Hüceyrə sayıları, əzələlərdə SMN -nin aşağı olmasına baxmayaraq, onurğa motor neyronlarının itkisinin olmadığını göstərdi (Şəkil 3, A və B). Üstəlik, biz nə motor neyronlarının somasında azalmış SMN boyanması, nə də zülalın lokallaşdırıldığı qiymətli daşların, subnüvə ocaqlarının sayının azalmasına dair dəlil tapmadıq (Şəkil 3, C–E və ref. 43).

NMJ qüsurları MyoD-iCre Smn F7/- 1 nüsxəsi olan mutantlar SMN2 gen. (A) P21 mutantının bel (L1–L3) onurğa beyninin eninə bölmələri və nəzarət. Ölçək çubuğu: 25 μm. Kəmiyyətləşdirilmiş nəticələr (B) onurğa motor neyronlarının sayı (L1–L3, T7–T10, C5–C6) (C) Motor neyronlarda SMN siqnal intensivliyi (D) siçanların motor neyronlarında nüvə daşları sayılır. NS: P & gt 0.05, t test, n > 150 hüceyrə və n = hər qrupdan 4 siçan. (E.) Güclü SMN siqnalını və nüvə daşlarının (oxlar) mövcudluğunu göstərən mutantdan bir bel motor neyronu. Ölçü çubuğu: 8 μm. (F) Mutant və nəzarət siçanlarının qabırğaarası əzələlərində NMJ-lər. Aşağıdakı mürəkkəbliyi və mutantda NF (oxlar) ilə doldurulmuş terminal varikozitlərin mövcudluğunu göstərən hər bir heyvanın tipik son plitələrinin yüksək böyüdücü şəkilləri daxildir. Ölçü çubuqları: sırasıyla 50 μm və 15 μm. Qrafikləri (GNMJ mürəkkəbliyi, (Hendplate ölçüsü və (Mən) P21 mutantlarında və nəzarətdə NMJ morfologiyası. **P & lt 0.01 ***P & lt 0.001, t test, n ≥ 100 NMJ -dən n ≥ hər qrupdan 3 siçan. (J) Mutantlar və nəzarətlərdə atrogen zülal ifadəsi bu denervasiya markerlərində az dəyişiklik göstərdi. NS: P > 0,05, t test, n = 3 siçan.

Əzələdən qaynaqlanan xəstəlik proksimal motor neyronu təsir etməsə də, xroniki miyopatiya postsinaptik bölməni pozur və nəticədə sinir -əzələ sinapsının morfologiyasına və funksiyasına xələl gətirir (44). Bundan əlavə, əzələdə aşağı SMN-nin SMA-da müşahidə olunan NMJ qüsurlarına kömək edib-etmədiyi və ya daha da gücləndirdiyi aydın deyil. Müvafiq olaraq, mutantlarımızda NMJ-lərin diqqətlə morfoloji təhlilini apardıq. P17-P21 mutantlarının hər 3 əzələsindəki asetilkolin reseptor (AChR) qruplarının yetkin NMJ-lərin tipik simit quruluşuna sahib olduqlarını gördük (Şəkil 3F). Bununla belə, qruplardakı perforasiyaların sayına əsaslanaraq onların nisbi mürəkkəbliklərinin diqqətlə qiymətləndirilməsi göstərdi ki, qastroknemii və tricepsdəki son lövhələr mutantlar və nəzarətlər arasında heç bir fərqi olmasa da, interkostalınkilər mutantlarda daha az işlənmişdir (Şəkil 3G). Bundan əlavə, daha kiçik ölçülü mutant əzələlərə uyğun olaraq, hər 3 əzələdəki qrupların nisbətən kiçildiyi aşkar edilmişdir (Şəkil 3, F və H). Mutant siçanlardakı əzələ sinir terminallarının müayinəsi, nörofilament (NF) zülalı ilə şişmiş varikozitələrdə artım aşkar etdi, bu sistemli SMN zülalını ifadə edən model siçanlarda müşahidə olunan qüsurları xatırladır (refs. 45-48 və Şəkil 3I). Bununla birlikdə, NMJ-nin nə immunohistokimyəvi tədqiqatlarında, nə də denervasiya olunmuş əzələlərdə müntəzəm olaraq tənzimlənən atrogenlərin, atrogin-1 və MuRF1-in miqdarı ilə denervasiya sübutları aşkar edilməmişdir (Şəkil 3J). Yenə də müşahidə olunan qüsurlar, əzələ patologiyası və açıq fenotipi ilə birlikdə MyoD-iCre SMN2 +/– Smn F7/- mutantlar bizi 2 nəticəyə gətirib çıxarır. Birincisi, nəticələr skelet əzələlərində aşağı SMN -nin xəstəliyə səbəb olmaq üçün kifayət olduğunu göstərir. İkincisi, əzələdən qaynaqlanan patologiyanın, çox güman ki, geriyə dönük bir şəkildə sinirlərdə anormallıqlara səbəb ola biləcəyini nümayiş etdirirlər. Buna görə, əzələlərdə SMN çatışmazlığı həm hüceyrə qüsurlarına, həm də ümumi SMA fenotipinə qatqı təmin etmək üçün həm hüceyrəyə, həm də hüceyrəyə bağlı olmayan hərəkət edir.

Miyopatiya, 2 SMN2 nüsxəsi olan gənc, fenotipik olaraq normal mutantlarda əzələ zədələnməsindən sonra açılır. Xəstələrdə tək model olan SMA və model siçanlar SMN2 surət mümkün olan xəstəliyin ən ağır formasını (tip 0) təşkil edir və çox vaxt uterusda ölümlə nəticələnir (49-51). Beləliklə, xəstəliyin bu formasının yayılması aşağıdır (52) və fenotipin şiddəti MyoD-iCre Smn F7/- üçün hemizigot mutantlar SMN2 transgen bəlkə də gözlənilməz deyil. İnsan SMA xəstələri arasında daha çox rast gəlinən bir vəziyyət olan genin 2 nüsxəsindən mutantların əzələlərində SMN ifadəsinin təsirini müəyyən etmək üçün biz homozigot siçanlar yaratdıq. SMN2 (MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- ).

MyoD-iCre mutantlarında aşkarlanan, sürətli başlanan fenotipdən fərqli olaraq, tək SMN2 kopya olaraq, genin 2 nüsxəsini ifadə edən gənc yetkin siçanlarda yalnız incə anormallıqlar aşkar etdik. Beləliklə, məsələn, sonuncu mutantlar, həyatın ikinci postnatal həftəsində Cre sürücüsü olmayan idarəetmələrlə müqayisədə (Şəkil 4A) bir qədər azalmış bədən çəkisi nümayiş etdirsələr də, P0 və P21 arasındakı məcmu artım əyriləri aydın yuxarıya doğru bir traektoriya nümayiş etdirdi (Əlavə şəkil) 3A). Bundan əlavə, mutantlar yenidoğulmuş kimi (Əlavə Şəkil 3B) və ya 6 həftəlik dövrdə (Əlavə Şəkil 3C) rotarodda düzəltmə qabiliyyətində heç bir zəiflik nümayiş etdirməmişlər və doğuşla P60 arasında ömründə heç bir azalma nümayiş etdirməmişlər (18 yaşında yaşayan 16 mutantdan 16 -sı) 18 nəzarət canlıdır). 1 aylıq mutantların skelet əzələlərində SMN konsentrasiyası aşağı olaraq qaldı, WT səviyyələrinin təxminən 21% -də (Şəkil 4, B və C) digər toxumalarda zülal səviyyələri azalmadı.

Yetkinlərdə kiçik hüceyrə patologiyası MyoD-iCre Smn F7/- daşıyan mutantlar 2 SMN2 nüsxələr. (A) 1 və ya 2-yə malik nəzarət və mutantların bədən çəkilərinin müqayisəsi SMN2 nüsxələr 1 tərəfli ANOVA, n Hər kohortdan ≥ 10 siçan. (BP30 skelet əzələsində SMN zülalının seçici tükənməsini göstərən Western blot nəticələri MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- mutant. (C) P30 mutant və nəzarət siçanlarında SMN zülalının miqdarları t test, n ≥ hər qrupdan 3 siçan. (D) P30 mutantından və nəzarətdən H&E ilə boyanmış qastroknemius əzələlərinin eninə kəsikləri ikisi arasında əsas morfoloji fərqləri aşkar etməmişdir. Ölçək çubuğu: 25 μm. Qrafikləri (E.) miyofiber sahələri, (F) mərkəzi nüvələri olan liflər və (G) gənc mutantlarda və nəzarətdə serum kreatin kinaz (CK) səviyyələri. NS: P & gt 0.05, t test, n > 150 liflər n Nəticələr üçün hər qrupdan = 3 siçan E.F NS: P & gt 0.05, t test, n = CK dəyərləri üçün 10 siçan. (H) P30 mutantının tricepsindən və 2 siçanda pre və postsinaptik bölmələrin oxşar morfologiyasını göstərən bir nəzarətdən NMJ-lər. Ölçək çubuğu: 30 μm. (Mən) P30 mutantlarında və nəzarətlərində NMJ innervasyonunun dərəcəsinin qrafiki. (J) P30 mutantlarında və nəzarət tullantılarında son lövhə mürəkkəbliyini təsvir edən qrafik. NS: P > 0.05, Fişerin dəqiq testi, n ≥ 300 NMJs n = Analiz üçün hər bir siçan qrupundan 3 siçan MənJ. **P & lt 0.01 ***P & lt 0.001.

Tək nüsxədə sinir-əzələ patologiyasına dair sübutlar verilir SMN2 MyoD-iCre mutantları, biz insan transgeninin 2 nüsxəsini saxlayan gənc yetkin mutantların əzələ və distal motor vahidini tədqiq etməyə davam etdik. Ümumi əzələ anomaliyaları qeyd edilməmişdir. Mutantların bir qədər kiçik olmasına baxmayaraq, müayinə olunan əzələlərdəki miofiberlər, ölçüləri ölçüdə nəzarət orqanlarının ölçüləri ilə eynidir (Şəkil 4, D və E), morfoloji baxımdan normal görünürdü və anormal olaraq lokal lokal myonükleus şəklində patoloji göstərmirdi. qastroknemius və qabırğaarası əzələlər. Mutantlarda daha həssas triceps əzələsi nəzarətdən daha çox sayda mərkəzi nüvəyə sahib idi, lakin bu araşdırılan ümumi miofiberlərin 1% -dən azını təşkil edirdi (Şəkil 4F və Əlavə Şəkil 4, A -E). Əsas əzələ patologiyasının olmaması ilə uyğun olaraq, mutant heyvanların serumunda əzələ kreatin kinazının (CK) yüksəlməsi aşkar etmədik (Şəkil 4G) və ya dövran edən serum IgG-nin miyofiberlərə nüfuz edib-etmədiyini yoxlayaraq qiymətləndirilən sarkolemmaya ziyan (Əlavə Şəkil) 4F). P7 mutantlarında miofiberlərin yetkinlik vəziyyətinin məlum markerləri olan miozin ağır zəncir genlərinin və miogen faktorları Pax7, MyoD, Myf6 və myogeninin ekspresiya səviyyələrinin təhlili, nə 1, nə də 2 saxlayan heyvanlarda əhəmiyyətli bir dəyişiklik olmadığını ortaya qoydu. SMN2 nüsxələri (Əlavə Şəkil 5, A–L), baxmayaraq ki, MyoD ifadəsi daha yüksək tendensiyaya malikdir, xüsusən də 1 nəzarət dəsti kimi xidmət edən ən ağır Δ7 SMA mutantlarında. İfadə dəyişiklikləri P14 mutantlarında da təsbit edilməmişdir (Əlavə Şəkil 5, M -Q), burada pozulmamış orqanizmin iskelet əzələlərində SMN -nin selektiv tükənməsinin miogenezi və ya əzələ fərqlənməsini pozmadığını göstərir.

Daha sonra NMJ morfologiyasını araşdırdıq. Mutantlarda müşahidə edilən təəccüblü qüsurlardan fərqli olaraq hemizigot SMN2 transgen, homozigot olan 1 aylıq mutantların triceps əzələlərində NMJ-lər SMN2 nisbətən normal görünürdü (Şəkil 4H). Xüsusilə, son plaka ölçüsündə heç bir fərq yoxdur (μm 2 sahə - nəzarətlər: 218.1 ± 3.9, mutantlar: 225.3 ± 3.7, n ≥ 150 NMJs n = hər kohortdan 3 siçan, P = 0.183, t test), innervasiya (Şəkil 4I), endplate mürəkkəbliyi (Şəkil 4J) və ya NF varikozlarının tezliyi müşahidə edildi (aksonal şişkinlikləri olan son lövhələrin sayı — nəzarət: 7,87 ± 0,69, mutantlar: 5,25 ± 1,56, n ≥ 150 NMJ-dən n = Hər qrupdan 3 siçan, P = 0.2, t test). Potensial sinaptik qüsurları aşkar etmək üçün daha həssas bir vasitə olaraq, NMJ-lərin funksional vəziyyətini də araşdırdıq. Miniatür son lövhə potensialı (MEPP) tezliyi, MEPP amplitudası, evoked endplate potensialı (EPPs) və kvant məzmunu 4-5 həftəlik uşaqlarda normal idi. MyoD-iCre SMN2 +/+ Smn F7/– mutantlar (Əlavə Şəkil 6, A–D). Bu nəticələrə uyğun olaraq, mutant ekstensor digitorum longus (EDL) əzələlərində kəmiyyətcə ölçülən kəsik sahəsi və liflərin orta sayı nəzarət orqanlarınınkinə ekvivalent idi (Əlavə Şəkil 6, E və F). Toplu olaraq bu nəticələr gənc yetkinlik göstərdi MyoD-iCre SMN2 +/+ Smn F7/– mutantlar fenotipik olaraq normal idi və əzələ və ya NMJ patologiyasının əsas sübutlarını nümayiş etdirmədi.

Gənclərdə əsas qüsurların olmaması nəzərə alınır MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- mutantlar, əzələnin kəskin zədələnməsinin əsas patologiyanı aça biləcəyini soruşduq. Buna görə, P21 mutantlarının gastrocnemius və idarəetmələrini miyonekrotik bir vasitə olan kardiotoksin (CTX) ilə enjekte etdik və əzələlərin bərpası qabiliyyətini araşdırdıq. CTX -ə məruz qaldıqdan altı gün sonra, mutantlardan və nəzarətdən alınan miofiberlər nekrotik əzələ ilə xarakterizə olunan vahid dejenerasiya və mərkəzi nüvələri olan çox dəqiqəlik yenilənən miofiberləri göstərdi (Şəkil 5A). Zədədən iki həftə sonra əzələlərin bərpası daha da aydın oldu. Bununla birlikdə, yeni miyofiberlərdəki mərkəzi və periferik yerləşmiş nüvələrin miqdarı, mutant əzələlərin nəinki hələ də mərkəzdə yerləşən nüvələri saxlayan daha çox liflə, həm də birdən çox belə nüvəni ehtiva edən hüceyrələrlə xarakterizə olunduğunu ortaya qoydu (Şəkil 5, A və B). İnyeksiyadan 26 gün sonra heyvanların müayinəsi göstərdi ki, SMN-nin normal səviyyələrini ifadə edən əzələlər tamamilə bərpa olunub, liflərin 2%-dən az hissəsi hələ də mərkəzi nüvələri saxlayır. Əksinə, zülaldan məhrum olan əzələ, bu əzələdəki liflərin təxminən yarısı hələ də yetişməmiş, 1 və ya daha çox mərkəzdə yerləşən nüvəni ehtiva edən, ölçüdə əhəmiyyətli dəyişkənlik nümayiş etdirən və bəzi hallarda hələ də degenerasiyaya uğrayan regenerasiya sübutlarını nümayiş etdirməyə davam etdi (Şəkil 5, A və C). Bu nəticələr göstərir ki, gənclərdə açıq-aşkar miopatiyanın olmamasına baxmayaraq MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- Əzələ zədələnməsi şəraitində ortaya çıxan mutantlar, heyvanların zədələnmiş əzələləri təmir etmə qabiliyyətini ciddi şəkildə pozur.

Kəskin zədə gənc yetkinlərdə əzələ patologiyasını açır MyoD-iCre Smn F7/- 2 nüsxəsini daşıyan mutantlar SMN2 gen. (A) Mutant və nəzarət siçanlarından əmələ gələn H & ampE boyalı eninə əzələlər CTX ilə zədələnmədən 6, 14 və 26 gün sonra müayinə edildi. Mutantın 26 -cı günündə hipotrofik liflər (bərk ox ucları), çoxsaylı mərkəzi nüvələr (oxlar) və dejenerativ liflər (açıq ox ucları) ilə xarakterizə olunan əzələ patologiyasının davamlılığını qeyd edin. Ölçü çubuqları: 25 μm (yuxarı panellər), 15 μm (orta panellər) və 30 μm (alt panellər). Qrafiklər, mutantlarda və nəzarətlərdə mərkəzi və ya periferik yerləşmiş nüvələri olan liflərin nisbətini göstərir (B) 14 gün və (C) zədədən 26 gün sonra. ***P & lt 0.001, t test, n ≥ 400 lifdən n Hər genotipdən ≥ 4 siçan.

Skelet əzələ toxumasında SMN-dən seçici şəkildə tükənən 2 nüsxəli SMN2 mutantlarında gec başlayan motor disfunksiyası və erkən ölüm müşahidə olunur. Baxmayaraq ki, gənclərdə böyük əzələ anomaliyaları və ya açıq xəstəlik aşkarlaya bilmədik MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- mutantlar, CTX ilə bağlı eksperimentlərimizin nəticəsi və kəskin zədələnmənin əsas patologiyanı ifşa etməsi bu cür disfunksiyanın gec başlayan xəstəlik şəklində ortaya çıxacağını proqnozlaşdırdı. Buna görə də 2 nüsxəni araşdırmağa davam etdik SMN2 6 ilə 7 ay arasında ikinci, geniş analizlər aparan mutantlar. Rotarod analizlərində, mutantların nəzarəti zəif yerinə yetirmə meyli olsa da, 8, 10 və 16 həftəlik yaşlarda mutantlarda nəzərəçarpacaq dəyişiklikləri aşkar edə bilmədik. Bununla belə, 18 həftəlik yaşda uyğunsuzluq əhəmiyyətli oldu və heyvanlar müvafiq olaraq 20 və 28 həftələrdə sınaqdan keçirildikdə belə qaldı (Şəkil 6A). Nəticələr cinslərə görə təbəqələşdikdə və mutantların ümumiyyətlə nəzarətdən daha yaxşı performans göstərməsinə baxmayaraq, dişi heyvanların rotaroddakı kişilərdən daha çox təsirləndiyini irəli sürdükdə bu fərqlər daha da qabarıq görünürdü (Əlavə Şəkil 7, A və B).

Gec başlayan xəstəlik MyoD-iCre Smn F7/- daşıyan mutantlar 2 SMN2 nüsxələr. Nəticələr (A) dönər və (B) tutma gücü testləri skelet əzələsində SMN-nin seçici şəkildə tükənməsinin gec başlayan, xəstəliyə səbəb olan təsirlərini nümayiş etdirdi. t test, n Hər genotipdən ≥ 25 siçan. (C) Kaplan-Meier sağ qalma əyriləri mutantların qısaldılmış ömrünü təsvir edir. P & lt 0.0001 mutantlar və 2 nəzarət dəsti arasında P > 0.05 2 nəzarət dəsti arasında, log-rank testi. (D) 6-7 aylıq mutant və nəzarət qastroknemius əzələlərinin eninə kəsikləri mutantlarda patologiyanın olmasını göstərir. Hipotrofik liflər (bərk oxlar), sitoplazmik bazofiliya ilə açılan liflər (açıq ox başı), parçalanmış liflər (bərk ox ucları) və ya dejenerativ liflər (açıq oxlar) göstərilmişdir. Ölçək çubuğu: 25 μm. Qrafiklər (E.lif ölçüləri və (F) 7 aylıq mutantlardan və nəzarətçilərdən əzələlərdə lif sayı t test, n ≥ 500 lifdən n Hər genotipdən ≥ 3 siçan. (G) 7 aylıq mutantların və ya nəzarət orqanlarının əzələlərindəki mərkəzi nüvələrin təxminləri t test, n ≥ 1000 lif n Hər genotipdən ≥ 3 siçan. (H) 7 aylıq mutant və zədələnmiş IgG pozitiv miofiberləri (oxlar) əks etdirən nəzarət siçanlarından gastrocnemius əzələlərinin eninə hissələri. Ölçək çubuğu: 50 μm. (Mən) Əvvəlki təcrübədən zədələnmiş liflərin miqdarı t test, n Dən ≥ 300 lif n Hər genotipdən ≥ 3 siçan. (J) 7 aylıq mutant və nəzarət siçanlarının serum CK dəyərlərinin kantifikasiya olunmuş nəticələri t test, n Hər kohortdan ≥ 8 siçan. *P < 0,05 **P & lt 0.01 ***P & lt 0.001.

Tutuş gücü testində disfunksiya daha əvvəl aydın oldu. Mutantlar araşdırılan bütün vaxtlarda aşağı performans göstərdilər (Şəkil 6B). Üstəlik, hər iki cins eyni dərəcədə təsirləndi (Əlavə Şəkil 7, C və D). Nəhayət, ömrün qiymətləndirilməsi göstərdi ki, skelet əzələsindəki aşağı SMN də 2 nüsxədə erkən ölümə səbəb olur. SMN2 mutantlar. Nəzarətin təxminən 95% -i (SMN2 +/ + Smn F7/ - ) heyvanlar təxminən 18 aylıq yaşda qaldı, mutantların yalnız 14% -i bu yaşda hələ də canlı idi (Şəkil 6C). Gözlənildiyi kimi, aralarında heç bir fərq görmədik SMN2 +/ + Smn F7/ - idarəedicilər və MyoD-iCre sürücüsünü özündə saxlayan, eyni zamanda 1 WT SMN allelini daşıyan ikinci idarəetmə dəsti (MyoD-iCre SMN2+/+ Smn F7/+ ), beləliklə əzələdə proteinin heterozigot səviyyələrini təmin edir (Şəkil 6C). Gənc yetkin mutantların davranış təhlili ilə birlikdə, bu nəticələr skelet əzələlərində 2 -dən etibarən davamlı aşağı SMN ifadəsinin olduğunu göstərir. SMN2 nüsxələr gec başlayan disfunksiya şəklində olsa da açıq bir xəstəlik fenotipini tetiklemek üçün kifayət idi.

Miyopatiya, iskelet əzələlərində SMN-nin aşağı olması nəticəsində yaranan, gec başlayan, hüceyrə-muxtar nəticəsidir. Yaşlılarda aşkar xəstəliyin sübutunu nəzərə alaraq MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- mutantlar, biz heyvanlarda potensial sinir-əzələ patologiyasının yenidən qiymətləndirilməsini xüsusilə vacib hesab etdik. Buna görə, analizlərimizə bir daha əzələ morfologiyasını araşdıraraq başladıq. Gənc yetkin mutantlarda aparılan müşahidələrdən fərqli olaraq, yaşlı (6-7 aylıq) siçanların analizlərinin nəticələri diqqəti çəkdi. Müayinə olunan hər 3 əzələdə, iltihablı hüceyrələr tərəfindən sızan nekrotik liflər, sitoplazmik bazofiliya nümayiş etdirən bərpalı liflər, daha böyük bir lifin parçalanmasından əmələ gəlmiş kimi görünən bucaqlı liflər və ara sıra hipotrofik qrupların olması ilə xarakterizə olunan açıq bir patoloji sübut tapdıq. bir zamanlar fərdi endomizium kimi görünən liflər (Şəkil 6D və Əlavə Şəkil 7, E və F). Mutant əzələdəki patologiyanın sübutu, mikroglial/makrofag marker Iba-1 (Əlavə Şəkil 7G) üçün müsbət ləkələnmiş artan punkta şəklində də nümayiş etdirildi. İkincisi, mutant miofiberlərin nəinki ümumiyyətlə daha kiçik olduğunu gördük (Şəkil 6E və Əlavə Şəkil 8, A -C), həm də tutarlı olmayan ölçülərdə idi. Üçüncüsü, mutant əzələlərin əhəmiyyətli dərəcədə az liflərə malik olduğunu gördük (Şəkil 6F), bir çoxu mərkəzdə yerləşən nüvələrə malikdir (Şəkil 6G). Miyofiberlərin itirilməsi açıq şəkildə gec bir hadisədir, çünki biz mutant və nəzarət əzələlərində 1 aylıq yaşda ekvivalent sayda lif tapdıq (Şəkil 6F). Nəhayət, mədə-bağırsaq traktının ümumi ölçüsünün qiymətləndirilməsi göstərdi ki, mutant əzələ nəzarət əzələsindən əhəmiyyətli dərəcədə azdır (mq ilə çəki: nəzarət - 126 ± 7,3, mutantlar - 93,08 ± 4,5, P < 0,01, n ≥ 7 siçan, t test). Daha həssas flexor digitorum brevis (FDB) əzələsindəki patologiya daha da şiddətli idi. Mutantlarda, demək olar ki, tam itkinliyi və ya dejenerasiyanı göstərən yalnız əzələ qalıqları aşkar edilmişdir (Əlavə Şəkil 8D).

Yaşlılarda davam edən əzələ degenerativ prosesi nəzərə alınmaqla MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- mutantlar və patologiyanı təsdiqləmək üçün ikinci vasitə olaraq, biz serum IgG və serum CK səviyyələri ilə penetrasyonun miqdarını təyin etməklə fərdi miyofiber bütövlüyünü qiymətləndirdik. Müşahidə olunan patologiyaya uyğun olaraq və gənc heyvanlarda müşahidə olunandan fərqli olaraq, daha az miqdarda olsa da, əzələ distrofiyasında müşahidə olunanlara oxşar olan mutant liflərin əhəmiyyətli dərəcədə daha çox sayda IgG (Şəkil 6, H və I) var idi (Əlavə). Şəkil 4F). Mutant CK səviyyələri də yüksəldi (Şəkil 6J). Təəccüblü deyil ki, yüksək serum CK və artan mərkəzi nüvəli kiçik miofiberlər ilə xarakterizə olunan əzələ patologiyası, əzələ nəslinin əvəzinə, HSA-Cre sürücüsü vasitəsi ilə SMN-dən seçilmiş şəkildə tükənmiş yaşlı mutantlarda da müşahidə edilmişdir (Əlavə şəkil). 9, A–D). Model siçanlarımızdakı bu tapıntıların insan SMA -da potensial əzələ patologiyasına uyğunluğunu müəyyən etmək üçün hamısı ən az bir il Spinraza ilə müalicə olunan 6 xəstənin rahatlığı nümunəsində serum CK dəyərlərini araşdırdıq. Hər bir halda, CK dəyərləri maksimum normal dəyərləri 15% -dən 500% -ə qaldırdı və aşdı (Cədvəl 1). Kollektiv olaraq, bu nəticələr yaşlılarda aşkar xəstəliyin müşahidələrini gücləndirir MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- mutantlar, motor disfunksiyası və erkən ölüm üçün bir hüceyrə əsası təmin edir və iskelet əzələsinin SMN zülalının kritik bir hüceyrə fəaliyyət sahəsi olduğu fikrini gücləndirir. Protein çatışmazlığı, hətta 2 varlığında SMN2 nüsxələr orqanizm yaşlandıqca əzələlərə zərər verir.

Müalicə olunan SMA xəstələrində serum əzələ kreatin kinaz (CK-MM) dəyərlərinin artması

NMJ-lərin funksional və struktur qüsurları skelet əzələsində aşağı SMN-nin hüceyrə avtonom nəticələridir. Daha sonra 7 aylıq uşaqdakı NMJ-ləri araşdırdıq MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- siçan. Morfoloji analizlərimizin ən təəccüblü nəticəsi mutant AChR klasterlərinin nə dərəcədə sökülməsi və parçalanması idi (Şəkil 7, A və B). Oxşar qüsurlar 6 aylıq uşaqlarda müşahidə edildi HSA-Cre SMN2 +/ + Smn F7/- mutantlar (Əlavə Şəkil 9, E və F). Üstəlik, gənclərdən fərqli olaraq MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- Son plitələrin ölçü və quruluş baxımından nəzarət elementlərindən heç bir fərqi olmayan mutantlar, köhnə siçanlarda son lövhələr nəinki əhəmiyyətli dərəcədə kiçik idi (Şəkil 7C), həm də daha az işlənmişdir - mədə-bağırsaq traktında AChR klasterlərinin nisbətinin ölçülməsi ilə qiymətləndirildiyi kimi. 4 və ya daha çox perforasiya ilə tipik simit kimi struktur (nəzarət - 86,33% ± 3,1%, mutantlar - 3,33% ± 1,85%, P & lt 0.001, n ≥ 100 NMJ n = Hər qrupdan 3 siçan, t test).

NMJ patologiyası və sinir-əzələ disfunksiyası MyoD-iCre Smn F7/- daşıyan mutantlar 2 SMN2 nüsxələr. (A) 7 aylıq siçanların EDL əzələlərindən NMJ-lər, mutantlarda son plakaların dərin parçalanmasını göstərir. Ölçü çubuğu: 10 μm. (B) 7 aylıq mutant və nəzarət siçanlarında parçalanmış NMJ-lərin kəmiyyət göstəriciləri t test, n -Dan ≥ 500 bitiş lövhəsi n Hər genotipdən ≥ 3 siçan. (C) Qrafikdə 7 aylıq mutantların və nəzarət orqanlarının gastroknemius əzələlərində NMJ ölçüsü təsvir edilmişdir t test, n ≥ 420 son lövhədən n = hər genotipdən 3 siçan. Kəmiyyət təsvirləri (D) MEPP amplitüdü, (E.) MEPP tezliyi, (F) EPP amplitudası və (G) 7 aylıq mutant və nəzarət siçanlarının EDL əzələlərində kvant miqdarı. NS: P & gt 0.05, t test, n heyvan başına ≥ 10 endplates n Hər genotipdən ≥ 4 siçan. Qrafiklər təmsil edir (H) myofiber nömrələri və (Mən) təhlil edilən siçanların EDL əzələlərində mərkəzi nüvəli liflərin nisbəti t test, n Hər genotipdən ≥ 4 siçan. Kəmiyyət təsvirləri (J) pik xüsusi qüvvə, (K) nisbi qüvvə düşməsi və (Lnəticələr üçün) 5 ilə 7 aylıq siçanların 2 tərəfli ANOVA taban əzələlərində maksimum güc istehsalının dərəcəsi Jt nəticələri üçün testlər KL, n Hər kohortdan ≥ 5 siçan. *P < 0,05 **P & lt 0.01 ***P & lt 0.001.

Morfoloji anomaliyaların pozulmuş neyrotransmissiya ilə əlaqəli olub olmadığını müəyyən etmək üçün NMJ funksiyasını elektrofizioloji vasitələrlə də qiymətləndirdik. Mutantların və idarəetmələrin EDL əzələlərində EPP amplitüdlərində və MEPP tezliklərində heç bir fərq olmasa da, MEPP amplitüdləri MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- siçanlar, postsinaptik AChR-lərin azlığına uyğundur (Şəkil 7, D-F). Bu, aşağı postsinaptik AChR konsentrasiyalarına cavab olaraq presinaptik nörotransmitter buraxılışında kompensasiyaedici artımı təklif edən mutant son plitələrdə (Şəkil 7G) orta kvantal məzmunun nəzərəçarpacaq dərəcədə artmasına səbəb oldu. Mutant EDL əzələsinin ölçüsü də azaldı (əzələlərin kəsişmə sahəsi μm 2: nəzarət-584.300 ± 33.470, mutantlar-406.900 ± 36.780, P & lt 0.05, t testi n Hər kohortdan ≥ 4 heyvan) və daha az lifdən ibarət olub, çoxu periferik deyil, mərkəzi yerləşmiş nüvələrə malikdir (Şəkil 7, H və I). Yuxarıda qeyd olunan əzələ qüsurları, mutantlardakı onurğa motor neyron sayına təsir etməmişdir (bölmə başına ortalama sayı: mutantlar - 14.5 ± 0.25, nəzarətlər - 12.8 ± 1.08, P & gt 0.05, n = 3 siçan, t test). Bu nəticələr morfoloji və motor disfunksiyasının skelet əzələsindəki aşağı SMN nəticəsində yarandığı müşahidəsini gücləndirir və daha sonra postsinaptik bölmədə yaranan qüsurların motor neyron funksiyasına retrograd təsir göstərə biləcəyini göstərir.

Yekun funksional təcrübələr toplusunda, 5-7 aylıq yeganə əzələlərdə ex vivo kontraktilite ölçmələri apardıq. MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- mutantlar. Biz tapdıq ki, tək seğirmə və aşağı tezlikli (10-20 Hz) stimullaşdırma zamanı yaranan maksimal xüsusi qüvvə mutant və nəzarət nümunələri arasında fərqlənmir. Bununla birlikdə, mutant əzələlərin yığılma daralması (40-200 Hz) ilə nəticələnən tezliklər ilə stimullaşdırılması zamanı pik xüsusi qüvvədə əhəmiyyətli bir azalma aşkar edilmişdir (Şəkil 7J). Nəzarət və mutant əzələlər arasında güc-tezlik əlaqəsində heç bir dəyişiklik müşahidə edilməmişdir. Yorğunluğa həssaslığı qiymətləndirmək üçün əzələləri təkrarlanan, orta tezlikli stimullaşdırmaya da məruz qoyduq. Maraqlıdır ki, mutant əzələ son təxminən 25 stimullaşdırıcı qatar zamanı təvazökar, lakin əhəmiyyətli dərəcədə yorğunluqda azalma nümayiş etdirdi (Şəkil 7K). Bu müşahidənin hüceyrə əsasını araşdırmaq üçün bütün soleus əzələsindən çıxarılan miofibrillər miozin ağır zəncir izoformlarının nisbi səviyyələri üçün təhlil edilmişdir. Yorğunluğa qarşı artan müqavimətlə, soleus əzələlərindən gəldiyini gördük MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- siçanlar, yavaş seğirmə, yorğunluğa davamlı miyofiberlərdə xarakterik olaraq aşkar edilən I tip (MyHc7) miyozini əhəmiyyətli dərəcədə daha çox ifadə etdilər (Əlavə Şəkil 10, A və B). Nəhayət, pik spesifik tetanik qüvvədə və yavaş tip I miyozin məzmunundakı bu müşahidə olunan dəyişiklikləri nəzərə alaraq, nəzarət və mutant siçanlardan taban əzələlərində güc inkişaf kinetikasını (dF/dt) təhlil etdik. MyHc7 məzmununda müşahidə edilən artımla uyğun olaraq və normal ölçüdə olmasına baxmayaraq (çəki mq ilə: nəzarətlər - 6,15 ± 0,22, mutantlar - 6,15 ± 0,38) P = 1, n ≥ 4 siçan, t test), aşağı SMN ifadə edən soleus əzələsində maksimal dF/dt azalmışdır (Şəkil 7L). Ümumilikdə, bu nəticələr SMN çatışmazlığının bu toxumada hüceyrəyə müstəqil təsirindən yaranan əzələlərin əhəmiyyətli morfoloji və funksional çatışmazlıqlarına dair güclü sübutlar verir.

Sinir -əzələ patologiyasının azaldılması, SMN zülalının simptomsuz replikasiyasından sonra müşahidə olunur. SMN-nin erkən postnatal doldurulması SMA başlanğıcını effektiv şəkildə qarşısını alır (53, 54). SMN -nin bərpasının əzələdəki zülalın seçici olaraq tükənmiş post -simptomatik olmayan siçanlara da faydası olub olmadığını müəyyən etmək üçün sistematik olaraq ya SMN2 birləşməni dəyişdirən morfolino (MO) və ya 7 aylıq uşağa şifrələnmiş ardıcıllıqla MyoD-iCre SMN2 +/ + Smn F7/- mutantlar. Doqquz həftə sonra əzələlərin SMN səviyyələri qiymətləndirildi. Əvvəlki hesabatlara uyğun olaraq, SMN MO ilə işlənmiş mutantlarda FL-SMN transkriptlərinin və ümumi SMN protein səviyyələrinin, qarışıq molekulla işlənmiş qrupa nisbətən daha yüksək olduğunu gördük (Şəkil 8, A-C). Əzələ SMN -nin artmasının, ümumiyyətlə mutantlarda müşahidə olunan əzələ patologiyasını azaltdığını müəyyən etmək üçün, SMN səviyyələri araşdırılarkən, əzələləri qiymətləndirmək üçün gastroknemiyanı müxtəlif qruplardan ayırdıq. Əzələ nəm çəkisinin ölçülməsi, MO ilə müalicə olunan mutantlardan olan əzələlərin nəzarətdən əhəmiyyətli dərəcədə kiçik qaldığını, SMN üçün bərpa olunan mutantların əzələlərinin nəzarət əzələsindən daha böyük olduğunu və çəki baxımından fərqli olmadığını göstərdi (Şəkil 8D). Bu, SMN MO ilə işlənmiş mutantlarda daha az hüceyrə qüsurları ilə müşayiət olundu, bu heyvanlardakı miofiberlər, qarışıq MO tətbiq olunan mutantlarla müqayisədə daha böyük lif sahələri nümayiş etdirdi. Əlavə olaraq, daha az SMN MO ilə işlənmiş miofiberlər, qarışıq MO ilə işlənmiş mutantlara nisbətən mərkəzləşdirilmiş nüvələri ehtiva edir (Şəkil 8, E -G). Nəhayət, siçanların 3 kohortunda son lövhə ölçüsünün və mürəkkəbliyin ölçülməsi göstərdi ki, bu parametrlərin hər ikisi SMN MO ilə müalicə olunan mutantlarda qismən normallaşdırılıb (Şəkil 8, H-J). Xüsusilə, SMN üçün bərpa edilmiş mutantlarda NMJ-lər nəinki daha böyük idi (Şəkil 8I), həm də daha az parçalanmışdır (Şəkil 8, H və J). Bundan əlavə, SMN üçün bərpa olunan mutantlardakı pozulmamış boşqablar, 3 və ya daha çox fərqli deşikli simit kimi quruluşların kəmiyyətcə qiymətləndirilməsi ilə qiymətləndirildiyi kimi, daha mürəkkəb idi (Şəkil 8J). Biz belə nəticəyə gəlirik ki, əzələ patologiyasından sonra da SMN-nin bərpası aşkar tutulmalara çevrilir və/yaxud toxumada aşağı zülalla bağlı olan miopatiyanın qarşısını alır. Buna görə, SMA subyektlərinin əzələlərinə SMN -nin qaytarılmasının ümumi xəstəlik fenotipinə əhəmiyyətli dərəcədə yumşaldıcı təsiri olacağı gözlənilir.

SMN repletionu simptomatik mutantlarda əzələ qüsurlarını azaldır. Səviyyələri (A) SMN2-alınmış FL-SMN transkriptləri və (B) Nəzarət və mutantların qastroknemius əzələlərində SMN zülalı SMN2 splice-switching MO və ya 7 aylıq bir spesifik olmayan MO, bir tərəfli ANOVA, n = hər genotipdən 3 siçan. (C) Western blot, SMN-MO və ya pişmiş MO ilə müalicədən sonra skelet əzələlərində SMN zülalını araşdırdı. (D) Siçanlardakı əzələ çəkiləri əvvəlki panellərdə təsvir edildiyi kimi müalicə olunur 1 tərəfli ANOVA, n Hər qrupda ≥ 3 siçan. (E.) Gastroknemius əzələlərinin eninə hissələri müalicə olunan mutantlardan və nəzarətdən. SMN-MO ilə müalicə olunan əzələlərdə müşahidə olunan mərkəzi nüvələr (ox başları), hipotrof liflər (açıq oxlar) və dejenerativ liflər (bərk oxlar) şəklində daha az patoloji. Ölçü çubuğu: 100 μm. Kəmiyyətləşdirilmiş nəticələr (Fmərkəzi nüvələr vəG) siçanlardan əzələlərdə myofiber bölgələr 1 tərəfli ANOVA, n Dən ≥ 300 lif n Hər kohortdan ≥ 3 siçan. (H) 3 siçan dəstinin son lövhələri SMN-MO ilə müalicə olunan mutantda daha az parçalanmış NMJ-lərdə müşahidə edilir, onun mütərəqqi MO ilə müqayisədə. Ölçək çubuğu: 25 μm. (MənNMJ sahə ölçüləri və (J) Müalicə olunan mutantların və ya zibil yoldaşının qastroknemius əzələlərində NMJ mürəkkəbliyi təhlili 1-yollu ANOVA-ya nəzarət edir, n ≥ 400 son lövhədən n Nəticələr üçün hər genotipdən ≥ 3 siçan MənJ. *P < 0,05 **P & lt 0.01 ***P & lt 0.001.

SMA, aşağı SMN zülalının səbəb olduğu bir uşaq iflici olan paralitik bir xəstəlikdir. Müalicə edilmədikdə, SMA olan xəstələrin əksəriyyəti 2 yaşına qədər ölür. Model siçanlarda SMN -nin bərpası, SMA başlanğıcını maneə törədir və/və ya geri qaytarır (54, 55) və buna görə də həyat sürən bir müalicə vasitəsi olaraq sürətlə qəbul edildi. Bununla belə, doldurma tədqiqatları strategiyanın müvəffəqiyyətinin SMN-nin nə vaxt və hansı toxumalarda bərpa olunduğundan kritik dərəcədə asılı olduğunu da aydınlaşdırdı. MSS hüceyrələrinin və xüsusən də onurğa motor neyronlarının aşağı SMN -ə qarşı xüsusilə həssas olduğunu və bu səbəbdən xəstəliyin başlanmasının qarşısını almaq üçün kifayət qədər SMN səviyyəsini ifadə etməli olduğu qəbul edilir. Bu hüceyrələr Spinraza kimi SMN bərpaedici maddələrin intratekal tətbiqi ilə effektiv şəkildə hədəflənir. Həqiqətən də, xəstələrin bu şəkildə müalicəsinin ilkin nəticəsi, mərkəzi sinir sistemini hədəf almağın klinik effektivliyinə şübhə etməmişdir. Bununla belə, dərmanın məhdud intratekal çatdırılması və periferiyanı adekvat SMN-dən məhrum etmənin uzunmüddətli təsirləri ilə bağlı uzunmüddətli suallar qalır. Burada əhəmiyyətli bir periferik orqanı, iskelet əzələsini, adekvat SMN -dən məhrum etmənin nəticəsini nümayiş etdirmək üçün yeni bir model siçan seriyasından istifadə etdiyimizi istifadə etdik. Bu toxuma, SMA -da mühərrikin zəifliyi nəzərə alınmaqla xüsusilə aktualdır. Araşdırmalarımızdan dörd əsas nəticə çıxdı. Ən böyük idxal, SMN çatışmazlığının skelet əzələlərinə nə qədər zərərli olduğunu ortaya çıxarmaqdır. Fərdi miofiberlərdə və NMJ -lərdə qüsurlar, bütün əzələlərin anormallıqları və disfunksiyası və nəticədə sağ qalmağı pozan açıq bir fenotip tapdıq. Bu patoloji digər toxumalarda normal SMN səviyyəsinə baxmayaraq ortaya çıxdı. İkincisi, xəstəliyin dərəcəsinin sayı ilə əlaqəli olduğunu nümayiş etdirdik SMN2 surətləri və beləliklə toxumada funksional SMN zülalının mütləq səviyyələri. Yalnız 1 nüsxəni ifadə edən mutantlar SMN2 genin sürətlə inkişaf etdiyi bir xəstəlik, 2 nüsxəsi olanlar daha gec başlayan fenotip nümayiş etdirdi. Buna baxmayaraq, hətta gec başlayan xəstəliyin altında yatan hüceyrə patologiyası kəskin əzələ zədəsi şəraitində erkən mərhələlərdə aşkar edilə bilər. Üçüncüsü, nəticələrimiz birmənalı şəkildə göstərdi ki, ümumi SMA fenotipinin ən azı bəzi aspektləri əzələ-atonom təsirindən qaynaqlanır. Bu toxumada SMN -nin tükənməsi patologiyanı tetiklemek üçün kifayətdir. Üstəlik, ortaya çıxan anormallıqlar ən çox əzələnin özündə görünsə də, nəticədə NF ehtiva edən aksonal varikozlar və kompensator nörotransmisyon cəhdi şəklində presinapsda qüsurlar da aşkar edildi.Nəhayət, göstərdik ki, patologiyanın başlanmasından sonra da SMN -in əzələlərə qaytarılması yumşaldıcı təsir göstərə bilər. Bu, xüsusilə klinik baxımdan arxayındır. SMN zülalının əzələ funksiyası üçün əhəmiyyətli olduğu qənaətinə gəldik. Bu toxumanı adekvat zülaldan məhrum edən SMN bərpaedici müalicələrinin maksimum fayda əldə etməsi ehtimalı azdır. Əksinə, əldə etdiyimiz nəticələr, zaman keçdikcə ciddi və potensial olaraq həyatı təhdid edən miyopatiyalar inkişaf etdirə biləcək intratekal müalicə olunan subyektlərin perspektivini artırdı. Bu yaxınlarda SMA-nın müalicəsi üçün təsdiq edilmiş AAV9 vasitəçiliyi ilə SMN gücləndirici agent Zolgensma bu narahatlığı aradan qaldırır, çünki o, sistemli şəkildə çatdırılır və buna görə də əzələləri hədəf alır. Ancaq bu cür müalicə hal -hazırda yalnız 2 yaşdan kiçik xəstələr üçün təsdiq edilmişdir.

SMA-nın müalicəsi üçün SMN doldurulması zülal üçün məkan və zaman tələblərini nəzərə almalıdır. Bu kontekstdə, skelet əzələsində aşağı SMN-nin potensial hüceyrə avtonom, xəstəliyə səbəb olan təsiri çox müzakirə edilmişdir. Qaranlıqlıq, əsasən SMN zülalının aşağı səviyyəsini, onurğa motor neyronlarının SMN çatışmazlığına əsas zəifliyini və denervasiyanın əzələlərə təsir etmə üsulunu əhatə edən SMA təbiətindən qaynaqlanır. SMA -nın əzələlərə hər hansı bir təsiri, motor neyron itkisinə görə ortaya çıxan ikincil olaraq qəbul edilə bilər. Yenə də bir çox tədqiqatlar SMA-da əzələlərin müstəqil rolunu müəyyən etmişdir. Bu tədqiqatlar, SMA əzələsinin sinir -əzələ kulturalarına zərərli təsirini göstərən mədəniyyətdəki hüceyrələrin analizlərindən [23, 56], otopsi toxumasında və model siçanlarda bütöv əzələlərin və miogenez markerlərinin qiymətləndirilməsinə qədər dəyişmişdir [26, 57, 58]. Bununla birlikdə, təcrübələr SMN üçün hər zaman tükənən xəstələrin hüceyrələrinə və ya siçanlara əsaslandığından, motor neyronlardakı təsirləri əzələdən daxili olaraq ayırmaq mümkün deyildi. Aşağı əzələ SMN-nin SMA fenotipinə potensial hüceyrə avtonom təsirlərini müəyyən etmək üçün ən birbaşa cəhdlər bu toxumada aşağı proteinin xəstəliyə az kömək etdiyi qənaətinə gəldi (25, 28).

Nəticələrimiz Iyer et al. ( 28 ). Nəticələrdəki fərqin bir izahı Cre sürücülərini seçdiyimizdən qaynaqlanır. Bu cür sürücülərin sağlamlığı və spesifikliyi, xəstəlik kontekstində nəticələri dəqiq proqnozlaşdırmağa imkan verən açardır. Bu baxımdan, biz nəinki MyoD-iCre xəttini SMN-ni Myf5-Cre sürücüsündən daha səmərəli şəkildə tükəndirmək, həm də daha çox toxuma spesifikliyi ilə etmək üçün tapdıq. Nəticələrimiz demək olar ki, hamısının demək olar ki, yarısını nümayiş etdirdi Myf5-Cre Smn F7/– mutantlar nəinki yetkinlik yaşına qədər yaşadılar, həm də çoxalmaq üçün kifayət qədər möhkəm idilər. Bu, Myf5-Cre xəttinin rekombinasiyanı səmərəli idarə edə bilmədiyini göstərir Smn F7 allel və buna görə də əlavə edilməsi təəccüblü deyil SMN2 üçün Myf5-Cre Smn F7/– siçanlar xəstəliyin hər hansı simptomlarını daha da maskalayardılar - İyer və başqalarının müşahidə etdiyinə bənzər. Ziddiyyətli tapıntıların əlaqəli bir izahı, 2 tədqiqatda qəbul edilmiş allel fonudur. Halbuki Iyer et al tərəfindən istifadə edilən model siçanlar. süni bir SMNΔ7 transgenini saxladı və ifadə etdi, bizimki isə etmədi. SMNΔ7 zülalının öz funksiyasız olduğunu göstərən etibarlı məlumatlara baxmayaraq, yenə də FL-SMN ilə birlikdə SMN kompleksinə qismən funksiya verə bilir və beləliklə xəstəliyi əhəmiyyətli dərəcədə azalda bilir (41, 59). Iyer et al tərəfindən yaradılan siçanlarda disfunksiyanı aşkar edə bilməməsi üçün son izahat. Çox güman ki, təhlillərin üstünlüyü nisbətən gənc (8 həftə), 2 nüsxədə aparılmışdır. SMN2 mutantlar. Həqiqətən də, gənc yetkin MyoD-iCre mutantlarımızda hüceyrə patologiyası və ya açıq xəstəliyə dair dəlil aşkar edə bilmədik. SMN2 nüsxələr. Xəstəliyin fenotipi yalnız 6-7 aylıq dövrdə ortaya çıxdı. İyer və həmkarları yaşlı mutantları təhlil etsəydilər, bunun da belə olacağından şübhələnirik. Müvafiq tapıntılarımızdakı fərq, Iyer et al. SMA-da yalnız əzələ toxumasının müalicəsi klinik fayda gətirməyəcək. Bu, çox güman ki, belə qalacaq, optimal klinik fayda yalnız SMN üçün periferiya və mərkəzi sinir sistemi bərpa edildikdə əldə edilir.

Əsasən sinir -əzələ SMA fenotipini və xəstəliyə töhfə verməkdə əzələlərin müstəqil rolunun nəticələrini nəzərə alsaq, nəticələrimiz tamamilə gözlənilməz deyil. Yenə də bildiyimizə görə, bizimki bir məməli modeli ifadə edən ilk nəticələrdir SMN2 birbaşa skelet əzələsindəki aşağı SMN-nin hüceyrə muxtariyyətində xəstəlik yaratdığını göstərmək. Bu, SMN bərpaedici agentlərin terapevtik vədləri nəzərə alınmaqla, klinik baxımdan xüsusilə aktualdır. Bunlardan ikisi, Spinraza və Zolgensma, SMA müalicəsi üçün tənzimləyici təsdiq aldı. Bununla birlikdə, onlardan istifadə etmək üçün əvvəlcədən bildirilən xəbərdarlıqlara tabedir. Nəticələrimizi nəzərə alsaq, bu faktorların birləşməsi hal -hazırda müalicə olunan yüzlərlə xəstəni narahat edir, xüsusən də mərkəzi sinir sistemi ilə məhdudlaşdıqda. Klinik preklinik nəticələrimizin proqnozlaşdırdığı kimi, əzələ patologiyası toxumada SMN-nin aşağı olması səbəbindən gec başlayan bir nəticədirsə, intratekal müalicənin ilkin faydalarının sonda xroniki və məkrli bir gec başlayan əzələ xəstəliyinə səbəb olacağı hər ehtimal var. Spinraza ilə müalicə olunan SMA xəstələrimizdə ümumiyyətlə yüksəlmiş serum CK dəyərləri və nümunə götürülmüş ambulator xəstələrdə bu biomarkerin xüsusilə yüksək səviyyələri, ambulator xəstələrdə SMN-dən məhrum olan əzələlərin bu aktivliyə bağlı istifadəsini dəstəklədi, ehtimal ki, toxuma ziyanını sürətləndirdi. . Modelimizdə göstərildiyi kimi disfunksiya əzələdə SMN-i artırmaqla dayandırıla və/və ya geri qaytarıla bilər, lakin bir daha müdaxilənin vaxtından asılı ola bilər. Bir dəfə tamamilə itirilən əzələni əvəz etmək çətin olacaq.

Model siçanlarımızdakı əzələ qüsurları və bu zərərin müalicəvi nəticələri açıq olsa da, SMN-nin nə qədər aşağı patoloji tetikler etdiyini araşdırmaq hələ də davam edir. Bəziləri miyogenez prosesində pozulmaları təklif etdilər (29, 57, 60, 61). Bu, SMA -nın ən ağır formasında doğru olsa da, mutantlarımızda, xüsusən də 2 -ni ifadə edənlərdə belə deyildi. SMN2 nüsxələr. P7-də araşdırılan belə mutantlarda bir neçə əzələ qüsuru aşkar etdik. Əksinə, əldə etdiyimiz məlumatlar əzələlərin saxlanmasında qüsurların olduğunu göstərdi. SMA-da əzələ saxlama qüsurları indiyədək bildirilməmiş və ya vurğulanmamışdır - bu günə qədər araşdırılan model siçanların fenotipinin şiddətinin və qısa ömürlərinin ehtimal olunan nəticəsi. Buna baxmayaraq, təmir qüsurları fərqli bir ehtimal olaraq qalır və zədələnmiş miofiberlərdən və/və ya peyk hüceyrələrindən qaynaqlana bilər. Peyk hüceyrələri yeni miyonukleilərin mənbəyi kimi xidmət etdikdə erkən postnatal əzələ inkişafı zamanı xüsusilə aktivdirlər (62). Siçanlarda (4-6 həftəlik), doğuşdan əvvəlki həyatdan sonra, SMN səviyyələrinin də əhəmiyyətli dərəcədə azaldığı bir dövr (63), miofiberlər yetkin ölçülərinə çatdıqda bu hüceyrələrin sayı kəskin şəkildə azalır. Biz fərz edirik ki, sonrakı həftələrdə aşağı SMN ifadə edən miyofiberlər əhəmiyyətli sayda degenerasiya olunur. Peyk hüceyrələri əvvəlcə degenerasiyaya uğrayan lifləri doldurmaq tələbini ödəyə bilər. Bununla belə, SMN tükənmiş peyk hüceyrələrində daxili disfunksiya ilə müşayiət olunan sürətlənən degenerasiya prosesi nəticədə bu kök hüceyrələrin əzələləri bərpa etmək qabiliyyətini aşır. Peyk hüceyrə disfunksiyası, serum IgG qəbulu ilə qiymətləndirildiyi kimi, mərkəzi nüvələr nümayiş etdirən daha çox sayda lif arasındakı uyğunsuzluqdan nəticələnə bilər (Şəkil 6I). Belə uyğunsuzluğun maraqlı izahatlarından biri, SMN ilə tükənmiş peyk hüceyrələrinin lif zədələnməsinə normal reaksiya vermə qabiliyyətində, lakin sonradan hüceyrələrin sükunət vəziyyətinə qayıtmamasında ola bilər. Bu hüceyrələrin meydana çıxan konstitusional aktiv vəziyyəti onların tükənməsini və beləliklə, ümumi əzələ lifinin itkisini sürətləndirə bilər. CTX təcrübələrimiz, SMN səviyyələrinin zədədən sonra əzələ bərpasına ciddi təsir etdiyini irəli sürdü. İnsanlarda bu doğrudursa, SMN-ni yalnız MSS-yə bərpa edən dərmanlarla müalicə olunan xəstələr qayğı göstərməli olacaqlar. Müşahidələrimizdən ortaya çıxan aşkar bir problem, klassik SMA-da müşahidə etdiyimizə bənzər əzələ patologiyasının niyə geniş şəkildə bildirilməməsidir. Biz cavabın ilk növbədə erkən motor neyron itkisinin maskalanma təsirlərində olduğunu düşünürük. İkinci maraqlı bir hipotez, əzələ ilə sinir arasındakı söhbətə əsaslanır. Klassik SMA-da həm pre-sinaptik, həm də postsinaptik bölmələrin sağlamlığı təhlükə altındadır. İntratekal müalicə olunan xəstələrdə gözlənildiyi kimi, motor neyronu seçici şəkildə xilas etmək, xilas edilmiş presinaptik bölmənin əzələlərə həddindən artıq yük qoyması ilə nəticələnə bilər. NMJ -də siqnal verməkdə bu cür pozulmaların əsasını təşkil edən molekulyar determinantlar SMA kontekstində araşdırılmağa davam edir. Model siçanlarımız, hər iki hüceyrə növünün sağlamlığını və canlılığını təmin etmək üçün motor nöronları və əzələlər arasında lazım olan siqnalları mərkəzləşdirən bu və daha geniş sualları araşdırmaqda faydalı bir vasitə kimi xidmət edəcək.

Siçan. ROSA26-flox-STOP-flox-YFP siçanları (The Jackson Laboratoriyası, ehtiyat № 006148) https://www.jax.org/ MyoD-iCre və ya Myf5-Cre SMA siçanları olmayan protokollara uyğun olaraq genotiplənmişdir. SMN2 (MyoD-Cre Smn F7/– və ya Myf5-Cre Smn F7/– ) və nəzarət (Smn F7/ - ) MyoD-iCre (The Jackson Laboratory, anbar № 014140) və ya Myf5-Cre (The Jackson Laboratory, stock no. 007893) siçanları üçün heterozigotlu siçanların yetişdirilməsi ilə yaradılmışdır. Smn (Smn +/– Jackson Laboratoriyası, səh. 006214) ilə Smn F7/F7 heyvanlar (Smn F7 , Jackson Laboratoriyası, səh. 006138). 1 və ya 2 nüsxəsi olan MyoD-Cre SMA mutantları SMN2 və nəzarət (SMN2 +/– Smn F7/ -, SMN2 +/ +Smn F7/ - , və ya MyoD-Cre SMN2+/+ Smn F7/+ ) təqdim edilərək yaradılmışdır SMN2 transgen (The Jackson Laboratory, stock no. 005024) Cre sürücüsü və floxed alleli ilə heyvanlara. Bütün təhlillər 2 nüsxədə SMN2 siçanlar fenotipə kor olan müstəntiqlə aparıldı. Bənzər bir protokol 1 nüsxə üçün təqib edildi SMN2 mutantlardakı açıq fenotipin korluğun qarşısını aldığı davranış tədqiqatları istisna olmaqla, siçanlar. Genotipləşdirmə primerlərinin təfərrüatları üçün Əlavə Metodlara baxın.

Motor davranış təhlili. Rotarod və tutma gücü testləri, istehsalçının təlimatlarına uyğun olaraq, LE8200 rotarod (Harvard Apparatus/Panlab Inc.) və BIOSEB Tutuş Gücü Test Cihazı BIO-GS3 (Bioseb Inc.) istifadə edərək həyata keçirildi. Bu metodların təfərrüatları Əlavə Metodlarda təsvir edilmişdir.

Serum CK analizi. Siçanlar CO ilə ötenazi edildi2 qaz və sağ mədəcikdən 21 əcnəbi iynə ilə toplanan 500 μL qan. Serum CK səviyyəsi Kolumbiya Universitetinin Müqayisəli Tibb İnstitutu tərəfindən Element DC baytarlıq kimya analizatoru (Heska) istifadə edərək ölçüldü.

Motor neyron, NMJ və əzələ histologiyası. Motor neyron, NMJ və əzələ histologiyası əsasən əvvəllər təsvir edildiyi kimi aparılmışdır (42, 45). Əlavə təfərrüatlar Əlavə Metodlarda təqdim olunur.

PCR, Western blots və gümüşlə boyanmış gel analizləri. Toxumalar istehsalçının göstərişlərinə uyğun olaraq TRIzol (Invitrogen) istifadə edərək parçalandı. CDNA sintezindən sonra kəmiyyət PCR MasterCycler Real Plex4 (Eppendorf) üzərində üç dəfə yerinə yetirildi. qRT-PCR üçün istifadə olunan primer ardıcıllıqları Əlavə Metodlarda göstərilmişdir. Western blotting təsvir edildiyi kimi həyata keçirildi (13) miozin ağır zəncirinin izoform analizi əvvəlki hesabata əsasən aparıldı (64), həmçinin Əlavə Metodlara baxın.

CTX və MO təcrübələri. Siçanlar 1% -2% izofluran ilə anesteziya edildi və CTX ilə miyonekroz səbəb oldu. Qastroknemiusun qarnına PBS-də 20 μL 10 μM CTX məhlulu yeritmək üçün 30 kalibrli iynədən istifadə edilmişdir. Kardiotoksin, sağ arxa ayağın əzələlərinə bərabər şəkildə verildi. Sol arxa ayağına eyni həcmdə PBS vurulub. Siçanlar CTX və PBS enjeksiyonlarından sonra başlanğıc nöqtədə (enjeksiyon yoxdur) və müxtəlif vaxt nöqtələrində qiymətləndirildi və arxa ayağın əzələləri çıxarıldı, çəkildi və dərhal toxuma lizatları və ya krio kəsimləri hazırlamaq üçün istifadə edildi. İstifadə olunan SMN və şifrələnmiş MO-lar əvvəlki hesabatda olanlarla eyni idi (16). Hər bir MO steril suda yenidən süspansiyona alındı ​​və 0,5 mM son konsentrasiyasına bölündü. Siçanlar MO'ları i.p. P210 -da enjeksiyon (12.5 mq/kq).

Elektrofiziologiya. NMJ elektrofizyolojisi: NMJ elektrofizyolojisi əslində əvvəllər təsvir edildiyi kimi yerinə yetirildi (46). Ex vivo əzələlərin daralma təcrübələri optimallaşdırılmış və əvvəllər istifadə edilən metodlar əsasında aparılmışdır (64). Bu araşdırmanın müvafiq metodlarına edilən dəyişikliklər Əlavə Metodlarda ətraflı təsvir edilmişdir.

Statistika. Kaplan-Meier sağ qalma əyriləri, Mantel-Haenszel testinə bərabər olan log-rank testindən istifadə edərək fərqlər üçün qiymətləndirildi. Cütləşməmiş, 2 quyruqlu Tələbə t test və ya 1 yollu ANOVA, sonra da göstərildiyi təqdirdə, Tukey-in post hoc müqayisəsi, statistik fərqlər üçün vasitələri müqayisə etmək üçün istifadə edilmişdir. Kateqoriyalı binomial dəyişənlərin təhlil edilməsi lazım olduğu hallarda, Fisherin dəqiq testi tətbiq edildi. Məlumat başqa cür göstərilmədiyi təqdirdə ortalama ± SEM olaraq təmsil olunur. P 0.05 -dən az olan dəyərlər əhəmiyyətli hesab edilmişdir. Statistik təhlillər Prism 6.0 (GraphPad Software) versiyası ilə aparılmışdır.

Tədqiqatın təsdiqi. Bütün heyvan prosedurlarında təsvir olunan protokollara riayət edilir Laboratoriya heyvanlarına qulluq və istifadə üçün bələdçi (National Academies Press, 2011) və Kolumbiya Universitetinin IACUC tərəfindən təsdiq edilmişdir. Bu tədqiqatın subyektləri təsadüfi seçilmiş, qarışıq fon, qida və su ilə 12 saatlıq işıq/12 saatlıq qaranlıq dövrədə idarə olunan mühitdə yerləşdirilən erkək və dişi siçanlar idi.

JKK, NNJ və MRF burada təsvir edilən eksperimentlərin əksəriyyətini həyata keçirdi. ZF, NMJ -lərin funksional vəziyyətini qiymətləndirdi, CPK isə bu təcrübələrə nəzarət etdi və intellektual giriş təmin etdi. CAC, bu araşdırmada təsvir olunan xəstə məlumatlarına qatqı təmin etdi. LWL ex vivo əzələ daralma tədqiqatlarını həyata keçirdi və RTD layihənin bu aspektini yönləndirdi. URM təcrübələri konseptuallaşdırdı, ümumi layihəni idarə etdi və məlumatları təhlil etdi və şərh etdi. JKK və URM əlyazmanı bütün müəlliflərin girişi ilə yazmışdır.

Məsləhət və təkliflərə görə P. Faust və Kolumbiya MNC üzvlərinə təşəkkür edirik. Bu araşdırma zamanı göstərdiyi dəstəyə görə D.C. De Vivoya da minnətdarıq. Bu layihə AFM-France, Cure SMA və NIH (R21 NS099921, R01 NS057482 və R56 NS104218), URM, NIH R01 AR059646-08-dən RTD-yə və SMA Vəqfindən CPK-ya verilən qrantlar hesabına maliyyələşdirildi.

Maraqların toqquşması: Müəlliflər heç bir maraq toqquşmasının olmadığını bəyan ediblər.


Giriş seçimləri

1 il ərzində jurnala tam giriş əldə edin

Bütün qiymətlər NET qiymətləridir.
ƏDV daha sonra ödəniş zamanı əlavə olunacaq.
Vergi hesablanması ödəniş zamanı yekunlaşacaq.

ReadCube -də vaxt məhdud və ya tam məqalə əldə edin.

Bütün qiymətlər NET qiymətləridir.


NƏTİCƏLƏR

PBO və MTX -in diyetə əlavə edilməsinin MTX borucuq sekresiyasına təsiri

Əvvəlcə tək və ya metotreksatla birlikdə PBO -nun diyetə əlavə təsirlərini araşdırdıq. Nəzarət pəhrizində yetişdirilən milçəklərdən təcrid olunmuş borulara nisbətən 400 μmol l -1 MTX olan duzlu suda yuyulmuş təcrid olunmuş Malpighian borucuqlarının maye ifrazat dərəcələrinə hər iki təcrübənin də təsiri olmamışdır (Şəkil 1A).

Bunun əksinə olaraq, PBO və ya həm PBO, həm də MTX ehtiva edən pəhrizlərdə yetişdirilən milçəklərdən borucuqlar tərəfindən ifraz olunan mayedə MTX konsentrasiyası müvafiq nəzarət vasitələrindən iki dəfə çox idi (Şəkil 1B). Nəticədə, PBO və ya həm PBO, həm də MTX ehtiva edən diyetlərdə yetişdirilən milçəklərdən borucuqlar tərəfindən MTX ifrazı, idarəetmələrə nisbətən müvafiq olaraq 73 və 136%artmışdır (Şəkil 1C).

Pəhriz fenoluna bir neçə nəsil MTX -in borucuq sekresiyasına təsiri

GST fəaliyyəti artır Drosophila 0,3% fenol olan pəhrizdə yeddi nəsildən çox böyüdülər (Shen et al., 2003). Buna görə GST aktivliyinin artmasının MRP substrat metotreksatın salınmasının artması ilə əlaqəli olub olmadığını qiymətləndirdik.

Fenolla zənginləşdirilmiş pəhrizdə yetişdirilən milçəklərdən təcrid olunmuş borucuqların maye ifraz etmə dərəcələri, ifraz olunmuş maye metotreksatın konsentrasiyası və metotreksat ifraz etmə dərəcələri F0, F1 və F4 nəsillərindəki nəzarət qruplarının göstəricilərinə oxşar idi (Şəkil 2). Bununla birlikdə, F7 və F10 nəsillərindən olan borular üçün mayelərin ifraz nisbətində müvafiq olaraq fenolla zənginləşdirilmiş pəhrizdə idarə olunan sineklərin nəzarətə görə nisbətdə 46 və 65% artması müşahidə edildi (Şəkil 2A). Həmçinin fenolla zənginləşdirilmiş pəhrizdə F7 və F10 nəsillərinin milçəklərindən borucuqlar tərəfindən ifraz olunan mayedə metotreksatın konsentrasiyasında müvafiq olaraq 43 və 50% artım müşahidə edilmişdir (Şəkil 2B). Həm maye ifrazının, həm də ifraz olunan maye metotreksatın konsentrasiyasındakı artımlar nəticəsində, fenolla zənginləşdirilmiş pəhrizdə F7 və F10 nəsillərinin sineklərindən çıxan borucuqlar, müvafiq nəzarət vasitələrinin iki qatından çox sürətlə MTX ifraz edir (Şəkil 2C).

Tək və ya metotreksat (MTX 0.1 mmol l -1) ilə birlikdə qida piperonil butoksidinə (PBO 1 mmol l -1) xroniki məruz qalmanın (A) maye ifraz dərəcəsinə, (B) ifraz olunan mayedəki MTX konsentrasiyasına təsiri. ([MTX]sf) və (C) MTX-nin transepitelial axını. İzolyasiya olunmuş Malpiqi borucuqları 400 μmol l –1 [3 H] MTX olan Ramsay analizində çimmək üçün duzlu suda quruldu və ifraz olunan damcılar 60 dəqiqədə toplandı. Standart pəhrizdə (nəzarət açıq çubuqlar) və eksperimental pəhrizlərdə (bərk çubuqlar) yetişdirilən milçəklərdən alınan vasitələr arasındakı əhəmiyyətli fərqlər ulduzlarla göstərilir (*P& lt0.05, qoşalaşmış t testi, N.= 8-12). Səhv panelləri +s.e.m.

Tək və ya metotreksat (MTX 0.1 mmol l -1) ilə birlikdə qida piperonil butoksidinə (PBO 1 mmol l -1) xroniki məruz qalmanın (A) maye ifraz dərəcəsinə, (B) ifraz olunan mayedəki MTX konsentrasiyasına təsiri. ([MTX]sf) və (C) MTX transepitelial axını. İzolyasiya olunmuş Malpiqi borucuqları 400 μmol l –1 [3 H] MTX olan Ramsay analizində çimmək üçün duzlu suda quruldu və ifraz olunan damcılar 60 dəqiqədə toplandı. Standart pəhrizdə (idarə olunan açıq çubuqlar) və eksperimental diyetlərdə (bərk çubuqlar) yetişdirilən milçəklərin vasitələri arasındakı əhəmiyyətli fərqlər ulduzlarla göstərilir (*P& lt0.05, qoşalaşmış t testi, N.= 8-12). Xəta çubuqları +s.e.m -dir.

PBO -nun Malpighian borular tərəfindən MTX metabolizmasına təsiri

TLC tərəfindən ifraz olunan mayenin təhlili MTX-nin tək metabolitinin olduğunu göstərdi RfMTX və metabolit üçün s müvafiq olaraq 0,41 və 0,79 olmuşdur. The Rf nəzarətdə yetişdirilən milçəklərdən və PBO ilə zənginləşdirilmiş diyetlərdən borucuqlar tərəfindən ifraz olunan maye nümunələri üçün dəyərlər eyni idi, bu da dietik PBO-nun metabolitlərin sayını dəyişdirmədiyini göstərir. Bununla birlikdə, spot densitometriya göstərdi ki, MTX -in 24,5% -i birləşmə ilə metabolizə edilmişdir. Rf nəzarət borularında 0,79 (Cədvəl 2), MTX-nin 38,2%-i PBO ilə zənginləşdirilmiş pəhrizdə yetişdirilən milçək borularında bu birləşməyə metabolizə edilmişdir.

Malpighian borular tərəfindən ifraz olunan maye nümunələrinin nazik təbəqə xromatoqrafiyası Drosophila müxtəlif pəhrizlərdə yetişdirilən milçəklər

YoPFfKHAZhQnTFHm4yHQiQskWfUHvg __ & ampKey-Pair-Id = APKAIE5G5CRDK6RD3PGA " />

PBO və MTX-nin P450 genlərinin ifadəsinə təsiri

MTX -ə diyetə məruz qalma, nəzarət pəhrizində yetişdirilən milçəklərin tüpləri ilə müqayisədə Malpighian borucuqlarında beş P450 geni üçün nisbi mRNA ifadəsinin əhəmiyyətli dərəcədə azalması ilə əlaqələndirilmişdir (Şəkil 3A). PBO -ya diyetə məruz qalma, Cyp4e2 və Cyp4p1 ifadəsinin azalması, Cyp6a2 və Cyp6a8 ifadələrində əhəmiyyətli bir dəyişiklik və Cyp12d1 ifadəsinin nəzarətlə müqayisədə dörd qat artması ilə əlaqələndirildi (Şəkil 3B). Həm MTX, həm də PBO-ya məruz qalma, Cyp4e2 və Cyp6a2-də heç bir dəyişiklik, Cyp4p1 ifadəsində azalma və Cyp6a8 və Cyp12d1 ifadəsində 10-18 dəfə artımla əlaqələndirilir (Şəkil 3C).

MTX, PBO və fenolun GST genlərinin ifadəsinə təsiri

Pəhrizdə MTX-ə xroniki məruz qalma GstD1 və GstE1-in nisbi ifadəsinin azalması ilə əlaqələndirildi (Şəkil 4A). Diyetdə PBO və ya hər iki PBO və MTX -ə xroniki məruz qalma, GstD1 ifadəsinin azalması və ya azalma (PBO) və ya GstD5 üçün heç bir dəyişiklik (PBO + MTX) ilə əlaqələndirilməmişdir (Şəkil 4B, C). GstE1 ifadəsi, PBO-ya cavab olaraq 1,5 dəfə artdı (Şəkil 4B) və əhəmiyyətli bir dəyişiklik olmadı (P>0.1), həm PBO, həm də MTX-ə cavab olaraq GstE1 ifadəsində idarəetmələrə nisbətən (Şəkil 4C).

Pəhrizdə çoxlu nəsillər üçün fenolun (0,3%) məruz qalmasının (F0-F10) (A) maye ifraz etmə sürətinə, (B) ifraz olunan mayedə MTX konsentrasiyasına ([MTX]) təsirisf) və (C) MTX transepitelial axını. İzolyasiya olunmuş Malpiqi borucuqları 400 μmol l –1 [3 H] MTX olan Ramsay analizində çimmək üçün duzlu suda quruldu və ifraz olunan damcılar 60 dəqiqədə toplandı. Nəzarət vasitələri (açıq çubuqlar) və eksperimental qruplar (bərk çubuqlar) arasında əhəmiyyətli fərqlər ulduzlarla göstərilir (*P& lt0.05, qoşalaşdı t-test, N.= 8-12). Xəta çubuqları +s.e.m -dir.

Bir neçə nəsil (F0 -F10) fenolun (0,3%) pəhriz təsirinin (A) maye ifraz sürətinə, (B) ifraz olunan mayedəki MTX konsentrasiyasına ([MTX]) təsirisf) və (C) MTX transepitelial axını. İzolyasiya olunmuş Malpiqi borucuqları 400 μmol l –1 [3 H] MTX olan Ramsay analizində çimmək üçün duzlu suda quruldu və ifraz olunan damcılar 60 dəqiqədə toplandı. Nəzarət vasitələri (açıq çubuqlar) və eksperimental qruplar (bərk çubuqlar) arasında əhəmiyyətli fərqlər ulduzlarla göstərilir (*P& lt0.05, qoşalaşdı t-test, N.= 8-12). Xəta çubuqları +s.e.m -dir.

Pəhrizə tək başına və ya 10 nəsil üçün MTX ilə birlikdə əlavə edildikdə, fenol Malpigi borularında GstD1 ifadəsinin azalması ilə əlaqələndirildi (Şəkil 5A, B). Fenol GstD5-in azalması və GstE1 ifadəsində dəyişiklik olmaması ilə əlaqələndirildi (Şəkil 5A). Bunun əksinə olaraq, 10 nəsil ərzində həm MTX, həm də fenola pəhrizlə məruz qalma GstD5 ifadəsində heç bir dəyişikliyə deyil, GstE1 ifadəsində dörd qat artımla nəticələndi (Şəkil 5B).

Standart pəhrizdə (açıq çubuqlar) və ya (A) 0.1 mmol l –1 MTX, (B) 1 mmol olan eksperimental diyetlərdə (bərk çubuqlar) yetişdirilən milçəklərdən təcrid olunmuş yetkin Malpig borularında GAPDH1 ifadəsinə nisbətən beş sitokrom P450 geninin mRNA ifadəsi l –1 PBO və ya (C) həm PBO, həm də MTX. Nəzarət vasitələri ilə təcrübə qrupları arasındakı əhəmiyyətli fərqlər ulduzlarla göstərilir (P& lt0.05, N.= 6-12). Xəta çubuqları +s.e.m -dir.

Standart pəhrizdə (açıq çubuqlar) və ya (A) 0,1 mmol l –1 MTX, (B) 1 mmol olan eksperimental pəhrizlərdə (bərk çubuqlar) yetişdirilən milçəklərdən təcrid olunmuş yetkin Malpiqi borucuqlarında GAPDH1 ifadəsinə nisbətən beş sitoxrom P450 geninin mRNA ifadəsi l –1 PBO və ya (C) həm PBO, həm də MTX. Nəzarət vasitələri ilə təcrübə qrupları arasındakı əhəmiyyətli fərqlər ulduzlarla göstərilir (P& lt0.05, N.= 6-12). Xəta çubuqları +s.e.m -dir.

PBO və MTX -in transporter gen ifadəsinə təsiri

PBO-ya xroniki məruz qalma MET ifadəsində 123 qat artım və dMRP ifadəsində 27 dəfə artım ilə əlaqələndirildi, lakin OATP ifadəsində dəyişiklik olmadı (Şəkil 6A). Pəhrizdə həm PBO, həm də MTX-ə xroniki məruz qalma, Malpighian borucuqlarında hər üç genin ifadəsinin artması ilə nəticələndi: MET üçün 93, dMRP üçün 267 və OATP üçün 50 qat (Şəkil 6B).


F7. Əlaqələr və İstinadlar - Biologiya

F7 geni, qan laxtalanmasının xarici yolunda iştirak edən, K vitaminindən asılı qlikoproteinin, serum proteaz faktor VIIa-nın zimogeni olan laxtalanma faktoru VII-ni kodlayır. Damar zədələndikdə, VII faktor faktor III və ya TFA (TF 134390) olaraq da bilinən toxuma faktoru ilə təmasda olur və aktiv formasına ayrılır: bu reaksiya qan laxtalanmasında əsas hadisədir. Doku faktoru və aktivləşdirilmiş faktor VII kompleksi IX (F9 300746), X (F10 613872) və (avtokatalitik olaraq) VII faktorları aktivləşdirməyə xidmət edir (O'Hara və başqaları tərəfindən xülasə, 1987 və Millar və digərləri, 2000) .

▼ Klonlaşdırma və ifadə

Hagen və s. (1986) insan qaraciyərinin cDNT kitabxanasından F7 geninə uyğun gələn təcrid olunmuş klonlar. Zülal lider ardıcıllıqla sintez edilir və yetkin dövran edən zülal 406 amin turşusu olan bir zəncirli polipeptiddir. VII faktorun aktivləşdirilmiş VIIa faktoruna çevrilməsi arg152 ilə ile153 arasındakı bağın serin proteaz parçalanması ilə əlaqədardır. VII faktorun aktivləşdirilmiş forması, qamma-karboksiglutamik turşu qalıqları olan 20 kD 152 qalıq yüngül zəncirdən və 2 zəncirin bir disulfid bağı ilə birlikdə tutulduğu katalitik sahəni ehtiva edən 30 kD 254 qalıq ağır zəncirdən ibarətdir. . İnsan faktoru VII, faktor IX (F9 300746), faktor X (F10 613872), faktor II (F2 176930) və zülal C (PROC 612283) kimi K vitamini asılı olan digər zülallara çox homologdur.

O'Hara və başqaları. (1987) F7 geninin nukleotid ardıcıllığını təyin etdi. Faktor VII üçün mRNT bir çox yerdə poliadenilləşir və alternativ birləşməyə məruz qala bilər.

▼ Gen quruluşu

O'Hara və başqaları. (1987) F7 geninin 9 ekzona malik olduğunu və təxminən 12.8 kb aralığında olduğunu təyin etdi.

▼ Xəritəçəkmə

F7 geni 13q34 xromosomuna xəritələnir (Millar et al., 2000).

Gilgenkrantz et al. (1986) F7 və F10 (613872) genlərini 13q34 -ə uyğunlaşdırdı. Bu seqmentin trisomiyada laxtalanma faktorları artıb, monosomiyada isə azalıb.

Tariverdian və başqaları. (1986) halqa 13-də VII və X faktorlarının çatışmazlığını aşkar etdi. Qırılan yer, genlərin 13q34-qter seqmentində yerləşməsinə uyğun idi.

▼ Gen funksiyası

VII və X faktorlarının (613872), II (176930) və IX (264900) faktorlarının sintezi qaraciyərdə baş verir və K vitamini tələb edir. (Zur və Nemerson, 1981). Ratnoff və Bennett (1973) bildirdilər: 'Bir molekuldan əmələ gəldiyinə dair inandırıcı bir arqument irəli sürülə bilsə də, əksər sübutlar onların fərqli zülallar olduğunu göstərir.'

Furie and Furie (1992) qan laxtalanmasının molekulyar və hüceyrə biologiyasını müzakirə edərkən, 5 proenzim, 3 prokofaktor və 2 tənzimləyici zülal üçün genlərin quruluşunu müqayisə edən bir rəqəm təqdim etdi. Hər bir kateqoriyanın üzvləri üçün maraqlı oxşarlıqlar və fərqlər var idi. 5 proenzim VII, XI (264900), IX və X faktorları və protrombin 3 protofaktorları toxuma faktoru, VIII (F8 300841) və V (F5 612309) faktorları isə C vitamini (PROC 612283) və protein S idi. (PROS1 176880).

Pike və başqaları. (1999) faktor VIIa/toxuma amili kompleksində baş verən incə struktur fərqləri təsvir etmiş, beləliklə, VIIa faktorunun aktivliyinin dramatik şəkildə toxuma faktoru ilə induksiya edilmiş gücləndirilməsi mexanizmini işıqlandırmışdır.

Di Bitondo və s. (2002), F7 -nin promoter bölgələrinin (qalıqları -658 ilə -1 və -348 ilə -1) estrogenik faktorların iştirakı ilə transkripsiya aktivliyini azaldığını göstərmək üçün reportyor gen analizindən istifadə etmişdir. Təsir promotor polimorfik haplotipdən asılı deyildi. Müəlliflər, estrogen reseptorunun F7 promoterinin -225 ilə -212 qalıqlarına bağlandığı ardıcıllığı lokalize etdilər. F7 estrogen reaksiya elementi alternativ bir növü təmsil edir, burada 2 yarım sahə yalnız 2 spacer nukleotidlə ayrılır. Müəlliflər, menstrual dövrü ərzində müşahidə olunan F7 və estradiol səviyyələri arasındakı tərs əlaqənin mexanizmini təqdim etmişlər.

▼ Molekulyar Genetika

Girolami və başqaları. (1977) faktor VII çatışmazlığı ilə əlaqəli Verona adlanan keyfiyyətcə anormal VII faktoru müşahidə etdi.

VII faktor çatışmazlığı

VII faktor çatışmazlığı səbəbiylə qanayan diatezi olan bir İtalyan qadında (227500), Arbini et al. (1996) F7 genində (613878.0005 və 613878.0008) 2 mutasiya üçün mürəkkəb heterozigotluğu müəyyən etmişdir.

Cooper və s. (1997) polimorfizmlər və VII faktor çatışmazlığının altında yatan mutasiyalar da daxil olmaqla təbii olaraq meydana gələn variantların təhlilinə əsaslanaraq VII faktorun struktur-funksiya tədqiqatlarını nəzərdən keçirdi. 30 fərqli tək bazalı əvəzetmə və 4 qısa silinmə cədvəli hazırladılar. VII faktor çatışmazlığından məsul olan əksər lezyonlar yalnız bir dəfə qeyd edilmişdir. Diqqəti çəkən istisnalar arasında Tamary et al. (1996).

Qohum valideynlərdən doğulan, kəllədaxili qanaxma nəticəsində erkən ölümlə nəticələnən ağır faktor VII çatışmazlığı olan 2 körpə bacı-qardaşda McVey et al. (1998) F7 genində (613878.0008) homozigot birləşmə yeri mutasiyasını müəyyən etmişdir.

Wulff və Herrmann (2000), əlaqəsi olmayan 87 probandda VII aktivliyi azalmış və ya aşağı olan bir mutasiya ekranı həyata keçirmişlər. 77 probandın 101 F7 alleli arasında 34 müxtəlif lezyon aşkar edilmişdir ki, bunlardan 22-si yeni idi. 34 fərqli lezyon 31 nöqtə mutasiyasından və 3 kiçik silmədən ibarət idi. CpG dubletindəki bir keçid, 34 fərqli mutantdan 12 -ni təşkil etdi. On altı mutasiya yalnız bir dəfə qeyd edildi. Almaniyada bu tədqiqatda tapılan ən çox yayılmış mutasiyalar A294V (613878.0010) və ikiqat mutasiya A294V/11128delC (613878.0012) idi. Bu mutasiyalar, VII faktor çatışmazlığına səbəb olan ən çox mutasiyanın cəmləşdiyi genin karboksi-terminal ucunda exon 8-də yerləşir. Hər iki mutasiya həm də Polşa və İtalyan xəstələrində yayılmışdır (Arbini et al., 1994 Bernardi və digərləri, 1994), bu onların Avropa populyasiyalarında ən çox rast gəlinən F7 mutasiyalarını təmsil etdiyini göstərir. Ailə tədqiqatları hər iki mutasiya üçün eyni haplotip göstərdi.

Millar və başqaları. (2000) faktor VII çatışmazlığı olan 48 əlaqəli olmayan fərddə F7 genini ardıcıllıqla sıralamış, 15 səhv mutasiya, 2 mikrodelesiya, 5 splice qovşağı mutasiyası və 5 əsas tərcümə olunmamış bölgədə tək baza cüt əvəzlənməsi daxil olmaqla cəmi 23 yeni lezyon əldə etmişdir.

McVey və başqaları. (2001) dünya ədəbiyyatında təsvir edilən 238 fərdin F7 genindəki mutasiyaların qeydə alındığı mutasiya məlumat bazasını təsvir etmişdir. F7 genində bir neçə polimorfizm təsbit edildi və bəzilərinin plazma faktoru VII antigen səviyyələrinə təsir etdiyi göstərildi.

DGGE və F7 geninin 9 ekzonun birbaşa sekanslaşdırılmasından istifadə edərək, Giansily-Blaizot et al. (2001) əsasən fransız və Şimali Afrika mənşəli, VII amil koaqulyant aktivliyi normadan 5%-dən az olan 37 əlaqəsi olmayan xəstəni araşdırdı. Bu strategiya, proqnozlaşdırılan mutasiyaya uğramış 74 alleldən 68 -inin aşkarlanmasına imkan vermişdir (92%). Gen boyunca 18 -i əvvəllər bildirilməmiş 40 fərqli mutasiya aşkar edilmişdir. Şiddətli qanaxma diatezi olan xəstələrin genotipləri, hər iki alleldə mutasiyalardan ibarətdir ki, bu da funksional FVII molekulunun istehsalına mane olur. Müəlliflər təklif edirdilər ki, yüngül və asemptomatik qruplarda bir allel üzrə zərərsiz mutasiya hemostatik şəlaləni işə salmaq üçün kifayət qədər az miqdarda FVII zülalının buraxılmasına imkan verə bilər.

Miokard infarktına həssaslığın azalması

Girelli və başqaları. (2000), F7 genində 3 polimorfizmi araşdırdı və bunlardan 2-nin, 5-başlı F7 polimorfizmi (613878.0013) və R353Q (613878.0014) faktor VII aktivlik səviyyəsinə təsir etdiyini və miyokard infarktı riskinin daha aşağı olduğunu göstərdi (MI 608446) koronar arteriya xəstəliyi olan xəstələrdə. 311 -də ağır, angioqrafik olaraq təsdiqlənmiş koronar aterosklerozu olan 444 xəstəni araşdırdılar. Bu 311 xəstədən 175-də əvvəlki Mİ sənədləri var idi. Nəzarət qrupu, normal koronar arterioqramma olan 133 xəstə də tədqiqata daxil edilmişdir. 5-əsas F7 polimorfizmi F7 geninin 5-əsas promotor bölgəsində -323 mövqedə 10-bp daxil edilməsini nəzərdə tutur allel A1 dekamerin olmamasına, allel A2 isə onun daxil edilməsinə aiddir. A2A2 genotipi olan xəstələrdə VII aktivləşdirilmiş faktor aktivliyi 66% azalmışdır. R353Q polimorfizmi, F7 geninin 353 kodonunda bir miss-mutasiyanı ehtiva edir və nəticədə arg-to-glu əvəzlənməsi ilə nəticələnir. Q allelinə homozigot olan xəstələrdə VII aktivləşdirilmiş aktivlik 72% azalmışdır. A2 və Q allellərinin əlaqə balanssızlığında olduğu aşkar edilmişdir. MI olmayanlar arasında A2 və Q allelləri üçün homozigotlardan əhəmiyyətli dərəcədə daha çox heterozigot var idi. A1A2 və ya RQ genotipi olan xəstələrdə Mİ üçün düzəldilmiş odds nisbəti 0.47 idi.

▼ Tarix

8-ci xromosomda laxtalanma faktorunun VII (F7R, F7E) səviyyəsini tənzimləyən bir genin olması ehtimalı, həmin xromosom üçün trisomik olan 3 subyektdə bu amilin çatışmazlığının müşahidə edilməsi ilə təklif edilmişdir (de Grouchy et al., 1974). Fineman və s. (1975, 1979) de Grouchy və digərlərinin tapıntılarını təsdiq edə bilər. (1974) lakin Stenbjerg et al. (1975) bacarmadı. De Grouchy və başqaları. (1984) yenidən bir tənzimləyici genin 8 -ci xromosomda olduğu qənaətinə gəldi və eyni zamanda VII faktor üçün struktur geninin (və X faktoru üçün) 13q34 -ə uyğun gələn nəticələri təqdim etdi. Sübut olaraq əlavə edilən qeyddə de Grouchy et al. (1984) tandem duplikasiyasına görə 8p trisomiyası olan bir körpədə normal faktor VII təsvir etdi və F7R-nin 8q-də ola biləcəyini təklif etdi. Bununla birlikdə, Fagan et al. (1988), fərqli xromosom anomaliyaları olan 2 xəstədə sitogenetik və laxtalanma tədqiqatlarından, yerin 8p23.2-p23.1 olduğu qənaətinə gəldi.

▼ Heyvan Modeli

Siçan geni nokaut təcrübələri, toxuma faktorunun 9 -cu gündən sonrakı embrion inkişafı üçün vacib olduğunu, homozigot toxuma faktoru çatışmayan embrionların bir yumurta sarısı dövranı inkişaf etdirmədiyini göstərir (Toomey və digərləri, 1996). VII faktor toxuma faktorunun bilinən yeganə liqandı olduğu üçün, ehtimal ki, VII faktorun nokautu da ölümcül ola bilər.

F7a/TF kompleksi, sonrakı trombin istehsalına və nəticədə trombin laxtasının əmələ gəlməsinə imkan verən IX və X faktorlarının aktivləşdirilməsini katalizləyir. Pıhtılaşma sisteminin müxtəlif reaksiyalarını, məsələn, aktivləşdirilmiş protein C, protein S, heparin kofaktoru II və antitrombin III -ü tənzimləmək üçün bir neçə antikoagulyant zülal mövcud olsa da, yalnız toxuma faktoru yol inhibitorunun (TFPI 152310) F7a/TF kompleksini inhibə etdiyi bilinir. Chan və başqaları. (1999), Kunitz tipli domeni-1 olmayan və F7 geninin çatışmazlığı olan dəyişdirilmiş TFPI alleli üçün ikiqat heterozigotlu siçanlar yaratdı. Çiftleşme təcrübələri, TFPI modifikasiyası üçün nəsillərin yalnız homozigot olduğunu, ancaq F7 allelinin və F7 çatışmazlığı üçün siçanların tək homozigotunun TFPI wildtype alleli ilə əvvəllər detallı fenotipləri (yəni embrionun 9.5 -ci günündə erkən embrion ölümünün yüksək faizini) göstərdiyini göstərdi. ciddi perinatal qanaxma ilə inkişaf). Təəccüblüdür ki, birləşdirilmiş (ikiqat homozigot) genotipin siçanları gözlənilən mendel tezliyində doğulmuş, lakin F7 -/ - genotipi ilə əlaqəli ölümcül perinatal qanaxma keçirmişlər. Heterozigot F7 və homozigot mutant TFPI genotipini daşıyan siçanlar da F7 və homozigot mutant TFPI genotipləri ilə əlaqəli ölümcül xəstəlikdən xilas edilmiş, lakin perinatal istehlakçı koaqulopatiyaya təslim olmuşlar. Beləliklə, TFPI homozigot mutant embrionlarının ya müşayiət olunan homozigot və ya heterozigot F7 çatışmazlığı ilə xilas edilməsi, F7 fəaliyyətinin azalmasının embriogenez zamanı F7a/toxuma amili laxtalanma yolunun TFPI vasitəçiliyi ilə inhibə edilməsinə ehtiyacı istisna etdiyini göstərir. Bundan əlavə, bu birləşmiş çatışmazlıq hallarının fenotipləri embrion F7-nin siçanlarda embrionun 9.5-ci günündə istehsal olunduğunu və erkən mərhələdə embrionlarda ana F7-nin hər hansı səviyyəsinin homozigot TFPI mutant siçanlarında koaqulopatiyaya səbəb olmaq üçün kifayət etmədiyini irəli sürdü.

Faktor VII geninin əlavə itkisinin C vitamini çatışmazlığı olan (PC-/-) embrionlarda və yenidoğulmuşlarda müşahidə olunan koaqulopatiyaya təsir edib-etmədiyini müəyyən etmək üçün Chan et al. (2000) 2 amil üçün ikiqat heterozigotlu siçanları kəsərək, 9 proqnozlaşdırılan genotipik birləşməyə malik nəsillər meydana gətirdi. İkiqat sıfır embrionlar, gözlənilən Mendel tezliyində mövcud olsalar da, nə VII amil, nə də protein C tək çatışmazlığı olan embrionlarda müşahidə olunmayan bir fenotip nümayiş etdirdilər. E12.5-ci gün postkoitumda ikiqat boş embrionlar, E17.5-ci günə qədər əhəmiyyətli dərəcədə birlikdə qanaxma və periferik ödemlə irəliləyən, doğumdan dərhal sonra ölümlə nəticələnən, damardaxili və damardaxili koagulopatiya nümayiş etdirdi. FVII (+/-)/PC (-/-) embrionları daha az şiddətli bir fenotip göstərdi və bu, gen dozaj effektini göstərir. Əlavə heterozigot və ya homozigot FVII çatışmazlığı nəticəsində əmələ gələn PC-/-embrion və yenidoğulmuşların və artırılmış koaqulopatiyanın olmaması, Xa faktorunun artması (613872) və FVIIa'ya bağlı toxuma faktoru yolunun itirilməsi nəticəsində meydana gələn trombin əmələ gəlməsi ilə əlaqədar olduğu düşünülür. inhibitor funksiyası və Va və VIIIa amilləri səviyyəsində nəzarətin olmaması. VII fetal faktor olmadıqda embrionlarda fibrinin olması, embrion faktor VII-dən asılı olan yolun xaricində əhəmiyyətli laxtalanma potensialının mövcud olduğunu irəli sürdü.

▼ ALLELİK VARİANTLAR ( 24 Seçilmiş Nümunə):

.0001 FAKTOR VII PADUA

Klinik qanaxma meyli olmayan, lakin dovşan beyin toxuması faktorundan istifadə edərək 1 mərhələli analizdə test edildikdə plazma faktor VII aktivliyi aşkarlanmayan 47 yaşlı kişidə O'Brien et al. (1991), F7 genində bir heterozigot G-to-A keçidini təyin etdi, nəticədə arg304-to-gln (R304Q) əvəzlənməsi ilə nəticələndi. Xəstənin plazmasında VII faktor antigen səviyyəsi normal idi. arg304 qalığı IX faktorun arg333-ə homolojidir və F9-da arg333-to-gln mutasiyası (300746.0056) ağır hemofiliya B (306900) olan xəstələrdə IX faktor zülalının sintezi və ifadəsi olan xəstələrdə müəyyən edilmişdir.

Marchetti və başqaları. (1992) Girolami və digərləri tərəfindən təsvir edilən anormal amil VII Paduanın əsası kimi F7 genində heterozigot R304Q əvəzlənməsini müəyyən etmişdir. (1982) İtaliyanın şimal -şərqindəki Piave çayı vadisindən olan insanlarda. Girolami və digərləri tərəfindən təsvir edilən şəxslər. (1982) asemptomatik idi, lakin protrombin müddətinin mülayim uzanmasını təqdim etdi. VII faktor aktivliyi normalın 45% -dən 61% -ə qədər dəyişdi, lakin faktor VII çarpaz reaksiya verən material normal idi. VII faktor səviyyəsi ilə protrombin vaxtları arasında yaxşı bir mənfi əlaqə tapıldı.

.0002 VII AMİL ƏSASLIĞI

İtaliyanın müxtəlif bölgələrindən faktor VII çatışmazlığı olan 2 xəstədə (227500), Marchetti et al. (1992) F7 genində G-to-T transversiyasını tapdı, nəticədə cys310-to-phe (C310F) əvəzlənməsi baş verdi ki, bu da bütün serin proteazların katalitik domenində qorunan disulfid bağını sıxışdırdı.Homoziqot formada mutasiya proteaz aktivliyinin kəskin azalmasına səbəb oldu (4%).

.0003 VII AMİL ƏSASLIĞI

qismən faktor VII çatışmazlığı (227500) ilə uyğun olaraq, müvafiq olaraq 30% və 37% səviyyəsində F7 antigeni və F7 aktivliyi olan bir xəstədə Marchetti et al. (1993) F7 geninin 7-ci ekzonunda heterozigot G-dən A-ya keçidi müəyyən etdi, nəticədə katalitik domendə cys178-to-tyr (C178Y) əvəzlənməsi baş verdi. Anormallıq cərrahiyyə əvvəli tarama testində aşkar edilmişdir. Neytral dimorfizmlər də tapıldı: biri histidin üçün 115 kodonda, digəri arginin üçün 353 kodonda (R353Q 613878.0014).

.0004 FAKTOR VII YOXLUQ

Ohiwa və başqaları. (1994) uzun müddət protrombin vaxtına malik olduğu qeyd edilən 45 yaşlı proposita vasitəsilə müəyyən edilən bir ailədə VII faktorun (227500) homozigot asimptomatik çatışmazlığı aşkar etdi. İndeks halda VII faktor antigeninin səviyyəsi normanın 25,9%-i, VII faktorun aktivliyinin səviyyəsi isə istifadə edilən testdən asılı olaraq 28% və 24% təşkil etmişdir. Demək olar ki, eyni azalmış VII faktor antijeni və aktivliyi 2 bacısında tapıldı və ilk əmiuşağı, bir oğlu, bir qızı və qızı olan valideynləri həm VII faktor aktivliyi, həm də antigen səviyyələrini orta dərəcədə aşağı saldı. Molekulyar tədqiqatlar exon 8-də G24-a-a (R247H) əvəz edilməsi ilə nəticələnən G-dən A-ya keçidi təyin etdi. Keçici ekspressiya analizləri, əvəzetmənin mutasiyaya uğramış zülalın sekresiyasını pozaraq VII amil çatışmazlığına səbəb olduğunu irəli sürdü. Bu mutasiya VII Mie faktoru olaraq təyin edildi.

.0005 VII AMİL ƏSASLIĞI

Ağır faktor VII çatışmazlığı olan (227500) 36 yaşlı italyan qadında Arbini et al. (1996) F7 genindəki 2 mutasiya üçün mürəkkəb heterozigotluğu təyin etdi: 1994C-T keçidi, nəticədə thr359-to-met əvəzlənməsi (T359M) və intron 4-də G-to-A keçidi (613878.0008) ilə nəticələndi. birləşmə qüsuru və anormal mRNA işlənməsi. Hüceyrə ifadəsi tədqiqatları, T359M mutant zülalının hüceyrədaxili olaraq toplandığını və 3 saatlıq təqibdən sonra mühitdə heç bir faktor VII təsbit edilmədiyini göstərdi. Mutant T359M zülalı ilə əlaqəli karbohidrat yan zəncirləri endo-beta-N-asetilqlükozaminidaza H (endo H) həzminə həssas idi və bu, zülalın endoplazmatik retikulumda saxlandığını göstərirdi. Arbini və başqaları. (1996) belə nəticəyə gəldi ki, F9-da T359M mutasiyası, çox güman ki, molekulun anormal qatlanmasının nəticəsi olan ciddi sekresiya qüsuru ilə nəticələnir. Xəstədə təkrar burun qanaxması, asan qançır, menorragiya, sağ dizin hemartrozu, dişlərin çəkilməsindən sonra böyük qanaxma olub. Xəstənin bir qardaşı 7 yaşında nəzarətsiz qanaxma ilə öldü.

.0006 VII FAKTOR

VII faktor çatışmazlığı olan 13 İsrail xəstəsində (225700), Tamary et al. (1996) F7 genində homozigot 10648C-T keçidini təyin etdi və nəticədə ala244-dən vala (A244V) keçdi. Mutasiya faktor VII aktivliyinin və antigen səviyyəsinin azalması ilə əlaqədardır. On əlavə xəstə mutasiya üçün heterozigot idi. 36 A244V allelinin 20-si Mərakeş, 10-u İran-Yəhudi, 6-sı digər etnik mənşəli xəstələrdə müşahidə edildi. Tamary et al. (1996) A244V əvəzinin bütün protein quruluşunun təhrif olunmasına səbəb ola biləcəyini söyləmişdir. İntragenik polimorf yerlərin analizi (haplotip analizi) Mərakeş və İran-Yəhudi xəstələri üçün qurucu təsirini ortaya qoydu. A244V mutasiyasının Mərakeş yəhudilərində 1:42,5, İran yəhudilərində isə 1:40 allel tezliyinə malik olduğu müəyyən edilib. Mərakeş yəhudiləri 2000 ildən artıqdır ki, İran yəhudilərindən ayrıldıqları üçün məlumatlar A244V mutasiyasının qədim zamanlarda meydana gəldiyini irəli sürür.

.0007 FAKTOR VII YOXLUQ

VII faktor çatışmazlığı olan bir qohumun təsirlənmiş üzvlərində (613878), Leonard et al. (1998) F7 geninin ekzon 5-də heterozigot 5989G-A keçidini təyin etdi, nəticədə VII faktorun EGF1 sahəsində asn75-asp (N57D) amin turşusu dəyişikliyi baş verdi. Fərdlər faktor VII antigeninə nisbətən azalmış prokoaqulyant fəaliyyət göstərmişdir. In vitro funksional ifadə analizləri göstərdi ki, N57D mutasiyası birinci EGF1 domeninin qatlanmasına təsir edir və nəticədə toxuma faktorunu bağlaya bilməyən və buna görə də bioloji cəhətdən qeyri-aktiv olan mutant F7-nin hüceyrə ifrazının azalması ilə nəticələnir.

.0008 VII AMİL ƏSASLIĞI

Qohum valideynlərdən doğan 2 bacı-qardaşda, ağır VII faktor çatışmazlığı (227500), McVey et al. (1998), F7 geninin intron 4-də homozigot G-to-A keçidini təyin etdi, nəticədə yarılma yeri mutasiyası, exon 4-ün atlanması və mRNA kodlayan faktor VII, ilk epidermal böyümənin çərçivə daxilində silinməsi ilə nəticələndi. faktor kimi domen. Mutasiya, intron 4-ün 5-ayrılma yerindəki dəyişməz bir GT dinükleotidində meydana gəldi. Körpə bir qardaş və bacısı, valideynlərinin təsirlənmədiyi ağır faktor VII çatışmazlığı ilə əlaqədar olaraq 10 gün və 1 aylıq yaşda öldü. Bu ailədə VII faktorun tam çatışmazlığı ağır qanaxma diatezi ilə əlaqələndirildi, lakin inkişaf anomaliyaları yoxdur, bu, insanlarda toxuma faktorunun (F3 134390) ehtimal olunan angiogen funksiyaları üçün dölün VII faktorunun tələb olunmadığını göstərir.

.0009 FAKTOR VII YOXLUQ

Əməliyyat əvvəli tədqiqatlar zamanı faktor VII çatışmazlığı (227500) kəşf edildiyi kolon polipli 82 yaşlı bir Yapon kişidə Ozawa et al. (1998), F7 genində homozigot 38T-C keçidini təyin etdi və nəticədə siqnal peptidinin hidrofob nüvəsindəki kodon -26 (L-26P) ilə leu-to-pro əvəzlənməsi ilə nəticələndi. Bu əvəzlənmənin zülalın endoplazmatik retikuluma translokasiyasına təsir edəcəyi və plazma faktor VII səviyyəsinin azalmasına səbəb olacağı proqnozlaşdırılır. Xəstədə heç bir hemorragik epizod yox idi, variant VII amil Morioka olaraq adlandırıldı.

.0010 VII AMİL ƏSASLIĞI

Qismən faktor VII çatışmazlığı olan 2 sibdə (227500), Bernardi et al. (1994) F7 genindəki 2 mutasiya üçün mürəkkəb heterozigotluğu müəyyən etdi: ekson 8-də 10798C-T keçidi, nəticədə ala294-dən val (A294V) əvəzlənməsi və çərçivə dəyişikliyinə və vaxtından əvvəl dayandırılmaya səbəb olan 17-bp silinməsi 255 kodonunda (613878.0011). Faktor VII antigen səviyyələri normalın 38% və 25%, aktivlik səviyyəsi isə müvafiq olaraq 18% və 7% idi.

Wulff və Herrmann (2000) Almaniyada apardıqları bir araşdırmada, missense A294V və A294V/11128delC cüt mutasiyasının (613878.0012) ən çox yayılmış olduğunu tapdılar.

.0011 FAKTOR VII YOXLUQ

Bernardi və digərləri tərəfindən qismən VII faktor çatışmazlığı (227500) olan xəstələrdə mürəkkəb heterozigot vəziyyətdə aşkar edilmiş F7 genində 17-bp silinməsinin müzakirəsi üçün. (1994), bax 613878.0010.

.0012 VII AMİL ƏSASLIĞI

VII faktor çatışmazlığı olan Polşalı bir xəstədə (227500) Arbini et al. (1994) F7 genində homozigot 1-bp silinməsini (11128delC) müəyyən etdi, çərçivə dəyişikliyi. Faktor VII antigeni və aktivlik səviyyəsi normanın 4%-dən az idi.

.0013 MİOKARD İNFARKSIYASI, HƏVSİLLİYİN AZALMASI

Girelli və başqaları. (2000), 5-başlı F7 polimorfizmi olaraq bilinən F7 promoterində -323 mövqeyinə 10-bp daxil edilməsinin ağır, angioqrafik olaraq sənədləşdirilmiş xəstələrdə miyokard infarktı riskini (608446) əhəmiyyətli dərəcədə azalması ilə əlaqəli olduğunu tapdı. koronar ateroskleroz. A2 alleli, 10-bp daxil edilməsindən bəhs edildiyi kimi, xəstələrin və nəzarətçilərin təxminən 4% -də homozigotluqda tapıldı. A2 allelinin R353Q polimorfizmi (613878.0014) ilə əlaqə balanssızlığında olduğu aşkar edilmişdir ki, bu da müstəqil olaraq sənədləşdirilmiş koronar aterosklerozu olan xəstələrdə MI hallarının azalması ilə əlaqələndirilir. A2A2 genotipi olan xəstələrdə aktivləşdirilmiş VII faktor səviyyəsi vahşi tip genotipi olanlardan 66% aşağı idi.

.0014 MİOKARD İNFARKSIYASI, HƏVSİLLİYİN AZALMASI

Girelli və başqaları. (2000) F7 genində arg353-to-gln polimorfizmi (R353Q) daşıyan fərdlərin ağır, angioqrafiya ilə sənədləşdirilmiş koronar ateroskleroza baxmayaraq, miokard infarktı (608446) hallarının nəzərəçarpacaq dərəcədə azaldığını aşkar etdi. QQ genotipi, aktivləşdirilmiş VII faktor aktivliyinin vəhşi tip genotipinə nisbətən 72% azalması ilə əlaqələndirilmişdir. Q allelinin heterozigot daşıyıcıları, vahşi tip genotipi olan xəstələrlə müqayisədə 0.47 MI riski daşıyırdı (95% CI, 0.27-0.81). Q allelinin 5 əsas F7 polimorfizminin (613878.0013) A2 alleli ilə əlaqə balanssızlığında olduğu aşkar edilmişdir. Hər biri müstəqil olaraq ağır koronar aterosklerozu olan xəstələrdə Mİ riskinin azalması ilə əlaqələndirilirdi.

.0015 FAKTOR VII YOXLUQ

Arbini və başqaları. (1997) ağır faktor VII çatışmazlığı olan bir xəstədə F7 geninin 5-əsas tənzimləyici bölgəsi daxilində -61 mövqeyində homozigot T-to-G əvəzini təyin etdi (227500). Mutasiya HNF4 (600281) yetim nüvə reseptoru ilə qarşılıqlı əlaqəni tamamilə aradan qaldırdı. Böyümə hormonu müxbiri gen analizlərində mutant promotoru ehtiva edən plazmidin aktivliyi vəhşi növün 6,7%-i olmuşdur. Tapıntılar HNF4-ün F7 ifadəsinə böyük müsbət tənzimləyici təsir göstərdiyini göstərdi və bu transkripsiya amilinin bağlanmasının normal faktor VII ifadəsi üçün kritik olduğunu in vivo sübut etdi.

.0016 FAKTOR VII YOXLUQ

VII faktor çatışmazlığı olan qohum ailədən olan Fransız Kanadalı bir xəstədə (227500), Carew et al. (1998) F7 geninin 5-əsas tənzimləyici bölgəsində -94 mövqeyində homozigot C-dən G transversiyasını müəyyən etdi. Mutasiya Sp1 (189906) və digər nüvə zülalları ilə bağlanma və aktivləşmənin qarşısını aldı. Xəstədə VII faktor antigeninin və VII faktorun koaqulyant aktivliyinin qalıq plazma səviyyəsi 1%-dən az idi və hemartrozlar və xroniki artropatiya nümayiş etdirdi. Məlumatlar F7 promotorunun bu bölgəsinin F7 geninin in vivo ifadəsi üçün əhəmiyyətini vurğuladı.

.0017 VII AMİL ƏSASLIĞI

Carew və başqaları. (2000), F7 genində 2 mutasiya üçün mürəkkəb heterozigot olan VII faktor çatışmazlığı (227500) olan 25 yaşlı Polşalı bir kişini təsvir etdi. Ata allelində 3 struktur gen anormallığı var idi və ana alleli tərcümənin başlanğıc sahəsinə nisbətən -55 mövqeyində C-dən T-yə keçidi həyata keçirdi. Bu mutasiya HNF4 (600281) transkripsiya aktivatorunun F7 promoterinə bağlanmasına qismən mane olur, eyni zamanda qaraciyər hüceyrələrində müxbir gen ifadəsini xeyli azaldır.

.0018 FAKTOR VII YOXLUQ

VII faktor çatışmazlığı (225700) olan 55 yaşlı Çinli qadında Au et al. (2000) F7 genindəki 2 mutasiya üçün mürəkkəb heterozigotluğu müəyyən etdi: 4-cü ekzonda 6003C-A transversiyası, nəticədə cys61-dən ter (C61X) əvəzlənməsi və 8-ci eksonda 10902T-G transversiyası, cys329 ilə nəticələnir. -to-gly (C329G 613878.0019) əvəzlənməsi. O, hemoptizi və sağ çiyin ağrısı ilə müraciət etdi və xroniki hemofilik artropatiya ilə uyğun gələn sağ çiyin artritinin olduğu aşkar edildi. 3 komplikasız vajinal doğuş keçirmiş və anormal qanaxma tarixi barədə məlumat verməmişdir. Ancaq 2 kiçik qardaşının biri doğulduqda, digəri 9 aylıq olanda qanaxmadan öldü. Bu mutasiyalardan birincisi üçün iki qız heterozigot idi və mənasız bir mutasiyaya uyğun bir fenotip göstərdi, bir qızı C329G mutasiyası üçün heterozigot idi və missens mutasiyasına uyğun normal antijen səviyyələri göstərdi. Au və başqaları. (2000), bunların Çində bildirilən ilk F7 mutasiyalar olduğunu ifadə etdi.

.0019 VII AMİL ƏSASLIĞI

Au et al tərəfindən VII faktor çatışmazlığı (225700) olan bir xəstədə mürəkkəb heterozigot vəziyyətdə aşkar edilmiş F7 genindəki cys329-to-gly (C329G) mutasiyasının müzakirəsi üçün. (2000), bax 613878.0018.

.0020 FAKTOR VII YOXLUQ

Şiddətli VII faktor çatışmazlığı (227500) nəticəsində təkrarlanan intratorasik qanaxma, beyin qanaması və mədə-bağırsaq qanaxması olan 10 aylıq yapon kişisində (227500), Takamiya və Okimoto (2001) F7109 a genində birləşmə heterozigotluğu tapdılar: Ekson 8-də T keçidi, nəticədə gln211-dən-ter (Q211X) mutasiya və 6071 nukleotidində (başqa yerdə 6070 kimi qeyd olunur) G-dən A dəyişikliyi, intron 4 (613878.0008).

.0021 VII AMİL ƏSASLIĞI

Faktor VII aktivliyi və antijen səviyyəsi normal olaraq 1,2% və 21% olan asemptomatik 46 yaşlı bir Yapon kişidə Nagaizumi et al. (2002) F7 genində 2 yeni mutasiya tapdı: 2-ci ekzonda 3895G-A keçidi, nəticədə glu25-dən lise (E25K) mutasiyası və 8-ci eksonda 10961T-G keçidi, nəticədə his348-ə -gln (H348Q 613878.0022) mutasiyası. Tapıntılar qismən faktor VII çatışmazlığı ilə uyğundur (227500). Müəlliflər, hər iki mutasiyanın 'ikiqat heterozigot vəziyyətdə' olduğunu, ancaq ikiqat heterozigotluğun 2 ayrı lokusun hər birində heterozigotluq olduğu üçün 'mürəkkəb heterozigot vəziyyətdə' olduğunu söyləməli olduğunu bildirdilər.

.0022 VII AMİL ƏSASLIĞI

Qismən faktor VII çatışmazlığı olan bir xəstədə mürəkkəb heterozigot vəziyyətdə olan F7 genindəki his348-to-gln (H348Q) mutasiyasını müzakirə etmək üçün (227500) Nagaizumi et al. (2002), bax 613878.0021.

.0023 FAKTOR VII YOXLUQ

Təsadüfi burun qanaxması olan bir yapon qadında Takamiya və Hino (2004) həm VII faktorun koaqulyant aktivliyinin, həm də antigenin (227500) aşağı səviyyələrini aşkar etmişlər. Zülalın katalitik sahəsindəki gly354-to-cys (G354C) mutasiyası üçün homozigot idi. Haplotip analizi bu mutasiyanın qohum valideynlərindən miras qaldığını göstərdi. Hüceyrədaxili faktor VII cys354 normal zülalın 67% -i olduğu təxmin edilsə də, mediada keçici eksperiment təcrübələri zamanı həm antigen, həm də laxtalanma aktivliyi, VII yabanı tip faktorundan ayrılan səviyyələrin müvafiq olaraq 5% və 4% -ə qədər azaldıldı. Takamiya və Hino (2004), VII faktor molekulunda əlavə bir sərbəst sistein qalığının tətbiq edilməsinin qeyri -qanuni disulfid bağları və səhv bir sahənin meydana gəlməsi ilə nəticələndiyini, qüsurlu sekresiyaya səbəb olduğunu irəli sürdülər.

.0024 FAKTOR VII YOXLUQ

VII faktor çatışmazlığı olan 24 yaşlı bir kişidə (227500), Bharadwaj et al. (1996), F7 geninin exon 8-də homozigot 10907T-C keçidini təyin etdi və nəticədə zülalın katalitik sahəsindəki bir phe328-to-ser (F328S) əvəzlənməsi ilə nəticələndi. Xəstənin plazma faktoru VII antijeni normalın 38% -i idi, lakin faktor VII aktivliyi normalın 1% -dən az idi. Funksional ifadə tədqiqatları göstərdi ki, mutant zülal toxuma faktoruna 2 qat azalmışdır və Xa faktoru aktivləşdirildikdən sonra toxuma faktorunun iştirakı ilə faktor X (bax 227600) və ya IX (300746) aktivləşdirilməmişdir. Xa faktoru ilə mutant F328S faktor VII aktivləşmə sürəti yabanı növlə müqayisədə xeyli azaldı. Kompüter modelləşdirməsi və molekulyar dinamika simulyasiyaları, F328S faktor VIIa-nın substratları parçalaya bilməməsinin substratın arginin tərəfinin qarşılıqlı əlaqəsi üçün vacib olan substratı bağlayan cibinin altındakı bir qalıq olan tyr377 və asp338 arasında hidrogen bağının aşkar meydana gəlməsi ilə nəticələndiyini irəli sürdü. fermenti olan zəncirlər. Bharadwaj və başqaları. (1996) protrombin (176930), faktor IX, faktor X, faktor VII və tripsində (276000) konservləşdirilmiş phe328 -in faktor VIIa katalizi üçün vacib olduğu qənaətinə gəldi.

▼ Həmçinin bax:

▼ İSTİFADƏLƏR

Arbini, A. A., Bodkin, D., Lopaciuk, S., Bauer, K. A. VII faktor çatışmazlığı olan Polşa xəstələrinin molekulyar analizi. Blood 84: 2214-2220, 1994. [PubMed: 7919338, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Arbini, A. A., Mannucci, P. M., Bauer, K. A. İrsi çatışmazlığı olan bir xəstənin VII faktorunda thr359-to-met mutasiyası molekulun qüsurlu sekresiyasına səbəb olur. Qan 87: 5085-5094, 1996. [PubMed: 8652821, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Arbini, A. A., Pollak, E. S., Bayleran, J. K., Yüksək, K. A., Bauer, K. A. Bir mutasiya səbəbiylə ağır faktor VII çatışmazlığı, VII faktor promoterində hepatosit nüvə faktoru 4 bağlanma sahəsini pozur. Qan 89: 176-182, 1997. [PubMed: 8978290, əlaqəli sitatlar] [Tam mətn]

Au, W. Y., Lam, C. C. K. K., Chan, E. C., Kwong, Y. L. VII faktor çatışmazlığı olan bir Çin ailəsində iki yeni faktor VII gen mutasiyası. Brit. J. Haemat. 111: 143-145, 2000. [PubMed: 11091194, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Bernardi, F., Castaman, G., Redaelli, R., Pinotti, M., Lunghi, B., Rodeghiero, F., Marchetti, G. VII (294ala-val) və X (334ser-pro) funksional laxtalanma faktorlarına səbəb olan topoloji ekvivalent mutasiyalar. zümzümə. Molec. Genet. 3: 1175-1177, 1994. [PubMed: 7981691, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Bharadwaj, D., Iino, M., Kontoyianni, M., Smith, K. J., Foster, D. C., Kisiel, W. Faktor VII mərkəzi: toxuma amilinin bağlanmasını azaldan, Xa faktoru ilə aktivləşməni pozan, amidolitik və koaqulyant fəaliyyətini ləğv edən katalitik sahədə yeni mutasiya. J. Biol. Kimya 271: 30685-30691, 1996. [PubMed: 8940045, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Carew, J. A., Pollak, E. S., High, K. A., Bauer, K. A. VII amil stimulyatorundakı Sp1 bağlanma sahəsini pozan mutasiya səbəbiylə ağır faktor VII çatışmazlığı. Blood 92: 1639-1645, 1998. [PubMed: 9716591, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Carew, J. A., Pollak, E. S., Lopaciuk, S., Bauer, K. A. VII faktor çatışmazlığı olan bir xəstədə faktor VII promoterinin HNF4 bağlanma bölgəsində yeni bir mutasiya. Qan 96: 4370-4372, 2000. [PubMed: 11110717, əlaqəli sitatlar] [Tam mətn]

Chan, J.C.Y., Carmeliet, P., Moons, L., Rosen, E.D., Huang, Z.-F., Broze, G.J., Jr., Collen, D., Castellino, F.J. Faktor VII çatışmazlığı, toxuma faktoru yolu inhibitoru çatışmazlığı ilə əlaqəli siçanlarda intrauterin ölümcülliyi xilas edir. J. Klin. İnvestisiya edin. 103: 475-482, 1999. [PubMed: 10021455, şəkillər, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Chan, J. C. Y., Cornelissen, I., Collen, D., Ploplis, V. A., Castellino, F. J. Birləşdirilmiş faktor VII/protein C çatışmazlığı siçanlarda intrauterin koaqulopatiya ilə nəticələnir. J. Klin. İnvestisiya edin. 105: 897-903, 2000. [PubMed: 10749569, şəkillər, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Cooper, D. N., Millar, D. S., Wacey, A., Banner, D. W., Tuddenham, E. G. D. VII faktor çatışmazlığı: molekulyar genetika və patofizyoloji. Tromb. Haemost. 78: 151-160, 1997. [PubMed: 9198146, əlaqəli sitatlar]

de Grouchy, J., Dautzenberg, M.-D., Turleau, C., Beguin, S., Chavin-Colin, F. 13q34-ə qədər laxtalanma faktorları VII və X-in regional xəritələşdirilməsi: 8-ci xromosom vasitəsilə faktor VII ifadəsi. zümzümə. Genet. 66: 230-233, 1984. [PubMed: 6714981, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

de Grouchy, J., Josso, F., Beguin, S., Turleau, C., Jalbert, P., Laurent, C. VII de laxtalanma çatışmazlığı trisomiques 8. Ann. Genet. 17: 105-108, 1974. [PubMed: 4547936, əlaqəli sitatlar]

Denson, K.W.E., Conrad, J., Samama, M. VII faktorun genetik variantları. (Məktub) Lancet 299: yalnız 1234, 1972. Qeyd: Orijinal olaraq I cild. [PubMed: 4113214, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Di Bitondo, R., Hall, A. J., Peake, I. R., Iacoviello, L., Winship, P. R. İnsan koagulyasiya faktoru VII ifadəsinin estrogenik repressiyası, promotor bölgədə bir estrogen cavab elementi ardıcıllığı motivi vasitəsi ilə. zümzümə. Molec. Genet. 11: 723-731, 2002. [PubMed: 11929845, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Fagan, K., Wilkinson, I., Allen, M., Brownlea, S. Koaqulyasiya faktoru VII tənzimləyicisi 8p23.1-də yerləşir. zümzümə. Genet. 79: 365-367, 1988. [PubMed: 3410461, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Fineman, R. M., Ablow, R. C., Breg, W. R., Wing, D., Rose, J. S., Rothman, L. G., Warpinski, J. 8 -ci xromosomun müxtəlif seqmentlərinin tam və qismən trisomiyası: Vəziyyət məlumatları və baxış. Clin. Genet. 16: 390-398, 1979. [PubMed: 527246, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Fineman, R. M., Ablow, R. C., Howard, R. O., Olbright, J., Breg, W. R. Trisomiya 8 mozaizm sindromu. Pediatrics 56: 762-767, 1975. [PubMed: 1196733, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Furie, B., Furie, B. C. Qan laxtalanmasının molekulyar və hüceyrə biologiyası. New Eng. J. Med. 326: 800-806, 1992. [PubMed: 1538724, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Giansily-Blaizot, M., Aguilar-Martinez, P., Biron-Andreani, C., Jeanjean, P., Igual, H., Schved, J.-F., The Study Group of Factor Seven çatışmazlığı. İrsi faktor VII çatışmazlığı ilə əlaqəsi olmayan 37 xəstənin genotiplərinin və fenotiplərinin təhlili. Avropa. J. Hum. Genet. 9: 105-112, 2001. [PubMed: 11313743, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Gilgenkrantz, S., Briquel, M.-E., Andre, E., Alexandre, P., Jalbert, P., Le Marec, B., Pouzol, P., Pommereuil, M. 13q34 -də yerləşən VII və X laxtalanma faktorlarının struktur genləri. Ann. Genet. 29: 32-35, 1986. [PubMed: 3487272, əlaqəli sitatlar]

Girelli, D., Russo, C., Ferraresi, P., Olivieri, O., Pinotti, M., Friso, S., Manzato, F., Mazzucco, A., Bernardi, F., Corrocher, R. VII faktor genində polimorfizmlər və koronar arteriya xəstəliyi olan xəstələrdə miokard infarktı riski. Yeni Müh. J. Med. 343: 774-780, 2000. [PubMed: 10984565, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Girolami, A., Kattarozzi, G., Dal Bo Zanon, R., Cella, G., Toffanin, F. Faktor VII Padua-2: qüsurlu öküz beyin tromboplastin aktivasiyası və mürəkkəb irsi nümunə ilə başqa bir faktor VII anormallığı. Qan 54: 46-53, 1979. [PubMed: 444674, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Girolami, A., Dal Bo Zanon, R., Zanella, F., Procidano, M., Ruffato, G. Faktor VII Padua qüsuru: heterozigot populyasiyası. Akta Haemat. 68: 34-38, 1982. [PubMed: 6812354, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Girolami, A., Falezza, G., Patrassi, G., Stenico, M., Vettore, L. Faktor VII Verona laxtalanma pozğunluğu: anormal VII faktor və heterozigot faktor VII çatışmazlığı olan ikiqat heterozigoz. Blood 50: 603-610, 1977. [PubMed: 901936, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Girolami, A., Patrassi, G., Cappellato, G., Casonato, A. VII faktor Padua laxtalanma qüsuru olan başqa bir ailə. Acta Haemat. 62: 4-11, 1979.

Hagen, F. S., Grey, C. L., O'Hara, P., Grant, F. J., Saari, G. C., Woodbury, R. G., Hart, C. E., Insley, M., Kisiel, W., Kurachi, K., Davie, E. W. İnsan faktoru VII üçün kodlaşdırma cDNT-nin xarakteristikası. Proc. Nat. Akad. Elmi. 83: 2412-2416, 1986. [PubMed: 3486420, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Leonard, B. J. N., Chen, Q., Blajchman, M. A., Ofosu, F. A., Sridhara, S., Yang, D., Clarke, B. J. Birinci epidermal böyümə faktoru sahəsinin N57D struktur variantından qaynaqlanan VII faktor çatışmazlığı. Qan 91: 142-148, 1998. [PubMed: 9414278, əlaqəli sitatlar] [Tam mətn]

Marchetti, G., Ferrati, M., Patracchini, P., Redaelli, R., Bernardi, F. İnsan pıhtılaşma faktoru VII genində bir missens mutasiya (178cys-to-tyr) və iki neytral dimorfizm (115his və 333ser). zümzümə. Molec. Genet. 2: 1055-1056, 1993. [PubMed: 8364544, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Marchetti, G., Patracchini, P., Gemmati, D., DeRosa, V., Pinotti, M., Rodorigo, G., Casonato, A., Girolami, A., Bernardi, F. VII faktor genində (F7) iki səhv mutasiyaların aşkarlanması və təkrar polimorfizmin səciyyələndirilməsi. zümzümə. Genet. 89: 497-502, 1992. [PubMed: 1634227, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

McVey, J. H., Boswell, E. J., Takamiya, O., Tamagnini, G., Valente, V., Fidalgo, T., Layton, M., Tuddenham, E. G. D. VII faktorun ilk EGF sahəsinin birləşmə yeri mutasiyası ilə xaric edilməsi ölümcül faktor VII çatışmazlığına səbəb olur. Blood 92: 920-926, 1998. [PubMed: 9680360, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

McVey, J. H., Boswell, E., Mumford, A. D., Kemball-Cook, G., Tuddenham, E. G. D. Faktor VII çatışmazlığı və FVII mutasiya bazası. zümzümə. Mutat. 17: 3-17, 2001. [PubMed: 11139238, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Millar, DS, Kemball-Cook, G., McVey, JH, Tuddenham, EGD, Mumford, AD, Attock, GB, Reverter, JC, Lanir, N., Parapia, LA, Reynaud, J., Meili, E., von Felton, A., Martinowitz, U., Prangnell, DR, Krawczak, M., Cooper, DN VII faktor çatışmazlığında genotip-fenotip əlaqəsinin molekulyar təhlili. zümzümə. Genet. 107: 327-342, 2000. [PubMed: 11129332, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Nagaizumi, K., İnaba, H., Suzuki, T., Hatta, Y., Hagiwara, T., Amano, K., Arai, M., Fukutake, K. F7 genindəki iki cüt heterozigot mutasiya fərqli təzahürlər göstərir. Brit. J. Haemat. 119: 1052-1058, 2002. [PubMed: 12472587, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

O'Brien, D. P., Gale, K. M., Anderson, J. S., McVey, J. H., Miller, G. J., Meade, T. W., Tuddenham, E. G. D. VII 304-gln faktorunun saflaşdırılması və xarakteristikası: kliniki cəhətdən təsirlənməmiş bir kişidən təcrid olunmuş aktivliyi aşağı olan variant molekul. Qan 78: 132-140, 1991. [PubMed: 2070047, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

O'Hara, P. J., Grant, F. J., Haldeman, B. A., Grey, C. L., Insley, M. Y., Hagen, F. S., Murray, M. J. Qanın laxtalanmasında iştirak edən K vitaminindən asılı zülal olan insan faktoru VII üçün kodlaşdıran genin nukleotid ardıcıllığı. Proc. Nat. Akad. Elmi. 84: 5158-5162, 1987. [PubMed: 3037537, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Ohiwa, M., Hayashi, T., Wada, H., Minamikawa, K., Shirakawa, S., Suzuki, K. Faktor VII Mie: onun (CAC) katalitik sahədə arg(247) (CGC) ilə amin turşusu əvəzlənməsi nəticəsində yaranan homozigot asimptomatik tip I çatışmazlıq. Tromb. Haemost. 71: 773-777, 1994. [PubMed: 7974346, əlaqəli sitatlar]

Ozawa, T., Takikawa, Y., Niiya, K., Ejiri, N., Suzuki, K., Sato, S., Sakuragawa, N. Faktor VII Morioka (FVII L-26P): amil VII çatışmazlığı olan bir xəstədə müəyyən edilmiş siqnal ardıcıllığında homozigot səhv mutasiya. Brit. J. Haemat. 101: 47-49, 1998. [PubMed: 9576180, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Pike, A. C. W., Brzozowski, A. M., Roberts, S. M., Olsen, O. H., Persson, E. VIIa insan faktorunun strukturu və onun qan laxtalanmasının tetiklenmesi üçün təsiri. Proc. Nat. Akad. Elmi. 96: 8925-8930, 1999. [PubMed: 10430872, şəkillər, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Ratnoff, OD, Bennett, B. Qan laxtalanmasının irsi pozğunluqlarının genetikası. Elm 179: 1291-1298, 1973. [PubMed: 4568863, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Stenbjerg, S., Husted, S., Bernsen, A., Jacobsen, P., Nielsen, J., Rasmussen, K. Trisomiya 8 sindromu olan xəstələrdə laxtalanma tədqiqatları. Ann. Genet. 18: 241-242, 1975. [PubMed: 1083193, əlaqəli sitatlar]

Takamiya, O., Hino, K. VII faktorunda gly354-to-cys mutasiyası üçün homozigot olan, molekulun ifrazını ciddi şəkildə pozan, lakin tam çatışmazlığı olmayan bir xəstə. Brit. J. Haemat. 124: 336-342, 2004. [PubMed: 14717781, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Takamiya, O., Okimoto, Y. IVS4-ün birləşmə yeri mutasiyası üçün ikiqat heterozigotluq və 8-ci ekzonda yeni bir cəfəngiyat mutasiyası səbəbindən təkrarlanan kəllədaxili qanaxmalarla ağır VII faktor çatışmazlığı (Gln211-Term). Brit. J. Haemat. 114: 369-374, 2001. [PubMed: 11529858, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Tamary, H., Fromoviç, Y., Shalmon, L., Reich, Z., Dym, O., Lanir, N., Brenner, B., Paz, M., Luder, AS, Blau, O., Korostişevski , M., Zaizov, R., Seligsohn, U. Ala244val, Mərakeş və İran Yəhudilərində VII faktor çatışmazlığına səbəb olan ümumi, ehtimal ki, qədim bir mutasiyadır. Tromb. Haemost. 76: 283-291, 1996. [PubMed: 8883260, əlaqəli sitatlar]

Tariverdian, G., Schroeder-Kurth, T., Zimmermann, R. 13-cü halqalı xromosomlu qızda laxtalanma faktorlarının VII və X çatışmazlığı.(Avtomatik) 7 -ci Beynəlxalq İnsan Genetiği Konqresi, Berlin 1986. S. 76.

Toomey, J. R., Kratzer, K. E., Lasky, N. M., Stanton, J. J., Broze, G. J., Jr. Siçan toxuması faktoru geninin hədəflənmiş pozulması embrion ölümünə səbəb olur. Qan 88: 1583-1587, 1996. [PubMed: 8781413, əlaqəli sitatlar] [Tam mətn]

Wulff, K., Herrmann, F. H. VII faktor çatışmazlığında faktor VII geninin iyirmi iki yeni mutasiyası. zümzümə. Mutat. 15: 489-496, 2000. [PubMed: 10862079, əlaqəli sitatlar] [Tam Mətn]

Zur, M., Nemerson, Y. Doku faktorunun qan laxtalanma yolları. In: Bloom, A. L. Thomas, D. P. (red.): Hemostaz və Tromboz. Edinburq: Churchill Livingstone (pub.) 1981. Sf. 124-139.

* 613878

COAGULATION FACTOR VII F7

Alternativ başlıq simvolları

VII FAKTOR

HGNC Təsdiqlənmiş Gen Simvol: F7

Sitogenetik yer: 13q34 Genomik koordinatlar (GRCh38): 13: 113,105,772-113,120,684 (NCBI-dan)

Gen-Fenotip Əlaqələri

Yer Fenotip Fenotip
MIM nömrəsi
Miras Fenotip
Xəritə açarı
13q34 608446 3
VII amil çatışmazlığı 227500 Otozomal resessiv 3

Mətn

Təsvir

F7 geni, qan laxtalanmasının xarici yolunda iştirak edən, K vitaminindən asılı qlikoproteinin, serum proteaz faktor VIIa-nın zimogeni olan laxtalanma faktoru VII-ni kodlayır. Damar zədələndikdə, VII faktor faktor III və ya TFA (TF 134390) olaraq da bilinən toxuma faktoru ilə təmasda olur və aktiv formasına ayrılır: bu reaksiya qan laxtalanmasında əsas hadisədir. Doku faktoru və aktivləşdirilmiş faktor VII kompleksi IX (F9 300746), X (F10 613872) və (avtokatalitik olaraq) VII faktorları aktivləşdirməyə xidmət edir (O'Hara və başqaları tərəfindən xülasə, 1987 və Millar və digərləri, 2000) .

Klonlaşdırma və ifadə

Hagen və s. (1986) insan qaraciyərinin cDNT kitabxanasından F7 geninə uyğun gələn təcrid olunmuş klonlar. Zülal lider ardıcıllıqla sintez edilir və yetkin dövran edən zülal 406 amin turşusu olan bir zəncirli polipeptiddir. VII faktorun aktivləşdirilmiş VIIa faktoruna çevrilməsi arg152 ilə ile153 arasındakı bağın serin proteaz parçalanması ilə əlaqədardır. VII faktorun aktivləşdirilmiş forması, qamma-karboksiglutamik turşu qalıqları olan 20 kD 152 qalıq yüngül zəncirdən və 2 zəncirin bir disulfid bağı ilə birlikdə tutulduğu katalitik sahəni ehtiva edən 30 kD 254 qalıq ağır zəncirdən ibarətdir. . İnsan faktoru VII, faktor IX (F9 300746), faktor X (F10 613872), faktor II (F2 176930) və zülal C (PROC 612283) kimi K vitamini asılı olan digər zülallara çox homologdur.

O'Hara və başqaları. (1987) F7 geninin nukleotid ardıcıllığını təyin etdi. Faktor VII üçün mRNT bir çox yerdə poliadenilləşir və alternativ birləşməyə məruz qala bilər.

Gen quruluşu

O'Hara və başqaları. (1987) F7 geninin 9 ekzona malik olduğunu və təxminən 12.8 kb aralığında olduğunu təyin etdi.

Xəritəçəkmə

F7 geni 13q34 xromosomuna xəritələnir (Millar et al., 2000).

Gilgenkrantz et al. (1986) F7 və F10 (613872) genlərini 13q34 -ə uyğunlaşdırdı. Bu seqmentin trisomiyada laxtalanma faktorları artıb, monosomiyada isə azalıb.

Tariverdian və başqaları. (1986) halqa 13-də VII və X faktorlarının çatışmazlığını aşkar etdi. Qırılan yer, genlərin 13q34-qter seqmentində yerləşməsinə uyğun idi.

Gen funksiyası

VII və X faktorlarının (613872), II (176930) və IX (264900) faktorlarının sintezi qaraciyərdə baş verir və K vitamini tələb edir. (Zur və Nemerson, 1981). Ratnoff və Bennett (1973) bildirdilər: 'Bir molekuldan əmələ gəldiyinə dair inandırıcı bir arqument irəli sürülə bilsə də, əksər sübutlar onların fərqli zülallar olduğunu göstərir.'

Furie and Furie (1992) qan laxtalanmasının molekulyar və hüceyrə biologiyasını müzakirə edərkən, 5 proenzim, 3 prokofaktor və 2 tənzimləyici zülal üçün genlərin quruluşunu müqayisə edən bir rəqəm təqdim etdi. Hər bir kateqoriyanın üzvləri üçün maraqlı oxşarlıqlar və fərqlər var idi. 5 proenzim VII, XI (264900), IX və X faktorları və protrombin 3 protofaktorları toxuma faktoru, VIII (F8 300841) və V (F5 612309) faktorları isə C vitamini (PROC 612283) və protein S idi. (PROS1 176880).

Pike və başqaları. (1999) faktor VIIa/toxuma amili kompleksində baş verən incə struktur fərqləri təsvir etmiş, beləliklə, VIIa faktorunun aktivliyinin dramatik şəkildə toxuma faktoru ilə induksiya edilmiş gücləndirilməsi mexanizmini işıqlandırmışdır.

Di Bitondo və s. (2002), F7 -nin promoter bölgələrinin (qalıqları -658 ilə -1 və -348 ilə -1) estrogenik faktorların iştirakı ilə transkripsiya aktivliyini azaldığını göstərmək üçün reportyor gen analizindən istifadə etmişdir. Təsir promotor polimorfik haplotipdən asılı deyildi. Müəlliflər, estrogen reseptorunun F7 promoterinin -225 ilə -212 qalıqlarına bağlandığı ardıcıllığı lokalize etdilər. F7 estrogen reaksiya elementi alternativ bir növü təmsil edir, burada 2 yarım sahə yalnız 2 spacer nukleotidlə ayrılır. Müəlliflər, menstrual dövrü ərzində müşahidə olunan F7 və estradiol səviyyələri arasındakı tərs əlaqənin mexanizmini təqdim etmişlər.

Molekulyar Genetika

Girolami və başqaları. (1977) faktor VII çatışmazlığı ilə əlaqəli Verona adlanan keyfiyyətcə anormal VII faktoru müşahidə etdi.

VII faktor çatışmazlığı

VII faktor çatışmazlığı səbəbiylə qanayan diatezi olan bir İtalyan qadında (227500), Arbini et al. (1996) F7 genində (613878.0005 və 613878.0008) 2 mutasiya üçün mürəkkəb heterozigotluğu müəyyən etmişdir.

Cooper və s. (1997) polimorfizmlər və VII faktor çatışmazlığının altında yatan mutasiyalar da daxil olmaqla təbii olaraq meydana gələn variantların təhlilinə əsaslanaraq VII faktorun struktur-funksiya tədqiqatlarını nəzərdən keçirdi. 30 fərqli tək bazalı əvəzetmə və 4 qısa silinmə cədvəli hazırladılar. VII faktor çatışmazlığından məsul olan əksər lezyonlar yalnız bir dəfə qeyd edilmişdir. Diqqəti çəkən istisnalar arasında Tamary et al. (1996).

Qohum valideynlərdən doğulan, kəllədaxili qanaxma nəticəsində erkən ölümlə nəticələnən ağır faktor VII çatışmazlığı olan 2 körpə bacı-qardaşda McVey et al. (1998) F7 genində (613878.0008) homozigot birləşmə yeri mutasiyasını müəyyən etmişdir.

Wulff və Herrmann (2000), əlaqəsi olmayan 87 probandda VII aktivliyi azalmış və ya aşağı olan bir mutasiya ekranı həyata keçirmişlər. 77 probandın 101 F7 alleli arasında 34 müxtəlif lezyon aşkar edilmişdir ki, bunlardan 22-si yeni idi. 34 fərqli lezyon 31 nöqtə mutasiyasından və 3 kiçik silmədən ibarət idi. CpG dubletindəki bir keçid, 34 fərqli mutantdan 12 -ni təşkil etdi. On altı mutasiya yalnız bir dəfə qeyd edildi. Almaniyada bu tədqiqatda tapılan ən çox yayılmış mutasiyalar A294V (613878.0010) və ikiqat mutasiya A294V/11128delC (613878.0012) idi. Bu mutasiyalar, VII faktor çatışmazlığına səbəb olan ən çox mutasiyanın cəmləşdiyi genin karboksi-terminal ucunda exon 8-də yerləşir. Hər iki mutasiya həm də Polşa və İtalyan xəstələrində yayılmışdır (Arbini et al., 1994 Bernardi və digərləri, 1994), bu onların Avropa populyasiyalarında ən çox rast gəlinən F7 mutasiyalarını təmsil etdiyini göstərir. Ailə tədqiqatları hər iki mutasiya üçün eyni haplotip göstərdi.

Millar və başqaları. (2000) faktor VII çatışmazlığı olan 48 əlaqəli olmayan fərddə F7 genini ardıcıllıqla sıralamış, 15 səhv mutasiya, 2 mikrodelesiya, 5 splice qovşağı mutasiyası və 5 əsas tərcümə olunmamış bölgədə tək baza cüt əvəzlənməsi daxil olmaqla cəmi 23 yeni lezyon əldə etmişdir.

McVey və başqaları. (2001) dünya ədəbiyyatında təsvir edilən 238 fərdin F7 genindəki mutasiyaların qeydə alındığı mutasiya məlumat bazasını təsvir etmişdir. F7 genində bir neçə polimorfizm təsbit edildi və bəzilərinin plazma faktoru VII antigen səviyyələrinə təsir etdiyi göstərildi.

DGGE və F7 geninin 9 ekzonun birbaşa sekanslaşdırılmasından istifadə edərək, Giansily-Blaizot et al. (2001) əsasən fransız və Şimali Afrika mənşəli, VII amil koaqulyant aktivliyi normadan 5%-dən az olan 37 əlaqəsi olmayan xəstəni araşdırdı. Bu strategiya, proqnozlaşdırılan mutasiyaya uğramış 74 alleldən 68 -inin aşkarlanmasına imkan vermişdir (92%). Gen boyunca 18 -i əvvəllər bildirilməmiş 40 fərqli mutasiya aşkar edilmişdir. Şiddətli qanaxma diatezi olan xəstələrin genotipləri, hər iki alleldə mutasiyalardan ibarətdir ki, bu da funksional FVII molekulunun istehsalına mane olur. Müəlliflər təklif edirdilər ki, yüngül və asemptomatik qruplarda bir allel üzrə zərərsiz mutasiya hemostatik şəlaləni işə salmaq üçün kifayət qədər az miqdarda FVII zülalının buraxılmasına imkan verə bilər.

Miokard infarktına həssaslığın azalması

Girelli və başqaları. (2000), F7 genində 3 polimorfizmi araşdırdı və bunlardan 2-nin, 5-başlı F7 polimorfizmi (613878.0013) və R353Q (613878.0014) faktor VII aktivlik səviyyəsinə təsir etdiyini və miyokard infarktı riskinin daha aşağı olduğunu göstərdi (MI 608446) koronar arteriya xəstəliyi olan xəstələrdə.311 -də ağır, angioqrafik olaraq təsdiqlənmiş koronar aterosklerozu olan 444 xəstəni araşdırdılar. Bu 311 xəstədən 175-də əvvəlki Mİ sənədləri var idi. Nəzarət qrupu, normal koronar arterioqramma olan 133 xəstə də tədqiqata daxil edilmişdir. 5-əsas F7 polimorfizmi F7 geninin 5-əsas promotor bölgəsində -323 mövqedə 10-bp daxil edilməsini nəzərdə tutur allel A1 dekamerin olmamasına, allel A2 isə onun daxil edilməsinə aiddir. A2A2 genotipi olan xəstələrdə VII aktivləşdirilmiş faktor aktivliyi 66% azalmışdır. R353Q polimorfizmi, F7 geninin 353 kodonunda bir miss-mutasiyanı ehtiva edir və nəticədə arg-to-glu əvəzlənməsi ilə nəticələnir. Q allelinə homozigot olan xəstələrdə VII aktivləşdirilmiş aktivlik 72% azalmışdır. A2 və Q allellərinin əlaqə balanssızlığında olduğu aşkar edilmişdir. MI olmayanlar arasında A2 və Q allelləri üçün homozigotlardan əhəmiyyətli dərəcədə daha çox heterozigot var idi. A1A2 və ya RQ genotipi olan xəstələrdə Mİ üçün düzəldilmiş odds nisbəti 0.47 idi.

Tarix

8-ci xromosomda laxtalanma faktorunun VII (F7R, F7E) səviyyəsini tənzimləyən bir genin olması ehtimalı, həmin xromosom üçün trisomik olan 3 subyektdə bu amilin çatışmazlığının müşahidə edilməsi ilə təklif edilmişdir (de Grouchy et al., 1974). Fineman və s. (1975, 1979) de Grouchy və digərlərinin tapıntılarını təsdiq edə bilər. (1974) lakin Stenbjerg et al. (1975) bacarmadı. De Grouchy və başqaları. (1984) yenidən bir tənzimləyici genin 8 -ci xromosomda olduğu qənaətinə gəldi və eyni zamanda VII faktor üçün struktur geninin (və X faktoru üçün) 13q34 -ə uyğun gələn nəticələri təqdim etdi. Sübut olaraq əlavə edilən qeyddə de Grouchy et al. (1984) tandem duplikasiyasına görə 8p trisomiyası olan bir körpədə normal faktor VII təsvir etdi və F7R-nin 8q-də ola biləcəyini təklif etdi. Bununla birlikdə, Fagan et al. (1988), fərqli xromosom anomaliyaları olan 2 xəstədə sitogenetik və laxtalanma tədqiqatlarından, yerin 8p23.2-p23.1 olduğu qənaətinə gəldi.

Heyvan Modeli

Siçan geni nokaut təcrübələri, toxuma faktorunun 9 -cu gündən sonrakı embrion inkişafı üçün vacib olduğunu, homozigot toxuma faktoru çatışmayan embrionların bir yumurta sarısı dövranı inkişaf etdirmədiyini göstərir (Toomey və digərləri, 1996). VII faktor toxuma faktorunun bilinən yeganə liqandı olduğu üçün, ehtimal ki, VII faktorun nokautu da ölümcül ola bilər.

F7a/TF kompleksi, sonrakı trombin istehsalına və nəticədə trombin laxtasının əmələ gəlməsinə imkan verən IX və X faktorlarının aktivləşdirilməsini katalizləyir. Pıhtılaşma sisteminin müxtəlif reaksiyalarını, məsələn, aktivləşdirilmiş protein C, protein S, heparin kofaktoru II və antitrombin III -ü tənzimləmək üçün bir neçə antikoagulyant zülal mövcud olsa da, yalnız toxuma faktoru yol inhibitorunun (TFPI 152310) F7a/TF kompleksini inhibə etdiyi bilinir. Chan və başqaları. (1999), Kunitz tipli domeni-1 olmayan və F7 geninin çatışmazlığı olan dəyişdirilmiş TFPI alleli üçün ikiqat heterozigotlu siçanlar yaratdı. Çiftleşme təcrübələri, TFPI modifikasiyası üçün nəsillərin yalnız homozigot olduğunu, ancaq F7 allelinin və F7 çatışmazlığı üçün siçanların tək homozigotunun TFPI wildtype alleli ilə əvvəllər detallı fenotipləri (yəni embrionun 9.5 -ci günündə erkən embrion ölümünün yüksək faizini) göstərdiyini göstərdi. ciddi perinatal qanaxma ilə inkişaf). Təəccüblüdür ki, birləşdirilmiş (ikiqat homozigot) genotipin siçanları gözlənilən mendel tezliyində doğulmuş, lakin F7 -/ - genotipi ilə əlaqəli ölümcül perinatal qanaxma keçirmişlər. Heterozigot F7 və homozigot mutant TFPI genotipini daşıyan siçanlar da F7 və homozigot mutant TFPI genotipləri ilə əlaqəli ölümcül xəstəlikdən xilas edilmiş, lakin perinatal istehlakçı koaqulopatiyaya təslim olmuşlar. Beləliklə, TFPI homozigot mutant embrionlarının ya müşayiət olunan homozigot və ya heterozigot F7 çatışmazlığı ilə xilas edilməsi, F7 fəaliyyətinin azalmasının embriogenez zamanı F7a/toxuma amili laxtalanma yolunun TFPI vasitəçiliyi ilə inhibə edilməsinə ehtiyacı istisna etdiyini göstərir. Bundan əlavə, bu birləşmiş çatışmazlıq hallarının fenotipləri embrion F7-nin siçanlarda embrionun 9.5-ci günündə istehsal olunduğunu və erkən mərhələdə embrionlarda ana F7-nin hər hansı səviyyəsinin homozigot TFPI mutant siçanlarında koaqulopatiyaya səbəb olmaq üçün kifayət etmədiyini irəli sürdü.

Faktor VII geninin əlavə itkisinin C vitamini çatışmazlığı olan (PC-/-) embrionlarda və yenidoğulmuşlarda müşahidə olunan koaqulopatiyaya təsir edib-etmədiyini müəyyən etmək üçün Chan et al. (2000) 2 amil üçün ikiqat heterozigotlu siçanları kəsərək, 9 proqnozlaşdırılan genotipik birləşməyə malik nəsillər meydana gətirdi. İkiqat sıfır embrionlar, gözlənilən Mendel tezliyində mövcud olsalar da, nə VII amil, nə də protein C tək çatışmazlığı olan embrionlarda müşahidə olunmayan bir fenotip nümayiş etdirdilər. E12.5-ci gün postkoitumda ikiqat boş embrionlar, E17.5-ci günə qədər əhəmiyyətli dərəcədə birlikdə qanaxma və periferik ödemlə irəliləyən, doğumdan dərhal sonra ölümlə nəticələnən, damardaxili və damardaxili koagulopatiya nümayiş etdirdi. FVII (+/-)/PC (-/-) embrionları daha az şiddətli bir fenotip göstərdi və bu, gen dozaj effektini göstərir. Əlavə heterozigot və ya homozigot FVII çatışmazlığı nəticəsində əmələ gələn PC-/-embrion və yenidoğulmuşların və artırılmış koaqulopatiyanın olmaması, Xa faktorunun artması (613872) və FVIIa'ya bağlı toxuma faktoru yolunun itirilməsi nəticəsində meydana gələn trombin əmələ gəlməsi ilə əlaqədar olduğu düşünülür. inhibitor funksiyası və Va və VIIIa amilləri səviyyəsində nəzarətin olmaması. VII fetal faktor olmadıqda embrionlarda fibrinin olması, embrion faktor VII-dən asılı olan yolun xaricində əhəmiyyətli laxtalanma potensialının mövcud olduğunu irəli sürdü.

ALLELİK VARİANTLAR 24 Seçilmiş Nümunə):

.0001 FAKTOR VII PADUA

Klinik qanaxma meyli olmayan, lakin dovşan beyin toxuması faktorundan istifadə edərək 1 mərhələli analizdə test edildikdə plazma faktor VII aktivliyi aşkarlanmayan 47 yaşlı kişidə O'Brien et al. (1991), F7 genində bir heterozigot G-to-A keçidini təyin etdi, nəticədə arg304-to-gln (R304Q) əvəzlənməsi ilə nəticələndi. Xəstənin plazmasında VII faktor antigen səviyyəsi normal idi. arg304 qalığı IX faktorun arg333-ə homolojidir və F9-da arg333-to-gln mutasiyası (300746.0056) ağır hemofiliya B (306900) olan xəstələrdə IX faktor zülalının sintezi və ifadəsi olan xəstələrdə müəyyən edilmişdir.

Marchetti və başqaları. (1992) Girolami və digərləri tərəfindən təsvir edilən anormal amil VII Paduanın əsası kimi F7 genində heterozigot R304Q əvəzlənməsini müəyyən etmişdir. (1982) İtaliyanın şimal -şərqindəki Piave çayı vadisindən olan insanlarda. Girolami və digərləri tərəfindən təsvir edilən şəxslər. (1982) asemptomatik idi, lakin protrombin müddətinin mülayim uzanmasını təqdim etdi. VII faktor aktivliyi normalın 45% -dən 61% -ə qədər dəyişdi, lakin faktor VII çarpaz reaksiya verən material normal idi. VII faktor səviyyəsi ilə protrombin vaxtları arasında yaxşı bir mənfi əlaqə tapıldı.

.0002 VII AMİL ƏSASLIĞI

İtaliyanın müxtəlif bölgələrindən faktor VII çatışmazlığı olan 2 xəstədə (227500), Marchetti et al. (1992) F7 genində G-to-T transversiyasını tapdı, nəticədə cys310-to-phe (C310F) əvəzlənməsi baş verdi ki, bu da bütün serin proteazların katalitik domenində qorunan disulfid bağını sıxışdırdı. Homoziqot formada mutasiya proteaz aktivliyinin kəskin azalmasına səbəb oldu (4%).

.0003 VII AMİL ƏSASLIĞI

qismən faktor VII çatışmazlığı (227500) ilə uyğun olaraq, müvafiq olaraq 30% və 37% səviyyəsində F7 antigeni və F7 aktivliyi olan bir xəstədə Marchetti et al. (1993) F7 geninin 7-ci ekzonunda heterozigot G-dən A-ya keçidi müəyyən etdi, nəticədə katalitik domendə cys178-to-tyr (C178Y) əvəzlənməsi baş verdi. Anormallıq cərrahiyyə əvvəli tarama testində aşkar edilmişdir. Neytral dimorfizmlər də tapıldı: biri histidin üçün 115 kodonda, digəri arginin üçün 353 kodonda (R353Q 613878.0014).

.0004 FAKTOR VII YOXLUQ

Ohiwa və başqaları. (1994) uzun müddət protrombin vaxtına malik olduğu qeyd edilən 45 yaşlı proposita vasitəsilə müəyyən edilən bir ailədə VII faktorun (227500) homozigot asimptomatik çatışmazlığı aşkar etdi. İndeks halda VII faktor antigeninin səviyyəsi normanın 25,9%-i, VII faktorun aktivliyinin səviyyəsi isə istifadə edilən testdən asılı olaraq 28% və 24% təşkil etmişdir. Demək olar ki, eyni azalmış VII faktor antijeni və aktivliyi 2 bacısında tapıldı və ilk əmiuşağı, bir oğlu, bir qızı və qızı olan valideynləri həm VII faktor aktivliyi, həm də antigen səviyyələrini orta dərəcədə aşağı saldı. Molekulyar tədqiqatlar exon 8-də G24-a-a (R247H) əvəz edilməsi ilə nəticələnən G-dən A-ya keçidi təyin etdi. Keçici ekspressiya analizləri, əvəzetmənin mutasiyaya uğramış zülalın sekresiyasını pozaraq VII amil çatışmazlığına səbəb olduğunu irəli sürdü. Bu mutasiya VII Mie faktoru olaraq təyin edildi.

.0005 VII AMİL ƏSASLIĞI

Ağır faktor VII çatışmazlığı olan (227500) 36 yaşlı italyan qadında Arbini et al. (1996) F7 genindəki 2 mutasiya üçün mürəkkəb heterozigotluğu təyin etdi: 1994C-T keçidi, nəticədə thr359-to-met əvəzlənməsi (T359M) və intron 4-də G-to-A keçidi (613878.0008) ilə nəticələndi. birləşmə qüsuru və anormal mRNA işlənməsi. Hüceyrə ifadəsi tədqiqatları, T359M mutant zülalının hüceyrədaxili olaraq toplandığını və 3 saatlıq təqibdən sonra mühitdə heç bir faktor VII təsbit edilmədiyini göstərdi. Mutant T359M zülalı ilə əlaqəli karbohidrat yan zəncirləri endo-beta-N-asetilqlükozaminidaza H (endo H) həzminə həssas idi və bu, zülalın endoplazmatik retikulumda saxlandığını göstərirdi. Arbini və başqaları. (1996) belə nəticəyə gəldi ki, F9-da T359M mutasiyası, çox güman ki, molekulun anormal qatlanmasının nəticəsi olan ciddi sekresiya qüsuru ilə nəticələnir. Xəstədə təkrar burun qanaxması, asan qançır, menorragiya, sağ dizin hemartrozu, dişlərin çəkilməsindən sonra böyük qanaxma olub. Xəstənin bir qardaşı 7 yaşında nəzarətsiz qanaxma ilə öldü.

.0006 VII FAKTOR

VII faktor çatışmazlığı olan 13 İsrail xəstəsində (225700), Tamary et al. (1996) F7 genində homozigot 10648C-T keçidini təyin etdi və nəticədə ala244-dən vala (A244V) keçdi. Mutasiya faktor VII aktivliyinin və antigen səviyyəsinin azalması ilə əlaqədardır. On əlavə xəstə mutasiya üçün heterozigot idi. 36 A244V allelinin 20-si Mərakeş, 10-u İran-Yəhudi, 6-sı digər etnik mənşəli xəstələrdə müşahidə edildi. Tamary et al. (1996) A244V əvəzinin bütün protein quruluşunun təhrif olunmasına səbəb ola biləcəyini söyləmişdir. İntragenik polimorf yerlərin analizi (haplotip analizi) Mərakeş və İran-Yəhudi xəstələri üçün qurucu təsirini ortaya qoydu. A244V mutasiyasının Mərakeş yəhudilərində 1:42,5, İran yəhudilərində isə 1:40 allel tezliyinə malik olduğu müəyyən edilib. Mərakeş yəhudiləri 2000 ildən artıqdır ki, İran yəhudilərindən ayrıldıqları üçün məlumatlar A244V mutasiyasının qədim zamanlarda meydana gəldiyini irəli sürür.

.0007 FAKTOR VII YOXLUQ

VII faktor çatışmazlığı olan bir qohumun təsirlənmiş üzvlərində (613878), Leonard et al. (1998) F7 geninin ekzon 5-də heterozigot 5989G-A keçidini təyin etdi, nəticədə VII faktorun EGF1 sahəsində asn75-asp (N57D) amin turşusu dəyişikliyi baş verdi. Fərdlər faktor VII antigeninə nisbətən azalmış prokoaqulyant fəaliyyət göstərmişdir. In vitro funksional ifadə analizləri göstərdi ki, N57D mutasiyası birinci EGF1 domeninin qatlanmasına təsir edir və nəticədə toxuma faktorunu bağlaya bilməyən və buna görə də bioloji cəhətdən qeyri-aktiv olan mutant F7-nin hüceyrə ifrazının azalması ilə nəticələnir.

.0008 VII AMİL ƏSASLIĞI

Qohum valideynlərdən doğan 2 bacı-qardaşda, ağır VII faktor çatışmazlığı (227500), McVey et al. (1998), F7 geninin intron 4-də homozigot G-to-A keçidini təyin etdi, nəticədə yarılma yeri mutasiyası, exon 4-ün atlanması və mRNA kodlayan faktor VII, ilk epidermal böyümənin çərçivə daxilində silinməsi ilə nəticələndi. faktor kimi domen. Mutasiya, intron 4-ün 5-ayrılma yerindəki dəyişməz bir GT dinükleotidində meydana gəldi. Körpə bir qardaş və bacısı, valideynlərinin təsirlənmədiyi ağır faktor VII çatışmazlığı ilə əlaqədar olaraq 10 gün və 1 aylıq yaşda öldü. Bu ailədə VII faktorun tam çatışmazlığı ağır qanaxma diatezi ilə əlaqələndirildi, lakin inkişaf anomaliyaları yoxdur, bu, insanlarda toxuma faktorunun (F3 134390) ehtimal olunan angiogen funksiyaları üçün dölün VII faktorunun tələb olunmadığını göstərir.

Həmçinin baxın 613878.0005 və Arbini et al. (1996).

.0009 FAKTOR VII YOXLUQ

Əməliyyat əvvəli tədqiqatlar zamanı faktor VII çatışmazlığı (227500) kəşf edildiyi kolon polipli 82 yaşlı bir Yapon kişidə Ozawa et al. (1998), F7 genində homozigot 38T-C keçidini təyin etdi və nəticədə siqnal peptidinin hidrofob nüvəsindəki kodon -26 (L-26P) ilə leu-to-pro əvəzlənməsi ilə nəticələndi. Bu əvəzlənmənin zülalın endoplazmatik retikuluma translokasiyasına təsir edəcəyi və plazma faktor VII səviyyəsinin azalmasına səbəb olacağı proqnozlaşdırılır. Xəstədə heç bir hemorragik epizod yox idi, variant VII amil Morioka olaraq adlandırıldı.

.0010 VII AMİL ƏSASLIĞI

Qismən faktor VII çatışmazlığı olan 2 sibdə (227500), Bernardi et al. (1994) F7 genindəki 2 mutasiya üçün mürəkkəb heterozigotluğu müəyyən etdi: ekson 8-də 10798C-T keçidi, nəticədə ala294-dən val (A294V) əvəzlənməsi və çərçivə dəyişikliyinə və vaxtından əvvəl dayandırılmaya səbəb olan 17-bp silinməsi 255 kodonunda (613878.0011). Faktor VII antigen səviyyələri normalın 38% və 25%, aktivlik səviyyəsi isə müvafiq olaraq 18% və 7% idi.

Wulff və Herrmann (2000) Almaniyada apardıqları bir araşdırmada, missense A294V və A294V/11128delC cüt mutasiyasının (613878.0012) ən çox yayılmış olduğunu tapdılar.

.0011 FAKTOR VII YOXLUQ

Bernardi və digərləri tərəfindən qismən VII faktor çatışmazlığı (227500) olan xəstələrdə mürəkkəb heterozigot vəziyyətdə aşkar edilmiş F7 genində 17-bp silinməsinin müzakirəsi üçün. (1994), bax 613878.0010.

.0012 VII AMİL ƏSASLIĞI

VII faktor çatışmazlığı olan Polşalı bir xəstədə (227500) Arbini et al. (1994) F7 genində homozigot 1-bp silinməsini (11128delC) müəyyən etdi, çərçivə dəyişikliyi. Faktor VII antigeni və aktivlik səviyyəsi normanın 4%-dən az idi.

.0013 MİOKARD İNFARKSIYASI, HƏVSİLLİYİN AZALMASI

Girelli və başqaları. (2000), 5-başlı F7 polimorfizmi olaraq bilinən F7 promoterində -323 mövqeyinə 10-bp daxil edilməsinin ağır, angioqrafik olaraq sənədləşdirilmiş xəstələrdə miyokard infarktı riskini (608446) əhəmiyyətli dərəcədə azalması ilə əlaqəli olduğunu tapdı. koronar ateroskleroz. A2 alleli, 10-bp daxil edilməsindən bəhs edildiyi kimi, xəstələrin və nəzarətçilərin təxminən 4% -də homozigotluqda tapıldı. A2 allelinin R353Q polimorfizmi (613878.0014) ilə əlaqə balanssızlığında olduğu aşkar edilmişdir ki, bu da müstəqil olaraq sənədləşdirilmiş koronar aterosklerozu olan xəstələrdə MI hallarının azalması ilə əlaqələndirilir. A2A2 genotipi olan xəstələrdə aktivləşdirilmiş VII faktor səviyyəsi vahşi tip genotipi olanlardan 66% aşağı idi.

.0014 MİOKARD İNFARKSIYASI, HƏVSİLLİYİN AZALMASI

Girelli və başqaları. (2000) F7 genində arg353-to-gln polimorfizmi (R353Q) daşıyan fərdlərin ağır, angioqrafiya ilə sənədləşdirilmiş koronar ateroskleroza baxmayaraq, miokard infarktı (608446) hallarının nəzərəçarpacaq dərəcədə azaldığını aşkar etdi. QQ genotipi, aktivləşdirilmiş VII faktor aktivliyinin vəhşi tip genotipinə nisbətən 72% azalması ilə əlaqələndirilmişdir. Q allelinin heterozigot daşıyıcıları, vahşi tip genotipi olan xəstələrlə müqayisədə 0.47 MI riski daşıyırdı (95% CI, 0.27-0.81). Q allelinin 5 əsas F7 polimorfizminin (613878.0013) A2 alleli ilə əlaqə balanssızlığında olduğu aşkar edilmişdir. Hər biri müstəqil olaraq ağır koronar aterosklerozu olan xəstələrdə Mİ riskinin azalması ilə əlaqələndirilirdi.

.0015 FAKTOR VII YOXLUQ

Arbini və başqaları. (1997) ağır faktor VII çatışmazlığı olan bir xəstədə F7 geninin 5-əsas tənzimləyici bölgəsi daxilində -61 mövqeyində homozigot T-to-G əvəzini təyin etdi (227500). Mutasiya HNF4 (600281) yetim nüvə reseptoru ilə qarşılıqlı əlaqəni tamamilə aradan qaldırdı. Böyümə hormonu müxbiri gen analizlərində mutant promotoru ehtiva edən plazmidin aktivliyi vəhşi növün 6,7%-i olmuşdur. Tapıntılar HNF4-ün F7 ifadəsinə böyük müsbət tənzimləyici təsir göstərdiyini göstərdi və bu transkripsiya amilinin bağlanmasının normal faktor VII ifadəsi üçün kritik olduğunu in vivo sübut etdi.

.0016 FAKTOR VII YOXLUQ

VII faktor çatışmazlığı olan qohum ailədən olan Fransız Kanadalı bir xəstədə (227500), Carew et al. (1998) F7 geninin 5-əsas tənzimləyici bölgəsində -94 mövqeyində homozigot C-dən G transversiyasını müəyyən etdi. Mutasiya Sp1 (189906) və digər nüvə zülalları ilə bağlanma və aktivləşmənin qarşısını aldı. Xəstədə VII faktor antigeninin və VII faktorun koaqulyant aktivliyinin qalıq plazma səviyyəsi 1%-dən az idi və hemartrozlar və xroniki artropatiya nümayiş etdirdi. Məlumatlar F7 promotorunun bu bölgəsinin F7 geninin in vivo ifadəsi üçün əhəmiyyətini vurğuladı.

.0017 VII AMİL ƏSASLIĞI

Carew və başqaları. (2000), F7 genində 2 mutasiya üçün mürəkkəb heterozigot olan VII faktor çatışmazlığı (227500) olan 25 yaşlı Polşalı bir kişini təsvir etdi. Ata allelində 3 struktur gen anormallığı var idi və ana alleli tərcümənin başlanğıc sahəsinə nisbətən -55 mövqeyində C-dən T-yə keçidi həyata keçirdi. Bu mutasiya HNF4 (600281) transkripsiya aktivatorunun F7 promoterinə bağlanmasına qismən mane olur, eyni zamanda qaraciyər hüceyrələrində müxbir gen ifadəsini xeyli azaldır.

.0018 FAKTOR VII YOXLUQ

VII faktor çatışmazlığı (225700) olan 55 yaşlı Çinli qadında Au et al. (2000) F7 genindəki 2 mutasiya üçün mürəkkəb heterozigotluğu müəyyən etdi: 4-cü ekzonda 6003C-A transversiyası, nəticədə cys61-dən ter (C61X) əvəzlənməsi və 8-ci eksonda 10902T-G transversiyası, cys329 ilə nəticələnir. -to-gly (C329G 613878.0019) əvəzlənməsi. O, hemoptizi və sağ çiyin ağrısı ilə müraciət etdi və xroniki hemofilik artropatiya ilə uyğun gələn sağ çiyin artritinin olduğu aşkar edildi. 3 komplikasız vajinal doğuş keçirmiş və anormal qanaxma tarixi barədə məlumat verməmişdir. Ancaq 2 kiçik qardaşının biri doğulduqda, digəri 9 aylıq olanda qanaxmadan öldü. Bu mutasiyalardan birincisi üçün iki qız heterozigot idi və mənasız bir mutasiyaya uyğun bir fenotip göstərdi, bir qızı C329G mutasiyası üçün heterozigot idi və missens mutasiyasına uyğun normal antijen səviyyələri göstərdi. Au və başqaları. (2000), bunların Çində bildirilən ilk F7 mutasiyalar olduğunu ifadə etdi.

.0019 VII AMİL ƏSASLIĞI

Au et al tərəfindən VII faktor çatışmazlığı (225700) olan bir xəstədə mürəkkəb heterozigot vəziyyətdə aşkar edilmiş F7 genindəki cys329-to-gly (C329G) mutasiyasının müzakirəsi üçün. (2000), bax 613878.0018.

.0020 FAKTOR VII YOXLUQ

Şiddətli VII faktor çatışmazlığı (227500) nəticəsində təkrarlanan intratorasik qanaxma, beyin qanaması və mədə-bağırsaq qanaxması olan 10 aylıq yapon kişisində (227500), Takamiya və Okimoto (2001) F7109 a genində birləşmə heterozigotluğu tapdılar: Ekson 8-də T keçidi, nəticədə gln211-dən-ter (Q211X) mutasiya və 6071 nukleotidində (başqa yerdə 6070 kimi qeyd olunur) G-dən A dəyişikliyi, intron 4 (613878.0008).

.0021 VII AMİL ƏSASLIĞI

Faktor VII aktivliyi və antijen səviyyəsi normal olaraq 1,2% və 21% olan asemptomatik 46 yaşlı bir Yapon kişidə Nagaizumi et al. (2002) F7 genində 2 yeni mutasiya tapdı: 2-ci ekzonda 3895G-A keçidi, nəticədə glu25-dən lise (E25K) mutasiyası və 8-ci eksonda 10961T-G keçidi, nəticədə his348-ə -gln (H348Q 613878.0022) mutasiyası. Tapıntılar qismən faktor VII çatışmazlığı ilə uyğundur (227500).Müəlliflər, hər iki mutasiyanın 'ikiqat heterozigot vəziyyətdə' olduğunu, ancaq ikiqat heterozigotluğun 2 ayrı lokusun hər birində heterozigotluq olduğu üçün 'mürəkkəb heterozigot vəziyyətdə' olduğunu söyləməli olduğunu bildirdilər.

.0022 VII AMİL ƏSASLIĞI

Qismən faktor VII çatışmazlığı olan bir xəstədə mürəkkəb heterozigot vəziyyətdə olan F7 genindəki his348-to-gln (H348Q) mutasiyasını müzakirə etmək üçün (227500) Nagaizumi et al. (2002), bax 613878.0021.

.0023 FAKTOR VII YOXLUQ

Təsadüfi burun qanaxması olan bir yapon qadında Takamiya və Hino (2004) həm VII faktorun koaqulyant aktivliyinin, həm də antigenin (227500) aşağı səviyyələrini aşkar etmişlər. Zülalın katalitik sahəsindəki gly354-to-cys (G354C) mutasiyası üçün homozigot idi. Haplotip analizi bu mutasiyanın qohum valideynlərindən miras qaldığını göstərdi. Hüceyrədaxili faktor VII cys354 normal zülalın 67% -i olduğu təxmin edilsə də, mediada keçici eksperiment təcrübələri zamanı həm antigen, həm də laxtalanma aktivliyi, VII yabanı tip faktorundan ayrılan səviyyələrin müvafiq olaraq 5% və 4% -ə qədər azaldıldı. Takamiya və Hino (2004), VII faktor molekulunda əlavə bir sərbəst sistein qalığının tətbiq edilməsinin qeyri -qanuni disulfid bağları və səhv bir sahənin meydana gəlməsi ilə nəticələndiyini, qüsurlu sekresiyaya səbəb olduğunu irəli sürdülər.

.0024 FAKTOR VII YOXLUQ

VII faktor çatışmazlığı olan 24 yaşlı bir kişidə (227500), Bharadwaj et al. (1996), F7 geninin exon 8-də homozigot 10907T-C keçidini təyin etdi və nəticədə zülalın katalitik sahəsindəki bir phe328-to-ser (F328S) əvəzlənməsi ilə nəticələndi. Xəstənin plazma faktoru VII antijeni normalın 38% -i idi, lakin faktor VII aktivliyi normalın 1% -dən az idi. Funksional ifadə tədqiqatları göstərdi ki, mutant zülal toxuma faktoruna 2 qat azalmışdır və Xa faktoru aktivləşdirildikdən sonra toxuma faktorunun iştirakı ilə faktor X (bax 227600) və ya IX (300746) aktivləşdirilməmişdir. Xa faktoru ilə mutant F328S faktor VII aktivləşmə sürəti yabanı növlə müqayisədə xeyli azaldı. Kompüter modelləşdirməsi və molekulyar dinamika simulyasiyaları, F328S faktor VIIa-nın substratları parçalaya bilməməsinin substratın arginin tərəfinin qarşılıqlı əlaqəsi üçün vacib olan substratı bağlayan cibinin altındakı bir qalıq olan tyr377 və asp338 arasında hidrogen bağının aşkar meydana gəlməsi ilə nəticələndiyini irəli sürdü. fermenti olan zəncirlər. Bharadwaj və başqaları. (1996) protrombin (176930), faktor IX, faktor X, faktor VII və tripsində (276000) konservləşdirilmiş phe328 -in faktor VIIa katalizi üçün vacib olduğu qənaətinə gəldi.

Həmçinin bax:

İSTİFADƏLƏR

Arbini, A. A., Bodkin, D., Lopaciuk, S., Bauer, K. A. VII faktor çatışmazlığı olan Polşa xəstələrinin molekulyar analizi. Blood 84: 2214-2220, 1994. [PubMed: 7919338] [Tam mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)76504-3]

Arbini, A. A., Mannucci, P. M., Bauer, K. A. İrsi çatışmazlığı olan bir xəstənin VII faktorunda thr359-to-met mutasiyası molekulun qüsurlu sekresiyasına səbəb olur. Qan 87: 5085-5094, 1996. [PubMed: 8652821] [Tam Mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)61207-1]

Arbini, A. A., Pollak, E. S., Bayleran, J. K., Yüksək, K. A., Bauer, K. A. Bir mutasiya səbəbiylə ağır faktor VII çatışmazlığı, VII faktor promoterində hepatosit nüvə faktoru 4 bağlanma sahəsini pozur. Blood 89: 176-182, 1997. [PubMed: 8978290] [Tam mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)76795-9]

Au, W. Y., Lam, C. C. K. K., Chan, E. C., Kwong, Y. L. VII faktor çatışmazlığı olan bir Çin ailəsində iki yeni faktor VII gen mutasiyası. Brit. J. Haemat. 111: 143-145, 2000. [PubMed: 11091194] [Tam Mətn: https://onlinelibrary.wiley.com/resolve/openurl?genre=article&sid=nlm:pubmed&issn=0007-1043-1048&s=0000000000000000000000000000000001... ]

Bernardi, F., Castaman, G., Redaelli, R., Pinotti, M., Lunghi, B., Rodeghiero, F., Marchetti, G. VII (294ala-val) və X (334ser-pro) funksional laxtalanma faktorlarına səbəb olan topoloji ekvivalent mutasiyalar. zümzümə. Molec. Genet. 3: 1175-1177, 1994. [PubMed: 7981691] [Tam Mətn: https://academic.oup.com/hmg/article-lookup/doi/10.1093/hmg/3.7.1175]

Bharadwaj, D., Iino, M., Kontoyianni, M., Smith, K. J., Foster, D. C., Kisiel, W. Faktor VII mərkəzi: toxuma amilinin bağlanmasını azaldan, Xa faktoru ilə aktivləşməni pozan, amidolitik və koaqulyant fəaliyyətini ləğv edən katalitik sahədə yeni mutasiya. J. Biol. Kimya 271: 30685-30691, 1996. [PubMed: 8940045] [Tam Mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0021-9258(19)79118-2]

Carew, J. A., Pollak, E. S., High, K. A., Bauer, K. A. VII amil stimulyatorundakı Sp1 bağlanma sahəsini pozan mutasiya səbəbiylə ağır faktor VII çatışmazlığı. Qan 92: 1639-1645, 1998. [PubMed: 9716591] [Tam mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)74116-9]

Carew, J. A., Pollak, E. S., Lopaciuk, S., Bauer, K. A. VII faktor çatışmazlığı olan bir xəstədə faktor VII promoterinin HNF4 bağlanma bölgəsində yeni bir mutasiya. Blood 96: 4370-4372, 2000. [PubMed: 11110717] [Tam mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)48198-4]

Chan, J.C.Y., Carmeliet, P., Moons, L., Rosen, E.D., Huang, Z.-F., Broze, G.J., Jr., Collen, D., Castellino, F.J. Faktor VII çatışmazlığı, toxuma faktoru yolu inhibitoru çatışmazlığı ilə əlaqəli siçanlarda intrauterin ölümcülliyi xilas edir. J. Klin. İnvestisiya edin. 103: 475-482, 1999. [PubMed: 10021455] [Tam mətn: https://doi.org/10.1172/JCI5678]

Chan, J. C. Y., Cornelissen, I., Collen, D., Ploplis, V. A., Castellino, F. J. Birləşdirilmiş faktor VII/protein C çatışmazlığı siçanlarda intrauterin koaqulopatiya ilə nəticələnir. J. Klin. İnvestisiya edin. 105: 897-903, 2000. [PubMed: 10749569] [Tam Mətn: https://doi.org/10.1172/JCI9095]

Cooper, D. N., Millar, D. S., Wacey, A., Banner, D. W., Tuddenham, E. G. D. VII faktor çatışmazlığı: molekulyar genetika və patofizyoloji. Tromb. Haemost. 78: 151-160, 1997. [PubMed: 9198146]

de Grouchy, J., Dautzenberg, M.-D., Turleau, C., Beguin, S., Chavin-Colin, F. 13q34-ə qədər laxtalanma faktorları VII və X-in regional xəritələşdirilməsi: 8-ci xromosom vasitəsilə faktor VII ifadəsi. zümzümə. Genet. 66: 230-233, 1984. [PubMed: 6714981] [Tam mətn: https://dx.doi.org/10.1007/BF00286607]

de Grouchy, J., Josso, F., Beguin, S., Turleau, C., Jalbert, P., Laurent, C. VII de laxtalanma çatışmazlığı trisomiques 8. Ann. Genet. 17: 105-108, 1974. [PubMed: 4547936]

Denson, K.W.E., Conrad, J., Samama, M. VII faktorun genetik variantları. (Məktub) Lancet 299: yalnız 1234, 1972. Qeyd: Orijinal Cild I. [PubMed: 4113214] [Tam Mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0140-6736(72)90951-8]

Di Bitondo, R., Hall, A. J., Peake, I. R., Iacoviello, L., Winship, P. R. İnsan koagulyasiya faktoru VII ifadəsinin estrogenik repressiyası, promotor bölgədə bir estrogen cavab elementi ardıcıllığı motivi vasitəsi ilə. zümzümə. Molec. Genet. 11: 723-731, 2002. [PubMed: 11929845] [Tam mətn: https://academic.oup.com/hmg/article-lookup/doi/10.1093/hmg/11.7.723]

Fagan, K., Wilkinson, I., Allen, M., Brownlea, S. Koaqulyasiya faktoru VII tənzimləyicisi 8p23.1-də yerləşir. zümzümə. Genet. 79: 365-367, 1988. [PubMed: 3410461] [Tam Mətn: https://dx.doi.org/10.1007/BF00282178]

Fineman, R. M., Ablow, R. C., Breg, W. R., Wing, D., Rose, J. S., Rothman, L. G., Warpinski, J. 8 -ci xromosomun müxtəlif seqmentlərinin tam və qismən trisomiyası: Vəziyyət məlumatları və baxış. Clin. Genet. 16: 390-398, 1979. [PubMed: 527246] [Tam Mətn: https://onlinelibrary.wiley.com/resolve/openurl?genre=article&sid=nlm:pubmed&issn=0009-9163&6039&6e=page&6e=page ]

Fineman, R. M., Ablow, R. C., Howard, R. O., Olbright, J., Breg, W. R. Trisomiya 8 mozaizm sindromu. Pediatriya 56: 762-767, 1975. [PubMed: 1196733] [Tam Mətn: http://pediatrics.aappublications.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=1196733]

Furie, B., Furie, B. C. Qan laxtalanmasının molekulyar və hüceyrə biologiyası. Yeni Müh. J. Med. 326: 800-806, 1992. [PubMed: 1538724] [Tam Mətn: https://www.nejm.org/doi/10.1056/NEJM199203193261205?url_ver=Z39.88:ampr_frsprc=Z39.88:ampr_fr_frc= %3dpubmed]

Giansily-Blaizot, M., Aguilar-Martinez, P., Biron-Andreani, C., Jeanjean, P., Igual, H., Schved, J.-F., The Study Group of Factor Seven çatışmazlığı. İrsi faktor VII çatışmazlığı ilə əlaqəsi olmayan 37 xəstənin genotiplərinin və fenotiplərinin təhlili. Avropa. J. Hum. Genet. 9: 105-112, 2001. [PubMed: 11313743] [Tam Mətn: https://doi.org/10.1038/sj.ejhg.5200593]

Gilgenkrantz, S., Briquel, M.-E., Andre, E., Alexandre, P., Jalbert, P., Le Marec, B., Pouzol, P., Pommereuil, M. 13q34 -də yerləşən VII və X laxtalanma faktorlarının struktur genləri. Ann. Genet. 29: 32-35, 1986. [PubMed: 3487272]

Girelli, D., Russo, C., Ferraresi, P., Olivieri, O., Pinotti, M., Friso, S., Manzato, F., Mazzucco, A., Bernardi, F., Corrocher, R. VII faktor genində polimorfizmlər və koronar arteriya xəstəliyi olan xəstələrdə miokard infarktı riski. Yeni Müh. J. Med. 343: 774-780, 2000. [PubMed: 10984565] [Tam Mətn: https://www.nejm.org/doi/10.1056/NEJM200009143431104?url_ver=Z39.88-amprfrc:Z39.88:amprfrc.2008 %3dpubmed]

Girolami, A., Kattarozzi, G., Dal Bo Zanon, R., Cella, G., Toffanin, F. Faktor VII Padua-2: qüsurlu öküz beyin tromboplastin aktivasiyası və mürəkkəb irsi nümunə ilə başqa bir faktor VII anormallığı. Blood 54: 46-53, 1979. [PubMed: 444674] [Tam mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)72627-3]

Girolami, A., Dal Bo Zanon, R., Zanella, F., Procidano, M., Ruffato, G. Faktor VII Padua qüsuru: heterozigot populyasiyası. Acta Haemat. 68: 34-38, 1982. [PubMed: 6812354] [Tam mətn: https://www.karger.com?DOI=10.1159/000206945]

Girolami, A., Falezza, G., Patrassi, G., Stenico, M., Vettore, L. Faktor VII Verona laxtalanma pozğunluğu: anormal VII faktor və heterozigot faktor VII çatışmazlığı olan ikiqat heterozigoz. Blood 50: 603-610, 1977. [PubMed: 901936] [Tam mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)72744-8]

Girolami, A., Patrassi, G., Cappellato, G., Casonato, A. VII faktor Padua laxtalanma qüsuru olan başqa bir ailə. Acta Haemat. 62: 4-11, 1979.

Hagen, F. S., Grey, C. L., O'Hara, P., Grant, F. J., Saari, G. C., Woodbury, R. G., Hart, C. E., Insley, M., Kisiel, W., Kurachi, K., Davie, E. W. İnsan faktoru VII üçün kodlaşdırma cDNT-nin xarakteristikası. Proc. Nat. Akad. Elmi. 83: 2412-2416, 1986. [PubMed: 3486420] [Tam mətn: http://www.pnas.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=3486420]

Leonard, B. J. N., Chen, Q., Blajchman, M. A., Ofosu, F. A., Sridhara, S., Yang, D., Clarke, B. J. Birinci epidermal böyümə faktoru sahəsinin N57D struktur variantından qaynaqlanan VII faktor çatışmazlığı. Qan 91: 142-148, 1998. [PubMed: 9414278] [Tam mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)54890-8]

Marchetti, G., Ferrati, M., Patracchini, P., Redaelli, R., Bernardi, F. İnsan pıhtılaşma faktoru VII genində bir missens mutasiya (178cys-to-tyr) və iki neytral dimorfizm (115his və 333ser). zümzümə. Molec. Genet. 2: 1055-1056, 1993. [PubMed: 8364544] [Tam Mətn: https://academic.oup.com/hmg/article-lookup/doi/10.1093/hmg/2.7.1055]

Marchetti, G., Patracchini, P., Gemmati, D., DeRosa, V., Pinotti, M., Rodorigo, G., Casonato, A., Girolami, A., Bernardi, F. VII faktor genində (F7) iki səhv mutasiyaların aşkarlanması və təkrar polimorfizmin səciyyələndirilməsi. zümzümə. Genet. 89: 497-502, 1992. [PubMed: 1634227] [Tam Mətn: https://dx.doi.org/10.1007/BF00219173]

McVey, J. H., Boswell, E. J., Takamiya, O., Tamagnini, G., Valente, V., Fidalgo, T., Layton, M., Tuddenham, E. G. D. VII faktorun ilk EGF sahəsinin birləşmə yeri mutasiyası ilə xaric edilməsi ölümcül faktor VII çatışmazlığına səbəb olur. Qan 92: 920-926, 1998. [PubMed: 9680360] [Tam mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)53709-9]

McVey, J. H., Boswell, E., Mumford, A. D., Kemball-Cook, G., Tuddenham, E. G. D. Faktor VII çatışmazlığı və FVII mutasiya bazası. zümzümə. Mutat. 17: 3-17, 2001. [PubMed: 11139238] [Tam Mətn: https://doi.org/10.1002/1098-1004(2001)17:1<3::AID-HUMU2>3.0.CO2-V]

Millar, DS, Kemball-Cook, G., McVey, JH, Tuddenham, EGD, Mumford, AD, Attock, GB, Reverter, JC, Lanir, N., Parapia, LA, Reynaud, J., Meili, E., von Felton, A., Martinowitz, U., Prangnell, DR, Krawczak, M., Cooper, DN VII faktor çatışmazlığında genotip-fenotip əlaqəsinin molekulyar təhlili. zümzümə. Genet. 107: 327-342, 2000. [PubMed: 11129332] [Tam Mətn: https://dx.doi.org/10.1007/s004390000373]

Nagaizumi, K., İnaba, H., Suzuki, T., Hatta, Y., Hagiwara, T., Amano, K., Arai, M., Fukutake, K. F7 genindəki iki cüt heterozigot mutasiya fərqli təzahürlər göstərir. Brit. J. Haemat. 119: 1052-1058, 2002. [PubMed: 12472587] [Tam Mətn: https://onlinelibrary.wiley.com/resolve/openurl?genre=article&sid=nlm:pubmed&issn=0007-1048&date=2002&volume=119&issue=59 ]

O'Brien, D. P., Gale, K. M., Anderson, J. S., McVey, J. H., Miller, G. J., Meade, T. W., Tuddenham, E. G. D. VII 304-gln faktorunun saflaşdırılması və xarakteristikası: kliniki cəhətdən təsirlənməmiş bir kişidən təcrid olunmuş aktivliyi aşağı olan variant molekul. Blood 78: 132-140, 1991. [PubMed: 2070047] [Tam mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)82987-5]

O'Hara, P. J., Grant, F. J., Haldeman, B. A., Grey, C. L., Insley, M. Y., Hagen, F. S., Murray, M. J. Qanın laxtalanmasında iştirak edən K vitaminindən asılı zülal olan insan faktoru VII üçün kodlaşdıran genin nukleotid ardıcıllığı. Proc. Nat. Akad. Elmi. 84: 5158-5162, 1987. [PubMed: 3037537] [Tam mətn: http://www.pnas.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=3037537]

Ohiwa, M., Hayashi, T., Wada, H., Minamikawa, K., Shirakawa, S., Suzuki, K. Faktor VII Mie: onun (CAC) katalitik sahədə arg(247) (CGC) ilə amin turşusu əvəzlənməsi nəticəsində yaranan homozigot asimptomatik tip I çatışmazlıq. Tromb. Haemost. 71: 773-777, 1994. [PubMed: 7974346]

Ozawa, T., Takikawa, Y., Niiya, K., Ejiri, N., Suzuki, K., Sato, S., Sakuragawa, N. Faktor VII Morioka (FVII L-26P): amil VII çatışmazlığı olan bir xəstədə müəyyən edilmiş siqnal ardıcıllığında homozigot səhv mutasiya. Brit. J. Haemat. 101: 47-49, 1998. [PubMed: 9576180] [Tam mətn: https://onlinelibrary.wiley.com/resolve/openurl?genre=article&sid=nlm:pubmed&issn=0007-1048&date=1998&volume=101&issue=7&issue=7 ]

Pike, A. C. W., Brzozowski, A. M., Roberts, S. M., Olsen, O. H., Persson, E. VIIa insan faktorunun strukturu və onun qan laxtalanmasının tetiklenmesi üçün təsiri. Proc. Nat. Akad. Elmi. 96: 8925-8930, 1999. [PubMed: 10430872] [Tam mətn: http://www.pnas.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=10430872]

Ratnoff, OD, Bennett, B. Qan laxtalanmasının irsi pozğunluqlarının genetikası. Elm 179: 1291-1298, 1973. [PubMed: 4568863] [Tam Mətn: https://www.sciencemag.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=4568863]

Stenbjerg, S., Husted, S., Bernsen, A., Jacobsen, P., Nielsen, J., Rasmussen, K. Trisomiya 8 sindromu olan xəstələrdə laxtalanma tədqiqatları. Ann. Genet. 18: 241-242, 1975. [PubMed: 1083193]

Takamiya, O., Hino, K. VII faktorunda gly354-to-cys mutasiyası üçün homozigot olan, molekulun ifrazını ciddi şəkildə pozan, lakin tam çatışmazlığı olmayan bir xəstə. Brit. J. Haemat. 124: 336-342, 2004. [PubMed: 14717781] [Tam Mətn: https://onlinelibrary.wiley.com/resolve/openurl?genre=article&sid=nlm:pubmed&issn=0007-1042=0007-10428&amp308& ]

Takamiya, O., Okimoto, Y. IVS4-ün birləşmə yeri mutasiyası üçün ikiqat heterozigotluq və 8-ci ekzonda yeni bir cəfəngiyat mutasiyası səbəbindən təkrarlanan kəllədaxili qanaxmalarla ağır VII faktor çatışmazlığı (Gln211-Term). Brit. J. Haemat. 114: 369-374, 2001. [PubMed: 11529858] [Tam Mətn: https://onlinelibrary.wiley.com/resolve/openurl?genre=article&sid=nlm:pubmed&issn=0007-1049=0007-104988& ]

Tamary, H., Fromoviç, Y., Shalmon, L., Reich, Z., Dym, O., Lanir, N., Brenner, B., Paz, M., Luder, AS, Blau, O., Korostişevski , M., Zaizov, R., Seligsohn, U. Ala244val, Mərakeş və İran Yəhudilərində VII faktor çatışmazlığına səbəb olan ümumi, ehtimal ki, qədim bir mutasiyadır. Tromb. Haemost. 76: 283-291, 1996. [PubMed: 8883260]

Tariverdian, G., Schroeder-Kurth, T., Zimmermann, R. 13-cü halqalı xromosomlu qızda laxtalanma faktorlarının VII və X çatışmazlığı.(Avtomatik) 7 -ci Beynəlxalq İnsan Genetiği Konqresi, Berlin 1986. S. 76.

Toomey, J. R., Kratzer, K. E., Lasky, N. M., Stanton, J. J., Broze, G. J., Jr. Siçan toxuması faktoru geninin hədəflənmiş pozulması embrion ölümünə səbəb olur. Qan 88: 1583-1587, 1996. [PubMed: 8781413] [Tam Mətn: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0006-4971(20)63510-8]

Wulff, K., Herrmann, F. H. VII faktor çatışmazlığında faktor VII geninin iyirmi iki yeni mutasiyası. zümzümə. Mutat. 15: 489-496, 2000. [PubMed: 10862079] [Tam mətn: https://doi.org/10.1002/1098-1004(200006)15:6<489::AID-HUMU1>-30].

Zur, M., Nemerson, Y. Doku faktorunun qan laxtalanma yolları. In: Bloom, A. L. Thomas, D. P. (red.): Hemostaz və Tromboz. Edinburq: Churchill Livingstone (pub.) 1981. Sf. 124-139.


Typhonium flagelliforme kaspaza-9, PARP parçalanması və sitoxromun aktivləşdirilməsi yolu ilə CEMss hüceyrələrində apoptozu induksiya edir. c buraxılması: G0/G1 faza hüceyrə dövrü həbs ilə birlikdə aktivləşdirilməsi

Bitki Typhonium flagelliforme Malayziyada 'gəmirici yumru' olaraq bilinən (TF) tez -tez lösemi də daxil olmaqla xərçəng üçün ənənəvi vasitə kimi istifadə olunur.

Tədqiqatın məqsədi

Bu bitkinin kök yumrularından alınan linoleik turşusu ilə zəngin olan fraksiya (DCM/F7), CEMss hüceyrələrində selektiv anti-proliferativ təsirlərə və apoptoza səbəb olduğunu əvvəllər morfoloji olaraq müəyyən etmişdik. Bu hazırkı işdə, lösemik CEMss hüceyrələrində hüceyrə ölümünün mümkün mexanizmini müəyyən etmək üçün eyni DCM/F7 fraksiyasını hüceyrə əsaslı fəaliyyət analizlərinə məruz qoymuşuq. in vitro.

Materiallar və metodlar

çıxarılması Typhonium flagelliforme yumru bitmiş və fraksiya vakuum maye sütun xromatoqrafiyası ilə aparılmışdır. Anti-proliferativ fəaliyyət MTT istifadə edərək yoxlanıldı və apoptozun aşkarlanması Annexin V və DNT laddering testi ilə aparıldı. Hüceyrə ölümü ilə əlaqəli zülalın ifadəsini aşkar etmək üçün kolorimetrik kaspaz təhlili və immunoblot təhlili istifadə edilmişdir. Hüceyrə dövrü analizi axın sitometriyasından istifadə etməklə aparılır.

Nəticələr

CEMss hüceyrələrində DCM/F7 fraksiyasının xərçəng inhibitor təsirinin 3 ± 0,08 μg/ml (IC) olduğunu aşkar etdik.50). CEMss hüceyrələrində erkən apoptotik induksiya 10 və 20 μg/ml gel elektroforezində müşahidə olunan aydın bir doza bağlı DNT parçalanmasını göstərən Annexin V testi ilə müşahidə edildi. 3 μg/ml -də DCM/F7 fraksiyası, G0/G1 fazasında CEMss hüceyrələrini əhəmiyyətli dərəcədə həbs etdi (səh & lt 0.05). 12 və 72 saat müalicə arasında sabit, lakin artan nümunə ilə əlaqəli Sub-G0/G1 indeksi müşahidə edildi. Bununla əlaqədar olaraq, hüceyrə ölümünə səbəb olan biokimyəvi hadisələri daha da araşdırdıq və DCM/F7 fraksiyasının müalicə olunan hüceyrələrdə kaspaza-3 və -9 hüceyrə səviyyələrini artırdığını aşkar etdik. Nəticələrimiz göstərdi ki, DCM/F7 konsentrasiyası artdıqca mitokondriyadan sitozola çevrilən sitokrom c tədricən artmışdır və bu sonradan PARP -ın 85 kDa parçasına parçalanmasına səbəb olur. Əksinə, müalicə zamanı Bcl-2 zülalının eyni vaxtda azaldığı aşkar edilmişdir.

Nəticələr

Kollektiv olaraq, bu işdə təqdim olunan nəticələr, DCM/F7 fraksiyasının mitokondrial yolla keçdiyi təsdiqlənmiş proqramlaşdırılmış hüceyrə ölümünə səbəb olan lösemi hüceyrələrinin çoxalmasını inhibə etdiyini göstərdi.


GİRİŞ

Böyük cis-tənzimləyici region BX-C anteroposterior (AP) oxu boyunca üç BX-C homeotik geninin ifadəsini idarə edən doqquz paraseqmentə xas xromatin domeninə bölünür (Ubx, abd-AAbd-B.) (rəylər üçün bax Duncan, 1987 Maeda and Karch, 2006). Bu genlərin parazemaya xas olan dəqiq ifadə nümunəsi, milçəyin arxa üçdə ikisinin hər seqmentinin seqment kimliyini təyin edir. Hər bir domen domen sərhədləri kimi tanınan ixtisaslaşdırılmış elementlər tərəfindən ayrıca və muxtar saxlanılır (Barges və digərləri, 2000 Gyurkovics et al., 1990 Karch et al., 1994 Mihaly et al., 1997). Transgen konstruksiyalarda bu sərhəd elementləri gücləndirici ilə onun hədəf promotoru arasında yerləşdirildikdə gücləndirici fəaliyyətini bloklayan izolyator kimi davranır (Barges et al.,2000 Gruzdeva et al.,2005 Hagstrom et al.,1996 Zhou et al.,1996). Bununla birlikdə, doğma kontekstində, tez -tez bir gücləndirici və hədəf təşviqçisi arasında tapılır. BX-C gücləndiricilərinin aralarındakı sərhədləri necə aşması hələ də mübahisə mövzusudur.

Sərhədlərin silinməsi göstərir ki, bu elementlər böyük cis-tənzimləyici region daxilində gücləndiricilərə və səsboğuculara funksional muxtariyyət təmin etmək üçün tələb olunur. The Fab-7 sərhəd elementi, məsələn, normal olaraq ayıran tapılır iab-6iab-7 cis-tənzimləyici sahələr (bax. Şəkil 1A). The iab-6 artırıcı bölgə səviyyəsini nəzarət edir Abd-B. paraqraf 11 -də (PS11) ifadəsi və A6 seqmentinin kimliyini təyin edir. The iab-7 bölgə, ancaq səviyyəsini nəzarət edir Abd-B.PS12-də ifadə və A7 seqmentinin kimliyini təyin edir (Celniker et al., 1990 Galloni et al., 1993 Mihaly et al., 2006 Sanchez-Herrero, 1991). Nə vaxt Fab-7 silinir, iab-6iab-7 domenlər tək bir domen halına gəlir və hər ikisinə də imkan verir iab-6iab-7 PS11 və PS12 -də aktiv olmaq üçün gücləndiricilər və ya səsboğucular. PS11-də əksər xanalarda iab-7 gücləndiricilər tərəfindən aktivləşdirilir iab-6 PS11/A6 -nın PS12/A7 -yə homeotik çevrilməsi ilə nəticələnən başlanğıc elementləri. Bununla birlikdə, PS11 -in digər hüceyrələrində iab-6təşəbbüskarlar əvvəllər əridilmiş domeni aktivləşdirə bilmirlər iab-7 Polycomb Response Elements (PRE) domeni susdurur və bu hüceyrələrin PS10/A5 kimliyini almasına səbəb olur (Galloni və digərləri, 1993 Gyurkovics və digərləri, 1990 Mihaly və digərləri, 1997).

kimi izolyatorları daha əvvəl göstərmişdik qaraçı(Geyer və Corces, 1992) və ya scs (Kellum və Schedl, 1992) əvəz edə bilməz Fab-7 daxilində BX-C (Hogga et al., 2001). Bu izolyatorların hər ikisi distal arasındakı qarşılıqlı əlaqəni bloklayır Abd-B. gücləndiricilər və Abd-B. təşviqatçı. Sərhədlərinin olub olmadığını yoxlamaq üçün BX-C funksional olaraq bir -birimizi əvəz edə bilərik Fab-7Fab-8 daxilində sərhədlər BX-C. Bu iki sərhəd oxşar funksiyaları yerinə yetirsə də, onlar az ardıcıllıq eyniliyini bölüşürlər. Təəccüblüdür ki, biz bunu tapırıq Fab-7 sərhədi demək olar ki, tamamilə əvəz edə bilər Fab-8 sərhəd funksiyası mexanizmində müasir ardıcıllıqla təhlil etməklə proqnozlaşdırıla bilməyən bir oxşarlığın olduğunu göstərir.


Epigenetik plastiklik sümük iliyindən əldə edilən mezenximal kök hüceyrələrin adipogen və osteogenik diferensiasiyasına təkan verir*

Multipotent kök hüceyrələrin terminal diferensiasiyası aktivləşdirilmiş transkripsiya faktorlarının və epigenetik modifikasiyaların əlaqələndirilmiş kaskadı vasitəsilə əldə edilir ki, bu da unikal hüceyrə taleyindən məsul olan gen transkripsiyasını aparır. Mezenxim soyu daxilində RUNX2 və PPARγ kimi faktorlar osteogenez və adipogenez üçün əvəzolunmazdır. Bu səbəbdən siçan sümük iliyi mənşəli mezenkimal kök hüceyrələrin (MSC) osteogen və adipojenik fərqlənməsi zamanı meydana gələn transkripsiya faktorlarının genomik bağlanmasını və müşayiət olunan epigenetik dəyişiklikləri araşdırdıq. ChIP ardıcıllığı və RNA-sıralama analizləri ilə qiymətləndirildiyi kimi, osteogenik kimlik üçün həyati əhəmiyyətli genlərin RUNX2, C/EBPβ, retinoid X reseptoru və D vitamini reseptorlarının bağlanma yerləri ilə əlaqəli olduğunu, adiposit fərqliliyinin PPARγ, retinoid X reseptoruna üstünlük verdiyini, C/EBPα və C/EBPβ bağlama yerləri. Epigenetik işarələr aktiv diferensiya lokuslarının, habelə gücləndirici fəaliyyətlərin və selektiv gen ifadəsinin aydın proqnozlaşdırıcıları idi. Bu ilik mənşəli MSC-lər, osteogenik yol üçün standart bir üstünlük təklif edən bir epigenetik model nümayiş etdirdilər, lakin bu nümunələr yaxınlıqda sürətlə dəyişdirildi. Adipoq, Cidec, Fabp4, Dodaq, Plin1, Pparg, və Cebpa adipogen differensiasiya zamanı genlər. Təəccüblüdür ki, bu hüceyrələrin boyanma, gen ifadəsi və ChIP-kəmiyyətli PCR analizi ilə qiymətləndirildikdən sonra, öhdəlikdən sonra adipositlərdən osteoblastlara (və əksinə) keçmələrini təmin edən bir epigenetik plastiklik nümayiş etdirdiklərini gördük. Osteojenik defolt yolu patoloji şəraitdə tərsinə çevrilə bilər, bu da yaşlanma, estrogen çatışmazlığı və skelet boşalması zamanı skelet kövrəkliyinə və ilik yağlanmasının artmasına səbəb olur. Birlikdə götürdükdə, məlumatlarımız terapevtik strategiyaların inkişafında faydalı ola biləcək MSC-lərin multipotent differensasiyası üçün zəruri olan epigenetik proqramların artan mexaniki anlayışını təmin edir.

Bu iş Milli Sağlamlıq Qrantları İnstitutu DK-072281 (J.W.P.-ə) və AR-066616 (J.R.-yə) tərəfindən dəstəklənib. Müəlliflər bu məqalənin məzmunu ilə heç bir maraq toqquşması olmadığını bəyan edirlər. Məzmun yalnız müəlliflərin məsuliyyətidir və Milli Sağlamlıq İnstitutunun rəsmi fikirlərini əks etdirmir.

Bütün ChIP-seq və RNA-seq məlumat dəstləri (xam sıralama faylları, zirvələr, bedGraphs və RPKM-lər daxil olmaqla) NCSI Gen Expression Omnibus-da (GEO) SuperSeries GSE79815 altında dərc olunur. ChIP-seq track mərkəzləri UCSC Genome Browser hub repozitoriyasında bu tədqiqat üçün ictimaiyyətə açıqdır.


F7 səhv kodu ilə GE sobasını necə təmir edə bilərəm?

F7 səhv kodu olan bir GE sobasını təmir etmək üçün problemin dəqiq səbəbini təyin edin. Tipik olaraq, problemi həll etmək üçün idarəetmə lövhəsi və ya açar paneli dəyişdirilməlidir. Təmir bir neçə saat çəkə bilər.

    Problemi təcrid edin

F7 səhv kodunun dəqiq səbəbini müəyyən etmək üçün idarəetmə panelindəki Off və ya Clear düyməsini basın və sobanı elektrik şəbəkəsindən ayırın. Nəzarət lövhəsindəki lent konnektorunu ayırın və sobanı qoşun. F7 kodu 30 saniyədən sonra görünsə, idarə lövhəsini dəyişdirmək lazım ola bilər. Kodun olmaması, açar panelini dəyişdirməyin lazım olduğunu göstərir. Hansı hissənin dəyişdirilməli olduğuna dair şübhə varsa, açar paneli dəyişdirməzdən əvvəl test etmək üçün ohm sayğacı istifadə edilə bilər.

Fırını elektrik şəbəkəsindən ayırın və açar panelinin və ya idarəetmə lövhəsinin dəqiq yerini tapmaq üçün istifadəçi təlimatına baxın. Əsas panel və idarəetmə lövhəsi adətən GE sobalarında saat ekranının arxasında yerləşir. Müvafiq hissəni ayırın və dəyişdirin. Müvafiq kabelləri yenidən bağlayın.

Giriş panelini dəyişdirin və problemin həll olunub-olunmadığını müəyyən etmək üçün sobanı yandırın.


Müəllif məlumatı

Bu müəlliflər bərabər töhfə verdilər: Fatma-Elzahraa Eid, Haitham A. Elmarakeby, Yujia Alina Chan.

Əlaqələr

Geniş MIT İnstitutu və Harvard, Cambridge, MA, ABŞ

Fatma-Elzahraa Eid, Haitham A. Elmarakeby, Yujia Alina Chan, Nadine Fornelos, Eliezer M. Van Allen & Kasper Lage

Sistemlər və Kompüter Mühəndisliyi Departamenti, Əl-Əzhər Universiteti, Qahirə, Misir

Fatma-Elzahraa Bayramı & amp; Haitham A. Elmarakeby

Dana-Farber Xərçəng İnstitutu, Boston, MA, ABŞ

Haitham A. Elmarakeby & amp Eliezer M. Van Allen

İnformatika və Sistemlər Departamenti, Mühəndislik Tədqiqatları Bölməsi, Milli Tədqiqat Mərkəzi, Giza, Misir

Virciniya Politexnik İnstitutu və Dövlət Universiteti, Blacksburg, VA, ABŞ

Cərrahiyyə şöbəsi, Massachusetts Ümumi Xəstəxanası, Boston, MA, ABŞ

Harvard Tibb Məktəbi, Boston, MA, ABŞ

Bu müəllifi PubMed Google Scholar -da da axtara bilərsiniz

Bu müəllifi PubMed Google Scholar -da da axtara bilərsiniz

Bu müəllifi PubMed Google Scholar -da da axtara bilərsiniz

Bu müəllifi PubMed Google Scholar -da da axtara bilərsiniz

Bu müəllifi PubMed Google Scholar -da da axtara bilərsiniz

Bu müəllifi PubMed Google Scholar -da da axtara bilərsiniz

Bu müəllifi PubMed Google Scholar -da da axtara bilərsiniz

Bu müəllifi PubMed Google Scholar -da da axtara bilərsiniz

Töhfələr

HAQQ. və K.L. tədqiqatı düşünüb və layihələndirib. HAQQ. audit yanaşmasını inkişaf etdirdi, məlumatları təhlil etdi və H.E. və K.L. F.E.E., Y.A.C., N.F. və K.L. məqaləni bütün müəlliflərin girişi ilə yazdı. Y.A.C. və N.F. sənədin əsaslı şəkildə redaktəsi və yenidən işlənməsi. M.E., E.V.A., L.S.H. və K.L. işinə nəzarət edirdi. Bütün müəlliflər məqaləni oxudu və bəyəndi.

Müvafiq müəlliflər


F1 - F12 düymələri nələrdir?

The funksiya düymələri və ya F düymələri kompüter klaviaturasında, etiketli F1 vasitəsilə F12, əməliyyat sistemi və ya aktiv proqram tərəfindən müəyyən edilmiş xüsusi funksiyaya malik düymələrdir. Bəzi hallarda, onlar Alt və ya Ctrl düymələri ilə birləşdirilə bilər.

Bəzi kiçik klaviatura və dizüstü kompüterlərdə F düymələri, ekran parlaqlığını, səs səviyyəsini və ya cihaza xas olan digər funksiyaları dəyişdirmək kimi xüsusi bir məqsəd ola bilər. Bu klaviaturalarda bir var Fn F düyməsinin nə etdiyini dəyişmək üçün basıb saxlaya biləcəyiniz düymə. Əlavə məlumat və bu açardan istifadə ilə bağlı kömək üçün Fn səhifəmizə baxın.

Aşağıda Windows və macOS üçün F düymələrinin (F1 - F12) daha ümumi funksiyalarına ümumi baxış verilmişdir.

  • Demək olar ki, hər bir proqramda kömək açarı kimi istifadə olunur. Basıldıqda yardım ekranı açılır və ya veb səhifəyə yönləndirilirsiniz.
  • Kompüter yüklənərkən BIOS parametrlərinə daxil olun. + F1, Microsoft Windows kömək və dəstək mərkəzini açar.
  • Yeni bir iş səhifəsi yaratmaq üçün Excel -də Alt + Shift + F1 düymələrini basın.
  • Tapşırıq Bölməsini açın.
  • Ctrl + F1 düymələrinə basmaq Corel WordPerfect -də imla yoxlamasını həyata keçirir.

Bu açar və onun mümkün ikinci dərəcəli funksiyaları haqqında əlavə məlumat üçün F1 səhifəmizə baxın.

  • Microsoft Windows-da, Windows-un bütün versiyalarında vurğulanmış ikona, fayl və ya qovluğun adını dəyişir.
  • Microsoft Excel -də aktiv hüceyrəni düzəldir.
  • Alt + Ctrl + F2 Microsoft Word-də açıq sənəd pəncərəsini açır və Word-də açmaq üçün sənədi seçməyə imkan verir.
  • Ctrl + F2, Microsoft Word -də çap önizləmə pəncərəsini göstərir.
  • Kompüter açılarkən BIOS qurulmasına daxil olun.

Bu açar və onun mümkün ikinci dərəcəli funksiyaları haqqında əlavə məlumat üçün F2 səhifəmizə baxın.

  • Tez-tez Windows 7 və daha aşağı versiyalarda Windows iş masasında olduqda Microsoft Windows da daxil olmaqla bir çox proqramlar üçün axtarış funksiyasını açır.
  • Bəzi proqramlarda ilkin axtarış aparıldıqdan sonra F3 növbəti axtarış dəyərini tapır.
  • MS-DOS və ya Windows əmr satırında F3, daxil edilən son əmri təkrarlayır.
  • Microsoft Word -də Ctrl + F3 vurgulanan mətni kiçiltir.
  • Shift + F3 Microsoft Word-də mətni böyük hərfdən kiçik hərfə və ya hər sözün əvvəlində böyük hərfə dəyişir. + F3 Microsoft Outlook-da Qabaqcıl axtarış pəncərəsini açır.
  • Windows Explorer -də axtarış funksiyasını başladın.
  • MacOS X əməliyyat sistemi ilə işləyən Apple kompüterində Missiya Nəzarətini açın.

Bu açar və onun mümkün ikinci funksiyaları haqqında əlavə məlumat üçün F3 səhifəmizə baxın.

  • Windows 95 -dən XP -ə qədər tap pəncərəsini açın.
  • Windows Explorer və Internet Explorer-də ünvan çubuğunu açın.
  • Edilən son hərəkəti təkrarlayın (Word 2000+). Microsoft Windows-da hazırda aktiv olan proqram pəncərəsini bağlayır.
  • Ctrl + F4, Microsoft Windows -un aktiv pəncərəsindəki açıq pəncərəni və ya nişanı bağlayır.
  • Excelformula qutusunda olarkən, F4 düyməsini basmaq mütləq və nisbi hüceyrə istinadını dəyişir.

Bu açar və onun mümkün ikinci funksiyaları haqqında əlavə məlumat üçün F4 səhifəmizə baxın.

  • Bütün müasir İnternet brauzerlərində F5 düyməsini basmaq səhifəni və ya sənəd pəncərəsini yeniləyir və ya yenidən yükləyir.
  • Ctrl + F5 veb səhifəni tam yeniləməyə, keşi təmizləməyə və səhifənin bütün məzmununu yenidən yükləməyə məcbur edir.
  • Qovluqdakı məzmun siyahısını yeniləyin.
  • Tapmağı açın, dəyişdirin və Microsoft Word -də pəncərəyə keçin.
  • F5 düyməsini basmaq PowerPoint-də slayd şousunu ilk slayddan başlayır. Shift + F5 düymələrinin basılması slayd şousunu hazırda aktiv slayddan başlayır.
  • Kompüter MS-DOS-u ilk dəfə yükləyərkən F5 düyməsini basmaq standart parametrləri yükləyir.

Bu açar və onun mümkün ikinci funksiyaları haqqında əlavə məlumat üçün F5 səhifəmizə baxın.

  • Kursoru Internet Explorer, Mozilla Firefox və digər İnternet brauzerlərinin əksəriyyətində ünvan çubuğuna aparın.
  • Ctrl + Shift + F6 başqa bir açıq Microsoft Word sənədinə açılır.

Bu düymə və mümkün ikincil funksiyalar haqqında daha çox məlumat üçün F6 səhifəmizə baxın.

  • Microsoft Word, Outlook və s. kimi Microsoft proqramlarında sənədin imla yoxlaması və qrammatika yoxlaması üçün adətən istifadə olunur.
  • Shift + F7 vurğulanan sözün tezaurusunu yoxlayır.
  • Google Chrome və Mozilla Firefox-da Caret Browsing funksiyasını aktivləşdirir.
  • açın Qatlar Adobe Photoshop-da panel.
  • Windows əmr satırında olarkən, həmin pəncərəyə daxil edilmiş bütün əmrlərin tarixçəsinə baxmaq üçün F7 düyməsini basın.

Bu düymə və mümkün ikincil funksiyalar haqqında əlavə məlumat üçün F7 səhifəmizə baxın.

  • Windows Başlanğıc menyusuna daxil olmaq üçün istifadə olunan funksional düymə, ümumiyyətlə Windows Təhlükəsiz Moduna daxil olmaq üçün istifadə olunur.
  • Windows bərpa sisteminə daxil olmaq üçün bəzi kompüterlər tərəfindən istifadə olunur, lakin Windows quraşdırma CD -si tələb oluna bilər.
  • MacOS-da bütün iş yerləri üçün miniatür şəklini göstərir.
  • F8 düyməsini basaraq TextPad -də dəyişdir pəncərəsi açılır.

Bu açar və onun mümkün ikinci funksiyaları haqqında əlavə məlumat üçün F8 səhifəmizə baxın.

    Microsoft Word-də sənəd.
  • Microsoft Outlook-da e-poçt göndərin və qəbul edin.
  • Açar Ölçmələr alət çubuğu Quark 5.0.
  • Fn düyməsini və F9 -u eyni vaxtda istifadə etmək macOS X əməliyyat sistemi ilə işləyən Apple kompüterində Missiya Nəzarətini açır.

Bu düymə və mümkün ikincil funksiyalar haqqında əlavə məlumat üçün F9 səhifəmizə baxın.

  • Əksər Microsoft Windows proqramlarında, standart olaraq, F10 açıq proqramın menyu çubuğunu və ya lentini aktivləşdirir.
  • Shift + F10, vurgulanmış bir simvolu, faylı və ya İnternet bağlantısını sağ vurmaqla eynidir.
  • Compaq, HP və Sony kompüterlərində gizli bərpa hissəsinə daxil olun.
  • Kompüter açılarkən BIOS qurulmasına daxil olun.
  • macOS 10.3 və ya daha yeni versiyaları ilə aktiv proqram üçün bütün açıq Windows-u göstərir.

Bu açar və onun mümkün ikinci funksiyaları haqqında əlavə məlumat üçün F10 səhifəmizə baxın.

  • Bütün müasir İnternet brauzerlərində tam ekran rejiminə daxil olun və çıxın.
  • Ctrl + F11, kompüter bir çox Dell kompüterindəki gizli bərpa hissəsinə daxil olmağa başlayır.
  • F11 düyməsini basmaqla eMachines, Gateway və Lenovo kompüterlərindəki gizli bərpa hissəsinə daxil olur.
  • macOS 10.4 və ya daha yeni versiyaları ilə bütün açıq pəncərələri gizlədir və iş masasını göstərir.

Bu düymə və mümkün olan ikinci dərəcəli funksiyalar haqqında əlavə məlumat üçün F11 səhifəmizə baxın.

  • Microsoft Word-də Saxla pəncərəsini açın.
  • Ctrl + F12 Word -də bir sənəd açır.
  • Shift + F12, Microsoft Word sənədini saxlayır (Ctrl + S kimi).
  • Ctrl + Shift + F12 sənədləri Microsoft Word -də çap edir.
  • Firebug, Chrome Geliştirici Alətləri və ya digər brauzerlərin ayıklama vasitəsini açın.
  • MacOS 10.4 və ya daha yeni bir versiyası olan bir Apple ilə, F12 Paneli göstərir və ya gizlədir.
  • Microsoft Expression Web -də bir səhifəyə baxın.
  • Başlanğıcda fərqli bir cihazı (məsələn, sabit disk, CD və ya DVD sürücüsü, disket, USB sürücüsü və şəbəkə) seçməyinizə imkan verən kompüterdəki yüklənə bilən cihazların siyahısına daxil olun.

Bu düymə və mümkün ikincil funksiyalar haqqında əlavə məlumat üçün F12 səhifəmizə baxın.


Videoya baxın: Фильтрация данных в Excel. Расширенный фильтр (Noyabr 2022).