Məlumat

SDS PAGE -dən nisbi densitometriya

SDS PAGE -dən nisbi densitometriya


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

İki şəraitdə rekombinant zülalın ifadə səviyyələrini müqayisə etmək üçün Coomassie ilə boyanmış SDS PAGE gelində densitometriya aparmaq istərdim. BioRad Image Lab proqramından istifadə edirəm.

Suallarım, Coomassie boyanmasının qeyri-xətti ola biləcəyini nəzərə alaraq, hansı təxminlərin edilə biləcəyidir. Təəssüf ki, mənim standart əyrim yoxdur və zolaqlarda total lizat var.

  1. Ümumi hüceyrə zülal kütləsinin yüzdə bir təxmini olaraq zolaq həcminin yüzdə zolaq həcminə çıxa bilərəmmi? (25% ümumi hüceyrə zülalına qarşı 20%)

  2. Yoxsa normallaşdırılmış band həcmini lizatda ixtiyari bir zolağa götürmək və sonra şərtlər arasındakı faiz fərqini bildirmək daha məqsədəuyğundur? (6 vs 4.8 normallaşdırılmış bant həcmi və ya ifadə səviyyələrində 20% azalma).


Densitometriya ilə rekombinant zülalların ölçülməsi üçün bir protokol

Susana María Alonso Villela, TBI, CNRS, INRAE, INSA, Université de Toulouse, Toulouse, Fransa.

Laboratoire des Venins et Molécules Therapeutiques, Institut Pasteur de Tunis, Université Tunis El Manar, Tunis, Tunis

Laboratoire des Venins et Molecules Therapeutiques, Institut Pasteur de Tunis, Université Tunis El Manar, Tunis, Tunis

Tunis fakültəsi, Tunis El Manar Universiteti, Tunis, Tunis

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Université de Toulouse, Toulouse, Fransa

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Université de Toulouse, Toulouse, Fransa

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Université de Toulouse, Tuluza, Fransa

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Université de Toulouse, Toulouse, Fransa

Susana María Alonso Villela, TBI, CNRS, INRAE, INSA, Université de Toulouse, Toulouse, Fransa.

Laboratoire des Venins et Molécules Therapeutiques, Institut Pasteur de Tunis, Université Tunis El Manar, Tunis, Tunis

Laboratoire des Venins et Molécules Therapeutiques, Institut Pasteur de Tunis, Université Tunis El Manar, Tunis, Tunis

Tunis fakültəsi, Tunis El Manar Universiteti, Tunis, Tunis

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Université de Toulouse, Tuluza, Fransa

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Université de Toulouse, Tuluza, Fransa

TBI, CNRS, INRAE, INSA, Université de Toulouse, Tuluza, Fransa


SDS-PAGE necə işləyir?

Elektroforez, zülalları və nuklein turşuları, purinlər, pirimidinlər, bəzi üzvi birləşmələr və hətta qeyri -üzvi ionlar kimi digər maddələri ayırmaq üçün əsas bir üsuldur. Mövcud elektroforezin çoxu, hərəkətsiz bir mühitdə nümunəni mobil fazaya ayırmaqdır. Poliakrilamid gel əsas vasitələrdən biridir. Gözenek ölçüsü zülalların həllini yaxşılaşdıran zülal molekullarının ölçüsünə yaxın olan məsaməli bir jeldir. Üstəlik, poliakrilamid jeli yaxşı kimyəvi stabilliyə, güclü təkrarlanmaya, pH və temperatur dəyişikliyinə davamlılığa və asan rəng müşahidəçiliyinə malikdir. SDS poliakrilamid gel elektroforezi (SDS-PAGE) zülal molekulyar çəkisinin təyini, spesifik zülalların aşkarlanması və ştam növlərinin müəyyən edilməsində sadə əməliyyat və yaxşı təkrar istehsal üstünlüklərinə malikdir.

Poliakrilamid gel ammonium persulfat (AP) və N, N, N', N'-Tetrametiletilendiamin (TEMED) katalizatorlarının təsiri altında akrilamid və çarpaz birləşdirici maddə N, N'-metilenbisakrilamiddən ibarətdir. Üçölçülü şəbəkə quruluşuna malik bir geldir. PAGE, zülal molekullarının fərqli yükü və molekulyar ağırlığının səbəb olduğu hərəkətliliyinə görə zülalları bir neçə qrupa ayıra bilər. SDS, reduksiyaedici maddələrin (β-merkaptoetanol və ya ditiotreitol, DTT) iştirakı ilə zülalların hidrogen və hidrofobik bağlarını qıra bilən və müəyyən nisbətdə protein molekulları ilə birləşərək qısa çubuqşəkilli kompozitlər əmələ gətirən anion səthi aktiv maddədir. eyni sıxlıq. Zülalın molekulyar çəkisi ilə müsbət əlaqəli olan, fərqli molekulyar ağırlıqdakı zülallardan meydana gələn kompleksin uzunluğu fərqlidir. SDS, müxtəlif zülal molekulları arasındakı təbii yük fərqini maskalayaraq, mənfi yüklənmiş zülal miqdarını orijinal yükünü çox üstələyir. Buna görə də elektroforez zamanı müxtəlif zülal-SDS komplekslərinin hərəkətliliyinə artıq ilkin yük və molekulyar forma təsir etmir, yalnız nisbi molekulyar kütlədən asılıdır.

Poliakrilamid gel adətən yuxarı təbəqədə yığma geldən və aşağı təbəqədə ayırıcı geldən ibarətdir. Üst və aşağı jellər arasındakı fərq akrilamid konsentrasiyası və Tris-HCl pH-dır. Elektroforez zamanı gelə bir elektrik sahəsi tətbiq olunur və mənfi yüklü zülallar gel boyunca mənfi elektroddan müsbət elektroda keçir. Ən ümumi elektroforez tamponu Tris və glisindən ibarətdir. İstifləmə gelindəki pH 6,8-dir və yalnız bir neçə qlisin molekulu dissosiasiya olunur. Beləliklə, SDS ilə müalicə olunan zülal molekulları yuxarı qlisin molekulu ilə aşağı Cl-ion arasında hərəkət edir. Bu proses geldəki zülal nümunəsini ilkin yüklənmiş həcmdən çox kiçik olan zolaqlara sıxır. Elektroforez irəlilədikcə, zülal qlisin molekullarının dissosiasiya olunduğu ayırıcı gelə (pH 8.8) keçir. Hərəkətin sürəti artır və proteini üstələyir. Ayırıcı geldə hər bir zülalın hərəkət sürəti onun molekulyar çəkisindən asılıdır. Kiçik molekulyar çəkiyə malik zülallar geldəki məsamələrdən asanlıqla keçə bilir, böyük molekulyar çəkiyə malik olanlar isə keçməkdə daha çətinlik çəkirlər. Bir müddət sonra zülallar, protein ayrılma məqsədinə çataraq ölçülərinə görə fərqli məsafələrə çatır.

Şəkil 1. Poliakrilamid gel elektroforezinin şematik diaqramı (Gülay, və b, 2018).

SDS-PAGE ilə zülalın molekulyar çəkisini necə təyin etmək olar?

SDS-PAGE naməlum zülalların molekulyar çəkisini təyin etmək üçün əsas üsuldur. Molekulyar çəkisi məlum olan zülal və naməlum nümunə eyni vaxtda elektroforezlənir. Boyanmadan sonra, standart zülalın nisbi hərəkətliliyinə və molekulyar çəkinin loqarifmasına görə, bir xətt əldə edilə bilər və nisbi hərəkətliliyindən istifadə edərək naməlum nümunənin molekulyar çəkisini təyin edə bilərsiniz. Laboratoriyada, bilinməyən zülalın ölçüsünü kobud şəkildə ifadə etmək üçün, bir boyaya kovalent şəkildə qoşulmuş standart bir molekulyar çəki zülalı istinad zülalı olaraq istifadə olunur. Bu əvvəlcədən boyanmış protein markerini birbaşa elektroforez zamanı və ya membranları köçürərkən müşahidə etmək olar.

SDS-PAGE nəticələrini necə oxumaq olar?

Elektroforezdən sonra zülal ayrılması birbaşa çılpaq gözlə müşahidə edilə bilməz və sonrakı boyama üsullarına ehtiyac var. Coomassie parlaq mavi boyama və gümüş rəngləmə elektroforezlə ayrılmış zülalların müntəzəm aşkarlanması və miqdarının təyini üçün ümumi üsullardır. Fiksasiya-boyanma-dekolorizasiya kimi sadə emaldan sonra zülalın paylanmasını aydın şəkildə müşahidə etmək olar. Yüksək həssas protein analiz metodlarının və zülal identifikasiya texnologiyalarının təkmilləşdirilməsi ilə floresan etiketləmə və izotop etiketləmə texnologiyası kimi yeni boyama üsulları həssaslığı xeyli artırdı və eyni zamanda avtomatlaşdırılmış proteom platforması gel kəsmə texnologiyası ilə də uyğun gəlir. Daha yüksək həssaslıq və avtomatlaşdırılmış boyama texnologiyaları hazırlanmışdır.

SDS-PAGE gelini necə saxlamaq olar?

Təzə SDS-PAGE gelləri adətən hər təcrübədən əvvəl hazırlanır. Bununla birlikdə, jellər təxminən bir həftə ərzində 4 ° C temperaturda təmiz suda saxlanıla bilər. Boyanandan sonra gelin fotoşəkili vaxtında çəkilə bilmirsə, gelin qurumasını və kiçilməsini qarşısını almaq üçün onu suya qoymaq lazımdır. Boyanma nəticələrini ən qısa müddətdə çəkmək tövsiyə olunur. Jel uzun müddət suda isladıqda band dağılacaq.

İstinadlar
1. Smith B J. SDS Poliakrilamid Gel Zülalların Elektroforezi. Molekulyar Biologiyada Metodlar, 1984, 1(4):41-55.
2. Daffy MF, Noormohammadi A H, Baseggio N, və s. Bütün hüceyrə zülallarının poliakrilamid gel-elektroforezlə ayrılması. Molekulyar Biologiyada Metodlar, 1998, 104:267.

Zəhmət olmasa layihənizin ətraflı təsvirini təqdim edin. Araşdırma tələblərinizi qarşılamaq üçün sizə xüsusi bir layihə planı təqdim edəcəyik. Sorğular üçün birbaşa e -poçt göndərə bilərsiniz.


Akrilamid konsentrasiyası, sarmal membranlı zülal jelinin hərəkət istiqamətini və böyüklüyünü təyin edir

SDS/PAGE universal olaraq biokimya, hüceyrə biologiyası və immunologiyada toxuma və hüceyrə ekstraktlarından kiçik protein miqdarını asanlıqla həll etmək üçün istifadə olunur. Suda həll olunan zülalların molekulyar çəkiləri SDS/PAGE hərəkətliliyindən etibarlı şəkildə müəyyən edilsə də, insan genomunun 20-30% -ni və dərman hədəflərinin əksəriyyətini təşkil edən sarmal membran zülallarının əksəriyyəti onilliklər ərzində gözlənilməz dərəcədə yavaş olan mövqelərə keçir. və ya faktiki düstur ağırlığından daha sürətli, tez -tez onların identifikasiyasını qarışdırır. Sarmal membrana uzanan ardıcıllıqların tərkibinə uyğun gələn de novo dizaynlı transmembran-mimetik polipeptidlərdən istifadə edərək, bu polipeptidlərin Laemmli jellərindəki tipik suda həll olunan istinad zülalları ilə nisbi mobilliklərini müqayisə edərək, spiral membran zülallarının anormal SDS/PAGE fraksiyalanmasını kəmiyyətləndiririk. Transmembran-mimetik növlərin köçən hissəciklərinin həm xalis yükünün, həm də təsirli molekulyar ölçüsünün müvafiq istinad zülallarından daha çox olduğunu və gel akrilamid konsentrasiyasının bu iki faktorun anomal miqrasiyanın istiqamətinə və böyüklüyünə təsirini diktə etdiyini görürük. Bu məlumatlardan əldə etdiyimiz alqoritmlər akrilamid konsentrasiyasının müxtəlif təbii membran zülallarının SDS/PAGE hərəkətliliyinə bu diferensial təsirini kompensasiya edir. Nəticələrimiz membran zülallarının anomal köçünü proqnozlaşdırmaq üçün unikal bir vasitə təmin edir və bununla da SDS/PAGE vasitəsi ilə molekulyar çəkilərinin birbaşa təyin olunmasını asanlaşdırır.

Açar sözlər: görünən ölçüdə gel hərəkətliliyi immunoblotting protein identifikasiya edən protein miqrasiyası.

Maraqların toqquşması bəyanatı

Müəlliflər maraqların toqquşmadığını bəyan edirlər.

Rəqəmlər

TM-mimetika nisbi miqrasiya mövqelərini dəyişir ...

TM-mimetika, müxtəlif akrilamidlərdə SDS/PAGE üzərindəki istinad zülallarına nisbətən miqrasiya mövqelərini dəyişir ...

Molekulyar ölçü və xalis yükləmə…

TM-mimetikanın molekulyar ölçüsü və xalis yükü istinad edilənlərdən daha böyükdür...

TM-mimikanın SDS/PAGE mobillik dəyişiklikləri…

İstifadə olunan zülallara nisbətən TM-mimetikanın SDS/PAGE hərəkətliliyi. ( AB…


Molekulyar Kütlə üçün Standart Əyri nümunəsi

Jellər üçün protein standartları, əsl molekulyar kütləsinə yaxından uyğun gələn nisbi mobilliyə malik təmizlənmiş polipeptidlərdir. SIGMA (Sent-Luis, MO) və ya Bio-Rad (Hercules, CA) kimi elektroforez üçün kimyəvi maddələrin tədarükçüləri hazır molekulyar kütlə standartlarını təmin edirlər. SIGMA, tris əsaslı bufer sistemi (Laemmli gelləri) ilə SDS gellərinin kalibrlənməsi üçün standartları satır.

Ticarət standartları, köhnə ədəbiyyatlar və hətta köhnə veb səhifələrimdəki əlavələr molekulyar kütlədən çox molekulyar çəkiyə (MW) istinad edə bilər. MW nisbi molekulyar kütlə ilə eynidir (M.r) lakin molekulyar kütlədən vahidsiz kəmiyyət olması ilə fərqlənir. Çox güman ki, Daltons və ya kiloDaltonsda bildirilən MW məlumatlarını bu cür istifadə düzgün olmasa da tapa bilərsiniz. MW-ni təmsil edən ədəd Daltonda müvafiq molekulyar kütlə ilə eynidir, buna görə də vahidlər MW kimi göstərilən kəmiyyətlərdən çıxarıldığı müddətcə terminlər bir-birini əvəz edə bilər.

Molekulyar Ağırlıqlar üçün SIGMA Standart Qarışığı 30,000-200,000 (SDS6H2)

  • donuz əzələsindən miyozin, 200.000
  • beta-galaktosidaz, Escherichia coli, 116,000
  • fosforilaz B, dovşan əzələsindən 97,400
  • albumin, iribuynuzlu 66.000
  • albumin, toyuq yumurtasının ağından 45.000
  • sığır eritrositlərindən karbonik anhidraz, 29.000

SIGMA Dalton Mark VII-L Standart Qarışıq, MW diapazonu 14,000-70,000 (SDS-7)

  • albumin, iribuynuzlu 66.000
  • albumin, toyuq yumurtasının ağından 45.000
  • qliseraldehid-3-fosfat dehidrogenaz, dovşan əzələsindən 36.000
  • iribuynuzlu eritrositlərdən karbonik anhidraz, 29.000
  • tripsinogen, iribuynuzlu mədəaltı vəzidən 24.000
  • tripsin inhibitoru, soya, 20,100
  • alfa-laktalbumin, iribuynuzlu süd 14,200

Zülalların mənbələrinin müxtəlif olduğunu unutmayın. Hamısını bir protein hissəsində tapa bilməyəcəksiniz, əslində öyrəndiyiniz hissəyə görə heç birini tapa bilməyəcəksiniz. Onlar hansı növ zülalların mövcudluğunun göstəricisi kimi deyil, gelləri kalibrləmək üçün istifadə olunur. Bir çox fərqli zülalın oxşar molekulyar ağırlıqlara sahib olduğunu unutmayın. Standart qarışıqların verdiyi nümunələr təcrübə ilə tanınır.

Standartların molekulyar çəkilərinin onların nisbi hərəkətliliklərinə qarşı tipik qrafiki aşağıda molekulyar çəkilər üçün log şkalasından istifadə etməklə göstərilmişdir. Ölçənin loqarifmik olduğunu nəzərə alaraq, əyri uyğunlaşmalarla çox diqqətli olun. Gelin yuxarı hissəsinə yaxın səhv etmək istəmirsiniz. Nəticələri sadəcə interpolyasiya etmək daha yaxşı ola bilər (məlumat nöqtələrini birləşdirin).

Müəyyən bir polipeptid üçün nisbi hərəkətlilik gel sıxlığına görə dəyişəcək (%T). Yüzdə akrilamid dəyişdikdə əyrilər həmişə dəyişəcək.

Bəzi yüksək faizli akrilamid jelləri ilə boyanın cəbhəsi aydın olmayacaq, çünki bromfenol mavi boya ilə eyni hərəkətliliklə işləyə biləcək qədər kiçik zülallar olmaya bilər. Boyanmadan əvvəl boya cəbhəsinin mövqeyi işarələnməyibsə, əsl nisbi hərəkətlilik müəyyən edilə bilməz. Gel daxili standartlardan istifadə etməklə kalibrləndiyi müddətcə, MW təxminləri gelin dibi kimi ixtiyari istinad nöqtəsindən istifadə edərək nisbi miqrasiya məsafəsini təmsil etməklə əldə edilə bilər. Həqiqi nisbi hərəkətliliyin istifadəsi, elektroforez kəsildikdə boyanın ön hissəsinin ölçülərindən və mövqeyindən asılı olmayaraq eyni tərkibli hər hansı bir gel üçün eyni standart əyrini istifadə etməyə imkan verir. MW təxminlərindəki səhv, orijinal boya cəbhəsi əyri və ya başqa şəkildə təhrif edildikdə ixtiyari bir istinad nöqtəsinin istifadəsi ilə çətinləşir.


Təhlükəli materiallarla işləyərkən, həmin materialların yaratdığı təhlükələrin spesifik təbiətinə diqqət yetirmək vacibdir. Bu, eyni zamanda ehtiyat tədbirlərinin effektiv şəkildə tətbiq edilməsi üçün bir təhlükəli maddənin digərindən fərqləndirilməsinin vacib olduğunu bildirir. SDS-ni necə oxumağı bilmək menecerlər, idarəçilər və onların işçiləri üçün zəruridir.

Sağlamlıq və Təhlükəsizlik mütəxəssisləri bilirlər ki, Təhlükəsizlik Vərəqini (SDS) başa düşmək və oxumaq işçilərin təhlükəsizliyinə sadiq olan hər hansı bir iş yeri üçün əsas bacarıqdır.

Qlobal Uyğunlaşdırılmış Sistem tərəfindən tam 16 hissəli SDS tələb olunsa da, hər bölmə bir işçinin və ya təhlükəsizlik menecerinin ehtiyac duyacağı eyni məlumat növünə aid deyil. Bu yazıda, materialların istifadəsi/istifadəsi ilə əlaqədar təhlükələrlə əlaqədar bölümü əhatə edəcəyəm. Bu bölmələri başa düşməklə, siz zədə riskini azaltmaq üçün lazımi profilaktik və qoruyucu tədbirləri yerinə yetirmək üçün təchiz olunmuş olacaqsınız.

Təcili yardım tədbirləri üçün bir SDS -nin necə oxunacağı ilə bağlı məlumat axtarırsınızsa, "Təcili vəziyyətdə Təhlükəsizlik Məlumat Vərəqləri (SDS) haqqında Bilməli olduğunuz hər şey" məqaləsini oxuya bilərsiniz.

GHS Təhlükəsizlik Məlumat Vərəqinin aşağıdakı bölmələri materialın təqdim etdiyi təhlükələr və materialı müəyyən etmək üçün istifadə edilə bilən xüsusi xüsusiyyətlər haqqında məlumat verir:

  • Bölmə 1. Kimyəvi Məhsul və Təchizatçının İdentifikasiyası
  • Bölmə 2. Təhlükələrin müəyyənləşdirilməsi
  • Bölmə 3. Tərkibi/Tərkibi haqqında məlumat
  • Bölmə 9. Fiziki və kimyəvi xassələri

Bölmə 1: Kimyəvi Məhsul və Təchizatçı Şəxsiyyəti

Bu bölmədə material və təchizatçı ilə bağlı ümumi məlumatlar verilmişdir. Bura məhsulun hər hansı bir identifikasiya vasitəsi (məsələn, Məhsul Kodu, Məhsul Adı) daxildir. Bu identifikasiya vasitələri, istifadəçiyə lazım olduqda SDS -ni tez bir zamanda tapmağa imkan verən Etiket və SDS arasında bir istinad nöqtəsi verəcəkdir.

Bu bölmə həmçinin məhsulla bağlı hər hansı əlavə məlumat almaq və ya fövqəladə vəziyyətdə kömək axtarmaq üçün istifadəçi üçün məlumat və təcili əlaqə məlumatlarını ehtiva edir.

Nəhayət, bu bölməyə materialın tövsiyə olunan istifadəsi və ya qarşı tövsiyə edilən hər hansı istifadə ilə bağlı məlumat daxil ediləcək. Bu məlumatlar istifadəçiyə materialın istehsalçının tövsiyələrinə uyğun istifadə olunduğundan əmin olmağa imkan verir.

Bölmə 2: Təhlükələrin müəyyən edilməsi

Bu bölmədə materialla bağlı risklər və təhlükələr müəyyən edilir. Bu, istifadəçiyə bu materialın hansı yollarla təhlükəli ola biləcəyini, habelə materialdan təhlükəsiz istifadəyə dair bəzi ümumi təlimatları bildirir. Bu həm də etiketdə göstərilməli olan elementlərin tapıla biləcəyi bölmədir.

Bu bölmə aşağıdakı məlumatları ehtiva edir:

  • GHS Təhlükə Təsnifatları
  • Piktoqramlar
  • Siqnal Sözü
  • Təhlükə Bəyanatları
  • Ehtiyat bəyanatları
  • Digər təhlükələr (və ya başqa təsnif edilməyən təhlükələr)

GHS Təhlükə təsnifatları daha sonra Fiziki Təhlükələr, Sağlamlıq Təhlükələri və Ətraf Mühit Təhlükələri olaraq bölünür. Bu təsnifatlar istifadəçiyə bu təhlükələrdən xəbərdar olmağa imkan verir. GHS Təhlükə Sınıflandırmaları altında sadalanan təsnifatlar, digər təhlükələr (və ya başqa təsnif edilməyən təhlükələr) istisna olmaqla, bu hissənin qalan hissəsində olan bütün məlumatları müəyyən edir.

Piktoqram, Siqnal Sözü və Təhlükə Bəyanatları istifadəçiyə təhlükələrin qısa istinadını və təsvirini verir. Piktoqramlar materialın təhlükələrinin təbiətinin vizual təsvirini təmin edir, Siqnal Sözü bir sözlə təhlükələrin ciddiliyini bildirir (Xəbərdarlıq və ya Təhlükə) və Təhlükə Bəyanatları hər bir təhlükənin təsirini bir qısa cümlə ilə təsvir edir (məsələn, H300 – Ölümcül udulursa). Bu, istifadəçinin bu materialdan istifadə edərkən nələrə diqqət etməli olduğunu qısa və təsirli bir şəkildə izah edir.

Ehtiyat bəyannamələri aşağıdakı kateqoriyalara bölünə bilər:

  • Ümumi Ehtiyat Bəyanatları
  • Profilaktik tədbirlərlə bağlı ehtiyat bəyanatları
  • Hadisənin qarşısının alınması ilə əlaqədar ehtiyat tədbirləri
  • Saxlama şəraiti ilə bağlı ehtiyat ifadələr
  • Materialın atılması ilə əlaqədar xəbərdarlıq bəyanatları.

Bu standart ifadələr, riskləri azaltmaq, hadisələrə ilkin ilk yardım və ya yanğınsöndürmə tövsiyələri ilə cavab vermək və materialı düzgün şəkildə saxlamaq və atmaq üçün ümumi təlimat təqdim edir.

Bu bölmədə son kateqoriya Digər Təhlükələrdir. Buna başqa təsnif edilməyən təhlükələr də aid edilə bilər. Bu kateqoriya toz partlayışı riskləri və ya biotəhlükələr kimi GHS tərəfindən əhatə olunmayan hər hansı əlavə təhlükələri bildirir.

Bölmə 3: Tərkibi/Tərkibi haqqında məlumat

Bu bölmədə materialın kimyəvi tərkibi verilmişdir. Bura kimyəvi adı, CAS nömrəsi və təhlükəli kimyəvi maddələrin konsentrasiyası və ya konsentrasiyası diapazonu daxildir. Bu, istifadəçiyə GHS Təhlükə Sınıflandırmalarına əsas kimyəvi maddələrin kim olduğunu təyin etməyə və bu təhlükələri azaltmaq üçün istifadə etmək üçün xüsusi prosedurları və ya qoruyucu vasitələri tətbiq etməyə imkan verir.

Əlavə olaraq, saf kimyəvi maddənin GHS təsnifatları Bölmə 3 -ə daxil edilə bilər, həm də EC nömrəsi və ya digər qeydiyyat nömrələri kimi digər eyniləşdirmə vasitələri.

Bölmə 9: Fiziki və kimyəvi xassələr

Bu bölmədə materialın təsviri fiziki və kimyəvi xüsusiyyətləri verilmişdir. Bu, istifadəçiyə ikinci dərəcəli konteynerin düzgün etiketlənməməsi və ya tökülməsi hallarında materialı müəyyən etməyə imkan verir və istifadəçinin istifadə etdiyi məhsulun təchizatçı tərəfindən verilən təsvirə uyğun gəldiyinə əmin olmaq imkanı verir. Bu təsvirdən hər hansı bir əhəmiyyətli sapma materialda bir səhv olduğunu göstərə bilər və ya tamamilə fərqli bir material. Burada ümumi sadalanan əmlakların siyahısı və bu məlumatların iş yerinin təhlükəsizliyini artırmaq üçün necə istifadə oluna biləcəyi göstərilir.

Sıxlıq

Bu, müəyyən bir həcm üçün material kütləsinin ölçüsüdür. Bu, "nisbi sıxlıq" və ya "xüsusi çəki" olaraq da tapıla bilər, hər ikisi də materialın sıxlığı suyun sıxlığına bölünür.

Bu xüsusiyyət bu materialın digər materiallara münasibətdə necə davranacağını göstərəcək (məsələn, sudan daha aşağı sıxlıq materialın su üzərində üzəcəyini göstərir). Bu, çox faydalı ola bilər dağılma hadisəsi, istifadəçiyə bu materialın səthdə, ara qatda olub-olmayacağını və ya qarışığın dibinə batacağını təxmin etməyə imkan verən bütün materialların sıxlığı əsasında.

Görünüş

Bu fiziki vəziyyət, rəng və tutarlılıq daxil olmaqla materialın vizual təsviridir. Bu, materialın şəxsiyyətinin vizual təsdiqi üçün istifadəçiyə istinad verir.

Bu, həmçinin etiketlənməmiş və ya tökülmüş materialı vizual olaraq müəyyən etməyə kömək edə bilər.

Qoxu təsviri və eşik

Bu, materialın gözlənilən qoxusunun və bir insanın ümumiyyətlə bu qoxunu aşkar etməyə başlayacağı buxar konsentrasiyasının təsviridir. Bu, məhsulu müəyyən etməyə imkan verən və qoxuya əsaslanan buxar konsentrasiyasını qiymətləndirmək üçün bir meyar verən əlavə məlumatdır.

Başqa sözlə, qoxunun təsvirini və eşik həddini bilməklə istifadəçi bunu edə bilər materialın havada təhlükəli səviyyələrdə olub olmadığını müəyyən edin (Bölmə 8-də sadalanan İcazə Verilən Ekspozisiya Səviyyələrinə əsasən).

Suda Çözünürlük

Bu, materialın su ilə nə qədər yaxşı qarışdığını izah edir. İstifadəçi, bu fiziki xüsusiyyət üçün sadalanan məlumatlara əsaslanaraq, su ilə qarışdırılarsa (məsələn, ayrı bir mərhələ meydana gətirər və ya tamamilə həll olunarsa) gözlənilən davranışını təxmin edə bilər.

Yanma nöqtəsi, alovlanma nöqtəsi

Bu, qığılcım və ya alov kimi alovlanma mənbəyinə məruz qaldıqda bu məhsulun alov alacağı temperaturdur. Parlama nöqtəsi, məhsulun alovlanma qabiliyyəti haqqında daha konkret məlumat verir və yanğın təhlükəsinin qarşısını almaq üçün hansı məhsulların daha soyuq temperaturda saxlanılması lazım olduğunu müəyyənləşdirməyə kömək edir.

Donma/qaynama nöqtəsi

Məhsulun əridiyi və ya dondurduğu və qaynadığı temperaturlardır. Onlar materialın fiziki vəziyyətinin dəyişəcəyi temperaturu göstərir ki, bu da məhsulu saxlamaq üçün hansı temperaturun çox aşağı ola biləcəyini müəyyən etməyə kömək edir, çünki donma qabları zədələyə və sızmalara səbəb ola bilər və hansı temperaturlar məhsulu saxlamaq üçün çox yüksək ola bilər. buxarlanma ilə itkilərə.

PH

Bu pH şkalasına əsaslanaraq turşuluğun və ya qələviliyin ədədi göstəricisidir. Asitli məhsulların pH 7 -dən aşağı, qələvi məhsulların pH -ı 7 -dən yuxarıdır. Bu fiziki xüsusiyyət, aşındırıcı məhsulun nə qədər ola biləcəyini təyin etməyə kömək edir və digər məhsulların uyğunsuz olduğunu qiymətləndirməyə kömək edir (aşağı pH və yüksək pH olan məhsullar ayrıca saxlanılmalıdır).

SDS oxumağı öyrənmək: Təlim tələb olunur

Bir SDS-in yuxarıdakı bölmələrində sadalanan məlumatlar (16 bölməli GHS SDS-də tapa biləcəyiniz digər bölmələrə əlavə olaraq) kimyəvi məhsulu necə tanıyacağınızı, saxlayacağınızı və istifadə edəcəyinizi bilmək üçün vacib olduğu üçün yalnız sizin məsuliyyətiniz deyil işçilərinizə dəqiq və müasir SDS-lər təqdim etmək üçün-OSHA, WHMIS və CLP qaydalarına əsasən SDS-ni oxumaq və başa düşmək üçün işçilərinizə adekvat təlim verməyiniz tələb olunur.

Təlim qaydaları biznesinizə nəzarət edən Sağlamlıq və Təhlükəsizlik tənzimləyicisinə uyğun olaraq dəyişir, lakin ümumilikdə təlimatlar sizdən tələb edir:

  • İşçilərə Qlobal Qara Uyğunlaşdırılmış Sistem (GHS) standartları haqqında təlimlər verin.
  • SDS-nin bütün 16 bölməsini necə oxumaq olar.
  • Maruz qalma riski olan hər hansı bir material üçün SDS -lərin nüsxələrinə giriş təmin edin.
  • Federal SDS dil qanunlarına uyğun olaraq SDS təmin etmək. İşçiləriniz şifahi İngilis dilini yetərincə başa düşə bilmirsinizsə, ingilis dilindən başqa bir dildə təhsil verməyiniz tələb oluna bilər və ya olmaya da bilər (məsələn, OSHA OSHA 29 CFR 1910.1200 (h) bax).

SDS Uyğunluğu haqqında daha çox məlumatı haradan əldə etmək olar

SDS-nin hər bir bölməsinə nəyin daxil olduğu və məlumatın xəsarətlərin qarşısının alınmasında və riskin azaldılmasında necə mühüm rol oynadığı haqqında daha çox öyrənmək istəyirsiniz? ERA təmin edir tələb olunan pulsuz web seminarı SDS bölmələrinə, SDS yazılmasına və bunların Sağlamlıq və Təhlükəsizliyə uyğunluğu ilə necə əlaqəli olduğunu dərindən araşdıracaqsınız.


Təşəkkürlər

CE-SDS və Simple Western üçün alətlər və reagentlər Bio-Techne Brend olan ProteinSimple tərəfindən təmin edilmişdir. Udo Burger, Susanne Doerks və Chris Heger-ə böyük dəstəyə görə təşəkkür etmək istərdik. Technische Universität Braunschweig Əczaçılıq Biologiyası İnstitutuna görüntüləmə aparatını və SDS-PAGE sistemini bizə verdiyinə görə Technische Universität Braunschweig Dərman və Əczaçılıq Kimyası İnstitutundan Prof. Dr. Ott-un işçi qrupuna təşəkkür etmək istərdik. Bio-Rad. Bundan əlavə, Rebecca Wiesner üçün təqaüd verdiyinə görə Aşağı Saksoniya əyalətinə təşəkkür etmək istərdik. Texniki dəstək və məsləhətlərə görə Holger Zagst və Matthias Stein-ə təşəkkür edirik. Nordilyn Lorenz-ə nümunə hazırladığı və SDS-PAGE, CE-SDS və Simple Western-də bir çox təcrübələr apardığı üçün təşəkkür edirik..

Açıq giriş maliyyələşdirməsi Projekt DEAL tərəfindən aktivləşdirilib və təşkil edilib.

Hermann Wätzig, ProteinSimple ilə uzun müddət yaxın və çox dostluq əlaqələrində olduğunu qeyd etməyi sevir. Müəlliflər başqa maraqların toqquşması barədə açıqlama verməyiblər.

Fayl adı Təsvir
elps7314-sup-0001-SuppMat.docx2.2 MB Dəstəkləyici məlumat faylı: İstehsalçının spesifikasiyasına uyğun olaraq referans MW-lərin UniProt-un MW-ləri ilə müqayisəsi, müxtəlif nümunə tamponlarının MW-nin 10% SDS-PAGE təsiri ilə denaturasiya temperaturunun MW-nin CE-SDS-ə təsiri (n = 3) CE-SDS və Simple Western ilə denaturasiya temperaturunun MW təyinatına təsiri (n = 3) Azaldıcı maddələrin CE-SDS və Simple Western ilə MW təyin edilməsinə təsiri (n = 3) Matuzumabın CE-SDS ayrılmasının elektroferramları müxtəlif azaldıcı maddələrlə azaldıldı və azalmadı Matuzumab Beş fərqli istehsalçının MW markerlərinin% 10 SDS-PAGE ilə müqayisəsi, CE-SDS üzərindəki beş MW markerinin elektroferoqramları, Xətti reqressiya Bio-Rad, MW Marker Maurice CE-SDS tərəfindən ProteinSimple, ProteomeLab ™ MW-dən Precision Plus Zülal Standartının nümunəsini istifadə edərək MW nisbi köç məsafəsinə (Rf) nisbətdə nisbi köç məsafəsinə (Rf) əsaslanan sahələr. Sciex tərəfindən ölçü standartı, New England Biolabs tərəfindən Boyanmamış Zülal Standartı və həyat texnologiyaları ilə Novex tərəfindən Benchmark™ Ləkələnməmiş Protein Nərdivanı.

Diqqət yetirin: Nəşriyyat müəlliflər tərəfindən təmin edilən hər hansı bir məlumatın məzmununa və funksiyasına görə məsuliyyət daşımır. İstənilən sorğu (çatışmayan məzmundan başqa) məqalə üçün müvafiq müəllifə ünvanlanmalıdır.


SDS PAGE - Biologiyadan nisbi densitometriya

Yaxşı Həcmi
1 boş
2 boş
3 5 ul CYBH
4 *10 ul Nümunə A
5 *10 ul Nümunə B
6 *10 ul Nümunə C
7 *10 ul Nümunə D
8 *10 ul Nümunə E
9 *10 ul
10boş

1. Nə üçün balıq nümunələrinizə Laemmli nümunə buferini əlavə etdiniz?

Zülalların yalnız ölçüsünə görə hərəkət etməsini təmin edərək zülalları doğrultmaq üçün, elektrik yüklənmiş zülalları örtərək jelin altından köçəcəklər.

2. Nümunələri qızdırmaqda məqsəd nə idi?

Disulfid əlaqələrini azaltmaqla zülalları daha da denatürasiya etmək.

3. Balıq nümunələrindən zülallar necə çıxarılır?

Boruları otaq temperaturunda beş dəqiqə inkubasiya etməklə

4. Balıq dilimindən bütün zülallar çıxarılıb, yoxsa bəziləri çıxarıldıqdan sonra hələ də qalıb? Hipotezinizi necə sınaqdan keçirə bilərsiniz?

Bəli, heç kim qalmadı. Bu fərziyyə ikinci bir SDS SƏHİFƏSİ işlədilərək yoxlanıla bilər.

1. Nə üçün SDS ilə örtülmüş zülallar elektrik sahəsinə yerləşdirildikdə hərəkət edir?

SDS, zülala polipeptid zəncirinin uzunluğuna nisbətdə bir gücə malik olan ümumi mənfi yük verir və qarışığın ölçüsünə görə hərəkət etməsinə imkan verir, ya da ümumiyyətlə deyil.

2. Aktin və miyozin standartları və Precision Plus Protein Kaleydoskopu ilə müəyyən edilmiş standartın məqsədi nədir?

Gelin qabağında hərəkət. Aktin və miyozin standartları əsas konservləşdirilmiş əzələ zülallarını müqayisə etməyə imkan verir. Precision plus protein kaleydoskop standartı, zülallar jel vasitəsilə köçərkən görmə qabiliyyətini təmin edir.

3. Hansı zülallar ən uzaqlara köç edəcək? Niyə?

Kiçik mənfi yüklü zülallar daha az molekulyar çəkiyə malik olduqları üçün ən uzağa miqrasiya edəcəklər.

4. Ləkənin məqsədi nədir?

Ləkə, görünən elektroforez jeli boyunca hərəkət etmək üçün standartların və zülalların hərəkətini yaradır. Bu, bantları balıq nümunələri standartlarından müqayisə etməyə imkan verir.

1. Hansı iki balıq ən çox oxşar protein profilinə malikdir?

2. Hansı iki balıq ən az oxşar protein profilinə malikdir?

3. Bəzi balıq növlərinin protein profillərinin digər balıq növlərindən daha çox zolaq paylaşdığını düşündüyünüzü izah edin?

Bu balıqlar yaşadıqları mühitə görə digər balıqlardan fərqli olaraq inkişaf etmişdir.

4. Laboratoriyadan əvvəlki fəaliyyətinizlə bağlı proqnozlarınız doğru çıxdı, ya yox? Əgər yoxsa, niyə düşünürsünüz?

Balıq balığı və balığın üzmə növlərinə və üzmə mühitlərinə görə ən yaxından əlaqəli olduğunu söylədik. Qrafikdəki uyğun zolaqlar səbəbindən bu proqnoz qismən doğru idi, lakin Catfish və Cod ən çox oxşardır.


Porphyra yezoensis Ueda II fotosisteminin təcrid edilməsi və xarakteristikası

Tilakoid membranlar təcrid olunmuş və saxaroza sıxlığı gradient ultrasantrifüqasiya yolu ilə Porphyra yezoensis Ueda (P. yezoensis) gametofitindən təmizlənmişdir. P. yezoensis gametofit tilakoid membranları SDS ilə həll edildikdən sonra, fotosistem II (PSII) hissəcikləri təcrid edilərək təmizləndi. PSII hissəciklərinin aktivliyi DCIP (2,6-dikloroindofenol) fotoredaksiya reaksiyası ilə təyin edilmişdir. Təmizlənmiş PSII hissəciklərinin tərkibi SDS-PAGE tərəfindən aşkar edildi. Nəticədə, 55 kD protein, 47 kD protein, 43 kD protein, 33 kD protein, 31 kD protein, 29 kD protein və 18 kD protein daxil olmaqla yeddi protein tapıldı. Yüksək bitkilərin PSII hissəcikləri və digər yosunlarla müqayisədə bunlar D1/D2 kompleksi, CP47, CP43, 33 kD protein, D1, D2 və cyt c-550 olaraq təyin edilmişdir. Bundan əlavə, sırasıyla 20 kD, 16 kD və 14 kD olan digər üç yeni zülal tapıldı. Bu xarici zülallar arasında 16 kD və 14 kD zülalları əvvəllər bildirilməmişdi və 20 kD protein ilk dəfə çoxhüceyrəli qırmızı yosunlarda tapıldı.


Tricine – SDS-SƏHİFƏ

Tricine-SDS-PAGE, kütləvi olaraq 1-100 kDa aralığında olan zülalları ayırmaq üçün istifadə olunur. 30 kDa-dan kiçik zülalların həlli üçün üstünlük verilən elektroforetik sistemdir. Gellərdə istifadə olunan akrilamid konsentrasiyaları digər elektroforetik sistemlərə nisbətən daha aşağıdır. Bu aşağı konsentrasiyalar, hidrofob zülallar üçün xüsusilə vacib olan elektroblotlamanı asanlaşdırır. Tricine–SDS-PAGE də üstünlük olaraq ikiqat SDS-PAGE (dSDS-PAGE) üçün istifadə olunur, kütləvi spektrometrik identifikasiya üçün son dərəcə hidrofobik zülalları təcrid etmək üçün istifadə edilən proteomik alətdir və mavi-doğma PAGE-dən sonra ikinci ölçüsün həlli üçün üstünlüklər təklif edir. BN-PAGE) və aydın doğma SƏHİFƏ (CN-PAGE). Burada Coomassie mavi və ya gümüş boyama və elektroblotlama üçün təsirli üsulları ehtiva edən Tricine-SDS-PAGE protokolunu təsvir edirəm və bununla da yanaşmanın çox yönlülüyünü artırıram. Bu protokol 1-2 gün ərzində tamamlana bilər.

*Qeyd: Məqalənin ilkin olaraq internetdə dərc olunmuş versiyasında 18-ci səhifədəki cədvəldə “Gel bufer (3x)” sözləri yoxdur. Məqalənin bütün versiyalarında səhv düzəldildi.


Videoya baxın: Molla Nisbi Molla Muradxanin qohumluq haqqinda gözel şeirni dedi (Noyabr 2022).