Məlumat

Naməlum hüceyrə dövrü nəzarət nöqtəsi zülallarını (yəni, siklinlər) müəyyən etmək üçün necə getmək olar?

Naməlum hüceyrə dövrü nəzarət nöqtəsi zülallarını (yəni, siklinlər) müəyyən etmək üçün necə getmək olar?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Xeyr, bu "ev işi" deyil. Mən doktoranturam və bu yaxınlarda bir jurnal klubunun sonunda gündəmə gələn bir şey idi və PI -lərdən biri bu sualı verdi və bu barədə düşünməyimizi söylədi. Sadə səslənir, amma məni bir az çaşdırdı.

  • Qərb ləkəsi: Xeyr. Məlum bir antijenə ehtiyacımız var və buna görə də nəyin ardınca getdiyimizi bilmədiyimiz üçün bu işləməyəcək.

  • Ümumi protein geli: Hüceyrə dövrünün müxtəlif hissələrində olan fərqli hüceyrə populyasiyalarından hüceyrə lizatları toplayın, bir gel üzərində işləyin və hər hansı bir tsiklik ifadəni müşahidə edin. Bu bir qədər yaxşı görünür, amma bununla bir neçə problem olduğunu hiss edirəm: 1) fərqli dövr mərhələlərində olan hüceyrə populyasiyalarının müəyyən edilməsi; 2) eyni/oxşar ölçüdə fərqlənə bilməyən digər zülallar.

  • Bir növ RNAi, yıxılma və s.: Qərb ləkəsi kimi, biz də nə ilə məşğul olduğumuzu bilmirik və buna görə də heç nəyi hədəfə ala bilmirik.

  • Kütləvi xüsusiyyətlərə malik Pulldown təhlili: Protein-zülal qarşılıqlı təsirlərinə baxdığından başqa bu barədə çox şey bilmirəm. Burada uyğun olub -olmayacağından əmin deyiləm.

Bir model olaraq, mən ya maya, ya da hansısa ölümsüzləşdirilmiş məməli hüceyrə xəttini düşünürdüm.


Mən əslində diatomlarda (ökaryotik yosunların bir növü) nəzarət nöqtəsi zülallarının ovunda iştirak etmişəm, siklin ailəsi bu orqanizmlərdə xeyli genişlənmişdir və bu əlavə siklinlərin nə hiss etdiyini/siqnal verdiyini anlamağa çalışırdıq [1].

Bir sözlə, birinci müəllif siklin ifadəsinə təsir göstərə biləcək müxtəlif şərtlərə baxdı. Bu şərtlərin çoxu hüceyrə bölünməsini maneə törədirdi (məsələn, qida maddələrinin olmaması, G2/M kimyəvi inhibitorları və ya işıq) və bloklama şərtləri aradan qaldırılmadan əvvəl və sonra nümunələr alındı. Daha sonra mRNA'lar, şübhəli hüceyrə dövrü genlərinin miqdarını təyin etdi. Nəzarət nöqtəsi genlərinin mRNT və zülal dövrləri son dərəcə keçici olduğu üçün bu, bir az iş apardı. Şərtlərə reaksiya verən siklinlər tamamlayıcı analizlər və digər üsullardan istifadə etməklə xarakterizə olunurdu.

Daha sonra şəbəkəni qurmaq üçün qarşılıqlı təsir göstərən zülalları müəyyən etmək üçün maya iki hibrid analizindən istifadə edildi [2]. Ümumiyyətlə, bu təcrübələr o qədər də sadə deyildi və əsas genlərlə qarışıqlıq bir çox problem yaradır, ancaq hüceyrə dövrlərində qüsurlu, temperatur həssas mutantların dağlarında keçdikləri orijinal maya siklin işi ilə müqayisədə heç bir şey yoxdur (bax. Lee Hartwell və Paul Hemşire, 2001 -ci ildə Tim Hunt ilə birlikdə Nobel mükafatı aldı).


Videoya baxın: Hüceyrələrin bölünməsi (Dekabr 2022).