Məlumat

Bölmə 9: Bakteriyaların böyümə nümunələri - Stok Mədəniyyətlərinizin qurulması və Mədəniyyətin Xüsusiyyətlərinə Müşahidə - Biologiya

Bölmə 9: Bakteriyaların böyümə nümunələri - Stok Mədəniyyətlərinizin qurulması və Mədəniyyətin Xüsusiyyətlərinə Müşahidə - Biologiya


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Bölmə 9: Bakterial artım nümunələri - ehtiyat mədəniyyətlərinizin qurulması və mədəniyyətin xüsusiyyətlərini müşahidə etmək

Bölmə 9: Bakteriyaların böyümə nümunələri - Stok Mədəniyyətlərinizin qurulması və Mədəniyyətin Xüsusiyyətlərinə Müşahidə - Biologiya

İkinci trimestrdə olan 24 yaşlı hamilə qadın Nataliya yüksək hərarət, 38,9 °C (102 °F), yorğunluq və əzələ ağrıları - tipik qripə bənzər əlamətlər və simptomlar şikayətləri ilə klinikaya müraciət edir. Nataliya müntəzəm olaraq məşq edir və yerli fermer bazarından aldığı çiy süd də daxil olmaqla, üzvi qidalara diqqət yetirməklə qidalı pəhrizə riayət edir. Onun bütün peyvəndləri aktualdır. Lakin Nataliyanı görən tibb işçisi narahat olur və qan nümunəsinin mikrobiologiya laboratoriyasına göndərilməsini əmr edir.

Sonrakı səhifələrdə Nataliyanın nümunəsinə qayıdacağıq.

Bakterial hüceyrə dövrü DNT-nin təkrarlanması və hüceyrə komponentlərinin iki qız hüceyrəyə bölünməsi yolu ilə yeni hüceyrələrin meydana gəlməsini əhatə edir. Prokaryotlarda çoxalma həmişə aseksual olur, baxmayaraq ki, üfüqi gen transferi şəklində geniş genetik rekombinasiya baş verir, bunu başqa bir fəsildə araşdıracağıq. Əksər bakteriyalarda tək dairəvi xromosom var, lakin bəzi istisnalar var. Misal üçün, Borrelia burgdorferi, Lyme xəstəliyinin törədicisi xətti xromosoma malikdir.


Bakteriyaları necə böyütmək olar və daha çox

Bakteriyaların böyüməsini öyrənmək sizi maraqlandırırsa, oxuyun.

Bakteriyalara Baxış

Bakteriyalar birhüceyrəli və ya birhüceyrəli mikroorqanizmlərdir. Onlar bitki və heyvan hüceyrələrindən fərqlənirlər, çünki onların genetik materialı olan fərqli, membranla əhatə olunmuş nüvəsi yoxdur. Bunun əvəzinə, onların DNT-si hüceyrənin içərisində dolaşıq halında üzür. Viruslar protistdirmi?

Fərdi bakteriyaları yalnız mikroskopla görmək olar, lakin onlar o qədər sürətlə çoxalırlar ki, çox vaxt bizim görə biləcəyimiz koloniyalar əmələ gətirirlər. Bakteriyalar ikili parçalanma adlanan bir proses vasitəsilə bir hüceyrə iki hüceyrəyə parçalandıqda çoxalır. Parçalanma 20 dəqiqə ərzində sürətlə baş verir. Mükəmməl şəraitdə tək bir bakteriya cəmi 10 saat ərzində bir milyarddan çox bakteriyaya çevrilə bilər! (Təbii şəraitin nadir hallarda mükəmməl olması yaxşı bir şeydir, yoxsa yer bakteriyalarda basdırılacaq!)

Bakteriyaların yetişdirilməsi və sınaqdan keçirilməsi istənilən vaxt əyləncəli layihə və ya böyük bir elm sərgisi layihəsidir. Bakteriyalar hər yerdədir və sürətlə çoxaldıqları üçün onları bir neçə sadə materialla öyrənmək asandır. Sizə lazım olan yalnız bir neçə petri qabı, agar və steril tamponlar və ya peyvənd iynəsidir. Agar qida maddələri və bakteriyaların böyüməsi üçün sabit, idarə olunan mühit təmin edən jelatinli mühitdir (aqar məhlulu). Bakteriyaların əksəriyyəti qidalı agardan yaxşı istifadə edərək böyüyəcək, lakin bəzi daha cəld bakteriyalar (daha mürəkkəb qida maddələrinə ehtiyacı olanlar) Bacillus stearothermophilus, Branhamella catarrhalis, və Bacillus coagulans) triptik soya agarına üstünlük verirlər.

Siz həmçinin bakteriyalar üçün bir mənbəyə ehtiyacınız var və bunu tapmaq çətin deyil! Ağzınızı və ya dərinizi, ev heyvanlarınızı, torpağınızı və ya mətbəx lavabosu və ya tualet qabı kimi məişət səthlərini silə bilərsiniz. Müəyyən bir bakteriya növünü öyrənmək istəyirsinizsə, uşaqlar üçün mikrobiologiya bölməmizdə canlı mədəniyyətləri də əldə edə bilərsiniz. Bakteriyalardan istifadə edərək dörd təcrübə və elmi layihələr üçün daha çox ideya görmək üçün oxumağa davam edin (həmçinin bu praktiki bakteriya yetişdirmə dəstini nəzərdən keçirin)! Yetkinlərin nəzarəti tövsiyə olunur bakteriyalarla işləyərkən.

Bakteriyalar bizə necə kömək edə bilər?

Bakteriya olmasaydı, harda olardıq? Yaxşı, bakterial xəstəliklərə tutulmaya bilərik, amma yenə də vəziyyətimiz çox pis olardı! Bakteriyalar həm bədənimizdə, həm də ətrafımızdakı dünyada hər cür çox vacib funksiyaları yerinə yetirirlər. Budur yalnız bir neçəsi.

Həzm. Yoğun bağırsaqlarımız bədənimizin öz-özünə həzm edə bilmədiyi qidaları parçalayan faydalı bakteriyalarla doludur. Bakteriyalar onu parçaladıqdan sonra bağırsaqlarımız onu udmaq iqtidarında olur və bizə qidadan daha çox qida verir.

Vitaminlər. Bağırsaqlarımızdakı bakteriyalar əslində sağlamlığımız üçün vacib olan vitaminləri istehsal edir və ifraz edir! Misal üçün, E. coli bağırsaqlarımızdakı bakteriyalar K vitamininin əsas mənbəyidir (Ən çox E. coli bizim üçün xeyirlidir, lakin qida zəhərlənməsinə səbəb olan zərərli növü var.)

Qida. Bakteriyalar südü qatıq, pendir və digər süd məhsullarına çevirmək üçün istifadə olunur.

oksigen. Siyanobakteriyalar (əvvəllər mavi-yaşıl yosunlar adlanırdı) suda yaşayır və fotosintez həyata keçirir, bu da nəfəs almağımız üçün lazım olan oksigenin çox hissəsinin istehsalı ilə nəticələnir.

Təmizləmək. Neft dağılmaları, kanalizasiya, sənaye tullantıları - bakteriyalar bizə bütün bunları təmizləməyə kömək edə bilər! Onlar yağı və ya toksinləri ‘yeyirlər’ və onları daha az zərərli maddələrə çevirirlər.

Bakteriyalar heyrətamiz canlılardır, elə deyilmi? Onlar çox təhlükəli və eyni zamanda çox vacib ola bilər. Yaxşı bakteriyalardan istifadə edən bir təcrübə görmək üçün oxumağa davam edin!

Bakteriyalar bizə necə zərər verə bilər?

Bəzi bakteriya növləri xəstəliyə və xəstəliyə səbəb olur. Bu növ bakteriyalara patogenlər deyilir. Onlar bütün bakteriyalar kimi çox sürətlə çoxalırlar. Bunlar müxtəlif formalarda olur və qulaq infeksiyasından boğaz boğazına və xoleraya qədər xəstəliklərə səbəb ola bilər. Ağız və burnumuzdan və ya kəsiklər və sıyrıqlar vasitəsilə bədənimizə daxil ola bilərlər. Bəziləri havada olur, digərləri qidada olur, nəticədə qida zəhərlənməsi baş verir. Bakteriyalar da dişlərimizdə boşluqlara və diş əti xəstəliklərinə səbəb ola biləcək lövhələrin əmələ gəlməsinin səbəbidir.

Antibiotiklərin kəşfindən əvvəl bir çox ağır bakterial xəstəliklərin müalicəsi yox idi və adətən ölümlə nəticələnirdi. Antibiotiklər bakteriyaları məhv etməklə və ya onların çoxalmasını maneə törətməklə, orqanizmin öz hüceyrələrinə zərər vermədən işləyir. Bir müddət sonra bəzi bakteriyalarda antibiotikə qarşı müqavimət yaranır və o, onlara qarşı təsirli olmayacaq. Bu səbəbdən elm adamları daim yeni antibiotiklər üzərində araşdırmalar aparırlar. (Su çiçəyi, hepatit və ya poliomielit kimi bir çox xəstəliklərin səbəbi bakteriyalardan çox viruslardır. Antibiotiklərin bu xəstəliklərə qarşı heç bir təsiri yoxdur.)

Bakterial infeksiyalar tez-tez rast gəlinir, lakin onların bir çoxunu yaxşı yemək bişirmək, təmizləmək və əl yuma üsulları ilə qarşısını almaq olar.

Antibakterial agentlər nədir?

İnsanlar bakteriyaların böyüməsini və yayılmasını necə dayandırırlar? Onlar bunu iki yolla idarə edirlər: bakteriya hüceyrələrini öldürməklə və bakteriyaların çoxalmasını dayandırmaqla. Agent çoxalmanı öldürən və ya dayandıran bir həll və ya üsuldur. Bakterisidlər bakteriya hüceyrələrini öldürən maddələrdir. Statik maddələr hüceyrələrin böyüməsini və çoxalmasını maneə törədir.

Bakteriyaları öldürmək və ya onların çoxalmasına mane olmaq üçün müxtəlif yollar var.

  • Sterilizasiya. Bakteriyaları öldürmək üçün istilik tətbiqi. Yandırma (yandırma), qaynatma və bişirmə daxildir.
  • Pasterizasiya. Yeməkdə olan bakteriyaların sayını azaltmaq üçün yumşaq istilikdən istifadə.
  • Soyuq temperaturlar. Soyuducu və dondurma yeməklərin ömrünü qorumaq üçün evlərdə istifadə edilən ən çox yayılmış üsullardan ikisidir.
  • Antiseptiklər. Bu agentlər birbaşa canlı toxumalara, o cümlədən insan dərisinə tətbiq oluna bilər.
  • Dezinfeksiyaedici maddələr. Bu agentlər canlı toxumalar üçün təhlükəsiz deyildir. Dezinfeksiyaedici vasitələrdən tualet, lavabo, döşəmə və s.
  • Konservantlar. Bu gün mövcud olan demək olar ki, bütün emal edilmiş qidalarda istifadə olunur. Qidalarda bakteriyaların böyüməsini maneə törədirlər.
    • Bəzi qida konservantları natrium benzoat, monosodyum glutamat (MSG), kükürd dioksidi, duzlar, şəkər və odun tüstüsüdür.
    • Amoksisillin və ampisilin - hüceyrə divarının sintezində (tikinti) addımları maneə törədir
    • Penisilin - hüceyrə divarının sintezindəki mərhələləri maneə törədir
    • Eritromisin - protein sintezi üçün RNT tərcüməsini maneə törədir

    TƏHLÜKƏSİZLİK QEYDİ

    Ətraf mühitdəki bakteriyaların əksəriyyəti sağlam insanlar üçün zərərli olmasa da, koloniyalarda cəmləşdikdən sonra onlar təhlükəli ola bilər.

    Riski minimuma endirmək üçün bakteriyalarla işləyərkən birdəfəlik əlcəklər taxın və əvvəl və sonra əllərinizi yaxşıca yuyun. Bakteriya tədqiqatları zamanı heç vaxt yeməyin və içməyin, böyüyən mədəniyyətləri nəfəs almayın və ya qəbul etməyin. Qaralama olmayan bir otaqda işləyin və hava axını mümkün qədər azaldın. Nümunə götürmə və ya dezinfeksiya etmədikcə, petri qablarını mədəni mühitlərdə qapalı saxlayın (tercihen lentlə bağlanmalıdır). Bununla belə, petri qabını yalnız cihazınızı daxil etmək və ya ağartma və ya 70% izopropil spirti ilə əhatə etmək üçün kifayət qədər çıxarın.

    Təcrübəni bitirdikdən sonra qabları plastik torbaya bağlayın və atın. Təsadüfi qırılmaları və ya tökülmələri 10 dəqiqə ərzində ağartıcı və ya spirtlə örtün, sonra diqqətlə süpürün, plastik torbaya bağlayın və atın.

    Mədəniyyət yeməklərinin hazırlanması

    Bakteriyaları böyütməzdən əvvəl steril mədəniyyət qabları hazırlamalısınız. 125 ml-lik bir şüşə qidalı agarda təxminən 10 petri qabını doldurmaq üçün kifayətdir.

    Su Hamamı Metod – Agar şüşə qapağını gevşetin, lakin tamamilə çıxarmayın. Bütün agar maye olana qədər şüşəni 170-190 °F-də isti suya qoyun. Şüşənin əyilməsinin qarşısını almaq üçün suyun səviyyəsini agar səviyyəsi ilə bərabər saxlayın.

    • Petri qablarına tökməzdən əvvəl agarın 110-120 °F-ə qədər soyumasına icazə verin (şüşə hələ də isti hiss edir, lakin toxunmaq üçün çox isti deyil).
    • Petri qabının qapağını sürüşdürərək açın ki, qaba agar töksün. Yeməyin dibinin 1/2 - 2/3 hissəsini (təxminən 10-13 ml) örtmək üçün kifayət qədər agar tökün. Butulkanın ağzının qaba toxunmasına icazə verməyin. Çirklənmənin qarşısını almaq üçün qabı dərhal örtün və agar qabın bütün dibini örtənə qədər yavaşca irəli-geri əyin. (Aqar üçün kifayət qədər qab doldurun: istifadə etməyə hazır olana qədər əlavələri alt-üst saxlaya bilərsiniz.)
    • Petri qablarını istifadə etməzdən əvvəl ağarın bərkiməsi üçün bir saat dayanmasına icazə verin.

    Təcrübə №1: Yanaq Hüceyrə Swab

    Yuxarıdakı təlimatlardan istifadə edərək bir mədəniyyət yeməyi hazırlayın. Mədəniyyət qabı hazırlandıqdan sonra steril pambıq çubuqdan və ya aşılayıcı iynədən istifadə edin və yanağınızın içini silin. Tamponu bir neçə ziqzaq hərəkəti ilə çox yumşaq bir şəkildə agarın üzərinə sürtün və qabın qapağı ilə əvəz edin. Bakteriyaların böyüməsi görünməzdən əvvəl yeməyi 3-7 gün isti yerdə saxlamalısınız. Hər gün bir rəsm və yazılı təsvirlə böyüməni qeyd edin. Fərdi bakteriyalar yüksək güclü mikroskop olmadan görmək üçün çox kiçikdir, lakin siz bakteriya koloniyalarını görə bilərsiniz. Koloniyaların rənginə və formasına görə müxtəlif bakteriya növlərini fərqləndirin.

    Təcrübə №2: Antibakterial maddələrin sınaqdan keçirilməsi

    Həssaslıq kvadratlarının hazırlanması

    Maddənin antibakterial effektivliyini yoxlamaq üçün üsullardan biri ‘həssaslıq kvadratlarından istifadə etməkdir.’ Kiçik kvadratlar qurutucu kağızdan (və ya digər uducu kağız) kəsin və sonra onları yoxlamaq istədiyiniz maddədə isladın: yod, etil spirti, antibakterial sabun, antiseptiklər, sarımsaq və s. Kvadratlarla işləmək üçün təmiz cımbızdan istifadə edin ki, onları çirkləndirməyin. Onları daimi mürəkkəblə etiketləyin, seçilmiş maddədə isladın və artıq mayeni kağız dəsmal ilə silin.

    Bakteriyaların toplanması

    Bakteriyaların toplanması üçün mənbəyə qərar verin. Həssaslıq kvadratlarından istifadə etmək üçün yalnız bir mənbə olduğundan əmin olun və hər yeməyi mümkün qədər ardıcıl saxlayın. Mənbələrə mətbəx lavabosu, vanna otağı sayğacı, cib telefonu və ya sınaqdan keçirmək istədiyiniz başqa bir səth daxil ola bilər. Seçilmiş səthə steril bir çubuq sürtün və sonra onu hazırlanmış agar qabına ziqzaq şəklində yüngülcə sürtün. Yeməyi döndərin və təkrarlayın.

    Eksperimentin qurulması

    Hər bir təcrübədə normal şəraitdə bakteriyaların böyüməsini göstərən nəzarət qabı və müəyyən dəyişənləri dəyişdirdiyiniz və nəticələri araşdırdığınız bir və ya bir neçə test qabı olmalıdır. Test ediləcək dəyişənlərə misal olaraq temperatur və ya antiseptiklərin mövcudluğu göstərilə bilər. Bunlar bakteriyaların böyüməsinə necə təsir edir?

    • Bir qabı etiketləyin ‘Control.’ Sonra test qabınıza antibakterial xüsusiyyətləri yoxlamaq istədiyiniz maddədə isladılmış həssaslıq kvadratlarını əlavə etmək üçün cımbızdan istifadə edin. Kağızın özlüyündə bakteriyaların böyüməsinə hər hansı təsirinin olub-olmadığını görmək üçün düz bir kvadrat qurutucu kağız əlavə etmək yaxşı bir fikirdir. Ən yaxşı nəticələr üçün çoxsaylı sınaq qablarından istifadə edin və dəyişənlərə nəzarət edin ki, şərtlər hər bir qab üçün eyni olsun: eyni yerdən toplanmış, eyni miqdarda antibakterial maddəyə məruz qalmış, eyni temperaturda saxlanılan bakteriyalar və s. Nə qədər çox sınaq keçirəcəksiniz? , nə qədər çox məlumat toplayacaqsınız və nəticələrinizdən bir o qədər əmin ola bilərsiniz.
    • Bütün qabları şkaf kimi qaranlıq, otaq temperaturu olan yerə qoyun.

    3-7 gün gözləyin və qapaqları çıxarmadan qablarda bakteriyaların böyüməsini yoxlayın. Çoxlu yuvarlaq böyümə nöqtələrini görəcəksiniz, bunlar bakteriya koloniyalarıdır. Bakteriya nümunələrini topladığınız yerdən asılı olaraq qablarınızda bir neçə növ bakteriya (və hətta bəzi kiflər!) ola bilər. Müxtəlif növ koloniyalar fərqli rəng və toxumalara sahib olacaqlar. Əgər mürəkkəb və ya stereo mikroskopunuz varsa, fərqləri daha çox görmək üçün koloniyalara yaxından baxmağa çalışın.

    Nəzarət qabındakı bakteriyaların sayını sınaq qablarındakı miqdarla müqayisə edin. Sonra, hər kağız kvadratı ətrafında bakteriya artımının miqdarını müqayisə edin. Hansı bakteriya ona daha yaxın böyüyür? Hansının yanında ən az bakteriya var? Əgər birdən çox sınaq yeməyi etmisinizsə, bütün sınaq qablarında nəticələr oxşardırmı? Əgər deyilsə, sizcə, nəticələrin fərqli olmasına hansı dəyişənlər səbəb ola bilərdi? Bu, qənaətlərinizə necə təsir edir?

    Bu təcrübədə dəyişiklik üçün həssaslıq kvadratlarından istifadə etmək əvəzinə temperaturun bakteriya artımına təsirini yoxlayın. Nəzarət qabını otaq temperaturunda qoyun, digər qabları isə müxtəlif temperaturlu qaranlıq yerlərə qoyun.

    Eksperiment #3: Sabun Sorğusu

    Hər dəfə bir şeyə toxunduqda, yəqin ki, yeni bakteriyalar toplayır və bəzilərini geridə qoyursunuz. Bu qədər yoluxucu xəstəliklər yayılır - bakteriyalarımızı ətrafımızdakı hər kəslə paylaşırıq! Dərimizdə təhlükəsiz şəkildə yaşayan bakteriyalar belə, ağızlarımız və ya kəsiklər və sıyrıntılar vasitəsilə bədənimizə daxil olarsa, bizi xəstə edə bilər. Əllərimizi tez-tez və yaxşı yumağımızın bu qədər vacib olmasının səbəblərindən biri də budur.

    Əllərimizdəki bakteriyaları kəsmək üçün hansı sabun daha yaxşı işləyir? Ağar və petri qablarından istifadə edərək bəzi bakteriya mədəniyyətlərini yetişdirməklə bunu yoxlaya bilərsiniz.

    • İki (və ya daha çox) petri qabı və ya digər uducu kağız və ya cımbız
    • Müxtəlif növ əl təmizləyiciləri: adi sabun, antibakterial sabun, qab sabunu, əl təmizləyicisi
    1. Etiketdəki göstərişlərə uyğun olaraq agarı hazırlayın, sonra hər bir petri qabının altını örtəcək qədər tökün. Qabları örtün və agar yenidən qatılaşana qədər təxminən bir saat dayanmasına icazə verin. (Əgər onları soyuduqdan sonra dərhal istifadə etməyəcəksinizsə, onları soyuducuda tərs halda saxlayın.)
    2. Petri qablarınız hazır olduqda, əlinizdən və ya bir könüllünün əlindən bir neçə bakteriya toplayın. (Şəxsin əllərini bu yaxınlarda yumadığına əmin olun!) Bunu ovucun üzərindəki steril tamponu ziqzaq şəklində sürtməklə edin.
    3. Petri qabından örtüyü çıxarın və çubuqları aqar üzərində ziqzaq şəklində irəli və arxaya yüngülcə sürtün. Yeməyi dörddəbir döndərin və yenidən ziqzaq edin. Qabın üstünü örtün və yeni steril tampondan istifadə edərək digər qab üçün ikinci və üçüncü addımları təkrarlayın. Yeməkləri etiketləyin “Test” və “Control.” (Siz birdən çox sınaq yeməyi etmək istəyə bilərsiniz, beləliklə nəticələri müqayisə edə bilərsiniz.)
    4. Qurutma kağızını kiçik “həssaslıq kvadratlarına kəsin.” Test edəcəyiniz müxtəlif növ əl təmizləyiciləri üçün kvadratları etiketləmək üçün daimi mürəkkəbdən istifadə edin, məsələn, adi sabun üçün “R”, “A” antibakterial sabun üçün və əl təmizləyicisi üçün “S”. Cımbızdan istifadə edərək, hər kvadratı müvafiq təmizləyiciyə batırın. Artıq təmizləyicini kağız dəsmalın üzərinə sürtün və sonra kvadratları “Test” qabındakı agarın üzərinə qoyun. (Kvadratları yayın ki, aralarında məsafə olsun.) Əzmə kağızının özlüyündə hər hansı bir təsiri olub-olmadığını yoxlamaq üçün bir kvadrat adi qurutma kağızı əlavə edin. “Control” qabına heç bir kvadrat qoymayın – bu, sabun olmadan bakteriya artımının necə görünəcəyini sizə göstərəcək.
    5. Qabları şkaf kimi qaranlıq, otaq temperaturu olan yerə qoyun və bir neçə gün onları narahat etmədən saxlayın.

    Nə olub

    Yeməklərinizdə bakteriyaların böyümə sürəti temperaturdan və digər amillərdən asılı olacaq. Bir neçə gündən sonra mədəniyyətlərinizi yoxlayın, lakin məlumatlarınızı qeyd etməzdən əvvəl yəqin ki, 5-7 gün gözləmək istəyə bilərsiniz. Çoxlu yuvarlaq böyümə nöqtələrini görəcəksiniz, bunlar bakteriya koloniyalarıdır. Yeməklərdə bir neçə növ bakteriya böyüyə bilər. Müxtəlif növ koloniyalar fərqli rəng və toxumalara sahib olacaqlar.

    Hər bir sabun testi üçün hər qabda bakteriya koloniyalarının sayını sayın və qeyd edin. Hər bir sabunun nə qədər təsirli olduğunu görmək üçün sınaq qabındakı koloniyaların sayını nəzarət qabındakı koloniyaların sayına bölün, sonra nəticəni 1-dən çıxarın və cavabı faizlə yazın. Məsələn, nəzarət qabınızda 100 koloniya və sabun test qabınızda 30 koloniya varsa, sabun bakteriyaların 70%-ni yox edib: 1 — (30 ÷ 100) = .7 = 70%

    Nəticələrinizə görə, hansı növ sabun bakteriyaları aradan qaldırmaqda ən təsirli olub? “antibakterial” sabun həqiqətən adi sabundan daha yaxşı işləyir? Əlləri sabunsuz suda yumaq nə qədər yaxşı nəticə verdi? Hansı sabunların və əl yuma üsullarının bakteriyaları aradan qaldırmaqda ən təsirli olduğunu müəyyən etmək üçün daha hansı testləri edə bilərsiniz?

    Təcrübə №4: Havadakı bakteriyalar

    Bu təcrübə üçün iki mədəniyyət qabına ehtiyacınız var, burada antibakterial maddələrin (məsələn, antibiotiklər və ev təmizləyiciləri) bakteriyaların böyüməsinə necə təsir etdiyini nümayiş etdirəcəksiniz.

    Qabları qapaqları bağlı olaraq otaq temperaturu olan yerdə buraxın. Mədəniyyət qablarını təxminən bir saat açıq buraxın.

    Gözlədiyiniz müddətdə kağızdan kiçik kvadratlar kəsin (blotter kağızı yaxşı işləyir), onları sınaqdan keçirəcəyiniz antibakterialların adları ilə etiketləyin (məsələn, Lysol üçün ‘L’, spirt üçün ‘A’ və s. ) və hər birini antibakterial xüsusiyyətlərini yoxlamaq istədiyiniz müxtəlif məişət kimyəvi maddələrində isladın. Əgər vaxtınız varsa, çay ağacı yağı və ya qırmızı bibər kimi təbii antibakterial maddələrlə də sınaqdan keçirə bilərsiniz. Hər hansı artıq mayeni silin və mədəni qablardan birində kvadratların hər birini fərqli yerə qoymaq üçün cımbızdan istifadə edin. İkinci mədəniyyət yeməyi sizin ‘nəzarətinizdir.’ Bu, heç bir kimyəvi agent olmadan hava bakteriyasının mədəniyyətinin necə göründüyünü sizə göstərəcək.

    Qabları (qapaqları bağlı) qaranlıq yerdə bir neçə gün narahat edilməyəcək bir şkaf kimi saxlayın. 3-7 gündən sonra hər iki mədəniyyət qabını götürün və qapaqları açıq qoyaraq hər bir qabda bakteriyaların böyüməsini diqqətlə müşahidə edin. Bakteriyalar kiçik, rəngli qruplarda görünəcək. Müşahidələrinizi qeyd edin və rəsmlər çəkin. Aşağıdakı suallara da cavab verə bilərsiniz.Nəzarət mədəniyyətində, yeməyin nə qədəri bakteriya ilə örtülmüşdür? Həssaslıq kvadratı test mədəniyyətində bakteriyalar bu yeməyi nəzarət mədəniyyəti ilə eyni dərəcədə əhatə edibmi? Kimyəvi maddələrin hər biri bakteriyaların böyüməsinə hansı təsir göstərmişdir? Müəyyən bir kimyəvi maddə bakteriyaları öldürdü və ya sadəcə böyüməsini maneə törətdi?

    • Əlavə araşdırma üçün müxtəlif antibiotiklərin bakteriyalara qarşı nə edə biləcəyini görmək üçün bir antibiotik disk dəstindən istifadə edə bilərsiniz.
    • Daha təkmil bir layihə üçün qram boyamanın antibiotiklərin istifadəsi ilə necə əlaqəli olduğunu öyrənin.

    Təcrübə №5: Evdə Qatıq

    Ümumiyyətlə insanların ağlına ‘bakteriyalar,’ zərərli mikroblar gəlir. Ancaq bakteriyaların bütün formaları pis deyil!
    Evdə bir dəstə qatıq hazırlayaraq yaxşı bakteriyaların dadlı məhsulundan həzz ala bilərsiniz.

    Siz başlanğıcdan (baqqal və ya sağlamlıq ərzaq mağazalarında əldə edə bilərsiniz) və ya içərisində canlı mədəniyyətlər olan bir stəkan sadə, ətirsiz qatıqdan istifadə etməlisiniz. (Tərkibində canlı mədəniyyətlər varsa, konteynerdə belə deyəcək.)

    Dörd stəkan südü isti olana qədər yavaş-yavaş qızdırın, ancaq qaynar və ya yanmasın. Bəzi zərərli bakteriyaları öldürmək üçün temperatur 95-120 dərəcə ətrafında olmalıdır. Süd isti olana qədər bir az sərinləyin və sonra bir stəkan aktiv qatıq və ya başlanğıc əlavə edin.

    Qarışığı böyük bir qaba (və ya şüşə bankalara) qoyun və örtün. İstifadə etməzdən əvvəl qabyuyan maşından keçirərək və ya çox isti su ilə yuyaraq qabın və ya bankaların sterilizə olunduğundan əmin olun.

    Qatıq qarışığının becərilməsi üçün iki fərqli üsul var: Siz qapalı qabı və ya bankaları təmiz plastik soyuducuya qoya və soyuducunu mədəniyyət qablarının yuxarı hissəsinə qədər isti su ilə doldura bilərsiniz. Bu üsulla siz vaxtaşırı soyuducunu isti su ilə doldurmalı olacaqsınız ki, qatığın temperaturu sabit qalsın. Digər üsul, qabları istilik yastığına və dəsmallara bükmək, istilik yastığını aşağı və orta istilikdə qoymaqdır.

    3 1/2 - 4 saat qızdırıldıqdan sonra qarışığı yoxlayın. O, ‘quraşdırılmalı, ’ mağazada alınmış qatıq kimi hamar, qaymaqlı konsistensiyaya malik olmalıdır. Qarışıq hələ qurulmayıbsa, başqa 1-2 saat qızdırın. Düzgün konsistensiya olduqda, vanil ekstraktı, şokolad siropu və ya giləmeyvə kimi bəzi ətirli maddələr əlavə edin və qatığı soyuducuda saxlayın. Bir neçə həftə saxlanmalıdır. Təhlükəsizliyə görə, ayrılmış və ya qeyri-adi konsistensiyaya malik heç bir qatıq yeməməyi təklif edirik.


    Məqsəd/funksional istifadə/tətbiq əsasında bakterial kultura mühitlərinin təsnifatı

    Qidalandırıcı agar

    Müəyyən növ bakteriyaların tanınması, sadalanması və təcrid olunmasını asanlaşdırmaq üçün çoxlu xüsusi təyinatlı media lazımdır. Bu ehtiyacları ödəmək üçün çoxlu media mövcuddur.

    Ümumi Məqsəd Media

    Ümumi təyinatlı media da adlandırılan bazal media, ən çox cəld olmayan bakteriyaların böyüməsini dəstəkləyən sadə mediadır. Pepton suyu, qida bulyonu və qidalı agar (NA) bazal mühitlər hesab olunur. Bu mühitlər ümumiyyətlə mikroorqanizmlərin ilkin izolyasiyası üçün istifadə olunur.

    Zənginləşdirilmiş Media

    Bazal mühitə qan, zərdab, yumurta sarısı və s. şəklində əlavə qida maddələrinin əlavə edilməsi zənginləşdirilmiş mühit yaradır. Zənginləşdirilmiş mühitlər qida baxımından tələbkar (sürətli) bakteriyaların böyüməsi üçün istifadə olunur. Qanlı agar, şokoladlı agar, Loeffler zərdab yamacı və s. zənginləşdirilmiş mühitin bir neçə nümunəsidir. Qan agarı, qanlı agar bazasına 5-10% (həcmi ilə) qan əlavə etməklə hazırlanır. Şokoladlı agar isidilmiş qanlı agar və ya lizis kimi də tanınır qanlı ağar.

    Seçici və zənginləşdirici media

    Bu medialar arzuolunmaz kommensal və ya çirkləndirici bakteriyaların qarşısını almaq və bakteriyaların qarışığından patogenləri bərpa etməyə kömək etmək üçün nəzərdə tutulmuşdur. Seçici mühit agar əsaslı olsa da, zənginləşdirici mühit maye konsistensiyaya malikdir. Bu medianın hər ikisi eyni məqsədə xidmət edir. İstənilən agar mühiti maraq doğuran patogenə təsir etməyən müəyyən inhibitor agentlərin əlavə edilməsi ilə seçici edilə bilər. Orta selektiv etmək üçün müxtəlif yanaşmalara antibiotiklərin, boyaların, kimyəvi maddələrin əlavə edilməsi, pH-ın dəyişdirilməsi və ya bunların kombinasiyası daxildir.

    Seçici Media

    Prinsip: Diferensial böyümənin dayandırılması
    Selektiv mühit bəzi mikroorqanizmlərin böyüməsini boğmaq, digərlərinin böyüməsinə icazə vermək üçün nəzərdə tutulmuşdur. Seçici mühit, ayrı-ayrı koloniyaların təcrid oluna bilməsi üçün agar əsaslı (bərk) mühitdir.

      bərpa etmək üçün istifadə olunur Neisseria gonorrhoeae tərkibində vankomisin, kolistin və nistatin antibiotikləri var.
  • Mannitol duzu agar və Salt Milk Ağar bərpa etmək üçün istifadə olunur S.aureus10% NaCl ehtiva edir.
  • Bərpa etmək üçün kalium tellurit mühiti istifadə olunur C.diphtheriae 0.04% kalium tellurit ehtiva edir. üçün istifadə olunur Enterobacteriaceaeüzvlərinin tərkibində qram-müsbət bakteriyaların çoxunu maneə törədən öd duzu var. bərpa etmək üçün istifadə olunur Pseudomonas aeruginosa cetrimid (antiseptik agent) ehtiva edir.
  • Crystal Violet Blood Agar bərpa etmək üçün istifadə edilmişdir S. pyogenes 0,0002% kristal bənövşəyi ehtiva edir. bərpa etmək üçün istifadə olunur M.tuberculosis malakit yaşılı qatılaraq seçici hala gətirilir.
  • Sağalmaq üçün Wilson və Blair's Agar S. typhi parlaq yaşıl boyanın əlavə edilməsi ilə seçici hala gətirilir.
  • kimi seçici media TCBS Ağartəcrid etmək üçün istifadə olunur Vibrio vəba nəcis nümunələrində digər bakteriyaların əksəriyyətini maneə törədən pH (8,5-8,6) yüksəlmişdir.
  • Zənginləşdirmə Media

    Zənginləşdirici mühit bərk selektiv mühitə örtülməzdən əvvəl mədəniyyətdə müəyyən mikroorqanizmlərin nisbi konsentrasiyasını artırmaq üçün istifadə olunur. Seçici mühitdən fərqli olaraq, zənginləşdirmə mədəniyyəti adətən bulyon mühiti kimi istifadə olunur. Zənginləşdirici mühitlər klinik nümunədə kommensalların qarşısını almağa xidmət edən maye mühitdir. Selenit F bulyonu, tetrationat bulyonu və qələvi peptonlu su (APW) nəcis nümunələrindən patogenləri bərpa etmək üçün istifadə olunur.

    Diferensial/ Göstərici Media

    Müəyyən mühitlər elə qurulmuşdur ki, müxtəlif bakteriyalar onların koloniya rənginə görə tanınsın. Müxtəlif yanaşmalara boyaların, metabolik substratların və s. daxil edilməsi daxildir ki, onlardan istifadə edən bakteriyalar fərqli rəngli koloniyalar kimi görünür. Belə media diferensial media və ya göstərici media adlanır. Diferensial mühitlər birdən çox maraq doğuran, lakin morfoloji cəhətdən fərqlənən koloniyalara malik mikroorqanizmlərin böyüməsinə imkan verir.

    Diferensial media nümunələrinə aşağıdakılar daxildir:

      (mannitol fermentasiyası = sarı) (müxtəlif hemoliz növləri, yəni α, β və γ hemoliz)
    1. Mac Conkey agar(laktoza fermentatorları, çəhrayı koloniyalar, qeyri-laktoza fermentator isə solğun və ya rəngsiz koloniyalar əmələ gətirir.
    2. TCBS(Vibrio vəba saxaroza fermentasiyası nəticəsində sarı koloniyalar əmələ gətirir)

    Nəqliyyat mediası

      və Venkatraman Ramakrishnan (VR) mühiti vəba şübhəsi olan xəstələrin nəcisini daşımaq üçün istifadə olunur.
    • Sach-ın tamponlanmış qliserin salinindən basilli dizenteriyadan əziyyət çəkən xəstələrin nəcisini daşımaq üçün istifadə olunur.
    • Pike mühiti boğaz nümunələrindən streptokokları daşımaq üçün istifadə olunur.

    Anaerob mühit:

    Anaerob bakteriyaların böyüməsi üçün xüsusi mühitə ehtiyacı var, çünki onlar aşağı oksigen tərkibinə, azaldılmış oksidləşmə-reduksiya potensialına və əlavə qida maddələrinə ehtiyac duyurlar.

    Anaeroblar üçün mühitlər hemin və K vitamini kimi qida maddələri ilə əlavə oluna bilər. Bu cür mühitlər də fiziki və ya kimyəvi vasitələrlə azaldılmalı ola bilər. Mühitin qaynadılması istənilən həll olunmuş oksigeni xaric etməyə xidmət edir. 1% qlükoza, 0,1% tioqlikolat, 0,1% askorbin turşusu, 0,05% sistein və ya qırmızı qaynar dəmir çöküntülərinin əlavə edilməsi mühiti azalda bilər. İstifadədən əvvəl, hər hansı həll olunmuş oksigeni çıxarmaq üçün mühit su banyosunda qaynadılmalı və sonra steril maye parafinlə bağlanmalıdır.

    Robertson bişirilmiş ət (RCM) yetişdirmək üçün istifadə olunan mühit Clostridium spp tərkibində 2,5 sm qalınlığında öküz ürək əti və 15 ml qidalı bulyon var. Tioqlikolat bulyonun tərkibində natrium tioqlikolat, qlükoza, sistin, maya ekstraktı və kazein hidrolizat var.

    Metilen mavisi və ya rezazurin mühitə daxil olan oksidləşmə-reduksiya potensialı göstəricisidir. Azaldılmış vəziyyətdə, metilen mavi rəngsizdir.


    Bakteriofaq Lövhə Təhlili: Prinsip, Prosedur, Nəticələr

    Dünya antimikrobiyal müqavimətin artması problemləri ilə mübarizə apararkən, bakterial infeksiyaları müalicə etmək üçün faqların tətbiqlərini qiymətləndirmək üçün müxtəlif tədqiqatlar aparılır (antibiotik terapiyasının əvəzi kimi).

    Bakterial infeksiyaları müalicə etmək üçün faglardan istifadə 1920-1930-cu illərdə Şərqi Avropa və Sovet İttifaqında inkişaf etdirilmişdir.

    Lövhə analizi nümunədə yoluxucu virusun miqdarını təyin etmək üçün geniş istifadə edilən yanaşmalardan biridir. Yalnız hüceyrələrə görünən ziyan vuran viruslar bu şəkildə yoxlanıla bilər. Lövhə analizi ilk dəfə bakteriofaq ehtiyatlarının titrlərini hesablamaq üçün hazırlanmışdır. Hal-hazırda onun dəyişdirilmiş proseduru bir çox müxtəlif heyvan viruslarının titrinin təyini üçün də istifadə olunur.

    Phage Lövhə Təhlilinin Prinsipləri

    İnfeksion faqın (məsələn, T4 faqının) suspenziyası həssas bakterial hüceyrələrin (məsələn,) çəmənliyinə yayıldıqda. Escherichia coli), faj bakteriya hüceyrəsini birləşdirir, onun içərisində çoxalır və litik sərbəst buraxılması zamanı onu öldürür. Bakteriofaqın lizisi bakteriyaların qazonunda təmizlənmə zonasının və ya lövhənin meydana gəlməsi ilə göstərilir. Litik fag olmadıqda, bakteriyalar birləşən böyümə qazonunu meydana gətirir.

    Hər bir lövhə tək bir bakteriofaqın yoluxucu bir vahid kimi çıxış etdiyi və litik dövrünü başlatdığı yerə uyğun gəlir. İnfeksion fagın əvvəlcə yoluxmuş bakteriya hüceyrəsindən ətrafdakı hüceyrələrə yayılması ətrafdakı bakteriyaların parçalanması ilə nəticələnir və nəticədə çılpaq gözlə görünəcək qədər böyük olan lövhə əmələ gəlir. Lövhələr sonsuza qədər yayılmağa davam etmir. Yaranan lövhənin ölçüsü virusa, ev sahibinə və mədəniyyət şəraitindən asılıdır.

    İnkişaf edən lövhələrin sayı və müvafiq seyreltmə faktorları bakteriofaqların sayını hesablamaq üçün istifadə edilə bilər, yəni.
    nümunədə lövhə əmələ gətirən vahidlər (PFU).

    Faj lövhə analizlərində istifadə olunan mühit, agarın nisbətən aşağı faizinə malikdir və buna görə də adlanır yumşaq ağar fagın yaxınlıqdakı infeksiyasız hüceyrələrə yayılmasına icazə verir, lakin yeni faqların lövhənin uzaq hissələrinə keçməsinə icazə vermir.

    Bakteriofaq Lövhə Təhlili Proseduru

    Bakteriofaq Lövhə Təhlili

    Serial seyreltmə yolu ilə ehtiyat məhlulunun hazırlanması

    1. Sınaq borusu rəfinə səkkiz steril salin borusu (hər biri 0,9 ml) qoyun.
    2. Bir borunu "nəzarət" ilə etiketləyin və qalan beş borunu ardıcıl olaraq 10 -1 ilə 10 -7 arasında etiketləyin.
    3. Altı qidalı agar lövhəsini borularla eyni şəkildə etiketləyin.
    4. Steril 1 ml pipetdən istifadə edərək, 0,1 ml bakteriofaq suspenziyasını aseptik şəkildə 10 -1 etiketli şoran boruya köçürün.
    5. Borunu ovuclarınızın arasında yuvarlayaraq yaxşıca qarışdırın.
    6. Başqa 1 ml pipetka ilə 0,1 ml 10 -1 borudan 10 -2 boruya köçürün. Borunu qarışdırın.
    7. Hər köçürmə üçün təzə pipetdən istifadə edərək, 0,1 ml süspansiyonu 10 -2 borudan 10 -3 boruya köçürün və qalan şoran borular üçün ardıcıl olaraq bu seyreltmə prosedurunu davam etdirin. Seyreltmədən əvvəl və sonra hər bir borunu yaxşıca qarışdırmağı unutmayın.

    Faq-Aqar qarışığı ilə üst-üstə düşən boşqab

    1. (Qeyd: burada tez işləməlisiniz) Su banyosundan altı boru ərinmiş yumşaq örtüklü agar əldə edin. Pipetlə 0,3 ml bulyon kulturası E.coli yumşaq agar borularının hər birinə. Hər bir boruyu ovuclarınız arasında yuvarlayaraq yaxşıca qarışdırın. Hər bir boruyu baş hərflərinizlə etiketləyin və mümkün qədər tez su banyosuna qaytarın. Ağarın bərkiməsinə icazə verməyin.
    2. (Yenə tez işləyin) Yumşaq agarın aşılanmış bir borusunu su banyosundan çıxarın. Borunun səthindən bütün suyu silin. 1 ml pipetdən istifadə edərək, aseptik şəkildə köçürün 0,1 ml yumşaq agar borusuna 10-1 şoran faqın seyreltilməsi. Agar borusunu əlləriniz arasında yuvarlayaraq qarışdırın.
    3. Dərhal aseptik qaydada yumşaq agarı müvafiq olaraq 10 -1 kimi etiketlənmiş qidalı agar boşqabının səthinə tökün. Qapağı dəyişdirin və boşqab götürmədən, agarı bərabər paylamaq üçün onu masanın səthində 6-8 düymlük dairə ilə yumşaq bir şəkildə çevirin.
    4. Hər dəfə təzə 1 ml-lik pipetdən istifadə edərək və tez işləyərək, qalan şoran məhlulu faj seyreltmə boruları və salin nəzarət borusu üçün 1 və 2-ci addımları təkrarlayın.
    5. Hər seyreltmə borusu üçün onun müvafiq olaraq etiketlənmiş qidalı agar lövhəsindən istifadə edin.
    6. Yumşaq agarın bərkiməsinə icazə verin.
    7. Plitələri çevirin və 24 saat ərzində 35°C ilə 37°C arasında inkubasiya edin.

    Nəticələr

    1. İnkubasiyadan sonra hər bir lövhəni yoxlayın və aydın şəkildə fərqlənmiş lövhələri olan hər bir boşqabdakı lövhələrin sayını sayın.
    2. Hesablarınızı qeyd edin. Lövhələrin bütün lövhəni əhatə etdiyi və lövhələrin bir-birindən aydın görünmədiyi (300-dən çox lövhə) TNTC (saymaq üçün çox sayda) kimi qeyd edilməlidir.
    3. Yuxarıda qeyd olunan düsturdan istifadə edərək orijinal bakteriofaq suspenziyasında olan hər mililitrdə litik faqların sayını hesablayın.

    Bakteriofaq Lövhə Təhlilinin Nəticələri

    10 -5 seyreltmə faktorunda 48 lövhə müşahidə edilərsə, 0,1 ml virus əlavə olunduqca, lövhə əmələ gətirən vahidlər/ml 4,8 X 10 7 olacaq.


    Qidalandırıcı agar boşqabında nə yetişdirilə bilər?

    Bakteriya

    Hər bir fərqli dairəvi koloniya dəfələrlə bölünmüş fərdi bakteriya hüceyrəsini və ya qrupunu təmsil etməlidir. Bir yerdə saxlanılaraq, meydana gələn hüceyrələr görünən bir yamaq meydana gətirmək üçün yığılmışdır. Əksər bakteriya koloniyaları ağ, krem ​​və ya sarı rəngdə və kifayət qədər dairəvi formada görünür.

    Bacillus subtilis(3)
    Proteus vulgaris(4)
    Staphylococcus aures (5)
    Streptococcus pyogenes(6)

    Mayalar

    Bir növ göbələk (göbələk üçün cəm) maya təbiətdən tutmuş tədqiqat laboratoriyalarına və hətta çörək bişirmək üçün gündəlik mətbəxlərə qədər bir çox yerdə tapılır. Maya koloniyaları ümumiyyətlə bakteriya koloniyalarına bənzəyir. Bəzi növlər, məsələn Candida, parlaq səthi olan ağ ləkələr kimi böyüyə bilər.

    Candida Albicans) dərinin səthində böyüyə bilən maya növüdür(7)
    Dəyirmi maya koloniyaları(8)
    Çəhrayı maya koloniyaları(9)

    Qəliblər

    Kalıplar əslində göbələklərdir və onlar tez-tez ağımtıl boz, kənarları qeyri-səlis görünür. Onlar adətən mərkəzdən xaricə doğru fərqli bir rəngə çevrilirlər. Aşağıda iki qəlib nümunəsi göstərilmişdir:

    Yaşıl qəlib (Trichoderma harzianum)(10)
    Qara Kalıp (Aspergillus nidulaus)(11)

    Digər Göbələklər

    Mamır yaşıl koloniyaları, ağ bulud və ya sporlar halqasının böyüməsi ilə əlaqələndirilə bilər. Aspergillus, bu, atlet ayağı kimi göbələk infeksiyalarında yaygındır. Budur nəyin bir nümunəsi Aspergillus oxşayır:


    Media növləri:

    Mikroorqanizmlərin böyüməsi üçün qida maddələri və ətraf mühit şəraiti lazımdır. Laboratoriyada hazırlanmış, orqanizmin böyüməsi üçün istifadə edilən qida preparatları media (tək: orta) adlanır. Üç fiziki formadan istifadə olunur: maye və ya bulyon mühiti yarı bərk mühit və bərk mühit. Qida bulyonu, triptik soya suyu və ya beyin ürəyi infuziya bulyonu kimi maye mühitlər fermentasiya tədqiqatlarında və biokimyəvi testlərdə çoxlu sayda mikroorqanizmləri yaymaq üçün istifadə edilə bilər. Yarımbərk mühitdən fermentasiya tədqiqatlarında, bakteriya hərəkətliliyinin müəyyən edilməsində və anaerob böyümənin təşviqində də istifadə edilə bilər. Koloniyaların görünüşünü müşahidə etmək, (2) təmiz kultura təcridləri, (3) kulturaların çoxlu saxlanması və (4) xüsusi biokimyəvi tərkibini müşahidə etmək üçün qidalı agar və ya qanlı agar kimi bərk mühitlərdən mikroorqanizmlərin səthi böyüməsi üçün istifadə olunur. reaksiyalar. Mayeləşdirilmiş vəziyyətdə, bərk mühit ya sınaq borusuna, ya da petri boşqabına (qabına) tökülə bilər və agar petri boşqabına tökülürsə, boşqab agar boşqab kimi təyin olunur.


    Protokol

    1. Təhlükəsiz və Steril İş Yeri Hazırlayın

    Mikroorqanizmlərlə işləyərkən görülməli olan bütün laboratoriya qaydaları və təhlükəsizlik tədbirləri ilə tanış olun. Biotəhlükə təsnifatından asılı olmayaraq, mikroorqanizmlərlə təmasda olan bütün materiallar yoluxucu tullantı hesab olunur və utilizasiyadan əvvəl zərərsizləşdirilməlidir. İnstitusional Ətraf Mühitin Sağlamlığı və Təhlükəsizliyi departamentləri tərəfindən təmin edilənlərə uyğun olaraq təhlükəsizlik qaydalarına əməl edin, potensial çirklənmiş materialların (bioloji təhlükələrin) dərhal və lazımi şəkildə atılması üçün müvafiq tullantı qabları hazırlayın.

    Kaplama prosedurları üçün istifadə etməzdən əvvəl bütün alətləri, məhlulları və medianı sterilizasiya edin.

    Laboratoriya skamyasında iş sahənizi darmadağın edən bütün materialları təmizləyin.

    Mümkün çirklənməni minimuma endirmək üçün iş yerini dezinfeksiyaedici ilə təmizləyin.

    Bunsen ocağı qurun və alovun yuxarı qalxması nəticəsində yaranan steril sahə ərazisində yavaş-yavaş, ehtiyatla və qəsdən işləyin.

    BSL-2 orqanizmləri ilə işləyirsinizsə, iş yerinizi Biotəhlükəsizlik kabinetində qurun. Bunsen ocağını şkafın içərisində istifadə etmək olmaz, çünki alovdan gələn istilik onun funksionallığı üçün vacib olan hava axınını pozur.

    Prosedur üçün lazım olan bütün ləvazimatları steril sahənin yaxınlığındakı laboratoriya skamyasında təşkil edin. Bütün materialların düzgün etiketləndiyinə əmin olun. İşin səmərəliliyini artırmaq və lazımsız hərəkətlərdən qaçınmaq üçün iş sahəsinin təşkili eksperimental materialların havadakı çirkləndiricilərə məruz qalma müddətini minimuma endirəcəkdir.

    Bunsen burnerini skamyada sağınıza qoyun.

    Aqar plitələrini və ya Petri qablarını solunuza qoyun.

    Hüceyrə kulturalarını, boruları, kolbaları və şüşələri dəzgahın ortasına düzün.

    Boruların, kolbaların və şüşələrin qapaqlarını gevşetin ki, sonrakı manipulyasiyalar zamanı bir əllə asanlıqla açılsın.

    Mikroorqanizmlərlə işləməzdən əvvəl əlləri antiseptik sabun və ilıq su ilə yaxşıca yuyun.

    2. Streak Plate Proseduru: Quadrant Metodundan istifadə edərək Bakterial Koloniyaların İzolyasiyası

    Zolaqlı lövhə proseduru sadə mexaniki ayırma yolu ilə qarışıq populyasiyalardan təmiz bakteriya mədəniyyətlərini və ya koloniyalarını təcrid etmək üçün nəzərdə tutulmuşdur. Tək koloniyalar agar boşqabında və ya içərisində çoxluqda böyüyən milyonlarla hüceyrədən ibarətdir (Şəkil 1). Koloniya, tək bir hüceyrədən fərqli olaraq, çılpaq gözlə görünür. Nəzəri olaraq, bir koloniyadakı bütün hüceyrələr əvvəlcə boşqabda yerləşdirilən tək bir bakteriyadan əldə edilir və buna görə də klon və ya genetik olaraq eyni hüceyrələrin çoxluğu adlanır.

    Bakteriyalar müxtəlif forma və ölçülərdə mövcuddur. Məsələn, fərdi Escherichia coli hüceyrələr çubuq şəklindədir, orta uzunluğu 2 milyard sm, eni isə 0,5 milyard santimetrdir. Streptokokk hüceyrələr orta diametri 1 º03 milyard sm olan sferikdir. Bəzi bakteriyalar (məsələn E. coli) tək hüceyrələr kimi mövcuddur, digərləri isə fərqli birləşmə nümunələri yaradır. Streptokokkməsələn, cüt-cüt böyüyür və ya zəncir və ya hüceyrə qrupları əmələ gətirir. Ümumiyyətlə tək koloniyanın ikili parçalanmaya məruz qalan tək bir hüceyrədən əmələ gəldiyi güman edilir, lakin bu fərziyyə təbii olaraq cütlər, zəncirlər və ya çoxluqlar şəklində mövcud olan və ya digər mexanizmlərlə bölünən bakteriyalar üçün doğru deyil. Alternativ olaraq, çox sayda bakteriya örtülürsə, hüceyrələrin üst-üstə düşməsi baş verə bilər və iki və ya daha çox bakteriyanın tək bir koloniyaya səbəb olma ehtimalını artıra bilər. Möhkəm mühitdə böyüyən bakterial kulturaları təsvir edərkən və ya sadalayarkən bu fəsadların qarşısını almaq üçün koloniyalar belə adlandırılır. koloniya əmələ gətirən vahidlər (cfu).

    Zolaqlı lövhə proseduru ilə hüceyrə qarışığı Petri qabında yarı bərk, agar əsaslı qida mühitinin səthinə yayılır ki, daha az və daha az bakterial hüceyrə mühitin səthində geniş şəkildə ayrılmış nöqtələrdə yerləşdirilsin. və inkubasiyadan sonra koloniyalara çevrilir. Hüceyrələrin qarışığından tək koloniyaları təcrid etmək üçün kvadrant üsulu burada təsvir olunacaq.

    Çizgilərin örtülməsi bir sıra müxtəlif alətlərlə həyata keçirilə bilər (Şəkil 2). Metal döngə bir neçə dəfə təkrar istifadə edilə bilər və adi laboratoriya ştammları üçün istifadə olunur. Birdəfəlik plastik ilmələr kommersiyada mövcuddur və biotəhlükəsizlik şkafında BSL-2 ştammları ilə işləyərkən daha çox istifadə olunur. Bir çox tədqiqatçı alim zolaqlar üçün birdəfəlik, əvvəlcədən sterilizasiya edilmiş taxta çubuqlardan və ya düz diş çubuğundan istifadə etməyi üstün tutur. Bunlar birdəfəlik plastik döngələrə ucuz alternativdir və spora əmələ gətirən bakteriyaların olduğu torpaq kimi ətraf mühit nümunəsi ilə işləyərkən xüsusilə faydalı ola bilər.

    Birdəfəlik əvvəlcədən sterilizasiya olunmuş çubuqlar və diş çubuqları Bunsen burnerində yandırılmamalıdır, beləliklə, spora yaradan bakteriyaların lazımsız aerozollaşmasının və laboratoriya səthlərinin və ya agar lövhələrinin sporlarla çarpaz çirklənməsinin qarşısını alır.

    Aqar boşqabının alt hissəsinin kənarına (qapağına deyil) ən azı adınız, tarix, böyümə mühitinin növü və mühitin üzərinə qoyulacaq orqanizmin növü ilə etiketləyin.

    Plitələr qapaqda kondensasiya olmadan tamamilə qurudulmalı və zolaqlar qoymadan əvvəl otaq temperaturuna qədər qızdırılmalıdır. Plitələr 4 ºC-də saxlanılırsa, onları bir neçə saat və ya bir gün əvvəl çıxarın. Onları 2-3 boşqabdan çox olmayan kiçik, pilləli yığınlara yayın və qurumağa icazə verin.

    Zolaq lövhəsinin aşılanacağı nümunə ya bulyondakı hüceyrələrin süspansiyonu, ya da başqa bir agar boşqabının mövcud koloniyası ola bilər. Başlamaq üçün, bir boşqabın aşılanması üçün yalnız bir nümunənin istifadə edilməsi tövsiyə olunur. Vaxta və materiallara qənaət etmək üçün bir boşqab birdən çox nümunə üçün istifadə oluna bilər, ancaq bir nümunəni boşqabda çəkməyi bacardıqdan sonra.

    Birinci kvadrant üçün nümunə götürülür və sürətli, hamar, irəli-geri hərəkətlə mühitin səthinin təxminən dörddə birinə yayılır (Panel A Şəkil 3). Dəzgahdan ters çevrilmiş boşqabın alt yarısını qaldırın. Döngəni, çubuq və ya diş çubuğunu ağar səthi boyunca kənardan boşqabın mərkəzinə qədər dəfələrlə irəli-geri hərəkət etdirin.

    Əgər inokulum hüceyrə süspansiyonudursa, metal ilmə ilə ilgək dolusu və ya mikropipettorla 5-10 μl alın. Kaplama üçün alikvotu çıxarmazdan əvvəl hüceyrə süspansiyonunu burulğanla və ya burulğanladığınızdan əmin olun. Bu addımı yerinə yetirərkən aseptik texnikadan istifadə edin, inokulumu götürməzdən əvvəl və sonra təkcə ilməni deyil, həm də şüşə və ya borunun kənarını yandırın. Həmçinin, borunun və ya şüşənin kənarlarına mikropipetatorun ilgəsi və ya lüləsi ilə toxunmayın. Əgər inokulum pipetlənirsə, hüceyrə süspansiyonunu boşqabın müvafiq yerinə paylayın, sonra onu lövhənin birinci kvadrantına yaymaq üçün ilgək, çubuq və ya diş çubuğundan istifadə edin.

    Əgər inokulum başqa boşqabın koloniyasıdırsa, koloniyaya ilgək, çubuq və ya diş çubuğu ilə yumşaq bir şəkildə toxunun və sonra onu boşqabın birinci kvadrantına yayın. Koloniyaya toxunmadan əvvəl metal döngənin soyuduğundan əmin olun. Döngənin çox isti olmamasına əmin olmaq üçün ona heç bir zolaq əmələ gəlməyəcəyi təyin olunmuş yerdə agar boşqabına yüngülcə toxunun. Koloniyadan yalnız bir neçə hüceyrə lazımdır, bütün koloniya deyil.

    Əgər metal ilmədən istifadə edirsinizsə, boşqab üçün inokulum almadan əvvəl onu Bunsen ocağı ilə yandırın (Panel B Şəkil 3). Döngədən təxminən 3-4 düymdən başlayın, tel mavi koninin ucunda, alovun ən isti hissəsidir. Metal qırmızı isti olmalıdır. Teli hərəkət etdirin ki, alov döngəyə yaxınlaşsın. Bu manipulyasiya əvvəlki istifadədən döngədə qalan bakteriyaların aerozollaşmasının qarşısını alır.

    Alovlanma bakteriyaları (sporlar olmasa da) öldürür və qızdırılan havadan gələn konveksiya cərəyanları sonrakı manipulyasiyalar zamanı digər havadakı çirkləndiricilərin metal məftil üzərinə çökməsinə mane olur.

    Steril yastı diş çubuğundan istifadə edirsinizsə, dar ucunu baş barmağınız və üzük barmağınız arasında orta ilə 10-20° bucaq altında yumşaq bir şəkildə tutun və geniş ucundan dörddəbirləri kəsmək üçün istifadə edin. Döngə və ya taxta çubuq istifadə edirsinizsə, onu qələm kimi eyni bucaq altında saxlayın. Döngə, çubuq və ya diş çubuğu ağarın içinə girəcək qədər bərk basmayın.

    Birinci kvadrantı tamamladıqdan sonra boşqabı ters çevirin və skamyadakı qapağa geri qoyun. Çubuğu və ya diş çubuğunu atın və ya 4-cü addımda təsvir olunduğu kimi metal döngəni yenidən yandırın.

    Petri qabını ikinci kvadrantı cızmaq üçün 90 ° çevirin. Dəzgahdan ters çevrilmiş boşqabın alt yarısını qaldırın, sonra son zolağın sonuna yaxın birinci kvadrant üçün ilgəyə, çubuq və ya diş çubuğuna toxunun. İrəli-geri naxışdan istifadə edərək, birinci kvadrantdakı zolaqların son yarısını keçin, sonra boş ikinci kvadrantda keçin. İkinci kvadrant doldurulduqdan sonra boşqabı ters çevirin və yenidən dəzgahın qapağına qoyun.

    Döngə, çubuq və ya diş çubuğu heç vaxt orijinal əkinin çox hissəsinin yerləşdirildiyi birinci kvadrantdakı zolaqların birinci yarısına qayıtmamalıdır.

    Hər kvadrant üçün yeni bir plastik döngə, taxta çubuq və ya diş çubuğu istifadə edilməlidir.

    Üçüncü və dördüncü kvadrantlar üçün №6 addımı iki dəfə təkrarlayın.

    Çubuğu və ya diş çubuğunu atdığınızdan və ya hər kvadrant arasındakı metal döngəni yenidən alovlandırdığınızdan əmin olun.

    Dördüncü kvadrantı kəsərkən birinci kvadranta girməkdən çəkinin.

    Plitəni alt-üst inkubasiya edin ki, qapaqda yığılan kondensasiya koloniyalara damlamasın.

    3. Boşqabın tökülməsi proseduru: Qarışıq Nümunədə Bakterial Hüceyrələrin Sadalanması

    Bu üsul tez-tez qatılaşmadan əvvəl ərimiş agar mühitinə əlavə edilən qarışıq nümunədəki mikroorqanizmlərin sayını hesablamaq üçün istifadə olunur. Proses, müvafiq nümunənin seyreltilməsi ilə örtüldükdə bərk mühitdə bərabər paylanmış koloniyalarla nəticələnir. Bu texnika, bir boşqabda agarın daxilində və səthində koloniya əmələ gətirən vahidlərin ümumi sayının sadalandığı həyat qabiliyyətli boşqab hesablamalarını həyata keçirmək üçün istifadə olunur. Canlı boşqab sayları elm adamlarına böyümə əyriləri yaratmaq, nümunənin örtüldüyü borudakı hüceyrələrin konsentrasiyasını hesablamaq və müxtəlif mühitlərin və ya böyümə şəraitinin bakteriya hüceyrələrinin sağ qalmasına və ya böyümə sürətinə təsirini araşdırmaq üçün standartlaşdırılmış vasitələr təqdim edir.

    Steril, lakin boş Petri qabının dibinin kənarına (qapağına deyil) ən azı adınız, tarix, böyümə mühitinin növü və ərinmiş agar mühitinə əlavə olunacaq orqanizmin növü ilə etiketləyin.

    Kaplama zamanı seyreltmə faktorunu daxil edin seriyalı seyreltmələr, və ya nümunədəki hüceyrələrin konsentrasiyasının sistematik azalması ilə nəticələnən bir sıra təkrar seyreltmələr. Nümunədəki hüceyrələrin sayı statistik əhəmiyyətli diapazonun 30-dan 300 cfu-a qədər olan agar boşqabının tutumundan artıq olarsa, seriyalı seyreltmələrin hazırlanması zəruridir. Bir boşqabda 300 cfu-dan çox varsa, o zaman koloniyalar sıx və üst-üstə düşəcək.

    18 ml ərinmiş agar mühiti olan bir boru alın.

    Agar mühiti sınaq borularına tökülməli və avtoklavda əvvəlcədən sterilizasiya edilməlidir. Təcrübə üçün lazım olduğu gün, agar 30 dəqiqə buxarda əridilməlidir, sonra 55 ºC su banyosuna köçürülməlidir. Yalnız təcrübə üçün lazım olan qədər agar əridilməlidir, çünki onu təkrar istifadə etmək mümkün deyil.

    Plitələrin tökülməsindən on dəqiqə əvvəl ərinmiş agar boruları 55°C su banyosundan 48°C-də quraşdırılmış laboratoriya skamyasındakı istilik blokuna köçürülməlidir. Agar bu temperatura çatdıqdan sonra tökməyə hazırdır. Əgər agar çox isti olarsa, nümunədəki bakteriyalar öldürülə bilər. Əgər agar çox sərindirsə, bərkidikdən sonra mühit topaqlaşa bilər.

    Nümunənizi alın, bu ya bulyon mədəniyyəti, ya da koloniyadan olan hüceyrələrin tampon və ya şoran məhlulda qarışdırılması nəticəsində əmələ gələn hüceyrələrin süspansiyonu olmalıdır.

    Nümunələr tək nümunənin seyreltmə seriyasından əldə edilə bilər.

    Qablaşdırılacaq nümunənin həcmi 0,1 ilə 1,0 ml arasında olmalıdır.

    Boş Petri qabının qapağını açın və nümunənizi boşqabın ortasına paylayın (Panel A Şəkil 4). Qapağı bağlayın.

    Bu prosedur boyunca aseptik texnikadan istifadə edin.

    Nümunənizi boşqaba köçürmək üçün ya seroloji pipetkadan, ya da mikropipetdən istifadə edin. Nümunənin boşqabdan sıçramaması üçün onun axınına nəzarət edin.

    Ərinmiş agarın borusundan qapağı çıxarın və açıq borunun kənarını Bunsen burnerinin alovundan keçirin.

    Nümunəniz olan Petri qabının qapağını açın və ehtiyatla agarı tökün (Panel B). Şəkil 4). Qapağı bağlayın, sonra boşqabı yumşaq bir şəkildə çevirərək nümunəni agar ilə qarışdırın.

    Plitəni inkubasiya üçün çevirməzdən əvvəl agarın hərtərəfli bərkiməsinə icazə verin.

    4. Plitələrin yayılması proseduru: Plitələrin sayılması, zənginləşdirilməsi, seçilməsi və ya süzülməsi üçün diskret bakteriya koloniyalarının formalaşması

    Bu texnika adətən kiçik bir nümunə həcmində olan mikroorqanizmləri ayırmaq üçün istifadə olunur və bu, agar boşqabının səthinə yayılır, nəticədə hüceyrələrin müvafiq konsentrasiyası örtüldükdə agar səthində bərabər paylanmış diskret koloniyalar əmələ gəlir. Tək bir boşqabda koloniya əmələ gətirən vahidlərin ümumi sayının sadalandığı və nümunənin örtüldüyü borudakı hüceyrələrin konsentrasiyasını hesablamaq üçün istifadə olunduğu həyat qabiliyyətli boşqab hesablamaları üçün bu texnikadan əlavə olaraq, yayılmış örtük müntəzəm olaraq istifadə olunur. zənginləşdirmə, seçim və seçim təcrübələrində. Bu üç təcrübə üçün arzu olunan nəticə, adətən, agarın səthində diskret koloniyaların paylanmasının meydana gəldiyi boşqabların sayılması ilə eynidir. Ancaq məqsəd təmin etmək deyil hamısı canlı hüceyrələr koloniyalar əmələ gətirir. Bunun əvəzinə, yalnız müəyyən bir genotipə malik olan populyasiyada olan hüceyrələr böyüməlidir. Əgər son məqsəd əlavə təhlil üçün koloniyaları təcrid etməkdirsə, yayma boşqab proseduru sayma təcrübəsi üçün tökmə boşqab texnikası üzərində tətbiq oluna bilər, çünki koloniyalar agarın səthində əlçatan şəkildə böyüyür, eyni zamanda tökmə boşqab proseduru ilə ağarda yerləşdirilir.

    Yayılmış lövhə proseduru üçün burada təsvir olunan iki strategiya var. Birinci (Metod A) dönər masa və xokkey çubuğuna bənzər şüşə və ya metal çubuğun istifadəsini nəzərdə tutur. "Copacabana Metod" kimi istinad edilən ikinci (Metod B) əvvəlcədən sterilizasiya olunmuş şüşə muncuqların silkələnməsini nəzərdə tutur. Hər ikisi ağar səthində hüceyrələrin hətta yayılmasını asanlaşdırır.

    Metod A: Dönər masa və şüşə və ya metal çubuq ilə yayılma

    Aqar boşqabının alt hissəsinin kənarına (qapağına deyil) ən azı adınız, tarix, böyümə mühitinin növü və mühitin üzərinə qoyulacaq orqanizmin növü ilə etiketləyin.

    Kaplama zamanı seyreltmə faktorunu daxil edin seriyalı seyreltmələr.

    Plitələr qapaqda kondensasiya olmadan tamamilə qurudulmalı və yayılmadan əvvəl otaq temperaturuna qədər qızdırılmalıdır. Plitələr 4 ºC-də saxlanılırsa, onları bir neçə saat və ya bir gün əvvəl çıxarın. Onları 2-3 boşqabdan çox olmayan kiçik, pilləli yığınlara yayın və qurumağa icazə verin.

    Plitəni dönər masanın ortasına qoyun (Şəkil 5).

    Nümunənizi əldə edin, bu, bir bulyon mədəniyyəti və ya koloniyadan olan hüceyrələri buferə və ya şoran məhlulda qarışdırmaqla istehsal olunan hüceyrələrin süspansiyonu olmalıdır.

    Nümunələr tək nümunənin seyreltmə seriyasından əldə edilə bilər.

    Qablaşdırılacaq nümunənin həcmi 0,1 ilə 0,2 ml arasında olmalıdır.

    Petri qabının qapağını açın və nümunənizi agarın mərkəzinə paylayın. Qapağı bağlayın.

    Bu prosedur boyunca aseptik texnikadan istifadə edin.

    Nümunənizi boşqaba köçürmək üçün mikropipettordan istifadə edin. Nümunənin boşqabdan sıçramaması üçün onun axınına nəzarət edin.

    Şüşə çubuğu və ya metal çubuğu (həmçinin yayıcı adlanır) 70% (h/v) etanoldan ibarət stəkana batırın.

    DİQQƏT: Heç vaxt isti yayıcını spirt olan bir şüşəyə batırmayın.

    Etanol yalnız yayıcının alt hissəsinə və gövdənin birinci qarışına toxunmalıdır.

    Artıq etanolu Bunsen ocağının alovundan keçirərək boşaltın və yandırın.

    Alov etanolla təmasda olan yayıcı və gövdə uzunluğu boyunca hərəkət etməlidir, sonra tez söndürülməlidir.

    Etanol stəkanı alovlanarsa, vahimə etməyin! Mənzərənin üzərinə bir şüşə qapaq qoyun ki, bu da yanğını tez bir zamanda söndürəcək.

    Ağar boşqabının qapağını açın, qapağı sol əlinizdə baş və şəhadət barmağınızla tutun. Yayıcını kənarın kənarı boyunca agara toxunduraraq sərinləyin.

    Hüceyrələrin əlavə olunduğu agara toxunmayın. İsti yayıcı hüceyrələri öldürəcək.

    Sol əlinizlə (aqar boşqabının qapağını hələ də tutarkən) dönər masanı yavaş-yavaş fırladın.

    Bunun qarşısını almaq daha yaxşı olsa da, qapağı aşağı qoymaq lazımdırsa, Bunsen ocağının steril sahəsində dezinfeksiya edilmiş səthə üzü aşağı qoyun. Üzü yuxarı olan qapaqda, mikroorqanizmlərin və toz hissəciklərinin qapağın daxili səthinə enməsinə səbəb olan hava axınları yaradaraq, əşyaların və ya əllərin hərəkəti nəticəsində çirklənmə ehtimalı daha yüksəkdir.

    Sağ əlinizlə yayıcını ağarın səthinə yumşaq bir şəkildə tutun və nümunəni tədricən bütün boşqabın üzərinə bərabər şəkildə yayın. Dönər masa fırlanan kimi yayıcını boşqab boyunca irəli və geri hərəkət etdirin.

    Plitəni inkubasiya üçün çevirməzdən əvvəl nümunənin hərtərəfli udulmasına icazə verin (ən azı 5 dəqiqə).

    Metod B: Şüşə muncuqlarla yayılma: "Copacabana Metod"

    Aqar boşqabının alt hissəsinin kənarına (qapağına deyil) ən azı adınız, tarix, böyümə mühitinin növü və mühitin üzərinə qoyulacaq orqanizmin növü ilə etiketləyin.

    Kaplama zamanı seyreltmə faktorunu daxil edin seriyalı seyreltmələr.

    Ağar boşqabının qapağını açın, qapağı sol əlinizdə baş və şəhadət barmağınızla tutun. Sonra əvvəlcədən sterilizasiya edilmiş şüşə muncuqları olan şüşə borunu və ya şüşəni açın. Sağ əlinizlə borunun və ya butulkanın kənarını alovlandırın, sonra 10-12 steril şüşə muncuqları agar boşqabına tökün (Şəkil 6). Boşqabın qapağını bağlayın və qapağı dəyişdirmədən və kənara qoymadan əvvəl borunun və ya şüşənin kənarını bir daha alovlayın.

    Muncuqları aqardan bir neçə santimetr yuxarı borudan və ya şüşədən yumşaq bir şəkildə tökün ki, muncuqlar Petri qabından çıxmasın.

    4 mm diametrli şüşə boncuklardan istifadə edin. Onları şüşə butulkalarda və ya sınaq borularında otoklavda 121 ºC-də quru dövrədə (qravitasiya rejimi) 30 dəqiqə sterilizasiya edin.

    Yayıcı əvəzinə muncuqlardan istifadə etməyin bir üstünlüyü ondan ibarətdir ki, təkrar alovlanma üçün açıq etanol qabları tələb olunmur.

    Agar boşqabının qapağını açın və nümunənizi agarın mərkəzinə paylayın. Qapağı bağlayın.

    Bu prosedur boyunca aseptik texnikadan istifadə edin.

    Hər boşqab üçün 100-150 μl nümunə. Bu həcm hüceyrələrin hətta yayılmasını asanlaşdıracaq. Nümunənizi boşqaba köçürmək üçün mikropipettordan istifadə edin. Nümunənin boşqabdan sıçramaması üçün onun axınına nəzarət edin.

    Muncuqları ağarın səthinə 6-7 dəfə yumşaq silkələməklə nümunəni yayın. Hüceyrələrin bərabər yayılmasını təmin etmək üçün üfüqi silkələmə hərəkətindən istifadə edin.

    Muncuqları çevirməyin, əks halda bütün hüceyrələr boşqabın kənarında bitəcək.

    İPUCU: Düzgün icra olunarsa, prosedur "marakas silkələmək" kimi səslənir.

    Plitəni 60º döndərin, sonra üfüqi olaraq yenidən 6-7 dəfə silkələyin.

    Plitəni ikinci dəfə 60° fırladın və yenidən üfüqi şəkildə silkələyin. İndiyə qədər, agar səthində hüceyrələrin bərabər yayılmasına nail olmalısınız.

    Yayma bitdikdən sonra nümunə udulmalı və agarın səthi quru olmalıdır. Çirklənmiş muncuqları tərkibində 10% xlor ağartıcısı olan işarələnmiş bir qaba tökün.

    Muncuqları zibil qutusuna atmayın! İstifadə olunmuş muncuqlar yuyulacaq və avtoklavlanacaq, təkrar istifadə üçün yenidən sterilizasiya ediləcək.

    QEYD: Üç dəfə silkələməkdən sonra agar səthi hələ də yaşdırsa, mayenin agar tərəfindən udulması üçün boşqabın bir neçə dəqiqə oturmasına icazə verin, sonra boşqab səthi quru görünənə qədər №4-6 addımlarını təkrarlayın.

    İnkubasiya üçün lövhəni çevirin.

    5. Yumşaq Aqar Üstünlük Proseduru: Faqın İzolyasiyası və Sayımlanması üçün Lövhələrin Yaradılması (Lövhə Təhlili)

    Bu texnika adətən ölçüsü 100 ilə 200 nm arasında dəyişən bakteriofaq (faj) və ya bakterial virusları aşkar etmək və kəmiyyətini müəyyən etmək üçün istifadə olunur. Fərdi faj hissəciklərini görmək üçün elektron mikroskop lazımdır. Ancaq yoluxucu faj hissəciklərinin varlığı olaraq təsbit edilə bilər lövhələr agar boşqabında (Şəkil 7A). Faqlar ev sahibi bakterial hüceyrələrindən kənarda çoxalda bilməzlər, buna görə də yayılma və aşkarlama örtükdən əvvəl fagların və ana hüceyrələrin qarışdırılmasını tələb edir. Yumşaq agar örtmə proseduru üçün kiçik həcmdə, ümumiyyətlə 50-dən 200-ə qədər faj süspansiyonu 2,5-də bərabər şəkildə səpələnmiş təxminən 108 bakteriya (ana hüceyrə) olan boruya paylanır. -3,0 ml yumşaq (0,5-0,7% [ağ/həc]), ərinmiş qidalı agar. Nəticədə qarışıq sərt (1,5-1,9% [ağırlıq/həc]) qidalı agar boşqabının səthinə tökülür. Yumşaq agarın bərk ağarın bütün səthini örtməsini təmin etmək üçün boşqab kifayət qədər yellənir. Sonra boşqab yuxarı agar təbəqəsi bərkiməyə vaxt tapana qədər düz bir səthə qoyulur və sonra inkubatora yerləşdirilə bilər.

    Zamanla bakteriya hüceyrələrinin buludlu bir süspansiyonu olaraq adlandırılan a qazon, yumşaq agar mühitində görünən olur (Şəkil 7B). Bir faj bakteriya hüceyrələrindən birini yoluxdurarsa, hüceyrə daxilində çoxalırsa, sonra 100-ə qədər nəsil faqı (a.k.a.) buraxaraq hüceyrəni parçalayırsa, lövhələr əmələ gəlir. partlama ölçüsü). Yeni faj hissəcikləri yumşaq agara diffuziya edərək, lizis bakteriya hüceyrəsini əhatə edən ərazidə bakteriyaları yoluxdurur. Çoxsaylı infeksiya və lizis dövründən sonra yumşaq ağardakı buludlu bakterial hüceyrə süspansiyonu yox olur və lövhə adlanan təmizlənmə zonasını tərk edir. Hər bir lövhə 10 9-dan çox faj hissəciklərini ehtiva edir, hamısı genetik olaraq orijinal yoluxucu faq hissəcikləri ilə eynidir. Lövhə tək bir faj hissəciyindən əmələ gəldiyi üçün, nəticədə sayı lövhə əmələ gətirən vahidlər (pfu) sayıla bilər və orijinal konsentrasiyası, və ya titri, faj suspenziyası hesablana bilər. Lövhə analizi adlanan bu təcrübə növü, eyni zamanda elm adamlarına bir addımlı böyümə əyriləri yaratmaq, ev sahibi diapazonunun spesifikliyini araşdırmaq və genetik təcrübələr üçün bakteriya hüceyrələrini köçürmək üçün standart vasitələr təqdim edir.

    Göstərici bakteriyaları hazırlayın: Yumşaq agar örtmə təcrübəsi üçün bakterial host ştamının eksponent olaraq artan mədəniyyəti hazırlanmalıdır. Hər ev sahibinin öz böyümə tələbləri var. Hər boşqab üçün 0,3 ml-dən 0,5 ml-ə qədər göstərici bakteriya süspansiyonu tələb olunur. Əgər indikator bakteriyalarından ibarət kolba hazırlanırsa (məsələn, 25 ml), çarpaz çirklənmə ehtimalını minimuma endirmək üçün mədəniyyət daha kiçik hissələrə bölünməlidir (məsələn, steril vida qapaqlı borulara paylanan 5 ml alikot).Təcrübədə istifadəyə hazır olana qədər borular buz üzərində (4 ºC-də) saxlanıla bilər. Steril qida bulyonu aşılamaq üçün aseptik texnikadan istifadə edin, sonra bakteriya ştammının spesifikasiyasına uyğun olaraq inkubasiya edin. Qalan mədəniyyətlər günün sonunda atılmalıdır.

    Adsorbsiya borularını hazırlayın: İki steril mikrosentrifuqa borusunu rafa yerləşdirin. Birinci borunun qapağına “Faj” və ikinci borunun qapağına “Nəzarət” yazın.

    Tipik olaraq seriyalı seyreltmələr faj lizatları hazırlanır və örtülür, bu halda rafa əlavə mikrosentrifuqa boruları əlavə olunacaq və seyreltmə əmsalı ilə etiketlənəcəkdir.

    Faj ehtiyatları tək lövhələrdən təzə hazırlanmalı və 4 ºC-də saxlanmalıdır. Faq hissəciklərini parçalamaq üçün ehtiyatlar sınaqdan əvvəl ətraf mühitin temperaturuna qədər qızdırılmalıdır.

    Faj ehtiyatları ilə yumşaq bir şəkildə işlənməlidir - güclü burulğan və ya pipetlə vurmayın.

    Birinci boruya 50 μl faj nümunənizi əlavə edin, sonra ikinci boruya 50 μl faj buferi əlavə edin, bu da lövhə analizi üçün mənfi nəzarət rolunu oynayacaq.

    Fag və bakteriyaların bütün manipulyasiyalarında aseptik texnikadan istifadə edin.

    Sonra hər bir adsorbsiya borusuna 500 μl göstərici bakteriya əlavə edin.

    Uzun müddət buz və ya skamyada oturan bakteriya hüceyrələri borunun dibinə yerləşəcək. Təcrübə üçün alikvotu çıxarmazdan əvvəl mədəniyyət qarışdırılmırsa, adsorbsiya borusuna kifayət qədər bakterial hüceyrə köçürülməyəcək. Lövhələri aşkar etmək üçün yumşaq agarda (yəni qazonda) kifayət qədər sayda bakterial koloniya əmələ gəlməlidir. Alikvotları adsorbsiya borularına köçürməzdən əvvəl indikator bakteriyaları yumşaq bir şəkildə yenidən homojen suspenziyaya salmaq üçün burulğan mikserindən istifadə edin.

    Boruları yumşaq bir şəkildə silkələməklə bakteriya hüceyrələrini və faqı qarışdırın.

    Faq/bakteriya qarışığını indikator ştammına uyğun temperaturda 15-20 dəqiqə (30 dəqiqədən çox olmayan) inkubasiya edin.

    Qidalandırıcı yumşaq agar və sərt agar boşqablarını hazırlayın: Adsorbsiya baş verərkən, iki yumşaq agar borusunu (əvvəllər əridilmiş və 55 ºC-də saxlanmışdır) 46-48ºC-də quraşdırılmış laboratoriya skamyanızda istilik blokuna qoyun.

    Ərinmiş yumşaq agar 10-15 dəqiqə ərzində istilik blokunun temperaturu ilə tarazlaşdırılmalıdır. Ərinmiş yumşaq agar 15 dəqiqədən çox oturursa, bərkiməyə başlayacaq və bərk agarın üzərinə töküldükdə yığınlar əmələ gələcək. Ərinmiş yumşaq agar 10 dəqiqədən az oturursa, faj/bakteriya qarışığına əlavə edildikdə çox isti olacaq və örtmədən əvvəl host hüceyrələri öldürəcəkdir. Nəticə etibarilə, qazon əmələ gəlməyə bilər və çox az və ya heç bir lövhə aşkar edilə bilməz.

    Fag lizatının ardıcıl seyreltmələrini örtsəniz, əlavə yumşaq agar boruları hazırlayın.

    Ən azı adınız, tarix, böyümə mühitinin növü və adsorbsiya borularına uyğun gələn "Faj" və ya "Nəzarət" yazısı ilə iki qidalı sərt agar boşqabının dibinin kənarına (qapağına deyil) etiketləyin.

    Serial seyreltmələri örtürsə, seyreltmə əmsalı ilə etiketlənmiş əlavə lövhələri daxil edin.

    Sərt agar plitələri qapaqda kondensasiya olmadan tamamilə qurudulmalı və yumşaq agar əlavə edilməzdən əvvəl otaq temperaturuna qədər qızdırılmalıdır. Plitələr 4 ºC-də saxlanılırsa, onları bir neçə saat və ya bir gün əvvəl çıxarın. Onları 2-3 boşqabdan çox olmayan kiçik, pilləli yığınlara yayın və qurumağa icazə verin. Sərt agar təbəqəsindəki həddindən artıq nəmlik yumşaq agarın seyrelməsinə səbəb olacaq, bu da lövhənin əmələ gəlməsi zamanı faqın yumşaq agar vasitəsilə daha asan yayılmasına imkan verəcəkdir. Nəticədə lövhə ölçüsü artacaq.

    Plitə adsorbsiya boruları bir-bir aşağıdakı kimi: P1000 mikropipettorundan istifadə edərək faj/bakteriya qarışığını (təxminən 550 ml olmalıdır) aseptik şəkildə yumşaq agar borusuna köçürün, sonra məzmunu qarışdırmaq üçün onu ovuclarınızın arasında sürətlə çevirin. Borunu silkələməyin ki, hava qabarcıqları daxil olsun. Borunu sol əlinizdə tutaraq, sağ əlinizlə sərt agar boşqabının qapağını açın və dərhal borunun bütün məzmununu sərt agar boşqabının səthinə tökün. Qapağı bağlamazdan əvvəl ərinmiş yumşaq agarı plitənin bütün səthinə yaymaq üçün plitəni yumşaq, lakin sürətlə silkələyin ki, bərkiməyə vaxt tapmadan. Ərinmiş yumşaq agarı Petri qabının kənarlarına sıçratmaqdan çəkinin. Qapağı bağlayın.

    Bütün adsorbsiya boruları üçün №9 addımı təkrarlayın, bir boru anında.

    Plitələri düz bir səthə qoyun və yumşaq agar bərkiyənə qədər onlara toxunmadan dayanmasına icazə verin.

    Adətən 30 dəqiqə kifayətdir.

    Plitələri inkubasiya üçün çevirin.

    Bir neçə boşqab yığıla və bir-birinə yapışdırıla bilər, sonra inkubasiya üçün ters çevrilə bilər.

    İnkubasiyadan sonra lövhələr lövhələr üçün yoxlanıla bilər. Mənfi nəzarətdə yalnız bakteriya çəmənliyi olmalıdır (lövhələri göstərən deşiklər yoxdur). Lövhələr ölçüsü, forması və ümumi görünüşü ilə fərqlənir. Müəyyən bir faj növü, bir lövhənin mərkəzini steril diş çubuğu ilə diqqətlə vuraraq və inokulumu 100-1000 º ml bulyon və ya faj tamponu olan steril mikrosentrifuqa borusuna köçürməklə lövhələrin heterojen qarışığından təcrid oluna bilər. Bu lizat yuxarıda təsvir edilən eyni prosedurdan istifadə etməklə örtülə bilər. Saf faqın əldə edilməsini təmin etmək üçün ən azı 3-6 ardıcıl tək lövhə izolyasiyası lazımdır. Çox vaxt boşqabda üst-üstə düşməyən lövhələr yaradan titri tapmaq üçün lizat böyük diapazonda (10 -1 ilə 10 -10 arasında) seyreltilməlidir. Sayı lövhənin ölçüsündən asılı olaraq dəyişir.

    6. Replika Plitəsi Proseduru: Mutantların və Oksotrofların Skrinqi üçün Hüceyrələrin Transferi

    Bu texnika birincil boşqabda hüceyrə artımını ikincil lövhələrlə müqayisə etməyə imkan verir, seçilə bilən bir fenotip üçün hüceyrələrin ekranlaşdırılması üçün vasitə yaradır. Əvvəlcə ilkin və ya əsas boşqab hüceyrələrlə aşılanır və ya tək koloniyalar əmələ gətirən seyreltməni yaymaqla və ya onları şəbəkə işarələri ilə müəyyən edilmiş məkan modelində boşqaba köçürməklə aşılanır. Tərkibində böyümə inhibitorları olan media və ya müəyyən bir qida maddəsi olmayan mühitlər olan ikincil lövhələr birincil lövhədəki koloniyalardan olan hüceyrələrlə aşılanır. Koloniyaların məkan nümunəsi əvvəlcə bir məxmər parçasının əsas lövhəyə basılması ilə təkrarlanır. Bakterial hüceyrələr məxməri yapışdırırlar, çünki onlar məxmərlə ağardan daha çox yaxınlığa malikdirlər. Məxmərdəki hüceyrələrin izi daha sonra birincil lövhə ilə eyni koloniya modelini əks etdirən hüceyrə böyüməsi ilə çoxlu ikincil lövhələrə köçürülür. Başqa sözlə, bu, rezin möhürə sahib olmaq, böyümə modelini bir boşqabdan digərinə təkrarlamaq kimidir. Bu texnika əlverişlidir, çünki bir təcrübədə nisbətən çox sayda koloniyanın bir çox fenotip üçün eyni vaxtda yoxlanılmasına imkan verir.

    İlkin boşqab hazırlayın: Aqar boşqabının alt hissəsinin kənarına (qapağına deyil) ən azı adınız, tarix və böyümə mühitinin növü ilə etiketləyin.

    Ən azı iki bərabər aralı şaquli xətt və ən azı iki bərabər məsafəli üfüqi xətt ilə boşqabın altındakı bir şəbəkəni qeyd edin. Yaranan kvadratları nömrələyin.

    Hər kvadratı hüceyrə nümunəsi ilə aşılamaq üçün əvvəlcədən sterilizasiya edilmiş diş çubuğundan istifadə edin. Hər bir nümunə üçün kvadratın mərkəzini çəkin. Bütün kvadratı hüceyrələrlə örtməyin (Şəkil 8) və ya inkubasiya edildikdə nümunə çoxalacaq və ətrafdakı meydanları çirkləndirəcək.

    Hər kvadrat ya bulyon mədəniyyətlərindən və ya başqa boşqabdakı koloniyalardan əldə edilən fərqli nümunə ilə aşılanacaq.

    Müxtəlif ikincili mühitləri aşılamaq üçün istifadə ediləcək əsas lövhəni çevirin və inkubasiya edin.

    İkinci dərəcəli plitələri aşılayın: Birincil boşqab və bütün ikincil lövhələri yığın. Bir marker ilə plitələrin yan tərəfində bir oriyentasiya işarəsi qoyun. İşarənin hər bir boşqabın qapağında deyil, alt tərəfində olduğundan əmin olun.

    Steril məxmər parça alın və onu silindrik blokun üzərinə qoyun (Şəkil 9). Məxmər parçanı tutucu ilə yerində bağlayın. Blokdakı oriyentasiya işarəsinə diqqət yetirin.

    Blok Petri qabının dibi ilə eyni ölçüdə olmalıdır (diametri 10,2 sm). O, replika örtüyü zamanı məxmər parçanı bloka bağlayan kilidləmə halqası ilə gəlməlidir.

    Məxmər parça (15,2 x 15,2 sm kvadrat) əvvəlcədən sterilizasiya edilməlidir. 10 və ya 12 təmiz kvadrat yığın, sonra onları alüminium folqa ilə sarın, sonra onları 121 ºC-də avtoklavda quru dövrədə (ağırlıq dərəcəsi) 30 dəqiqə qoyun. Onları replika örtük təcrübəsində istifadə etməzdən əvvəl onları bir neçə saat isti sobada yerləşdirərək tamamilə quruduqlarına əmin olun. Nəzərə alın ki, məxmər kvadratlar sterilizasiyadan əvvəl maskalama lenti ilə silinməlidir.

    Məxmər kvadratlar yenidən istifadə edilə bilər. İstifadə olunmuş məxmər kvadratlar avtoklavda zərərsizləşdirildikdən sonra onlar adi suda yuyulmalı və yuxarıda göstərildiyi kimi yenidən sterilizasiya edilməlidir.

    Silindrik blok və sıxac istifadələr arasında 70% (h/v) etanolda və ya 10% xlor ağartıcıda qısaca yaxalamaqla dezinfeksiya edilməlidir.

    Qapağı çıxarın və əsas lövhəni çevirin. Lövhədəki oriyentasiya işarəsini blokdakı işarə ilə düzün. Plitəni aşağı salın ki, agarın səthi silindrik blokdakı məxmər parça ilə təmasda olsun. Əsas boşqabın arxasına barmaqlarınızın ucları ilə yüngül, lakin bərabər şəkildə basıb saxlayın və sonra əsas lövhəni blokdan diqqətlə qaldırın. Plitədəki qapağı dəyişdirin.

    İlkin boşqabdan olan hüceyrələrin məxmər izi, yeni məxmərlə təəssürat yaratmazdan əvvəl təxminən 7-8 ikincil lövhəni aşılamaq üçün istifadə edilə bilər.

    İkinci dərəcəli plitələrin hər biri ilə #7 addımı təkrarlayın.

    Müsbət nəzarət olaraq, seriyanın son lövhəsi sınaqdan keçmiş bütün ştammların böyüməsi lazım olan agar mühiti olmalıdır. Beləliklə, hüceyrələrin seriyadakı bütün ikincil lövhələrə köçürüldüyünü təsdiqləyə bilərsiniz. Əks halda, müəyyən bir test mühitində böyümənin olmaması ştammın fenotipindən çox, qeyri-kafi hüceyrə transferi ilə əlaqələndirilə bilər.

    Yanlış pozitivlərin qarşısını almaq üçün ikincil plitələr ən azdan ən əlverişli substrata qədər sifariş edilməlidir. Əks halda, qida maddələri hüceyrələrin əlverişsiz mühitdə böyüməsinə imkan verən lövhələr arasında ötürülə bilər.

    Plitələri çevirin və inkubasiya edin.

    Qeyd: Böyümə üçün ikincil lövhələri yoxlayarkən, böyümə və iz arasında fərq qoyduğunuzdan əmin olun. Sonuncu mənfi nəticədir.

    7. İş yerinin təmizlənməsi

    Bunsen burnerini söndürün, sonra boşqablardakı və ya borulardakı mədəniyyətlər, əlavə mühit və digər reagentlər də daxil olmaqla bütün ləvazimatları kənara qoyun.

    Lövhələrdə və ya borularda köhnə mədəniyyətlərin laboratoriya skamyasında və ya saxlama yerlərində yığılmasına icazə verməyin. Kalıplar və arzuolunmaz bakterial növlər kimi məşhur çirklənmə mənbələri olan bu nümunələr ehtiyac qalmayan kimi atılmalıdır.

    Çirklənmiş laboratoriya qablarını (əlcəklər, pipet ucları, kimviplər), şüşə qablar (borular, kolbalar, butulkalar) və təhlükəli tullantıları (bakterial mədəniyyətlər və ya faq məhlulları, istifadə edilmiş lövhələr) lazımi utilizasiya qabına qoyun. Patogen olmayan ilə işləyərkən E. coli ştamm (BSL-1), yalnız yoluxucu olmayan təhlükəli tullantılar əmələ gəlir. Eyni prosedurları patogen orqanizmlərlə (BSL-2 və ya daha yuxarı) həyata keçirərkən yoluxucu təhlükəli tullantılar əmələ gəlir. Biotəhlükə təsnifatından asılı olmayaraq, təhlükəli tullantılar atılmadan əvvəl avtoklavlanmalı və ya dezinfeksiya edilməlidir. Təcrübə zamanı yaranan biotəhlükələrin dərhal və lazımi qaydada utilizasiyası üçün BMBL-də (5-ci Nəşr), eləcə də sizin institusional Ətraf Mühitin Sağlamlığı və Təhlükəsizliyi departamentiniz tərəfindən verilən təlimatlara əməl edin.

    İş yerini dezinfeksiyaedici ilə təmizləyin.

    Laboratoriyadan çıxmazdan əvvəl əlləri antiseptik sabun və ilıq su ilə yaxşıca yuyun.

    8. Nümayəndəliyin nəticələri

    Streak-plate texnikası. Zolaq örtükləri üçün nümunə tətbiqi aşağıda göstərilmişdir Şəkil 1. Bu prosedur qarışıq hüceyrə mədəniyyətlərindən bakterial koloniyaları təcrid etmək üçün istifadə olunur və mikrobiologiya və molekulyar genetikada mənimsənilməsi üçün ən vacib üsullardan biridir. Hər bir koloniya genetik olaraq eyni olan hüceyrələrin populyasiyasını təmsil edir. Bir çox aşağı axın tətbiqləri üçün ya tək koloniyadan, ya da tək bir koloniyadan olan hüceyrələrlə medianın aşılanması nəticəsində yaranan təmiz bakteriya mədəniyyətindən başlamaq vacibdir. Məsələn, bir koloniyada ayrı-ayrı hüceyrələrin morfologiyası işıq mikroskopundan istifadə etməklə yoxlanıla bilər. Genetik identiklik, tək koloniya ilə başlayan hüceyrə mədəniyyətindən təcrid olunmuş genomik DNT-dən kiçik subunit ribosomal RNT geninin ardıcıllığı ilə təyin edilə bilər. Metabolik xüsusiyyətlər hüceyrələri müxtəlif biokimyəvi və fizioloji analizlərə məruz qoyaraq təsvir edilə bilər. Yalnız təmiz kulturalarla bu cür təcrübələr aparmaqla müəyyən bir mikroorqanizmə aid xüsusiyyətlərə əmin olmaq olar. Nəticələr mədəniyyətin çirklənmiş olması ehtimalı ilə örtülmür. Hüceyrələri boşqabın üzərinə sürtmək üçün istifadə edilən alətin sterilliyi bütün prosedur boyu qorunmasa, texniki xətalar baş verə bilər. Kvadrantlar arasında bir döngə yandırmağı və ya təzə diş çubuğunu götürməyi unutmaq tək koloniya əldə etməyi çətinləşdirir. Bəzi bakteriya növlərini təmiz mədəniyyətdə təcrid etmək mümkün deyil, çünki onlar müəyyən böyümə tələbləri üçün başqa bir bakteriya növü ilə əməkdaşlıqdan asılıdır. Sintroflar adlandırılan bu orqanizmlər yalnız birgə mədəniyyət şəraitində yetişdirilə bilər, buna görə də koloniyalar (əgər yaranarsa) həmişə iki və ya daha çox növdən ibarət olacaqdır. Laboratoriyada ətraf mühit nümunələrindən əldə edilən bakteriyalarla zolaq lövhəsi prosedurunu həyata keçirərkən rast gəlinən başqa bir problem, hüceyrələrin ənənəvi laboratoriya ştammlarından kənara çıxan böyümə xüsusiyyətləri nümayiş etdirməsidir. E. coli. Bu cür bakteriya ştammları ağar boşqabının böyük bir hissəsinə yayılan, kalsifikasiya olunmuş və beləliklə də zolaqlı alətlə nüfuz etməyə davamlı və ya yapışqan kapsulla əhatə olunmuş budaqları olan filamentli (hüceyrələrin sıx qruplarından fərqli olaraq) koloniyalar yarada bilər. belə ki, ayrı-ayrı koloniyaları ayırd etmək mümkün deyil. Bu xüsusiyyətlər tək-tək koloniyaları zolaqlı lövhə üsulu ilə təmizləməyi çətinləşdirir.

    Boşqab texnikası. Pour-plate texnikası ilə koloniyalar agarda, eləcə də agar mühitinin səthində əmələ gəlir və beləliklə, nümunədəki canlı hüceyrələrin sayını hesablamaq üçün əlverişli vasitə təmin edir. Bu prosedur müxtəlif sənaye tətbiqlərində istifadə olunur. Məsələn, məişət, kommersiya və sənaye obyektləri, eləcə də kənd təsərrüfatı təcrübələri nəticəsində əmələ gələn maye tullantıların (məsələn, çirkab suları, fırtına drenajlarından axıdılması) təmizlənməsinə cavabdeh olan tullantı sularının təmizlənməsi qurğusu üçün suyun təhlili çox vacibdir. geniş təmizləmə prosesindən sonra nümunələr. Təmizlənmiş tullantı suları (qeyri-içməli su) müxtəlif üsullarla təkrar istifadə olunur - kənd təsərrüfatında qeyri-ərzaq bitkilərinin suvarılması üçün, yaşayış yerlərində sanitariya yuyulması üçün və sənaye soyutma qüllələrində - ona görə də kimyəvi və mikrob çirklənmədən təmizlənməlidir. İçməli su (içməli su) EPA standartlarına uyğun olaraq təmizlənməlidir və xüsusi insan patogenlərinin sadalanmasına imkan verən mikrobioloji örtük metodlarından istifadə etməklə sınaqdan keçirilir. Göstərilən Şəkil 10 ictimai içməli bulaqdan toplanmış su nümunəsində mövcud olan bakteriya hüceyrələrindən əmələ gələn bakteriya koloniyalarıdır. İçməli su üçün təmizlənmə tədbirlərini nəzərə alsaq, bakterial patogenlərin bu koloniyaları əmələ gətirməsi ehtimalı azdır, lakin mikroblar hər yerdədir və hətta patogen olmayan suşlarla çirklənməni tamamilə aradan qaldırmaq mümkün deyil, yalnız minimuma endirmək olar. Başqa bir misal olaraq, əczaçılıq şirkəti istehsal, saxlama və daşınma zamanı yeni dərman preparatının mikroblarla çirklənmə dərəcəsini və ya bioyükünü qiymətləndirməlidir. Prosesin müxtəlif mərhələlərində dərmandan nümunə götürməklə və nümunələri tökmə prosedurundan istifadə etməklə, mikrob yükünü və ya çirkləndirici bakteriyaların sayını asanlıqla müəyyən etmək olar. Bundan sonra mikrob çirklənməsini minimuma endirmək və ya aradan qaldırmaq üçün ehtiyat tədbirləri hazırlana bilər. Dökülmə texnikasını yerinə yetirərkən baş verən ən çox yayılmış texniki səhvlərdən biri, nümunənin ərinmiş agar ilə qeyri-kafi qarışdırılmasıdır ki, bu da koloniyaların bir-birinə yığılmasına səbəb olur və beləliklə, boşqabların sayının qeyri-dəqiq olmasına səbəb olur. Tez-tez rast gəlinən başqa bir səhv, ərinmiş agarı çox isti olanda tökmək və nümunədəki bir çox bakteriya hüceyrələrini öldürməkdir. Bu səhv həmçinin nümunədə koloniya əmələ gətirən vahidlərin ümumi sayını az təmsil edən nömrələr verən boşqab saymalarının düzgünlüyünə təsir edəcək.

    Spread-plate texnikası. Yayılan boşqab texnikası həyat qabiliyyətli boşqab saymalarını yerinə yetirmək üçün bir vasitə kimi faydalı olan tökmə boşqab proseduruna bənzəyir. Bununla belə, yayılma lövhəsi texnikasından istifadə edərək əmələ gələn koloniyalar agar mühitinin səthində bərabər paylandığı üçün ayrı-ayrı koloniyalardan olan hüceyrələr təcrid oluna və sonrakı eksperimental manipulyasiyalarda istifadə edilə bilər (məsələn, zolaq lövhəsi üçün inokulum kimi). bulyon mədəniyyəti). Yayılmış lövhə texnikasının mühüm komponent olduğu üç ümumi tətbiq zənginləşdirmə, seçim və seçim təcrübələridir. Hər üç tətbiqdə, istənilən hüceyrə növü qarışıqdan ayrıla və daha sonra istənilən sayda biokimyəvi, fizioloji və ya genetik testlərə məruz qala bilər.

    An zənginləşdirmə təcrübəsi qarışıq mədəniyyətin bir mühitə örtülməsini və ya nümunə daxilində istənilən metabolik xüsusiyyətləri, böyümə xüsusiyyətlərini və ya davranışlarını nümayiş etdirən mikroorqanizmlərin böyüməsinə kömək edən ətraf mühit şəraitində inkubasiya lövhələrini əhatə edir. Bu strategiya digər orqanizmlərin böyüməsini maneə törətmir, lakin mədəniyyətdəki digərlərinə nisbətən arzu olunan mikroorqanizmlərin sayının artması ilə nəticələnir. Beləliklə, zənginləşdirmə lövhəsində əmələ gələn koloniyalar, ehtimal ki, istənilən genotipi əks etdirən fenotipik xüsusiyyətlər nümayiş etdirirlər. Məsələn, əgər məqsədiniz 1000-dən çox müxtəlif bakteriya növünün qarışığı olan ətraf mühit nümunəsindən azot fiksasiya edən bakteriyaları yetişdirməkdirsə, o zaman nümunəni azot çatışmazlığı olan bir mühitə örtmək bu birləşməni istehsal edə bilən bakteriyalar üçün zənginləşdirəcəkdir. azotun fiksasiyası üçün tələb olunan bir sıra genlər tərəfindən təmin edilən metabolik imkanlardan istifadə edən atmosfer.

    A seçim təcrübəsi qarışıq mədəniyyətin yalnız müəyyən bir gen və ya gen dəstini ehtiva edən hüceyrələrin böyüməsinə imkan verən bir mühitə örtülməsini nəzərdə tutur. Bu tip eksperiment molekulyar biologiya laboratoriyalarında bakteriya ştammlarının antibiotiklərə davamlı genləri olan plazmidlərlə transformasiyası zamanı geniş yayılmışdır. Əgər məqsədiniz yalnız rekombinant hüceyrələri və ya plazmidi uğurla qəbul etmiş hüceyrələri yetişdirməkdirsə, onda nümunənin müvafiq antibiotik konsentrasiyası ilə əlavə edilmiş mühitə qoyulması bu xüsusi dərmana müqavimət göstərən hüceyrələr üçün seçiləcək.

    A skrininq təcrübəsi qarışıq mədəniyyətin bütün canlı hüceyrələrin böyüməsinə imkan verən bir mühitə örtülməsini nəzərdə tutur, lakin istənilən genotipə malik olan hüceyrələr fenotipinə görə digər hüceyrələrdən fərqlənə bilər. Yenə də bu tip təcrübə molekulyar biologiya laboratoriyalarında mutagenez analizləri və ya genlərin plazmidlərə klonlaşdırılması zamanı geniş yayılmışdır.Şəkildə göstərildiyi kimi klassik bir nümunə Şəkil 11, istifadə edir lacZ gen kodlayan β-qalaktosidaza bu ferment hüceyrələrə təbii substratı olan laktozanın substrat analoqu olan X-Gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-qalaktopiranosid) metabolizə etməyə imkan verir. X-Gal-ın β-qalaktosidaza tərəfindən parçalanması həll olunmayan mavi məhsulla nəticələnir. Beləliklə, əgər mühitdə X-gal və ya vəhşi tip (funksional) və ya mutant (qeyri-funksional) olan hüceyrələrdən ibarət nümunə varsa lacZ gen bu mühitə yerləşdirilir, sonra inkubasiyadan sonra funksional bir funksiyanı daşıyan vəhşi tipli hüceyrələr lacZ gen mavi-piqmentli koloniyalar kimi görünəcək, funksional olmayan mutant hüceyrələr lacZ gen piqmentsiz (“ağ”) koloniyalar kimi görünəcək.

    Yayılan lövhə texnikasını ilk dəfə öyrənərkən ən çox rast gəlinən texniki problem, agar səthində hüceyrələrin qeyri-bərabər yayılmasıdır. Dönər masa və şüşə çubuqdan istifadə edərkən nümunə çox tez udula bilər ki, koloniyalar yalnız boşqabın mərkəzinə yaxın əmələ gəlsin. "Kopakabana Metodunu" yerinə yetirərkən, şüşə muncuqlar agar səthində silkələnmək əvəzinə burulur. Nəticədə lövhənin xarici kənarı boyunca çoxlu koloniyalar böyüyür. Hər iki halda, koloniyaların nəticədə paylanması mövcud olan tam səth sahəsindən istifadə etmir, beləliklə, hüceyrələr bir-birinə yığılıb üst-üstə düşən koloniyalara çevrilə bilər, bu da boşqab sayını qeyri-dəqiq və ya hüceyrə növlərinin fərqləndirilməsini qeyri-mümkün edir.

    Soft Agar Overlay Technique. Bakteriya koloniyalarını saymaq üçün istifadə edilən yayılmış lövhə texnikasına bənzər bir prosedur, fagların sayını hesablamaq üçün istifadə edilə bilər. 30 ilə 300 arasında bakteriya hüceyrəsi ağar səthinə boşqab sayı (cfu/ml) üçün yayıldığı halda, 100 ilə 400 arasında yoluxucu faq hissəcikləri təbəqə daxilində lövhələrin sayı (pfu/ml) üçün 108-109 host hüceyrə ilə qarışdırılır. sərt qidalı agarın səthinə yayılmış yumşaq agar. Əksi göstərilmədiyi təqdirdə, ümumiyyətlə tək bir bakteriya hüceyrəsinin bölünməsi və koloniya adlanan tək bir çoxluqda çoxlu sayda genetik eyni hüceyrə topladığı güman edilir. Daha əvvəl müzakirə edildiyi kimi, hüceyrələr dəstələr şəklində böyüdükdə (yəni, cütlər, tetradlar, zəncirlər və ya qruplar) və ya tək koloniyanın formalaşmasına mane olan kapsullar kimi böyümə xüsusiyyətlərini nümayiş etdirdikdə bu fərziyyə etibarlı deyil. Bənzər bir fərziyyə lövhənin əmələ gəlməsi üçün edilir, çünki hər bir lövhə tək bir fajın fəaliyyətini təmsil edir. Bu ifadə yalnız bir faq bir bakteriyaya yoluxduqda doğrudur. Birdən çox faj hissəcikləri bir bakteriyaya yoluxsa nə olar? Bu problem, yoluxucu faq hissəciklərinin nümunədəki ev sahibi hüceyrələrin sayına nisbətini təsvir edən faj - infeksiya çoxluğu (MOI) ilə eksperimentlər apararkən nəzərə alınmalı olan mühüm statistik parametrə aiddir. Bəzi hüceyrələr birdən çox faqı adsorbsiya etdiyi halda, digər hüceyrələr yalnız bir və ya heç bir faq adsorbsiya etmədiyinə görə, hüceyrənin birdən çox faqla yoluxma ehtimalını minimuma endirmək üçün host hüceyrələrin populyasiyası aşağı MOI-də (𢙁) yoluxmalıdır. hissəcik. Lövhə əmələ gətirən vahidin (pfu) funksional tərif kimi istifadə edilməsi, faj ehtiyatının titrini hesablamaq üçün lövhə saymalarını apararkən bu fəsadların qarşısını alır.

    Göründüyü kimi Şəkil 12, lövhə morfologiyası müxtəlif faqlar üçün dəyişir. Bəzi fajlar kiçik lövhələr (panel A), digərləri isə böyük lövhələr yaradır (panel B). Bir sıra dəyişənlər lövhə ölçüsünə təsir göstərir. Bu dəyişkənliyə kömək edən texniki səbəblər var. Məsələn, tam media və qalın sərt agar daha böyük lövhələrin inkişafını dəstəkləyir, çünki ev sahibi hüceyrələr daha uzun müddət fag artımını təmin edə bilir. Ana hüceyrələrin yüksək örtük sıxlığı (hər boşqab üçün 9 cfu) lövhə ölçüsünün azalmasına səbəb olacaqdır. Yumşaq agarın aşağı konsentrasiyalarından istifadə yumşaq agarda faj hissəciklərinin diffuziya sürətini artıracaq və bununla da lövhələrin ölçüsünü artıracaq. Xatırladaq ki, bu artan diffuziya sürəti, əgər sərt agar plitələri tamamilə qurulmasa, istəmədən baş verə bilər ki, qabda kondensasiya və ya artıq nəmlik örtükdəki yumşaq agarı sulandırır. Bu texniki nəzarət müəyyən bir faq üçün lövhə ölçüsü ilə bağlı uyğun olmayan nəticələr verəcəkdir.

    Lövhənin ölçüsü, həmçinin adsorbsiya səmərəliliyi, gizli dövrün müddəti (fag adsorbsiyasından ev sahibi hüceyrənin lizisinə qədər olan vaxt) və partlama ölçüsü (böyük hüceyrələr tərəfindən buraxılan nəsillərin sayı) daxil olmaqla bir sıra host hüceyrə hadisələri ilə əlaqədardır. tək infeksiya). Bakterial böyümənin müxtəlif fazalarında faj hissəcikləri ev sahibi hüceyrələri yoluxdurarsa, lövhə ölçülərinin heterojen bir qarışığı müşahidə edilə bilər. Məsələn, erkən eksponensial fazada adsorbsiya olunanlar gec eksponensial fazada adsorbsiya olunanlara nisbətən daha çox nəsil fajı olan daha böyük lövhələr əmələ gətirirlər. Bir qayda olaraq, litik faq şəffaf lövhələr əmələ gətirir, lizogen faq isə bulanıq lövhələr əmələ gətirir. Bununla belə, bəzi litik fajlar, göstərilən "öküz gözü" lövhəsi kimi maraqlı nümunələr yaradır Şəkil 12B. Bu şəffaf lövhələr bulanıq halo ilə əhatə olunmuşdur, çünki lövhənin kənarındakı hüceyrələr tam parçalanmamışdır və ya fag infeksiyasına davamlı ola bilər. Mülayim faqla müşahidə edilən "öküz gözü" nümunəsi şəffaf bir halqa ilə əhatə olunmuş bulanıq mərkəzi olan lövhədir. Bu morfologiya liziz-lizogeniya qərarı ilə bağlı MOI və ana hüceyrənin fiziologiyasını əks etdirir. Hüceyrələr ilk dəfə faqla yoluxduqda, MOI aşağı olur və hüceyrələr sürətlə böyüyür, çünki qida maddələri birlikdə boldur, bu, litik böyüməni asanlaşdırır. Getdikcə daha çox hüceyrə parçalandıqca MOI artır və şəffaf lövhə əmələ gəlir. Lövhənin mərkəzindəki lizogenlər böyüməyə davam edir, çünki onlar lizisə qarşı immunitetlidir və bulanıq mərkəzi olan şəffaf lövhə meydana gətirir.

    Bindirmə texnikası eukaryotik viruslarla lövhə analizləri üçün dəyişdirilə bilər. Eyni şəkildə bakteriofaq yumşaq ağarda bakteriya hüceyrələrinin qazonunda lövhələr əmələ gətirir, eukaryotik viruslar isə gel ilə örtülmüş hüceyrələrin bir qatında lövhələr əmələ gətirir. Bir təbəqə mədəniyyət qabının səthində yan-yana böyüyən, bir-birinə toxunan, lakin bir-birinin üstündə böyüməyən birləşən hüceyrə təbəqəsidir. Bu tip lövhə analizini həyata keçirmək üçün eukaryotik hüceyrələrin həssas monolaylarına virus alikotları əlavə edilir. Sonra monolayer agaroza əsaslı qida mühiti ilə örtülür - bu gel yoluxmuş hüceyrələrdən ayrılan nəsil viruslarının monolayerdəki qonşu hüceyrələrə yayılmasını məhdudlaşdırır. Müvafiq olaraq, virionların sərbəst buraxılması ilə zədələnmiş hüceyrələri ehtiva edən sferik bir sahə və ya lövhə istehsal olunur. Lövhələrin vizuallaşdırılmasına kömək etmək üçün canlı hüceyrələri ləkələyən boyalar yoluxmuş və yoluxmamış hüceyrələr arasında kontrast təmin edərək hüceyrə mədəniyyətinə tətbiq oluna bilər.

    Yumşaq-aqar örtük texnikası lövhə analizlərindən başqa təcrübələr üçün istifadə olunur. Birincisi, sərt qidalı agarın bakteriyaların böyüməsinə imkan verən bir dəstək matrisi olduğunu xatırlamaq vacibdir. İkincisi, üst-üstə düşmə üçün istifadə olunan yumşaq agar sərt agardan fərqli qida tərkibinə malik ola bilər. Bu yolla, yumşaq-aqar müxtəlif böyümə xüsusiyyətləri və ya metabolik xüsusiyyətləri üçün bakteriya ştammlarını yoxlamaq üçün bir vasitə kimi xidmət edə bilər. Məsələn, üst-üstə düşmə texnikası bakteriyaların sellülozu parçalamaq qabiliyyətini yoxlamaq üçün istifadə olunur (Teather and Wood 1982). Tək koloniyalar qeyri-selektiv sərt agar mühitində yetişdirilir, sonra 0,1% (ağırlıq/həc) karboksimetilselüloz (CMC) olan yumşaq agar sərt agarın səthinə yayılır. İnkubasiyadan sonra lövhələr yumşaq ağarda koloniyaların ətrafındakı təmizlənmə zonalarının vizuallaşdırılmasına imkan verən ləkə ilə dolur. Təmizləmə, mühitdəki sellülozu parçalayan bakteriyaların ifraz etdiyi hidrolitik fermentlər nəticəsində yaranır. Bu yaxınlarda, üst-üstə düşmə texnikası mal-qaranın rumenində tapılan metanogen arxeyanın böyüməsini maneə törədən bakteriyaları aşkar etmək üçün istifadə edilmişdir (Gilbert və b. 2010). Ətraf mühit nümunələrindən bakterial izolatlar sərt agar qidalı mühitdə yetişdirilir, sonra koloniyalar tərkibində metanogenlərin mədəniyyəti olan yumşaq agar ilə örtülür. İnkubasiyadan sonra plitələr koloniyaların ətrafındakı böyümənin qarşısını alan zonalar üçün yoxlanılır. Bu üsul yumşaq agarda metanogenlərin inhibitorlarını istehsal edən bakteriya ştammlarını müəyyən edir.

    Yumşaq-aqar örtmə texnikası ilə baş verən ən çox yayılmış texniki səhvlər çox isti və ya çox sərin olduqda ərimiş yumşaq agarın tökülməsidir. Çox isti olarsa, mühitə qarışdırılmış bakteriya hüceyrələri örtükdən əvvəl öldürüləcəkdir. Əgər çox sərindirsə, yumşaq-aqar bərk ağarın üzərinə töküldükdə yığınlar əmələ gələcək. Hər iki halda, nəticələr ən yaxşı halda qeyri-müəyyən və ya oxunmaz olacaq.

    Replika lövhəsi proseduru. Böyümə tələblərini yoxlamaq üçün kulturaların bir növ qida mühitindən digərinə köçürülməsi bir neçə suşdan daha çox olduqda olduqca zəhmətli olur. Replika örtük çox sayda mikroorqanizmin eyni vaxtda skrininqinə imkan verən bir üsuldur. Məsələn, yabanı tipli hüceyrələrin mədəniyyətini mutagenləşdirdikdən sonra, tək koloniyalı lövhələr əldə etmək üçün mədəniyyətin boşqab qatılmalarını yaymaq olar. Birincil lövhələr böyümə üçün lazım olan bütün birləşmələri sintez edən vəhşi tipli prototroflar və böyümə üçün zəruri olan xüsusi birləşmələri sintez edə bilməyən biosintetik yolda genetik mutasiya keçirən mutant auksotroflar da daxil olmaqla, bütün hüceyrələrin böyüməsini dəstəkləyən bir mühitdən ibarətdir. Hüceyrələrin qarışığını tam bir mühitə örtməklə, itkin qidalar ətraf mühitdən götürülə bilər. Prototroflar və auksotroflar arasında fərq yaratmaq üçün koloniyalar minimal mühitə təkrarlana bilər. Yalnız prototroflar böyüyə biləcək. Birincil boşqabın məkan nümunəsi qorunub saxlandığı üçün ikincil boşqabın birincil lövhə ilə müqayisəsi mutant koloniyaları müəyyən etməyə imkan verir. Mutantların hansı birləşməni artıq sintez edə bilmədiyini müəyyən etmək üçün koloniyalar xüsusi birləşmələrlə (məsələn, amin turşuları, karbon mənbələri, vitaminlər və s.) əlavə edilmiş minimal mühitə təkrarlana bilər. Bu şəkildə, replika-plastinka prosedurundan istifadə edərək, eyni anda yüzlərlə koloniya yoxlanıla bilər. Baş verə biləcək texniki səhvlərdən biri çox nəm olan agar plitələrindən istifadə etməkdir ki, bu da koloniyaların bir-birinə bulaşmasına səbəb olur və boşqabdakı bütün mədəniyyətləri çirkləndirir. Bu, tamamilə etibarsız nəticələr verir. Başqa bir texniki səhv, hüceyrələri məxmərdən ikincil plitələrə köçürərkən çox təzyiq tətbiq etməkdir. Yenə də, ikincil plitələri inkubasiya etdikdən sonra, nəticədə yaranan koloniyalar auksotrofiya deyil, çirklənmə ilə əlaqəli böyümə fenotipləri yarada bilər.

    Bütün vəhşi tipli mikrob növləri prototrof deyil, ona görə də replika lövhəsi proseduru eyni vaxtda xarakterik böyümə tələbləri üçün müxtəlif vəhşi tipli ştammları yoxlamaq üçün istifadə edilə bilər. Göründüyü kimi Şəkil 13, dörd fərqli hüceyrədən "dabs" Pseudomonas bakteriya ştammları YTA (panel A) adlı tam mühiti ehtiva edən şəbəkə ilə işarələnmiş boşqabın üzərinə iki nüsxədə vurulmuşdur. Daha sonra ştamlar fərqli karbon mənbəyi (müvafiq olaraq asetamid, laktoza və qlisin) ilə əlavə edilmiş minimal mühitdən (MSA) ibarət üç ikinci dərəcəli lövhəyə (B, C və D panelləri) təkrarlandı. Nəticələr dörddən ikisinin olduğunu göstərir Pseudomonas suşlar (P. aeruginosaP. stutzeri) bu üç karbon mənbəyində böyümək iqtidarında deyillər. Nəzarət olaraq, hüceyrələrin prosedur boyu köçürüldüyünü təsdiqləmək üçün ştamlar YTA mühiti ilə dördüncü boşqaba təkrarlandı. Dörd ştamın hamısı YTA nəzarət lövhəsində böyüdüyündən, seriyanın əvvəlki üç lövhəsində göstərilən böyümə çatışmazlıqları etibarlıdır. Replikasiyanın nəticələri cədvəldə verilmişdir Cədvəl 1. Tez-tez edilən bir səhv, ikincil boşqabda böyümənin izini müsbət nəticə kimi şərh etməkdir. Məsələn, fenotipini müqayisə edin P. aeruginosa buna P. stutzeri MSA+asetamiddə (panel B). Sonuncu, böyümənin izini göstərir, bu mənfi nəticədir və əvvəlki boşqabdan olan qida maddələri ana hüceyrələrlə ötürülürsə baş verə bilər. Yeni hüceyrə böyüməsi baş vermir, çünki çatışmayan qidalar nəsil hüceyrələri üçün mövcud deyildir. Bir izi faktiki böyümə ilə qarışdırmaq asandır. Şübhə varsa, eksperiment birincil lövhədən ikincil mühitə zolaqlı hüceyrələr kimi alternativ üsuldan istifadə etməklə təkrar edilməlidir.

    Şəkil 1. Bir boşqabdakı tək koloniyaların nümunəsi. Lövhənin mərkəzinə yaxın olan çəhrayı kürələr koloniyalardır Serratia marcescens, Enterobacteriaceae ailəsində qram mənfi, çubuqşəkilli Proteobacterium. Rütubətli mühitlərə üstünlük verdiyinə görə, bu mikroorqanizm adətən vannaların künclərində, lavabo hövzələrində, kafel məhlulunda və duş pərdələrində böyüyür. S. marcescens prodigiozin adlı qırmızımtıl piqment istehsal etdiyi üçün tanımaq asandır. Bu boşqabdakı koloniyalar 30°C-də 24 saat ərzində inkubasiya edildikdən sonra dördüncü kvadrantda tək koloniyalar görünməklə, zolaqlı lövhə texnikasından istifadə edilməklə yaradılmışdır. Qalan üç kvadrant, agar səthində çökən hüceyrələrin üst-üstə düşən koloniyalara çevrildiyi birləşən böyüməyi göstərir.

    Şəkil 2. Streak-plate texnikası üçün istifadə olunan alətlər. Yuxarıdan aşağıya diş çubuğu (dairəvi olmayan yastı), məftil döngəsi, birdəfəlik plastik döngə və taxta çubuqlar göstərilir. Diş çubuqları adətən istifadə etməzdən əvvəl sterilizasiya etmək üçün avtoklavda saxlandıqda geniş ucu aşağı olan kiçik bir şüşə qaba köçürülür, sonra folqa ilə örtülür. Taxta çubuqlar 18 mm-lik sınaq borularına köçürülür, sonra istifadə etməzdən əvvəl sterilizasiya üçün avtoklavlanır.

    Şəkil 3. (A) Quadrant metodundan istifadə edərək zolağın plitə üsulu. Nümunəni aqar səthinin dörddə birinə sürətlə, hamar, arxa və dördüncü hərəkətlə halqadan boşqabın mərkəzinə yaymaq üçün əvvəlcədən sterilizə edilmiş ilgək, çubuq və ya diş çubuğundan istifadə olunur. Bu hərəkət boşqabın dörd kvadrantının hər biri üçün təkrarlanır. İnkubasiyadan sonra hüceyrələrin boşqabda yerləşdirilməsi üçün istifadə olunan alətin yolu boyunca hüceyrə artımı görünür. Bu texnikadan istifadə edərək qarışıq nümunədə hüceyrələrin mexaniki ayrılması dördüncü kvadrantda tək koloniyalarla nəticələnməlidir (bax. Şəkil 1 misal üçün). Tək koloniyalara koloniya əmələ gətirən vahidlər (cfu) deyilir. (B) Metal ilmədən zolaqların vurulması üçün istifadə edildikdə, inokulum və ya agar mühiti ilə təmasdan əvvəl Bunsen odunun alovu ilə sterilizasiya edilməlidir. Xatırladaq ki, alovun ən isti hissəsi mavi konusun ucudur. Alətin sapını tutaraq, teli döngədən təxminən 3-4 düym məsafədə alova qoyun. Telin qızarması üçün kifayət qədər uzun müddət buraxın. Teli hərəkət etdirin ki, alov döngəyə yaxınlaşsın. İnokuluma toxunmazdan əvvəl metal halqanın soyuduğundan əmin olun.

    Şəkil 4. Plitə tökmə texnikası. (A) Kiçik həcmli nümunə (0,1-1,0 ml arasında) aseptik qaydada boş, lakin steril Petri qabına 5,0 ml seroloji pipetkadan istifadə etməklə paylanır. (B) Təxminən 48 ºC temperatura tarazlaşdırılmış ərinmiş agar daha sonra nümunə ilə birlikdə Petri qabına tökülür. Qapağı bağladıqdan sonra boşqab nümunəni və ərinmiş agarı qarışdırmaq üçün yumşaq bir şəkildə burulur. Agarın təxminən 30 dəqiqə bərkiməsinə icazə verilir, sonra plitələr inkubasiya üçün ters çevrilir.

    Şəkil 5. Dönər masa və şüşə yayıcı ilə yayma texnologiyası. Agar boşqab dönər masaya yerləşdirildikdən sonra kiçik həcmli nümunə (0,1-0,2 ml) mikropipetatordan istifadə edərək aseptik qaydada boşqabın mərkəzinə paylanır. Yayıcı onu bir etanol şüşəsinə batıraraq, sonra artıq etanolu alovlandırmaq üçün Bunsen brülörünün alovundan keçirərək sterilizasiya edilir. Nümunə ilə təmasda olmamışdan əvvəl, yayıcı boşqabın kənarına yaxın olan agara toxunaraq soyudulmalıdır. Dönər masa yavaş-yavaş fırlanarkən, yayıcı yavaş-yavaş boşqab boyunca nümunə vasitəsilə irəli və geri hərəkət edir. Bu hərəkət nümunənin tədricən, lakin hətta agar səthinə yayılmasına imkan verir. Qapağı bağladıqdan sonra, boşqab inkubasiya üçün boşqabın tərsinə çevrilməzdən əvvəl nümunənin tam olaraq agara hopması üçün boşqab ən azı 5 dəqiqə dəzgahın üstünə qoyulmalıdır.

    Şəkil 6. Şüşə muncuqlarla spread-plate texnikası (Copacabana Method). Avtoklavda əvvəlcədən sterilizasiya edilmiş şüşə muncuqlar dəzgahın üstündə oturan agar boşqabının səthinə tökülür. Kiçik həcmli nümunə (100-150 ºCl) mikropipettordan istifadə edərək aseptik qaydada agarın mərkəzinə paylanır. Boşqabın qapağı bağlı halda, muncuqları boşqab boyunca 6-7 dəfə irəli-geri zərif şəkildə hərəkət etdirmək üçün üfüqi silkələmə hərəkətindən istifadə edilir, nümunə yayılır. Bu hərəkət boşqab 60° fırlanandan sonra təkrarlanır. Sarsıntı hərəkəti başqa 60° fırlanmadan sonra üçüncü dəfə təkrarlanır. Nümunə tam olaraq agar mühitinə hopduqdan sonra muncuqlar 10% ağartıcı olan stəkana tökülür. Bundan sonra plitələr inkubasiya üçün ters çevrilir.

    Şəkil 7. Lövhələrin əmələ gəlməsinə əsaslanaraq faqı təcrid etmək və saymaq üçün istifadə olunan yumşaq-aqar örtüyü texnikası (həmçinin lövhə analizi adlanır). (A) Yumşaq agarda böyüyən bakteriya koloniyalarının birləşən asqısında fagın olması təmizlənmə zonaları və ya lövhələr kimi aşkar edilə bilər. Phage T4, ev sahibini yoluxduran virulent, ikiqat zəncirli DNT faqıdır. Escherichia coli, ev sahibi hüceyrələrin parçalanmasına və nəsil faqının sərbəst buraxılmasına səbəb olur. İnfeksiya və lizisin çoxlu raundlarından sonra qonşu E. coli orijinal yoluxmuş ev sahibi hüceyrəni əhatə edən bilavasitə ərazidəki hüceyrələr yox olur və milyardlarla T4 faq hissəciklərini ehtiva edən lövhə buraxır. Phage T4 təxminən 1 mm diametrli lövhələr əmələ gətirir. Bu təcrübədə, Phage T4-ün 2 x 10 8 pfu/ml ehtiyatının 10-5 seyreltilməsinin 200 ºCl-i təqribən 300 ºCl ilə qarışdırıldı. E. coli göstərici hüceyrələri 37 ºC-də eksponent olaraq böyüyən, qazlı bir mədəniyyət kimi hazırlanmışdır. Həm faj, həm də bakteriyalar EHA yumşaq agar borusuna əlavə edildi, qarışdırıldı, sonra EHA sərt agar boşqabının səthinə töküldü. Qeyd edək ki, bu halda örtükdən əvvəl fag və bakteriyaların adsorbsiyasına icazə vermək lazım deyildi. Yumşaq agarın 20 dəqiqə dayanmadan bərkiməsinə icazə verdikdən sonra lövhələr ters çevrildi və 24 saat ərzində 37ºC-də inkubasiya edildi. (B) İnfeksiya edən faq hissəcikləri olmadıqda, bakteriya artımı diskret koloniyaların görünmədiyi yumşaq agarda hüceyrələrin buludlu asqısına səbəb olur. Bunun əvəzinə, bu vəziyyətdə bakterial hüceyrələrin bərabər qazon E. coli, bütün yumşaq agar təbəqəsi boyunca əmələ gəlir.

    Şəkil 8. Bakteriya nümunələri ilə ilkin lövhənin (master) hazırlanması. Nümunələri mütəşəkkil saxlamaq üçün boşqabın dibi tor şəklində qeyd oluna və nəticədə kvadratlar nömrələnə bilər. Hər bir nümunəyə şəbəkədə kvadrat təyin edilə bilər. Göstərilənlər düzgün və yanlış peyvənd nümunələridir.İdeal olaraq, nümunəni "dab" etmək üçün diş çubuğu kimi steril bir peyvənd alətindən istifadə edərək kvadratın mərkəzinə az sayda hüceyrə köçürülür (4 nömrəli hüceyrə). №5 xanada (“yamaq”) və xana #6 (“doldurma”) təsvir olunanlar kimi ümumi aşılama səhvləri inkubasiyadan sonra bakteriya nümunələrinin həddən artıq çoxalması ilə nəticələnir və nəticədə bitişik kvadratları çirkləndirir.

    Şəkil 9. Replika-plitə texnikası, fenotip ekranları üçün hüceyrələri birincil lövhələrdən ikincil lövhələrə köçürmək üçün istifadə olunur. İlkin boşqabdakı işarə məxmər örtüklü blokdakı işarə ilə düzlənir, sonra agar səthinin parça ilə təmasda olmasına imkan vermək üçün aşağı salınır. Hüceyrələr barmaq ucları ilə əsas boşqabın üzərinə yüngül, lakin bərabər şəkildə basaraq boşqabdan məxməriyə köçürülür. Bu hərəkət məxmər üzərində hüceyrə nümunələrinin izini əsas lövhə ilə eyni məkan modelində buraxacaq. Hüceyrələri məxmərdən ikinci dərəcəli boşqaba köçürmək üçün eyni prosedur istifadə olunur. Məxmər üzərində eyni ilkin boşqab təəssüratından istifadə edərək 7-8 ikinci dərəcəli lövhə vurula bilər. Məxmərdən aşılanan son boşqab müsbət nəzarət kimi xidmət etməlidir. Bu, bütün sınaqdan keçirilmiş suşların böyüməsini dəstəkləyən, bütün lövhələr seriyası boyunca kifayət qədər hüceyrə köçürməsini təmin edən bir mühit olmalıdır. İnkubasiyadan sonra ikincil lövhələr yoxlanıla və böyüməyə qarşı böyüməyə görə qiymətləndirilə bilər. Beləliklə, bir təcrübədə bir neçə bakterial ştamm eyni vaxtda bir neçə böyümə mühitində yoxlanıla bilər.

    Şəkil 10. Pour-plate texnikasından istifadə edərək nümunə nəticə. İctimai içməli bulaqdan toplanmış 1,0 ml su nümunəsi steril boş Petri qabına töküldü. Sonra ərinmiş, lakin soyudulmuş YTA nümunə ilə qaba töküldü. Su nümunəsində mövcud ola biləcək maya və kiflərin böyüməsinin qarşısını almaq üçün agarda 100 μg/ml sikloheksimid də var idi. Qarışdırmaq üçün yumşaq bir şəkildə çevirdikdən sonra boşqab düz bir səthə qoyuldu və agarın tamamilə bərkiməsinə icazə verildi. Plitə 37 ºC-də 48 saat inkubasiya edildi. Göstərilən bu təcrübənin nəticəsidir. Böyük və dairəvi formada olan səth koloniyaları ilə çox kiçik və qeyri-müntəzəm formada olan yeraltı koloniyaların görünüşündəki fərqə diqqət yetirin, çünki bərkimiş mühit alt səthdə koloniyanın yayılmasına mane olur.

    Şəkil 11. Yayılmış lövhə texnikasından istifadə edərək nümunə nəticə. "Copacabana Metod" skrininq təcrübəsi üçün E. coli hüceyrələrinin qarışığını plitə etmək üçün istifadə edilmişdir. Bu halda, böyümə mühitində (LB) X-Gal var, buna görə də funksional β-qalaktosidaza fermentini ifadə edən hüceyrələr mavi koloniyalar əmələ gətirir, bu hüceyrələr isə mutasiyaya malikdirlər. lacZ gen və beləliklə funksional β-qalaktosidaza fermentini ifadə edə bilməyən ağ koloniyalar əmələ gətirir. Tez-tez "mavi/ağ ekran" olaraq adlandırılan iki növ koloniya eyni boşqabda bir-birindən asanlıqla fərqləndirilə bilər.

    Şəkil 12. Yumşaq-aqar örtük texnikasından istifadə edərək lövhə analizinin nümunə nəticəsi. Host ştammında əmələ gələn lövhələr göstərilir Mycobacterium smegmatis mc 2 155 (ATCC 700084) iki müxtəlif faq tərəfindən: (A) Mikobakteriofaqları məhv edənlər və (B) Mikobakteriofaq MSSS. Bu faqlar 2010-cu ilin yazında UCLA MIMG 103L laboratoriya kursunda tələbələr tərəfindən təcrid edilmişdir. M. smegmatis patogen olmayan Aktinobakteriyadır və vərəm kimi ciddi xəstəliklərə səbəb olduğu bilinən bir neçə patogenləri ehtiva edən mikobakteriyalar ailəsinə aiddir.M. tuberculosis, M. africanum, M. bovis) və cüzam (M. leprae). Destroyers-in 10-2 seyreltilməsinin təqribən 50 μl və hər biri 10-3 MSSS seyreltməsi 500 μl ilə inkubasiya edilmişdir. M. smegmatis 20 dəqiqə 37 ºC-də, sonra MBTA (yumşaq agar) ilə qarışdırılır və MHA (bərk agar) boşqablarına tökülür. Yumşaq agarın 20 dəqiqə ərzində zədələnmədən bərkiməsinə icazə verdikdən sonra lövhələr ters çevrildi və 48 saat ərzində 37ºC-də inkubasiya edildi. Hər bir fag tərəfindən istehsal olunan fərqli lövhə morfologiyalarına diqqət yetirin. Məhvedicilər (A) kiçik (orta diametri təxminən 1 mm), litik faq üçün xarakterik olan şəffaf lövhələr əmələ gətirir, MSSS (B) isə bulanıq halo ilə əhatə olunmuş şəffaf mərkəzləri olan böyük "öküz gözü" lövhələr əmələ gətirir (orta diametri təxminən 3,2 mm). . Dumanlı halqa fag infeksiyasına davamlı bakteriyalardan ibarət ola bilər. Bu nümunə bulanıq lövhələr əmələ gətirən lizogen fag tərəfindən əmələ gələndən fərqlidir.

    Şəkil 13. Replika lövhəsi prosedurundan istifadə etməklə nəticə nümunəsi. dörd Pseudomonas suşlar (P. aeruginosa, P. putida, P. fluorescens və P. stutzeri) üç müxtəlif karbon mənbəyində böyümə üçün iki nüsxədə sınaqdan keçirilmişdir: asetamid, laktoza və qlisin. (A) İlkin lövhə göstərildiyi kimi dörd ştamla aşılanmış tam mühitdir (YTA). 24 saat ərzində 30 ºC-də inkubasiya edildikdən sonra bütün dörd suş YTA-da böyüyür. Birincil boşqab tək karbon mənbəyi ilə əlavə edilmiş minimal mühitə (MSA) boşqabın təkrarlanması üçün istifadə edilmişdir: asetamid (B), laktoza (C) və qlisin (D). Seriyadakı son boşqab müsbət nəzarət YTA lövhəsi (E) idi. Göstərildiyi kimi, ştammlar ikincil plitələrdə inkubasiyadan sonra dəyişkən böyümə nümunələrini göstərir. Qeyd edək ki, böyümə və hüceyrələrin izi arasında fərq qoymaq bəzən çətindir. Məsələn, yaratdığı izi müqayisə edin P. stutzeri üç MSA plitələr tərəfindən eyni üç plitələr heç bir artım P. aeruginosa. Göstərilən böyümə nümunələri ilə müqayisədə hər ikisi mənfi nəticələrdir P. putidaP. fluorescens. Bununla belə, hüceyrələrin seriyadakı bütün ikincil plitələrə köçürüldüyünü təsdiqləyən müsbət nəzarət lövhəsində bütün suşlar böyüyür. Bu təcrübənin nəticələri cədvəldə verilmişdir Cədvəl 1.

     YTA (əsas)MSA + asetamidMSA + laktozaMSA + glisinYTA (nəzarət)
    P. aeruginosa+---+
    P. putida+++++
    P. fluorescens+++++
    P. stutzeri+---+

    Cədvəl 1. Replika örtük nəticələrinin xülasəsi. Artım artı (+) işarəsi ilə, artım isə mənfi (-) işarəsi ilə göstərilib. YTA tam mühitdir (maya tripton agar) və MSA minimal mühitdir (minimal duzlu agar). MSA lövhələri göstərildiyi kimi tək bir karbon mənbəyi ilə tamamlandı.


    Tip 2: Eksponensial artım əyrisi

    İkinci növ artım eksponensialdır.

    Eksponensial artım əyriləri başlanğıcda yavaş-yavaş artır, lakin qazanclar sürətlə artır və zaman keçdikcə asanlaşır. Ümumiyyətlə, eksponensial artım belə görünür:

    Gündəlik həyatda da eksponensial böyümə imkanları tapacaqsınız (baxmayaraq ki, məncə, onlar daha az yayılmışdır).

    • İnvestisiya və sərvət: Mürəkkəb faizin gücü sayəsində, pensiya əmanətləriniz ilk illərdə kiçik bir xəzinə kimi başlayır, lakin son on və ya iki əmanət zamanı balon ölçüsündə olur.
    • E-poçt abunəçiləri və veb sayt trafiki: Yeni veb-saytlar burada və orada yalnız bir trafik axını alır, lakin həftələr və aylar keçdikcə bu damlalar ziyarətçilərin və abunəçilərin qəzəbli çayına çevrilə bilər.
    • Sahibkarlıq və biznesin inkişafı: Biznesiniz üçün qurduğunuz aktivlər bir-birinin üstünə yığılır və uğurlu biznesin ömrü boyu gəlir birləşir.
    • Sosial media izləyiciləri: Yalnız 100 izləyiciniz olduqda, daha 100 izləyici əldə etmək altı ay çəkə bilər. 1000 izləyiciniz olduqdan sonra növbəti 100-ü əldə etmək yalnız bir ay çəkə bilər. 100.000 izləyiciniz olduqdan sonra daha 100 izləyici əldə etmək çox güman ki, bir gün çəkəcək. Sizin böyümə sürətiniz qartopu.

    Tibb və Ekologiya üçün Qeyri-Genetik Kateqoriyalar

    Tibbdə mikroorqanizmlər morfologiya, fiziologiya və ekologiyada digər atributlarla yaşayış mühiti, enerji və karbon mənbəyi ilə müəyyən edilir.

    Öyrənmə Məqsədləri

    Təsnifatda istifadə olunan əlamətləri təsvir edin: ekologiyada bakteriya, virus və mikroorqanizmlər

    Əsas Çıxarışlar

    Əsas Nöqtələr

    • Patogen öz sahibində xəstəliyə səbəb olur. Tibbdə patogenlərin bir neçə geniş növü var: viruslar, bakteriyalar, göbələklər, eukaryotik parazitlər və prionlar.
    • Bakteriyaları laboratoriyada identifikasiya edərkən aşağıdakı xüsusiyyətlərdən istifadə olunur: Qram boyama, forma, kapsulun olması, birləşmə meyli, hərəkətlilik, tənəffüs, böyümə mühiti və onun hüceyrədaxili və ya hüceyrədənkənar olması.
    • Viruslar əsasən morfologiyası, nuklein turşusu növü, çoxalma üsulu, sahib orqanizmlər və törətdikləri xəstəliyin növü kimi fenotipik xüsusiyyətlərə görə təsnif edilir.
    • Ekologiyada mikroorqanizmlər ehtiyac duyduqları yaşayış mühitinin növünə və ya trofik səviyyəyə, enerji mənbəyinə və karbon mənbəyinə görə təsnif edilir.
    • Bioloqlar müəyyən ediblər ki, mikrob həyatı ekstremofillər adlanan və bir çox növ mövcud olan mürəkkəb orqanizmlər üçün tamamilə əlverişsiz olan ekstremal mühitlərdə sağ qalmaq üçün heyrətamiz bir çevikliyə malikdir.
    • Müxtəlif növ mikroorqanizmlər müxtəlif enerji və karbon mənbələrinin qarışığından istifadə edirlər. Bunlar foto- və kimyotrofiya arasında, lito- və orqanotrofiya arasında, avto- və heterotrofiya arasında və ya onların birləşməsi ola bilər.

    Əsas Şərtlər

    • məcbur etmək: Yalnız müəyyən bir mühitdə və ya müəyyən bir rol alaraq mövcud ola və ya sağ qala bilir: məcburi parazit və məcburi anaerob.
    • patogen: Bakteriyalar, viruslar, protozoa və ya göbələklər kimi xəstəliyə səbəb ola bilən hər hansı orqanizm və ya maddə, xüsusilə mikroorqanizm. Mikroorqanizmlər xəstəliyə səbəb olacaq qədər böyük populyasiyaya çatana qədər patogen hesab edilmir.
    • ekstremofil: Ekstremal temperatur, duzluluq və s. şəraitdə yaşayan orqanizm. Onlar oxşar şəraitdə fəaliyyət göstərən fermentlərin mənbəyi kimi kommersiya baxımından vacibdir.

    Tibbdə mikroorqanizmlərin təsnifatı

    Patogen (sözdə mikrob kimi tanınır) sahibində xəstəliyə səbəb olan bir yoluxucu agentdir. Tibbdə patogenlərin bir neçə geniş növü var: viruslar, bakteriyalar, göbələklər, eukaryotik parazitlər və prionlar.

    BAKTERİYA

    Bakteriyaların çoxu zərərsiz, hətta faydalı olsa da, bir çoxu patogendir. Hər bir patogen növün insan sahibləri ilə xarakterik qarşılıqlı təsir spektri var.

    Şərti olaraq, patogen bakteriyalar yalnız qana daxil olmağa imkan verən bir yara və ya immunitet funksiyasının azalması kimi müəyyən şərtlərdə patogendir. Bakterial infeksiyalar həmçinin bədəndəki yerə görə təsnif edilə bilər, məsələn, vajina, ağciyərlər, dəri, onurğa beyni və beyin və sidik yolları.

    Bakteriyaları laboratoriyada identifikasiya edərkən aşağıdakı xarakteristikalardan istifadə olunur: Qram boyaması, forması, kapsulun olması, bağlanma meyli (tək və ya cüt), hərəkətlilik, tənəffüs, böyümə mühiti, onun hüceyrədaxili və ya hüceyrədənkənar olması.

    Mədəniyyət üsulları nümunədəki digər bakteriyaların böyüməsini məhdudlaşdırmaqla yanaşı, müəyyən bakteriyaları böyütmək və müəyyən etmək üçün nəzərdə tutulmuşdur. Çox vaxt bu üsullar xüsusi nümunələr üçün nəzərdə tutulmuşdur: məsələn, pnevmoniyaya səbəb olan orqanizmləri müəyyən etmək üçün bəlğəm nümunəsi müalicə olunacaq. Patogen orqanizm təcrid edildikdən sonra onun morfologiyası, böyüməsi (aerob və ya anaerob), hemoliz nümunələri və boyanması ilə daha da xarakterizə edilə bilər.

    VİRUSLAR

    Hüceyrə orqanizmləri üçün istifadə edilən təsnifat sistemləri kimi, virusların təsnifatı yalançı canlı təbiətinə görə davam edən müzakirə mövzusudur. Əslində, onlar bəzi kimyəvi xüsusiyyətlərə malik canlı olmayan hissəciklərdir, buna görə də müəyyən edilmiş bioloji təsnifat sisteminə səliqəli şəkildə uyğun gəlmirlər.

    Viruslar əsasən fenotipik xüsusiyyətlərə görə təsnif edilir, məsələn:

    • morfologiya
    • nuklein turşusu növü
    • replikasiya rejimi
    • ev sahibi orqanizmlər
    • törətdikləri xəstəlik növü

    Hal-hazırda virusların təsnifatı üçün iki əsas sxem istifadə olunur: (1) Virusların Taksonomiyası üzrə Beynəlxalq Komitə (ICTV) sistemi və (2) virusları yeddi qrupdan birinə yerləşdirən Baltimor təsnifat sistemi. Bu günə qədər ICTV tərəfindən altı əmr yaradılmışdır:

    • Caudovirales
    • Herpes virusları
    • Mononeqaviruslar
    • Nidovirales
    • Pikornavirallar
    • Tymovirales

    Bu sifarişlər müxtəlif host diapazonlarına malik virusları əhatə edir, yalnız bəziləri insan hostlarını yoluxdurur.

    Baltimor təsnifatı virusları aşağıdakıların birləşməsindən asılı olaraq yeddi qrupdan birinə yerləşdirən sistemdir:

    • onların nuklein turşusu (DNT və ya RNT)
    • qapalılıq (tək və ya ikiqat)
    • mənada
    • replikasiya üsulu

    Digər təsnifatlar virusun yaratdığı xəstəlik və ya onun morfologiyası ilə müəyyən edilir, bunların heç biri qənaətbəxş deyil, çünki fərqli viruslar ya eyni xəstəliyə səbəb ola bilər, ya da çox oxşar görünə bilər. Bundan əlavə, viral strukturları mikroskop altında müəyyən etmək çox vaxt çətindir. Virusları genomlarına görə təsnif etmək o deməkdir ki, müəyyən bir kateqoriyada olanların hamısı oxşar şəkildə davranacaq və gələcək tədqiqatların necə davam etdiriləcəyinə dair bəzi göstərişlər verəcəkdir.

    Digər orqanizmlər həmişə insanlarda xəstəliyə səbəb olur, məsələn, yalnız digər orqanizmlərin hüceyrələrində böyüyə və çoxalmağa qadir olan məcburi hüceyrədaxili parazitlər.

    EKOLOGİYADA MİKROORQANİZMLERİN KATEQORİYALARI

    Ekologiyada mikroorqanizmlər ehtiyac duyduqları yaşayış mühitinin növünə və ya trofik səviyyəyə, enerji mənbəyinə və karbon mənbəyinə görə təsnif edilir.

    Habitat növü

    Bioloqlar müəyyən ediblər ki, mikrob həyatı mürəkkəb orqanizmlər üçün tamamilə əlverişsiz olan ekstremal mühitlərdə sağ qalmaq üçün heyrətamiz bir çevikliyə malikdir. Bəziləri hətta həyatın okeanın səthinin çox altındakı hidrotermal boşluqlarda başladığı qənaətinə gəliblər.

    An ekstremofil fiziki və ya geokimyəvi cəhətdən ekstremal şəraitdə inkişaf edən, Yerdəki həyatın əksəriyyətinə zərər verən orqanizmdir. Ən çox tanınan ekstremofillər mikroblardır. Domen Arxeya tanınmış nümunələri ehtiva edir, lakin ekstremofillər həm bakteriyaların, həm də arxelərin çoxsaylı və müxtəlif genetik nəsillərində mövcuddur. Bunun əksinə olaraq, daha mülayim mühitlərdə yaşayan orqanizmlər adlandırıla bilər mezofillər və ya neytrofillər.

    Ekstremofillərin çoxlu müxtəlif sinifləri var, onların hər biri ətraf mühitin mezofilik şəraitdən fərqlənmə tərzinə uyğundur. Bir çox ekstremofillər bir neçə kateqoriyaya bölünür və adlandırılır poliekstremofillər. Ekstremofil növlərinə bəzi nümunələr:

    • Asidofil: pH 3 və ya daha aşağı səviyyələrdə optimal böyüməsi olan orqanizm
    • Xerofil: Atakama səhrasının torpaq mikroblarının nümunəsi kimi həddindən artıq quru, quruyan şəraitdə inkişaf edə bilən bir orqanizm
    • Halofil: böyüməsi üçün ən azı 0,2M duz konsentrasiyası (NaCl) tələb edən orqanizm
    • Termofil: 45-122 °C temperaturda inkişaf edə bilən orqanizm

    Trofik səviyyə, enerji mənbəyi və karbon mənbəyi

    Bir orqanizmin qidalanma rejimləri: Bir növün avtotrof, heterotrof və ya alt tip olduğunu müəyyən etmək üçün axın sxemi.

    • Fototroflar: enerji əldə etmək üçün foton tutma həyata keçirin. Müxtəlif hüceyrə metabolik prosesləri həyata keçirmək üçün işıq enerjisindən istifadə edirlər. Onlar məcburi olaraq fotosintetik deyillər. Yaxşı tanınan fototrofların əksəriyyəti avtotroflar, başqa adla fotoavtotroflar, və karbonu düzəldə bilər.
    • Fotoheterotroflar: fotofosforilasiya yolu ilə ATP istehsal edir, lakin strukturları və digər biomolekulları yaratmaq üçün ətraf mühitdən əldə edilmiş üzvi birləşmələrdən istifadə edin.
    • Fotolitoototrof: işıq enerjisindən istifadə edən avtotrof orqanizm və qeyri-üzvi elektron donoru (məsələn, H.2O, H2, H2S) və CO2 karbon mənbəyi kimi.
    • Kemotroflar: enerjilərini mühitlərində elektron donorların oksidləşməsi ilə əldə edirlər.
    • Kimorqanotroflar: enerji mənbəyi kimi üzvi birləşmələrdəki kimyəvi bağları oksidləşdirən və hüceyrə funksiyası üçün lazım olan karbon molekullarını əldə edən orqanizmlər. Bu oksidləşmiş üzvi birləşmələrə şəkərlər, yağlar və zülallar daxildir.
    • Xemoorqanoheterotroflar (və ya orqanotroflar) bitki və heyvanlardan alınan karbohidratlar, yağlar və zülallar kimi azalmış karbon birləşmələrini enerji mənbəyi kimi istifadə edirlər. Xemolitoheterotroflar (və ya litotrofheterotroflar) hidrogen sulfid və elementar kükürd də daxil olmaqla ATP istehsal etmək üçün qeyri-üzvi maddələrdən istifadə edin.
    • Litoautotrof: mineral mənşəli azalmış birləşmələrdən enerji alır. kimi də istinad edilə bilər kemolitoavtotroflar, onların autotrofik metabolik yollarını əks etdirir. Litoautotroflar yalnız mikroblardır və əksəriyyəti bakteriyadır. Litoautotrof bakteriyalar üçün enerji mənbəyi kimi yalnız qeyri-üzvi molekullar istifadə edilə bilər.
    • Mixotrof: Müxtəlif enerji və karbon mənbələrinin qarışığından istifadə edə bilər. Bunlar foto- və kimyotrofiya, lito- və orqanotrofiya arasında, avto- və heterotrofiya arasında və ya onların birləşməsi ola bilər. Eukaryotik və ya prokaryotik ola bilər.

    Müxtəlif Herpes viruslarında fərqli morfologiya: Herpesviridae ailəsindən olan müxtəlif viruslar elektron mikroqrafikdən istifadə etməklə görüldü. Bu üzvlər arasında varicella-zoster (suçiçəyi) və herpes simplex tip 1 və 2 (HSV-1, HSV-2) var.


    Videoya baxın: BAKTERIYALAR ALEMI (Sentyabr 2022).


Şərhlər:

  1. Quincy

    Yazı hökumətimiz tərəfindən sifariş edildi :)

  2. Trevonn

    Hər kəsə baxın! Sadəcə Super !!!

  3. Dalkis

    Ayrılmır!

  4. Burlin

    Bu sonsuz müzakirə edilə bilər

  5. Miron

    Və sonra.

  6. Usi

    I advise to you to visit a site on which there are many articles on a theme interesting you.

  7. Jeramie

    Mesaj ayırması



Mesaj yazmaq