Məlumat

Qrip A üçün surroqat (CTL-1).

Qrip A üçün surroqat (CTL-1).


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Zəhmət olmasa kimsə Qrip virusu üçün kommersiya baxımından mövcud (rəfdən kənar) səviyyə 1 alternativlərini məsləhət verə bilərmi? İdeya bu virusu xüsusi material üzərində tutmaqdır. Beləliklə, 'əvəzetmə' ən xarici quruluşu və biokimyası baxımından çox oxşar olmalıdır (xarici olaraq necə qarşılıqlı əlaqədə olması baxımından; daxili aspektlər əhəmiyyət kəsb etməməlidir). CTL-1-ə sahib olmaq mükəmməl olardı.

Nəzərə alın ki, biologiyadan heç bir məlumatım yoxdur.


Qrip üçün antiviral terapiya

Hər il qrip epidemiyaları xeyli xəstəlik yükü yaradır. A və B qrip viruslarına qarşı peyvənd qripin qarşısının alınmasının təməl daşı olmuşdur və qalır, lakin antiviral terapiya xəstəliyin təsirinə nəzarət etmək üçün vaksinasiyaya mühüm əlavə kimi xidmət edə bilər. Hazırda bir çox ölkələrdə qripin müalicəsi üçün iki qrup dərmana lisenziya verilir. M2 ion kanal blokerləri və ya amantadanlar (amantadin və rimantadin) A qripi virusunun təkrarlanmasının spesifik inhibitorlarıdır, neyraminidaza inhibitorları (zanamivir və oseltamivir) isə A və B qrip viruslarına qarşı aktivdir. Tez-tez ötürülən dərmanlara davamlı viruslar amantadan müalicəsi zamanı inkişaf edir, lakin neyraminidaza inhibitorları ilə müalicə zamanı deyil.

Bu araşdırmada, antiviral müalicədən nə gözləyə biləcəyimizi və gözləyə bilməyəcəyimizi başa düşmək üçün randomizə edilmiş nəzarət edilən sınaqlardan alınan effektivlik və təhlükəsizlik məlumatları qiymətləndirilir. Dörd dərmanın hamısı qrip xəstəliyinin gedişatını təxminən 1 gün qısaldır və simptomları müəyyən dərəcədə yüngülləşdirir, lakin antiviral terapiyanın ciddi fəsadların və xəstəxanaya yerləşdirmənin azaldılmasına gətirib çıxardığına dair hələ də qeyri-müəyyənlik var. Xərc-effektivlik təhlillərinin nəticələri qismən metodologiyadakı fərqlərə görə, həm də bu tədqiqatların əsasını təşkil edən əsas risk və faydalara hansı ehtimalların təyin edilməsinə dair konsensus olmadığı üçün çox müxtəlifdir.

İngiltərə və Almaniyadakı məsləhət orqanlarının konsensus bəyanatları 65 yaşdan yuxarı və ya 2 yaşdan kiçik insanlar və xroniki ürək-damar, ağciyər və ya böyrək xəstəliyi, diabetes mellitus və ya immunosupressiyası olan şəxslər kimi yüksək riskli şəxslərdə qripin müalicəsi üçün neyraminidaza inhibitorlarını tövsiyə edir. Bununla belə, antiviral terapiyanın ümumiyyətlə sağlam uşaqlar və böyüklər üçün tövsiyə oluna biləcəyi ilə bağlı heç bir razılaşma yoxdur. Təhlükəsiz və effektiv antiviral terapiya variantlarının mövcudluğu praktiki klinisist tərəfindən yadda saxlanmalıdır, eyni zamanda daha spesifik tövsiyələr və siyasətin formalaşdırılması nəticə ölçüləri kimi ağırlaşmaların tezliyi və xəstəxanaya yerləşdirmə daxil olmaqla əlavə effektivlik məlumatlarından asılı olacaq.

Qrip, illik mövsümi epidemiyalar zamanı baş verən və orta il ərzində dünya əhalisinin 10-20%-ni təsir edən yüksək yoluxucu xəstəlikdir. ÜST hesab edir ki, hər il qrip epidemiyası 3-5 milyon ağır tənəffüs yoluxucu xəstəlik hadisəsi və 500 000-ə qədər ölümlə nəticələnir. Sənayeləşmiş ölkələrdə qriplə bağlı ölümlərin əksəriyyəti 65 yaşdan yuxarı və ya 2 yaşdan aşağı, xroniki ürək-damar, ağciyər və ya böyrək xəstəlikləri, diabetes mellitus və ya immunosupressiya kimi yaxşı müəyyən edilmiş riskləri olan insanlarda əsas xəstəliklərin ağırlaşması ilə əlaqədardır.[1] Təkcə ABŞ-da qrip hər il bütün səbəblərdən 50 000-dən çox ölümlə əlaqələndirilir.[2] Xəstəlik və ölüm baxımından böyük xəstəlik yükü ilə yanaşı, qrip epidemiyaları həm birbaşa səhiyyə xərcləri, həm də məhsuldarlıq itkiləri kimi dolayı xərclərdə əhəmiyyətli iqtisadi yük yaradır.

A və B qrip viruslarına qarşı peyvənd qripin qarşısının alınmasının təməl daşı olmuşdur və qalır. İnaktivləşdirilmiş peyvəndlər 60 ildən artıqdır ki, uğurla tətbiq edilir və canlı zəiflədilmiş intranazal vaksinlər kimi yeni peyvəndlər bu yaxınlarda mövcud olmuşdur.[3,4] Bununla belə, əsasən peyvəndin kifayət qədər əhatə olunmaması[5], həm də qoruyucu immunogenliyin olmaması səbəbindən yaşlılar və bəzi illərdə peyvənd ştammları ilə dövran edən suşlar arasında uyğunsuzluq, qrip böyük bir ictimai sağlamlıq problemi olaraq qalır. Buna görə də təsirli antiviral müalicələrə təcili ehtiyac var.

İki qrup qripə qarşı virusa qarşı dərman hazırda çox sayda ölkədə lisenziyaya malikdir və klinisyenlere qripin müalicəsi və qarşısının alınmasında seçim imkanı verir. Birinci qrup antiviral dərmanlar, M2 ion kanal blokerləri uzun müddətdir bazarda olsa da, antiviral dərmanların neyraminidaza inhibitorları qrupu bazara hələ 1999-cu ildə daxil olmuşdur. Bunların rolu ilə bağlı hələ də kifayət qədər qeyri-müəyyənlik mövcuddur. qrip epidemiyalarına nəzarətdə və xəstəlik yükünün azaldılmasında dərmanlar.

Ümumi dərman adlarından və "qrip" terminindən ən azı birini ehtiva edən məqalələr üzrə PubMed axtarışına və müvafiq dərmanların istehsalçıları tərəfindən verilmiş əlavə məlumatlara əsaslanaraq, bu icmal virus əleyhinə dərmanların effektivliyinə dair klinik sübutları araşdırır. qripin müalicəsində və pandemiyalararası qrip epidemiyalarında antiviral terapiyanın istifadəsi üçün bir sıra fayda-xərc təhlillərini və tövsiyələri qısa şəkildə ümumiləşdirir. Pandemik qripdə kemoprofilaktika və antiviral dərmanların rolu bu yaxınlarda nəzərdən keçirilmişdir[6,7] və buraya daxil edilmir.


Məqaləni nəzərdən keçirin

Lucas J. Kerstetter 1†, Stephen Buckley 1†, Carly M. Bliss 2† və Lynda Coughlan 1,3*†
  • 1 Mikrobiologiya və immunologiya şöbəsi, Merilend Universiteti Tibb Məktəbi, Baltimor, MD, Amerika Birləşmiş Ştatları
  • 2 Xərçəng və Genetika Bölməsi, İnfeksiya və İmmunitet Bölməsi, Tibb Məktəbi, Kardiff Universiteti, Uels, Böyük Britaniya
  • 3 Peyvənd İnkişafı və Qlobal Sağlamlıq Mərkəzi, Merilend Universiteti Tibb Məktəbi, Baltimor, MD, Amerika Birləşmiş Ştatları

Aydındır ki, heyvan su anbarlarından yayılma potensialına malik olan yoluxucu xəstəliklərin yaranması qlobal sağlamlıq üçün davamlı təhlükə yaradır. Zoonoz ötürülmə hadisələri son onilliklərdə insan davranışındakı dəyişikliklər, o cümlədən artan beynəlxalq səyahətlər, vəhşi təbiət ticarəti, meşələrin qırılması və ət istehlakına olan tələbatı ödəmək üçün əkinçilik təcrübələrinin intensivləşdirilməsi səbəbindən tezliyi artmışdır. Qrip A virusları (İAV) onları pandemiya təhlükəsi və insan sağlamlığı üçün əsas narahatlıq yaradan bir sıra xüsusiyyətlərə malikdir. Onların seqmentləşdirilmiş genomu və səhvə meyilli replikasiya prosesi insan əhalisinin immunoloji cəhətdən zəif olduğu yeni reassortant virusların yaranmasına səbəb ola bilər. Bundan əlavə, İAV-lərin su quşlarını və ev heyvanlarını, eləcə də insanları yoluxdurmaq qabiliyyəti reassortasiya və sonradan yeni virusların yaranması ehtimalını artırır. Son bir neçə onillikdə təsadüfi yayılma hadisələri insanların yüksək patogenli quş qripi (HPAI) virusları ilə yoluxması və yüksək ölümlə nəticələndi. Mövsümi qrip viruslarının qarşısının alınması üçün istifadə edilən adi peyvənd platformalarının, məsələn, təsirsizləşdirilmiş qrip vaksinləri (İIVs) və ya canlı zəiflədilmiş qrip vaksinləri (LAIVs) HPAI virusları üçün peyvəndlərin hazırlanmasında tətbiqi çətinliklərlə doludur. Bu problemlər biotəhlükəsizliyin gücləndirilmiş mühafizəsi altında istehsalla və yumurtalarda ölümcül olma meylinə görə HPAI viruslarının embrionlaşmış yumurtalarda yayılmasında çətinliklərlə bağlıdır. Aşağı patogenliyi olan quş qripi virusları (LPAI) kimi daha təhlükəsiz onurğa sütunlarının istifadəsi ilə istehsal maneələrini dəf etmək, əsas ştamm virusları ilə uyğun gəlmirsə, problem ola bilər. Replikasiya etməyən adenoviral (Ad) vektorları HPAI viruslarına qarşı peyvəndlərin hazırlanması üçün bir sıra üstünlüklər təklif edir. Onların genomu sabitdir və ifadə olunan HPAI virus antigenlərinin (Ag) daxil edilməsinə imkan verir. in vivo peyvənddən sonra. Buna görə də, onların istehsalı təkmilləşdirilmiş biotəhlükəsizlik vasitələri və ya prosedurları tələb etmir və yumurtadan müstəqildir. Əhəmiyyətli odur ki, Reklam vaksinləri çoxsaylı insan klinik sınaqlarında nümunəvi təhlükəsizlik və immunogenlik profilinə malikdir və ehtiyat toplama və pandemiyaya hazırlıq üçün termostabilləşdirilə bilər. Bu icmalda pandemiya potensialı olan quş qripi viruslarından qorunmaq üçün nəzərdə tutulmuş Reklama əsaslanan vaksinlərin vəziyyəti müzakirə olunacaq.


Universal Qrip Peyvəndi kimi Hemagglutinini hədəfləyən strategiyalar

Bu əlyazmanı nəzərdən keçirmək fürsətinə görə təşəkkür edirik. Bullard və digərləri Qrip viruslarına qarşı universal peyvənd strategiyası haqqında son inkişafı və biliyi ümumiləşdirdi. Bu əlyazma yaxşı yazılmış və strukturlaşdırılmışdır, ona görə də bu baxış əlyazmasından çox şey öyrəndim. Bu baxış əlyazmasını təkmilləşdirə biləcək bir neçə təklif var. Müəlliflər üçün şərhlərdə qeyd olunan xüsusi şərhlərimə baxın.

  1. Qrip kimi RNT viruslarına qarşı effektiv peyvənd sistemlərinin inkişafının niyə bu qədər çətin olduğunu (məsələn, mutasiya nisbətlərinin müqayisəsi) daha ətraflı təsviri əlavə etməyi təklif etmək istərdim.
  2. Bütün mətn boyu “ardıcıllıq” sözünü qarışdırdım. Siz "nukleotid ardıcıllığı"nı nəzərdə tutursunuz? və ya "amin turşusu ardıcıllığı"? Zəhmət olmasa bunu dəqiq təsvir edin.

Düşüncəli təklifləriniz üçün təşəkkür edirik. Zəhmət olmasa, aşağıda şərhlərinizə verilən cavablara baxın. Təkmilləşdirmələri müəyyən etməyə kömək etmək üçün əlyazmada düzəliş etdiyimizi və daxil edilmiş mətni cavaba daxil etdiyimizi görəcəksiniz. Rəyçiləri vaxtlarına və səylərinə görə təşəkkür edirik.

Bu əlyazmanı nəzərdən keçirmək fürsətinə görə təşəkkür edirik. Bullard və digərləri Qrip viruslarına qarşı universal peyvənd strategiyası haqqında son inkişafı və biliyi ümumiləşdirdi. Bu əlyazma yaxşı yazılmış və strukturlaşdırılmışdır, ona görə də bu baxış əlyazmasından çox şey öyrəndim. Bu baxış əlyazmasını təkmilləşdirə biləcək bir neçə təklif var. Müəlliflər üçün şərhlərdə qeyd olunan xüsusi şərhlərimə baxın.

Qrip kimi RNT viruslarına qarşı effektiv peyvənd sistemlərinin inkişafının niyə bu qədər çətin olduğunu (məsələn, mutasiya nisbətlərinin müqayisəsi) daha ətraflı təsviri əlavə etməyi təklif etmək istərdim.

Biz RNT viruslarının yüksək səviyyəli mutasiya nisbətlərini daxil etmək üçün girişə əlavə etdik. İndi girişdə deyilir: &ldquoQrip peyvəndlərinin inkişafı qrip virusunun əhəmiyyətli viral müxtəlifliyi ilə çətinləşir [14]. Qrip virusunun RNT polimerazası yüksək mutasiya sürəti və əhəmiyyətli antigen sürüşməsi ilə nəticələnən sübut oxuma fəaliyyətinə malik deyil [15]. Buna görə də, cari mövsümi qripə qarşı peyvəndlər hər il yenilənir və gələcək dövriyyədə olan mövsümi ştammları proqnozlaşdırmaq üçün qlobal nəzarətə əsaslanır [16].

Bütün mətn boyu “ardıcıllıq” sözünü qarışdırdım. Siz "nukleotid ardıcıllığı"nı nəzərdə tutursunuz? və ya "amin turşusu ardıcıllığı"? Zəhmət olmasa bunu dəqiq təsvir edin.

Biz &lsquosequence&rsquo sözünün hər bir halının HA protein ardıcıllığı və ya amin turşusu ardıcıllığı kimi təyin olunmasını təmin etdik.

Müəlliflər hemaglutinin zülalını hədəf alaraq universal qrip peyvəndinin yaradılması strategiyalarını nəzərdən keçiriblər. İcmal aydın şəkildə təşkil edilmiş və hərtərəfli yazılmışdır və bir-birini tamamlayan strategiyaların geniş spektrini əhatə edir.

  • 97-99-cu sətirlər: bu cümlə yenidən ifadə edilməlidir.
  • Şəkil 2: &ldquoRBS&rdquo akronim region bağlama yerindən sonra əfsanəyə əlavə edilməlidir (sətir 108). Fiqurun müvafiq olaraq 3D və xətti görünüşlər üçün 2 panelə bölünməsi onu daha aydın edə bilər.
  • Şəkil 4 və/və ya əlaqəli mətn: hər bir strategiya üçün istinadlar təqdim edilməlidir.
  • 177, 250-ci sətirlər və sonrakı hallar: xəstələnmənin qiymətləndirilməsinin çəki itkisi (yalnız itki ilə deyil) olduğunu göstərin.

Düşüncəli təklifləriniz üçün təşəkkür edirik. Zəhmət olmasa, aşağıda şərhlərinizə verilən cavablara baxın. Təkmilləşdirmələri müəyyən etməyə kömək etmək üçün əlyazmada düzəliş etdiyimizi və daxil edilmiş mətni cavaba daxil etdiyimizi görəcəksiniz. Rəyçiləri vaxtlarına və səylərinə görə təşəkkür edirik.

Müəlliflər hemaglutinin zülalını hədəf alaraq universal qrip peyvəndinin yaradılması strategiyalarını nəzərdən keçiriblər. İcmal aydın şəkildə təşkil edilmiş və hərtərəfli yazılmışdır və bir-birini tamamlayan strategiyaların geniş spektrini əhatə edir.

97-99-cu sətirlər: bu cümlə yenidən ifadə edilməlidir.

Bu cümləni oxumaq üçün yenidən ifadə etdik: &ldquoQripin HA proteini qırmızı qan hüceyrələrini aglütinasiya etmək qabiliyyətinə malikdir. HA-ya bağlanan və HA-nın hemaqlütinasiya fəaliyyətini maneə törədən anti-qrip anticisimləri neytrallaşdırıcı anticisim titrlərinin (HI titrlərinin) təyini üçün surroqat tədbir kimi istifadə olunur.&rdquo

Şəkil 2: &ldquoRBS&rdquo akronim region bağlama yerindən sonra əfsanəyə əlavə edilməlidir (sətir 108). Fiqurun müvafiq olaraq 3D və xətti görünüşlər üçün 2 panelə bölünməsi onu daha aydın edə bilər.

Biz əfsanəyə RBS əlavə etdik və aydınlıq üçün Şəkil 2-ni a və b panelinə ayırdıq.

Şəkil 4 və/və ya əlaqəli mətn: hər bir strategiya üçün istinadlar təqdim edilməlidir.

Hər bir strategiya üçün əfsanəyə istinadlar əlavə etdik.

177, 250-ci sətirlər və sonrakı hallar: xəstələnmənin qiymətləndirilməsinin çəki itkisi (yalnız itki ilə deyil) olduğunu göstərin.

Biz bütün hadisələrdə &lsquweight zərər&rsquo aydınlaşdırdıq.

Brianna L. Bullard və Eric A Weaver tərəfindən "Universal Qrip Peyvəndi kimi Hemaqlütinin Hədəflənməsi Strategiyaları" adlı icmal yaxşı yazılmış və ifadə edilmişdir.

Bu, qrip peyvəndi dizaynına əla töhfədir. Qripə qarşı universal peyvəndlərin yaradılması istiqamətində bir çox səylər göstərilsə də, mövsümi qrip viruslarına qarşı çox az sayda insan işləyir. Buna görə də, bu baxış çoxsaylı peyvənd dizayn strategiyaları axtaran tədqiqatçılar üçün məlumat mənbəyi olacaqdır. Müəlliflər HA əsaslı peyvənd dizaynları haqqında mövcud bilikləri hərtərəfli ümumiləşdirmişlər.

Budur bəzi kiçik şərhlər

VLP ilk mərhələdə genişlənmədi, baxmayaraq ki, sonradan dəfələrlə genişləndi.

Sətir 230: &ldquoiştirakçılar&rdquo ----- &ldquoiştirakçılar&rdquo

Düşüncəli təklifləriniz üçün təşəkkür edirik. Zəhmət olmasa, aşağıda şərhlərinizə verilən cavablara baxın. Təkmilləşdirmələri müəyyən etməyə kömək etmək üçün əlyazmada düzəliş etdiyimizi və daxil edilmiş mətni cavaba daxil etdiyimizi görəcəksiniz. Rəyçiləri vaxtlarına və səylərinə görə təşəkkür edirik.

Brianna L. Bullard və Eric A Weaver tərəfindən "Universal Qrip Peyvəndi kimi Hemaqlütinin Hədəflənməsi Strategiyaları" adlı icmal yaxşı yazılmış və ifadə edilmişdir.

Bu, qrip peyvəndi dizaynına əla töhfədir. Qripə qarşı universal peyvəndlərin yaradılması istiqamətində çoxlu səylər göstərilsə də, mövsümi qrip viruslarına qarşı çox az adam işləyir. Buna görə də, bu baxış çoxsaylı peyvənd dizayn strategiyaları axtaran tədqiqatçılar üçün məlumat mənbəyi olacaqdır. Müəlliflər HA əsaslı peyvənd dizaynları haqqında mövcud bilikləri hərtərəfli ümumiləşdirmişlər.

Budur bəzi kiçik şərhlər

VLP ilk mərhələdə genişlənmədi, baxmayaraq ki, sonradan dəfələrlə genişləndi.

Biz virusa bənzər hissəcikləri (VLP) ilk dəfə təyin etdik.

Vezikulyar stomatit virusunu (VSV) müəyyən etdik.

Sətir 230: &ldquoiştirakçılar&rdquo ----- &ldquoiştirakçılar&rdquo


Mücərrəd

Virusların vaksin vektorları kimi istifadəsində son inkişaflar virus biologiyasının daha yaxşı başa düşülməsi ilə asanlaşdırılıb. Viruslar və immunitet sisteminin qarşılıqlı əlaqəsi haqqında daha çox məlumat əldə etdikcə irəliləyişlər baş verir. Viral vektor peyvəndləri hüceyrə toxunulmazlığını inkişaf etdirmək üçün ən yaxşı vasitə olaraq qalır və indi güclü humoral reaksiyaların induksiyasına dair vədlər verir. Bu sahənin təklif etdiyi qlobal sağlamlıq üçün potensial faydalar, müəyyən xərçəng növlərindən tutmuş geniş spektrli yoluxucu xəstəliklərə qədər hədəfləri olan insanlar və baytarlıq tətbiqləri üçün vaksin vektorları kimi virusların əhatə dairəsini və faydalılığını əks etdirir.

Peyvənd məqsədləri üçün başqa bir yoluxucu agentdən antigenləri çatdırmaq üçün rekombinant virusun ilk dərc edilmiş istifadəsindən iyirmi beş il keçdi. Hepatit B səth antigeni (HBsAg) üçün rekombinant olan Vaccinia virusunun (VACV) HBsAg-ni ifadə etdiyi və sonradan şimpanzelərdə hepatit B infeksiyasından qorunmaq üçün kifayət qədər immunitet yaratdığı göstərildi 1,2. Bu perspektivli erkən başlanğıca və əhəmiyyətli gələcək inkişafa baxmayaraq, insan istifadəsi üçün lisenziyalı viral vektor peyvəndlərinin siyahısı qismən insan lisenziyasına aparan uzun və çətin yolun səbəbi ilə qısadır (baxın: Ref. 3). Bu cür peyvəndlərin genişmiqyaslı istehsalı və sabitliyi ilə bağlı məsələlər çox vaxt böyük elmi sərmayə tələb edir və təbii vəziyyətində insan patogenləri olmaq potensialına malik viruslar üçün ciddi təhlükəsizlik tələbləri yerinə yetirilməlidir. Bu, xüsusən replikasiya qabiliyyətini saxlayan və ya təbiətinə görə iltihab dövründən sonra ev sahibində qalıcı olan virus vektorları üçün doğrudur. Həqiqətən, ən sadə mənada zəifləmə ilə artan bir sıra təhlükəsizlik qalmaqdadır, bu da tarixən azalmış replikativ qabiliyyətin immunogenliyin azalması ilə nəticələnəcəyinə inamla balanslaşdırılmalı idi. Bununla belə, bu çətinliklərə baxmayaraq, viral-vektor peyvəndlərinin davamlı inkişafını şərtləndirən ən mühüm amil onların ümidverici immunogenliyidir, xüsusən də dünyanın ən çətin patogenləri və xərçənglərinə aid olan bəzi təbiətin ən çətin antigenləri ilə (Cədvəl 1).

Əksər hallarda, təkrarlanan bir virus infeksiyası bir neçə il davam edə bilən bir ev sahibinin güclü immun reaksiyalarını ortaya çıxarmaqda çox təsirli olur. Bu, ya subunit DNT plazmidləri, ya da zülallar kimi çatdırılan bir çox rekombinant antigenlərdən fərqli olaraq, onlar kifayət qədər təhlükəsiz hesab edilsə də (adjuvantdan asılı olaraq), onlar tez-tez zəif immunogenlikdən əziyyət çəkirlər. Əksinə, təkrarlanan viral peyvənd vektorları in vivo vəhşi tipli valideyn viruslarına bənzər bir qüvvə ilə çox vaxt yüksək immunogendir, lakin eyni zamanda rekombinasiya, reaktogenlik və ya virulentliyə çevrilmə riskini daşıyır. Optimal mühitin axtarışı zəifləmiş replikasiya qüsurlu viral vektorların, immunogenliyi və təhlükəsizliyi maksimuma çatdırmağa yönəlmiş strategiyanın inkişafında yeni səylərə səbəb olmuşdur (Şəkil 1).

İmmunogenliyi və təhlükəsizliyi maksimuma çatdırmaq üçün strategiyanın bir hissəsi kimi zəifləmiş replikasiya qüsurlu virus vektorları hazırlanmışdır. Onlar insan istifadəsi üçün lisenziyalaşdırılmış hər iki ekstremal vaksin texnologiyaları arasında bir sıra mürəkkəblik və təkrarlanma potensialının ortasında yerləşir. Klinik peyvəndin hazırlanması uzunmüddətli iş proqramı tələb etsə də, belə vektorlu vaksinlərin lisenziyası (təhlükəsiz və effektiv olduğu sübut olunarsa) tamamilə əldə edilə bilən və real məqsəd olaraq qalır. AAV, adeno ilə əlaqəli virus AdV, adenovirus AS01, GlaxoSmithKline HPV-dən köməkçi sistem 01, insan papilloma virusu MF59, Novartis MVA-dan suda yağ emulsiya köməkçisi, dəyişdirilmiş peyvənd virusu Ankara VEE, Venesuela atın VLP virusu kimi virus ensefaliti.

Vaksin vektorları kimi zəiflədən viruslar

Son onillikdə viral peyvənd sahəsinin əsasını qoyan nailiyyətlərdən biri replikasiya səriştəsinin və virus virulentliyinin həmişə immunoloji möhkəmliklə korrelyasiya olunmamasının dərk edilməsi olmuşdur. Məsələn, VACV və onun daha təhlükəsiz, yüksək dərəcədə zəiflədilmiş (replikasiya qüsurlu) qohumları - dəyişdirilmiş peyvənd virusu Ankara (MVA) 4,5,6 və Nyu York zəiflədilmiş peyvənd virusu (NYVAC) 7 - heyvanlarda müqayisə edilə bilən və bəzən daha yaxşı immunogenlik göstərmişdir. tədqiqatlar 8,9,10,11. Hal-hazırda geniş spektrli virus ailələri insan və ya baytarlıqda istifadə üçün peyvənd vektorları kimi intensiv inkişaf mərhələsindədir, o cümlədən replikasiya qabiliyyətinə malik olanlar, həm də xüsusi olaraq zəiflədilmiş bir çoxları. Cədvəl 1-də vektor kimi inkişafda olan əsas virus ailələri və onlarla əlaqəli xəstəliklər göstərilir.

İmmunitetdən yayınma: zəifləmə üçün təsirlər. Tarixən, virusların zəifləməsi transformasiya edilmiş hüceyrə xəttlərində və ya atipik hostlarda davamlı keçid və qeyri-təbii yollarla çatdırılma yolu ilə empirik olmuşdur. Bir çox viruslar mürəkkəb patogenlərdir və poxviruslar, adenoviruslar (AdVs) və herpesviruslar kimi böyük DNT virusları öz genomlarının çoxunu ev sahibinin immun reaksiyalarından yayınmağa imkan verən genlərə həsr etmişdir. Bir çox belə viral genlər spesifik immun müdafiəyə təsir edən zülalları, o cümlədən interferonları 12, nümunənin tanınması reseptorlarını (TLR-lər) 13,14, kemokinlər 15,16 və sitokinləri 17 cəlb edən yollar kimi erkən anadangəlmə yollarda fəaliyyət göstərən zülalları kodlayır. həmçinin viral peptidlərin əsas histouyğunluq kompleksi emalını dəyişdirərək sonrakı adaptiv cavablara təsir edənlər 18,19,20. Bu günə qədər əksər zəifləmə prosesləri - məsələn, davamlı olaraq in vitro Hüceyrə xətlərində keçid - itirilən və ya dəyişdirilən viral gen növlərinin qeyri-selektividir. Nəhayət, viral variantlar kiçik heyvanlarda zərərli təsirlərinin olmaması üçün seçilmişdir, belə ki, onlar artıq patogen deyil və ev sahibinə az və ya heç bir zərər vermir. Bununla belə, qeyri-spesifik zəifləmə prosesi zamanı itirilən və ya dəyişdirilən viral genlər, daha güclü köməkçi təsiri olan rekombinant əlavələrin immun təqdimatı üçün virusu daha yaxşı etmək baxımından mütləq ən optimal ola bilməz. Bir çox viral genomların hazırda yaxşı səciyyələndirildiyini nəzərə alsaq, viral vektorların adyuvant xassələrinin yaxşılaşdırılması və onların müxtəlif növ reaksiyalar yaratmaq üçün mühəndisləşdirilməsi üzrə gələcək səylər ev sahibinin immun sisteminə differensial təsir göstərən spesifik viral genlərin hədəflənməsinə əsaslanacaqdır. Məsələn, ev sahibinin antiviral immun cavablarını azaltmaq üçün təkamül etmiş viral genlərin sıradan çıxarılması immun yayınma xüsusiyyətlərini azalda və müəyyən viral vektorların adjuvant-spesifik xüsusiyyətlərini yaxşılaşdıra bilər, lakin anti-vektor reaksiyaları həmin vektorun fərdi şəxsdə sonrakı təkrar istifadəsinə mane ola bilər. .

Empirik və rasional zəifləmə. Zəifləmiş poxviruslar ilk dəfə çiçək xəstəliyinin aradan qaldırılması kampaniyası zamanı istifadə edilmiş və o vaxtdan bəri peyvənd vektorları kimi daha da inkişaf etdirilmiş və istifadə edilmişdir. Bunlardan biri olan MVA cücə embrionunun fibroblastlarında 570 dəfədən çox keçilmiş, genomunun təxminən 15%-ni itirmiş və nəticədə məməli hüceyrələrində replikasiya qüsurlu olmuşdur 4,21,22. Əksinə, NYVAC VACV-nin Kopenhagen təcridindən 18 müxtəlif ORF-nin silinməsi yolu ilə əldə edilmişdir. in vitro replikasiya çatışmazlığına səbəb olan rekombinasiya 7 . Bir sıra son tədqiqatlar göstərdi ki, MVA güclü immunostimulyasiya qabiliyyətinə malikdir, bəlkə də NYVAC 23,24,25,26-dan daha yüksəkdir, halbuki HİV-1 peyvəndi namizədlərinin primat tədqiqatı bu iki peyvənddən əldə edilən vektorun keyfiyyətcə fərqli induksiya etdiyini göstərdi. kodlanmış Gag-Pol-Nef (qrup spesifik antigen-polimeraza-HİV-1 mənfi amil) və zərf (Env) antigenlərinə immun cavab növləri — NYVAC CD4 + T hüceyrə-dominant cavabını, MVA isə daha güclü CD8-i induksiya etdi. + T hüceyrə cavabı və onu müşayiət edən CD4 + T hüceyrə cavabları 27. Bəziləri TLR siqnal yollarında və digər antigen təqdim edən hüceyrə funksiyalarında fəaliyyət göstərən bir çox viral zülalların birgə fəaliyyəti, yəqin ki, bu fərqləri izah edir. Daha yaxşı proqnozlaşdırıcı analizlər olana qədər in vivo nəticədə proses əsasən empirik olaraq qalacaq və ən yaxşıdan asılı olacaq in vivo hər bir vektorun immunostimulyator xüsusiyyətlərini qiymətləndirmək üçün modellər. Buna baxmayaraq, empirik olaraq zəiflədilmiş MVA vəziyyətində, genlərin rasional silinməsi immunogenliyi daha da artıra bilər, iki hesabat göstərir ki, B15Rhəll olan interleukin-1β (IL-1β) reseptorunu kodlayan , virusa xas yaddaş CD8 + T hüceyrə reaksiyasını artıra bilər 28,29 . Eynilə, rekombinant VACV-nin vektor-spesifik gen ifadəsini azaltmaqla, vektorun özünə CD8 + T hüceyrə reaksiyası azaldıla bilər və nəticədə transgenə qarşı gücləndirilə bilər 30 . Gələcək səylər bu viral vektorların immunogenliyini rasional şəkildə artırmaq cəhdi ilə tək və kombinasiyada daha çox genin silinməsi məqsədi ilə bu xətlər üzrə davam etdiriləcək.

İmmunogenliyin artırılması

Baş artırma rejimləri. 1990-cı illərdə DNT plazmid peyvəndlərinin meydana çıxması həyəcanla əhatə olundu. Bununla belə, tezliklə məlum oldu ki, DNT vaksinləri özləri tərəfindən insanlarda çətin xəstəliklərdən qorunmaq üçün kifayət qədər böyüklükdə T hüceyrə reaksiyaları yaratmaq üçün kifayət qədər immunogen deyillər 31,32. O cümlədən klinik sınaqlarda istifadə edilən kəmiyyət T hüceyrə analizlərindəki irəliləyişlərlə ex vivo interferon-γ ELISPOT (fermentlə əlaqəli immunosorbent nöqtəsi) və kultivasiya edilmiş interferon-γ ELISPOT analizləri, eləcə də çoxparametrli axın sitometriyası 33,34, virus vektorları digər peyvənd növləri ilə müqayisədə hüceyrə immun cavabları üçün gücləndirilmiş potensialının nümayişindən sonra mərkəzi mərhələni bərpa etdilər 35 ,36. Ancaq DNT peyvəndlərindən fərqli olaraq, bir və ya iki administrasiyadan sonra in vivo, virus vektorunun struktur zülallarına host reaksiyaları öz-özünə məhdudlaşdırılır və vektor çoxsaylı immunizasiya üçün istifadə edildikdə peyvənd əlavəsinə qarşı reaksiyaların azalmasına səbəb olur. Bu anti-vektor reaksiyalarının öhdəsindən gəlmək üçün əsas gücləndirici protokolların inkişafı tələb olundu, eyni zamanda vaksin əlavəsinə ev sahibi reaksiyası maksimuma çatdı.

Başlanğıcda, ümumi peyvənd əlavələri olan heteroloji əsas gücləndirici protokollar immunitet sistemini gücləndirmək üçün tez-tez bir DNT plazmidindən istifadə edirdi, lakin son zamanlarda müxtəlif rekombinant viral vektorların birləşmələrinin istifadəsinə və onların tətbiqi ardıcıllığının virusun təbiətinə necə təsir göstərməsinə maraq artdı. induksiya edilmiş immun reaksiya. İndi həm heyvan modellərində, həm də insanlarda, o cümlədən DNT–MVA, DNT–NYVAC, quş çiçəyi virusu (FPV)–MVA, qrip–MVA, AdV–MVA, heteroloji AdV–AdV və DNT–Sendai virusu sınaqdan keçirilmişdir. malyariya, HİV-1, vərəm (Vərəm) və hepatit C-dən xərçəngə qədər geniş spektrli xəstəliklər (Cədvəl 2). Bütün bu tədqiqatlar boyunca ardıcıl müşahidə, müəyyən vektorların cavabları gücləndirmək və ya artırmaq üçün diferensial qabiliyyətidir. DNT peyvəndləri, FPV və qrip virusu yaxşı hazırlama vektorlarıdır, poxviruslar (MVA və NYVAC) isə digər vasitələrlə astarlanan T hüceyrə reaksiyalarını ardıcıl olaraq gücləndirə bilir. Böyük bir məlumat toplusu göstərir ki, ümumiyyətlə, rekombinant AdV T hüceyrəsi və B hüceyrə reaksiyalarını yaxşılaşdıra və gücləndirə bilər 10,31,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46. Bu yaxınlarda, eyni vaksin əlavəsini ifadə edən bir-biri ilə əlaqəsi olmayan üç vektor metodunun birləşməsi istifadə edilmişdir 47,48 . Bu vektorların qiymətləndirilməsinə, xüsusən də çox parametrli axın sitometriyasından 34 istifadə etməklə, həm fenotipik, həm də sitokin istehsalı və effektor funksiyası baxımından müxtəlif T hüceyrə populyasiyalarının parçalanmasına imkan verən daha dərin təhlil kömək edilmişdir. belə müxtəlif vektorlar və rejimlər tərəfindən induksiya olunur 27,37,49,50,51,52,53 . Bu müxtəlif immunizasiya rejimləri və vektor strategiyaları tərəfindən törədilən T hüceyrə reaksiyalarının “kəmiyyətə qarşı keyfiyyət” mühafizə nəticələrinin əlaqələndirilməsi bu sahədə problem olaraq qalır.

Humoral toxunulmazlığın gücləndirilməsi. Daha yeni işlərdə B hüceyrəsi, eləcə də T hüceyrəsi reaksiyaları, xüsusilə AdV–MVA və ya heteroloji AdV–AdV rejimləri 39,40 induksiya etmək üçün əsas gücləndirici immunizasiya rejimlərinin istifadə edilməsi müəyyən edilmişdir. Adaptiv immun cavabın hər iki qolunun induksiyası, ehtimal ki, hüceyrə toxunulmazlığının dominant qoruyucu mexanizm olduğu mikobakteriyalardan fərqli olaraq, malyariya parazitləri və bir çox virus kimi patogenlərə qarşı qorunmaq üçün faydalı ola bilər. Görünür, AdV vektorları, cavabı gücləndirməkdən daha yaxşı gücləndirə bilən MVA vektorlarından fərqli olaraq, B hüceyrə cavablarını gücləndirə və gücləndirə bilir. Bu, AdV immunizasiyasından sonra uzunmüddətli yüksək səviyyəli antigen ifadəsinin nəticəsi ola bilər ki, bu da B hüceyrələrinin hazırlanması üçün daha faydalıdır, MVA-dan B hüceyrələrinin artırılması üçün daha uyğun olan antigenin qısamüddətli partlaması ilə müqayisədə 54. Alternativ olaraq, plazmasitoid dendritik hüceyrələr üzərində aparılan tədqiqatlar göstərmişdir ki, qrip virusu infeksiyasına cavab olaraq sitokinlərin dalğası, xüsusilə I tip interferon (IFN) və sonra IL-6, B hüceyrələrinin differensiasiyasının effektor plazma hüceyrələrinə keçməsi üçün vacibdir 55 . Əksinə, AdV vektorları tərəfindən transgenə spesifik antikor cavablarının hazırlanması, I tip IFN istehsalı ilə mənfi əlaqə yaradır 56,57, bu da transgen ifadəsinin azalması ilə əlaqələndirilir 58 . MVA vəziyyətində, E3L I tip IFN-ə müqavimət göstərir və cücə embrionunun fibroblastlarında davamlı böyümə üçün vacibdir və E3L-nokaut virusu hüceyrə mədəniyyətində toyuq növü I IFN və IL-6 səviyyəsinin yüksəldilməsinə səbəb olur 59,60 . MVA ilə B hüceyrələrinin hazırlanması qrip virusunun yaratdığına bənzər şəkildə baş verərsə, E3L-vasitəçili immun-yayınma mexanizmi bu vektorla müşahidə edilən zəif B hüceyrələrinin astarlanmasını izah edə bilər. Nəhayət, sitokinlərin müxtəlif virus ailələri tərəfindən B hüceyrə reaksiyalarının induksiyasına necə təsir göstərə biləcəyini daha yaxşı başa düşmək vektorların rasional dizaynını və optimal antikor reaksiyalarını induksiya etmək üçün uyğunlaşdırıla bilən əsas gücləndirmə strategiyalarını yaxşılaşdırmaq üçün vacibdir.

Əvvəllər mövcud olan toxunulmazlığın qarşısını almaq. İnsan əhalisini tez-tez yoluxduran viruslar əvvəlcədən mövcud olan toxunulmazlıq problemini də gətirir. Müəyyən viral vektorlar üçün, məsələn, insan AdV-lərinə və herpes viruslarına əsaslananlar üçün bu, əsas maneə ola bilər. Məsələn, insan AdV serotip 5 (HAdV-5) vektoruna əsaslanan namizəd HİV-1 peyvəndi bu yaxınlarda HİV-1 infeksiyasına yoluxma riski yüksək olan şəxslərdə aparılan II Faza sınaqında qiymətləndirilmişdir. Sınaq effektivliyin olmaması səbəbindən dayandırıldı, lakin o zaman qeydiyyat zamanı əvvəlcədən mövcud olan HAdV-5-neytrallaşdırıcı anticisimlərin yüksək titrləri olan şəxslərdə HİV-1 infeksiyasının artması istiqamətində qeyri-əhəmiyyətli bir tendensiya müşahidə edildi 52, 61. Bu məsələ tez-tez rast gəlinən insan virusunun peyvənd vektoru kimi istifadəsi ilə bağlı gərgin müzakirələrə səbəb oldu, lakin HAdV-5 vektor platforması üçün bu uğursuzluğa baxmayaraq, əvvəlcədən mövcud vektor toxunulmazlığını aradan qaldıra biləcək həyat qabiliyyətli alternativlər təmin etmək üçün digər strategiyalar fəal şəkildə həyata keçirilir 62 . Bunlara heteroloji adenovirus heksonlarını ifadə etmək üçün vektorun dəyişdirilməsi 63 və ya daha nadir serotiplərin 40,44,64,65 və ya şimpanzelər 66,67,68,69,70 kimi digər növlərdən olan insan adenoviruslarının istifadəsi daxildir. Əhəmiyyətli olan odur ki, bütün bu cür yeni vektorlar, xüsusən bir növ üçün ekzogen olanlar, tənzimləmə, təhlükəsizlik və istehsal maneələrini aradan qaldırmalıdırlar.

Vektorlu vaksinlərin empirik və rasional dizaynı. İmmunologiya və virus biologiyası ilə bağlı genişlənən biliklərimizlə vaksinologiyada yeni elm dövrü yaradılmışdır ki, bu da viral-vektor peyvəndlərinin rasional inkişafı üçün gələcək zəmin yaratmışdır. Alt vahid peyvənd antigen dizaynının optimallaşdırılması və vektor tropizminin başa düşülməsi, o cümlədən hədəf antigenin işlənməsi və təqdimatı in vivo, bu yanaşma üçün çox vacibdir. VACV vəziyyətində göstərilmişdir ki, tətbiq marşrutu 71, həmçinin transgen ifadəsini 72 idarə etmək üçün istifadə edilən poksviral promotor antigenlərin T hüceyrələrinə birbaşa və ya çarpaz təqdim olunma dərəcəsinə təsir göstərə bilər. Eynilə, yeni məlumatlar göstərir ki, infeksiya zamanı gec ifadə olunan və normal olaraq antigen təqdim edən hüceyrələrdə abortiv infeksiyaya görə birbaşa təqdimat yoluna daxil olmasının qarşısını alan ortopoksvirusun struktur antigenləri də xüsusi olaraq virus fabriklərində gizlənir və bununla da çarpaz təqdimatdan qaçırlar. yol və poxvirusa xüsusi CD8 + T hüceyrə cavablarının induksiyasına mane olur 73 . Bu, poxvirus erkən və ya gec promotorlar tərəfindən idarə olunan xarici antigenlər üçün belə deyil, çünki bu antigenlər adətən belə poxvirus fabriklərinə yönəldilmir. Vektor və transgenə qarşı peyvəndlə törədilən T hüceyrə reaksiyaları üçün bu cür müşahidələrin nəticələrinin daha yaxşı başa düşülməsi vacibdir və bu məlumatlar MVA kimi poxvirus vektorlarının immuniteti yenidən gücləndirməkdə niyə təsirli olduğunu izah etməyə başlaya bilər. eyni vektorla əvvəlki immunizasiyadan 12 ay sonra insanlarda cavablar 74.

'Mühəndislik' toxunulmazlığı. Adenoviruslar kimi davamlı DNT virusları ilə əlaqəli olan anti-vektor toxunulmazlığının nəhəng mürəkkəbliyindən fərqli olaraq, struktur antigenlərinin çoxundan məhrum olan mühəndis lentiviruslar genləri xüsusi hüceyrələrə çatdırmaq üçün vektor kimi işlənib hazırlanmışdır. in vivo hüceyrədaxili immunizasiya üçün 75 . Bu, qismən lentivirus-vektor genlərinin minimal ifadəsi və qismən təkrarlandığı üçün mümkün olur in vivo idarəetmə (ənənəvi immunizasiyada olduğu kimi) məqsəd deyil. Həqiqətən, lentiviruslar hazırda xərçəng və HİV-1 üçün "mühəndis toxunulmazlığı" üçün istifadə olunur (Refs 76, 77). T-hüceyrə reseptor genlərini ehtiva edən lentiviruslarla hematopoetik kök hüceyrələrin ötürülməsi artıq xərçəng immunoterapiyası üçün klinik sınaqlara daxil edilmişdir. HİV-1-ə qarşı neytrallaşdıran monoklonal anticisimləri kodlayan B hüceyrə reseptor genləri ilə insan CD34+ hüceyrələrinin ötürülməsi üçün bu vektorlardan istifadə etməklə klinikadan əvvəlki əhəmiyyətli irəliləyiş də əldə edilmişdir (İst. 76). Dəri dendritik hüceyrə (DC) alt qrupları kimi xüsusi hüceyrə növlərinə lentiviral vektorların yönəldilməsi strategiyaları da işlənib hazırlanmışdır, məsələn, DC-SIGN (dendritik hüceyrəyə xas) bağlamaq qabiliyyətini saxlayan Sindbis virus fuzogen zülalının mutasiya edilmiş versiyası. ICAM3-qəbuledici qeyri-inteqrin) zülalları işlənib hazırlanmışdır 78 . Əlavə spesifik hədəfləmə texnologiyalarının inkişafı geniş spektrli yoluxucu xəstəliklərin və xərçəngin qarşısının alınması üçün uyğunlaşdırılmış və effektiv immun cavabları yaradan viral-vektor vaksinlərinin rasional dizaynını əhəmiyyətli dərəcədə artıra bilər.

Baytarlıq vaksinlərində irəliləyişlər

Viral vektor peyvəndlərinin ən uğurlu tətbiqləri, şübhəsiz ki, baytarlıq sahəsində olmuşdur. Bu, daha ciddi tənzimləmə tələbləri, insan könüllüləri üzərində mərhələli klinik sınaqlar və lisenziyalaşdırma və investisiyanın qaytarılması üçün daha uzun müddət tələb edən insanlar üçün peyvəndlərin hazırlanmasından fərqlidir. Ən azı 12 virus-vektor peyvəndi hal-hazırda baytarlıqda istifadə üçün lisenziyaya malikdir (Cədvəl 3) və daha bir çoxu işlənmə mərhələsindədir (nəzərdən keçmək üçün Refs 79, 80-ə baxın). Buna baxmayaraq, bu texnologiyalar hələ də istehsal etmək daha asan olan klassik təsirsizləşdirilmiş peyvəndlərin rəqabəti ilə mübarizə aparır. Quşçuluqda quş qripi ilə mübarizədə çətinliklər iqtisadiyyatdan irəli gəlir və kütləvi peyvənd strategiyalarını tələb edir, məsələn, içməli su, aerozol spreyi və ya immunizasiya. ovoda 81 (Şəkil 2). Peyvəndin effektivliyini qoruyarkən bu administrasiya marşrutlarının xərclərini aşağı saxlamaq rekombinant viral-vektor texnologiyaları üçün xeyli çətinliklər yaradır. Uğurlu yanaşmalardan biri eyni anda iki müxtəlif quş patogeninə nəzarət etmək üçün bivalent metodu təmin edən yeni rekombinant Nyukasl xəstəliyi virusundan (NDV) istifadə etmək olmuşdur. ovoda immunizasiya 82. Başqa bir mühüm və yüksək yoluxucu baytarlıq patogeni, dabaq xəstəliyi virusu (FMDV) 83 üçün yeni peyvənd strategiyaları replikasiya qüsurlu HAdV-5-dən istifadə etməklə tədqiq edilir. FMDV kapsidi və proteaz antigenlərini ifadə edən rekombinant HAdV-5 ilə tək immunizasiyadan 7 gün sonra mal-qara və donuzlarda qoruyucu immunitet yaranmışdır 84,85 . İnaktivləşdirilmiş, bütöv virus peyvəndlərindən fərqli olaraq, bu vektor peyvəndi platformasından istifadə etməklə yoluxmuş heyvanları peyvənd olunmuş heyvanlardan ayırd etmək bacarığı (DIVA 1-ə bax) və yüksək dərəcədə artan biotəhlükəsizlik bu effektiv texnologiyanı FMDV-dən azad olan ölkələr üçün çox arzuolunan hala gətirər. Eynilə, iribuynuzlu vərəm, rekombinant HAdV-5 və ya MVA peyvəndi vektorları kimi mal-qaranın mühüm tənəffüs patogenləri ilə bağlı tədqiq edilir. Mikobakterial mikolil transferaza 85A antigenini ifadə edən bu vektorların hər ikisi, hər ikisi üçün effektiv gücləndirici agentlər kimi təsvir edilmişdir. Mycobacterium bovis mal-qarada basil Calmette-Guérin (BCG) peyvəndi 86,87,88 . Birbaşa təsirdən sonra immunlaşdırılmış mal-qaranın sürülərində və həmçinin təbii ötürülmə şəraitində bu BCG əsas vektor gücləndirmə rejimləri ilə müdafiəni qiymətləndirmək üçün indi sınaq sınaqları tələb olunur. Təkcə BCG peyvəndi ilə müqayisədə daha effektiv olarsa, BCG ilə hazırlanmış reaksiyaları artırmaq üçün vektorlu vaksinlərin istifadəsi dünyaya ildə təxminən 3 milyard ABŞ dolları dəyərində olan iribuynuzlu vərəmə nəzarət üçün vəd verə bilər. Əhəmiyyətli olan odur ki, iribuynuzlu vərəmə qarşı şərait namizəd insan vərəm peyvəndlərinin dizaynı və sınaqdan keçirilməsi üçün faydalı immunoloji məlumat verməyə davam edir 89.

Potensial üstünlüklər (+) və çatışmazlıqlar (−) peyvəndin müxtəlif mümkün marşrutları üçün göstərilmişdir. a | Əzələdaxili immunizasiya kimi kiçik istisnalar istisna olmaqla, insan peyvəndi üçün əsas yanaşmanı təşkil edir Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Guérin (BCG) peyvəndi, müntəzəm olaraq intradermal olaraq verilir. İndi peyvəndlə örtülmüş yamaqlar kimi iynəsiz transkutan cihazların hazırlanması istiqamətində işlər aparılır ki, bu da təlim keçmiş fərd olmadıqda öz-özünə tətbiq oluna bilər - bu, kütləvi və təcili peyvənd üçün aşkar üstünlükdür. Bəzi xərçəng peyvəndləri də venadaxili olaraq tətbiq oluna bilər, lakin ümumilikdə bu marşrut üçün təhlükəsizliklə bağlı narahatlıqlar yüksək olaraq qalır. Ağızdan və ya aerozollaşdırılmış peyvəndlərdən istifadə etməklə mədə-bağırsaq (GI) və tənəffüs yollarında selikli qişa toxunulmazlığı gücləndirilə bilər. Bu, patogenlərə qarşı qoruyucu toxunulmazlığı gücləndirə bilər, məsələn, ağciyərlərdə vərəm infeksiyasına və ya selikli qişada HİV infeksiyasına qarşı. Təbii bağırsaq patogeni olan rekombinant adenovirus insan serotipi 41 (HAdV-41), turşu şəraitdə immun cavabları stimullaşdırdığı bildirildiyini nəzərə alsaq, oral yol üçün daha uyğun vektor ola bilər 127 . Bununla belə, bu peyvənd marşrutlarının insanlarda geniş şəkildə istifadə edilməsinə qədər vaksinin təhlükəsizliyi, effektivliyi, stabilliyi və dozasının nümayişi və saxlanması baxımından hələ çox iş görülməlidir.Peyvəndin effektivliyini və daha da əhəmiyyətlisi, təhlükəsizliyi qoruyarkən insanlarda bu daha az standart idarəetmə yollarından hər hansı birinin istifadəsinin xərclərini aşağı saxlamaq rekombinant viral-vektor texnologiyaları üçün əhəmiyyətli problemlər yaradır və hələ də çoxlu konsepsiya sübutu tədqiqatı tələb olunur. b | Baytarlıq peyvəndləri həmçinin standart parenteral immunizasiya yollarından (dəridaxili və əzələdaxili) istifadə edir, lakin alternativ yollardan, məsələn, içməli suda, aerozol spreyi ilə və ya immunizasiya ilə tətbiq edilir. ovoda iqtisadiyyat, heyvanlarda daha az sərt təhlükəsizlik tələbləri və kütləvi peyvənd strategiyalarına tez-tez ehtiyacla idarə olunur.

İnsan yoluxucu xəstəliklərə qarşı peyvəndlər

Viral vektor peyvəndləri əvvəlcə hüceyrədaxili patogenlərə qarşı qoruyucu T-hüceyrə reaksiyalarını yaratmaq üçün hazırlanmışdır. Bununla belə, bu günə qədər nə virus-vektor peyvəndi, nə də T hüceyrəsi ilə birbaşa toxunulmazlıqla təsir göstərən peyvənd (BCG istisna olmaqla) insanlarda istifadə üçün lisenziyaya malik deyil. Bu vəziyyət, bu yeni yanaşmaların adi peyvənd yanaşmalarının təsirsiz olduğu bəzi ən mürəkkəb insan patogenləri üçün seçilmiş olması ilə daha da çətinləşir. Bunlara daxildir Plasmodium falciparum malyariya, Mycobacterium tuberculosis və HİV-1. Buna baxmayaraq, rekombinant virus-vaksin texnologiyaları ilə əhəmiyyətli irəliləyiş əldə edilmişdir. Hal-hazırda insan istifadəsi üçün inkişaf etdirilən vektorların siyahısı Cədvəl 2-də təqdim olunur. T hüceyrələrinin immunogenliyinin təsir edici səviyyələri indi ilk dəfə olaraq insan üzərində aparılan klinik sınaqlarda bildirilir - geniş səylərə baxmayaraq, hələ də həyata keçirilməmiş bir məqsəd. yalnız DNT plazmid vaksin texnologiyaları ilə. Bu irəliləyişin açarı AdV-vektorlu peyvəndlərin inkişafı olmuşdur — AdV eyni antigen üçün rekombinant olan ikinci vektor, adətən MVA və ya ikincisi ilə yüksək səviyyələrə qaldırıla bilən transgenə qarşı immun cavabları hazırlamaq üçün əla qabiliyyətə malikdir. Heteroloji serotipin AdV. Eynilə, həm MVA, həm də AdV digər vasitələrlə, məsələn, BCG peyvəndi ilə hazırlanmış immun cavabları əhəmiyyətli dərəcədə artıra bilər. Geniş istifadə olunan bu iki vektorun müqayisəsi Cədvəl 4-də verilmişdir.

Malyariya peyvəndləri. Eritrositik mərhələdə malyariya antigeni sirkumsporozoit zülalını (CSP) və ya qan mərhələsində malyariya antigeni apikal membran antigeni 1 (AMA1) 90 ifadə edən iki HAdV-5 vektorunun qarışığından istifadə etməklə son nailiyyətlər əldə edilmişdir. İnsan könüllülərində birdəfəlik immunizasiyadan sonra hər bir antigenə təsirli orta reaksiya hər milyon periferik qan mononükleer hüceyrəsinə (PBMCs) 500-1000 ləkə əmələ gətirən vahid (SFU) ilə ölçüldü. ex vivo IFN-γ ELISPOT. Tükənmə tədqiqatları cavabı qarışıq CD8 + və CD4 + T hüceyrə reaksiyası kimi təyin etdi, axın sitometriyası ilə ölçüldüyü kimi, CD8 + fenotipi IFN-γ ifraz edən cavab verən hüceyrələr arasında CD4 + fenotipindən üç-beş dəfə çox idi (M. Sedegah və T. Richie, şəxsi ünsiyyət). HAdV-5-ə qarşı əvvəllər mövcud olan ev sahibi reaksiyaları problemini aradan qaldırmaq üçün nadir insan serotiplərinin və ya qeyri-insan primatlarının rekombinant adenovirusları da malyariya peyvəndi namizədləri kimi inkişaf mərhələsindədir. HAdV-35 və HAdV-11 kimi heteroloji AdV-lərlə hazırlıq və gücləndirmə preklinik olaraq tədqiq edilir 44 və həvəsləndirici olaraq, eritrositik-mərhələli tromboz-mərhələli anti-eritrositik trombozlu proteini ifadə edən rekombinant şimpanze adenovirus serotipi 63 (AdCh63) 70. çox epitoplu sətirə (ME-TRAP) və sonra MVA ilə təkan insan könüllülərində malyariya antigeninə qarşı hər milyon PBMC üçün >1,000 SFU orta səviyyələri ortaya çıxarır (A. Hill, şəxsi ünsiyyət). Əlavə preklinik tədqiqatlar, həmçinin yüksək titrli antikor reaksiyalarına və güclü T hüceyrə reaksiyalarına səbəb olmaq üçün siçanlarda AdV-MVA rejimindən istifadə edildiyini bildirdi. Bu spesifik HAdV-5–MVA rejimi, qan mərhələsindəki malyariya antigeni merozoit səth zülalı 1 (MSP1) üçün rekombinant olan vektorlardan istifadə edərək, qan mərhələsindəki infeksiyaya qarşı qoruyucu antikor reaksiyalarını 39, eləcə də qismən təsirli olan T hüceyrə reaksiyalarına səbəb oldu. əvvəlki qaraciyər infeksiyasına qarşı 91 .

Heteroloji poxvirus və DNT-poxvirus immunizasiya rejimləri klinik sınaqlarda tək vektorlu yanaşmalardan daha güclü T hüceyrə reaksiyalarına nail olmaqla, insanlarda əsas gücləndirici yanaşmaların dəyərini müəyyən etdi 31,38,92. Buna baxmayaraq, effektivlik məhdud idi və buna görə də 2009-2010-cu illər üçün planlaşdırılan bu yeni AdV-vektorlu vaksinlərin Faza IIa malyariya problemi üzrə tədqiqatları vacib olacaqdır. Uğurlu olsa belə, bu perspektivli peyvənd namizədləri insan (xüsusilə Afrika) populyasiyasında HAdV-5 vektoruna qarşı yüksək səviyyəli əvvəlcədən mövcud olan toxunulmazlığın potensial problemləri də daxil olmaqla, əlavə problemlərlə üzləşəcəklər 93 . Bundan əlavə, gənc afrikalı uşaqların hədəf populyasiyasında immunogen AdV vektorlarının necə olacağını görmək qalır. Malyariyanın yüksək ötürülməsi zonalarında yaşayan 1 və 6 yaş arası uşaqlarda təbii immunitetə ​​malik Afrikalı böyüklər və inkişaf etmiş ölkələrdə malyariyaya qarşı sadəlövh könüllülərlə müqayisədə peyvəndin immunogenliyinin azaldığı bildirilmişdir 94 .

Vərəmə qarşı peyvəndlər. Malyariya ilə bağlı vəziyyətə bənzər şəkildə, insan vərəmi üçün yüksək perspektivli vektorlu vaksin proqramları həyata keçirilir. Təcrübəli insan çağırış modeli olmadığı üçün bunlar bir qədər mane olaraq qalır, baxmayaraq ki, inkişaf etdirmək üçün səylər davam edir. M. bovis BCG üçün surroqat problem kimi M. vərəm insanlarda 86. Nəticə etibarilə, namizəd peyvəndlər seçildikdən sonra effektivlik sahəsində sınaqlar vacib olaraq qalır – bu həm uzun, həm də bahalı bir prosesdir. BCG prime və MVA-85A (mikobakteriya mikolil transferaz 85A antigenini kodlayan geni ehtiva edən MVA vektoru) gücləndirmə rejimi indi Cənubi Afrikada Faza IIb effektivliyi tədqiqatına daxil olur və bu günə qədər həm T hüceyrələrinin immunogenliyini yüksək səviyyədə nümayiş etdirmişdir. Böyük Britaniya və Afrika və böyüklər, yeniyetmələr, körpələr, HİV-müsbət şəxslər və gizli şəkildə yoluxmuş şəxslər də daxil olmaqla 500-dən çox insanda əla təhlükəsizlik rekordu M. vərəm 51,95,96,97. Vərəmə qarşı peyvənd sahəsi həmçinin AdV-vektor namizəd peyvəndləri hazırlayır və HAdV-35 kimi nadir insan serotiplərindən istifadə etməklə insan anti-HAdV-5 reaksiyalarından yan keçmək üçün oxşar yanaşmalardan istifadə edir. Üç vərəm antigeninin, 85A, 85B və 10.4-ün birləşməsini ifadə edən HAdV-35 peyvəndi namizədi (İst. 98) qeyri-insan primatlarda 99 BCG və ya rekombinant BCG tərəfindən hazırlanmış T hüceyrə reaksiyalarını gücləndirə bilər. insanlarda sınaqdan keçirilir 100 . Həm ABŞ, həm də Cənubi Afrikada 137 Faza I tədqiqatlarında qarışıq CD8+ və CD4+ T hüceyrə reaksiyası bildirilmişdir, lakin CD8+ T hüceyrələrinin vərəmə qarşı insan immunitetinə verdiyi töhfə qeyri-müəyyən olaraq qalır. Hər iki aparıcı viral-vektor peyvəndi namizədləri üçün preklinik tədqiqatlar indi aktiv şəkildə sistemli deyil, aerozollaşdırılmış çatdırılma potensialını təqib edir, ola bilsin ki, nebulizerlərdən istifadə edərək, selikli qişanın toxunulmazlığını gücləndirməyə çalışır. M. vərəm infeksiya 50 (Şəkil 2). Bu görkəmli immunoloji sualları həll etmək üçün qeyri-insan primatlardan əlavə preklinik məlumatlar lazımdır.

Flaviviruslar. Viral xəstəlik olan sarı qızdırma epidemiologiyasının dəyişməsi səbəbindən sadəlövh insanlarda yenidən yaranır. Yüksək effektli zəiflədilmiş peyvənd (YFV-17D) insanlarda 70 ildən artıqdır ki, istifadə olunur 101 . YFV-17D əsasında canlı zəiflədilmiş flavivirus vektorlarının inkişafı ilə flavivirus peyvəndlərinin rasional inkişafı proqramı təkamül etdi 102. preM–Env flavivirus pre-membran və zərf zülallarını kodlayan genlər kimerik vektorlar yaratmaq üçün Qərbi Nil virusu, Yapon ensefalit virusu və ya Denq virusundan olan genlərlə əvəz edilmişdir. Bu vektorlarda qeyri-flavivirus antigenlərini stabil şəkildə ifadə etmək daha çətin olmuşdur, lakin qeyri-flavivirus epitoplarının daxil edilməsi 103, GFP 104-ün sabit daxil edilməsi kimi məlumat verilmişdir. Faza I-III sınaqlarında geniş və uğurlu təhlükəsizlik və immunogenlik testindən sonra Yapon ensefaliti üçün kimerik flavivirus insanlarda istifadə üçün lisenziyalı ilk viral vektor peyvəndi ola bilər 105.

Qrip virusu. Çarpaz ştamm qripinə qarşı peyvəndin hazırlanması böyük və çoxdan axtarılan nailiyyət olardı, xüsusən də qripin yeni variantlarının davamlı mövsümi yaranması, cari H1N1 qrip A virusu pandemiyası və yüksək patogenli quş qripinin baş vermə ehtimalı nəzərə alınmaqla. Səthi hemaglutinin və neyraminidaza antigenlərinə qarşı variant spesifik antikor reaksiyalarından daha çox, konservləşdirilmiş daxili qrip antigenlərinə qarşı qoruyucu T hüceyrə reaksiyalarının induksiyası uğur şansı ola biləcək bir yanaşmadır. Yüksək dərəcədə qorunmuş daxili nukleoproteini və matrix 1 (NP–M1) qripi A antigenlərini ifadə edən MVA vektorundan istifadə etməklə, yeni namizəd çarpaz qrip peyvəndinin Faza I sınaqları aparılır. Bu vektor, ehtimal ki, təbii məruz qalma (S. Gilbert, şəxsi ünsiyyət) tərəfindən hazırlanmış şəxslərdə T hüceyrə reaksiyalarını artıra bilər. Əgər bu T hüceyrələrinin cavabları qorunma ilə əlaqələndirilirsə, bəzi sübutlar göstərir ki, 106, onda viral-vektor peyvəndi yanaşması, varianta xas səth örtüyünün antigenlərinə qarşı anticisimləri induksiya etməyə yönəlmiş mövsümi qrip immunizasiyaları ilə müqayisədə yüksək qənaətcil ola bilər.

HİV. Ola bilsin ki, peyvəndin inkişafı üçün qrip virusunun mövsümi dəyişkənliyi və antigenik driftindən daha böyük problem daim inkişaf edən HİV epidemiyasıdır. HİV-1 üçün T-hüceyrə induksiya edən peyvəndlər viral yükü və CD4+T hüceyrə itkisini azaltmaq, sağ qalma müddətini uzatmaq və ötürülməni azaltmaq məqsədi daşıyır 107 . Yenilənmiş səylər zəiflədilmiş kanarpox virusu (ALVAC), MVA və ya NYVAC istifadə edərək poxvirus rejimlərinə yönəldilmişdir. Bu poxvirus peyvəndi vektorlarının hər biri insanlarda HİV-1-ə xüsusi immun reaksiyalar yaratmaq qabiliyyətinə görə hazırlanmış və qiymətləndirilmişdir. Ən son III Faza HİV-1 klinik sınaqlarında ALVAC və AIDSVAX (monomer HİV-1 qlikoprotein 120) birləşməsindən istifadə edilib, burada ötürülmə riski heteroseksual həyat tərzinə əsaslanır. Tədqiqat HİV-1 infeksiyasının qarşısının alınması istiqamətində həvəsləndirici bir tendensiya tapsa da (31,2% effektivlik), infeksiya sonrası virus yükü və ya CD4 + T hüceyrələrinin sayı üçün heç bir fayda olmadı 108 . Qeyri-insan primatlarda preklinik effektivlik tədqiqatlarında virus yükünün idarə edilməsi və CD4 + T hüceyrələrinin sayının qorunub saxlanması, DNT ilə astarlanmış cavabları artırmaq üçün heteroloji əsas gücləndirici birləşmələrdə müəyyən pox əsaslı vektorlardan istifadə edildikdə bildirilmişdir 41,48. Onlar Env-ə qarşı antikor reaksiyalarını induksiya edə və müxtəlif səviyyələrdə T hüceyrə reaksiyalarını ortaya çıxara bilirlər. İnsanlarda T-hüceyrə reaksiyaları qarışıq CD4+ və CD8+ fenotipinə malikdir və sitokin istehsalı baxımından çoxfunksiyalıdır 37,109,110. Bununla belə, konsensus olaraq qalır ki, bu peyvənd rejimləri Gag və Pol kimi antigenlərə qarşı CD8+ və CD4+ T hüceyrələrinin reaksiyalarının miqyasını və genişliyini artırmaq və yüksək titrli neytrallaşdırıcı anticisimləri və ya yüksək avidliyə malik antikorları induksiya etmək üçün təkmilləşdirilməlidir. yerli trimerik Env proteininə qarşı.

HİV-1 peyvəndi üçün HAdV-5 rekombinantlarının inkişafı STEP olaraq təyin edilmiş insan effektivliyi sınağına çıxarılan bu günə qədər ən immunogen namizəd peyvəndi istehsal etdi. HAdV-5 rekombinantları HİV-1 peyvəndi hazırlayanlar üçün STEP sınağı boş yerə 52,61,111 xitam verilənə qədər aparıcı yanaşma olaraq qaldı. İnsanlarda malyariya və vərəmə qarşı əsas gücləndirici peyvənd proqramlarında daha güclü T-hüceyrə reaksiyalarının əldə edilməsinə baxmayaraq, bəziləri STEP sınağının uğursuzluğunu T-hüceyrəsinin vasitəçiliyi ilə toxunulmazlığı stimullaşdırmağa yönəlmiş peyvəndlər konsepsiyasının rədd edilməsi üçün əsas kimi irəli sürmüşlər. Ancaq ümidvericidir ki, bəzi ilkin ümidsizlikdən sonra müzakirələr vaksin immunogenlərinin və texnologiyalarının daha da optimallaşdırılmasına yönəldi 62 . Həqiqətən, indi qeyri-HİV infeksiyaları üçün daha yüksək T-hüceyrə induksiyası bildirildiyi üçün, HİV peyvəndi sahəsində bunları uyğunlaşdırmağın vaxtı gəldi. HİV-1 üçün peyvənd hazırlayanlar artıq digər, az qurulmuş, kimerik virus-vektor texnologiyalarına diqqət yetirməyə başlayıblar. Sendai virusu, sitomeqalovirus (CMV), reovirus, herpes simplex virusu və NDV hazırda Beynəlxalq QİÇS Peyvəndi Təşəbbüsü (IAVI) daxil olmaqla bir sıra qruplar tərəfindən qiymətləndirilir. CMV-nin vektor kimi son istifadəsi göstərdi ki, bu vektor ciddi SIV-də əhəmiyyətli effektivliyə malikdir.MAKİNTOŞ (makakanın simian immunçatışmazlığı virusu) HAdV-5 istifadə edərək başqa bir araşdırmada müşahidə edilən virus yükünün yatırılmasını aşaraq rhesus makaka problem modeli (Refs 112, 113). Alternativ strategiyalar, ehtimal ki, həm T hüceyrələrinin, həm də B hüceyrələrinin cavablarının işə götürülməsini asanlaşdırmaq üçün AdV–MVA və ya heteroloji AdV–AdV rejimləri və ya hətta üçlü birləşmələr kimi hal-hazırda mövcud olan ən immunogen əsas gücləndirici rejimləri birləşdirəcək 41,114. Bu yaxınlarda SIV-ə qarşı T hüceyrə reaksiyasına səbəb ola bilən rekombinant HAdV-26-HAdV-5 rejimi təsvir edilmişdir.MAKİNTOŞ Homoloji HAdV-5 rejiminin yaratdığı cavabdan daha güclü, daha çoxfunksiyalı və daha qoruyucu olan rhesus makakalarında tıxanma 40 . Həqiqətən də, HAdV-5 homoloji əsas gücləndirici STEP sınağında könüllülərdə orta hesabla milyon PBMC-yə təxminən 300 SFU ilə müqayisədə bu makakalarda 40 milyon PBMC-də ortalama >2,000 SFU əldə edilmişdir 52 . Gələcək tədqiqatlar bu yanaşmaların SIV-də DNT və HAdV-5 peyvəndi vektorlarının birləşməsi ilə müəyyən edilmiş immunoloji və viral nəzarət meyarlarını ardıcıl olaraq təkmilləşdirə biləcəyini aşkar edəcək.MAKİNTOŞ rhesus makaka problem modeli.

Xərçəng vaksinləri. Xərçəng peyvəndi sahəsi (ətraflı araşdırmalar üçün, Refs 115, 116-a baxın) nəinki güclü, davamlı, effektiv immun reaksiyalar yaratmaq probleminə məruz qalmışdır (bir çox yoluxucu xəstəlik peyvəndi ilə paylaşılan məsələ), həm də bunu İmmunoloji cəhətdən zəifləmiş mühitdə tərifinə görə zəif immunogen və ya funksional olaraq qeyri-immunogen olan öz-antigenlərə qarşı tolerantlığın pozulmasının unikal və mürəkkəb problemi. Maraqlıdır ki, xüsusi şəraitdə müəyyən xərçəng vaksinlərinə ümid var. Karsinoembrion antigenini (CEA) hədəf alan terapevtik viral-vektor peyvəndlərinin yerli şüalanma, kemoterapi və ya sitotoksik T-limfosit zülalı 4 (CTLA4) spesifik monoklonal anticisimləri ilə birlikdə istifadəsi bəzi xəstələrdə sağ qalma müddətini yaxşılaşdırmışdır 117 . Bu şəraitdə "antigen şəlaləsi" müşahidə edilmişdir ki, burada T-hüceyrələrinin CEA-ya reaksiyaları təkcə peyvənddən sonra deyil, həm də de novo xərçəng hüceyrələrinin daha effektiv immun hədəflənməsindən sonra ehtimal olunan digər şişlə əlaqəli antigenlərə (TAAs) cavablar. TAA-ları ifadə edən MVA vektorları böyrək, prostat və qeyri-kiçik hüceyrəli ağciyər xərçəngi üçün birinci sıra müalicələrə əlavə olaraq hal-hazırda qabaqcıl klinik sınaqlardadır 118,119,120 . Son immunoloji təhlillər göstərdi ki, ilkin mərhələdə aktivləşdirilmiş təbii öldürücü hüceyrələrin səviyyəsi ilə ağciyər xərçəngi üçün MVA-MUC1-IL-2 üstəgəl kimyaterapiya alan xəstələrdə sonrakı effektivlik arasında əhəmiyyətli korrelyasiya var 121 . Aktivləşdirilmiş təbii öldürücü hüceyrələrin səviyyəsi potensial olaraq viral-vektor immunizasiya kombinasiya terapiyasından faydalana biləcək xəstələr üçün proqnozlaşdırıcı biomarker kimi istifadə edilə bilər. İmmuniteti zəiflədən viral infeksiyalarda olduğu kimi, xərçəng peyvəndlərinin terapevtik şəraitdə istifadəsi potensial tolerogen şəraitdə davam etdirilə bilən funksional və möhkəm immun cavabın yenidən qurulmasını tələb edəcək – bu, immundan yayınma strategiyasının bir hissəsi kimi yaradılmışdır. bəzi xərçəng növləri. Bu baxımdan, kombinasiya terapiyaları xərçəng peyvəndi sahəsində ən böyük ümidi saxlayır, baxmayaraq ki, siçan 122 və qeyri-insan primat 123 tədqiqatlarından alınan preklinik məlumatlar namizəd TAA-ları ifadə edən AdV vektorlarının tolerantlığı poza biləcəyini göstərir. AdV vektorlarına əsaslanan namizəd xərçəng peyvəndlərinin insan sınaqlarında poxvirus əsaslı immunoterapiya ilə müşahidə ediləndən daha yaxşı immunogenliyə nail olub-olmaması hələ də aydınlaşdırılmalıdır.

Əksər viruslar ev sahibinin immun reaksiyalarından yayınmaq və sonrakı iltihab mühitini müxtəlif yollarla modulyasiya etmək üçün mexanizmlər inkişaf etdirmişdir. Bu qaçaq atributlar ideal vaksin köməkçilərinin immunostimulyator xüsusiyyətlərinə ziddir. Bununla belə, genomikanın yeni dövründə, bu immunostimulyasiya xüsusiyyətlərini gücləndirmək üçün immun-qaçan xüsusiyyətlərə malik faktorları kodlayan spesifik viral genlər hədəflənir. Vaksinologiyada bu yeni elm nəinki yaxşı qurulmuş viral vektorlardan istifadə edir, həm də yeni viruslar aşkar edildikdə və onların peyvənd vektorları kimi faydalılığı da araşdırılır. Məsələn, əvvəllər mövcud olan vektor toxunulmazlığı problemini aradan qaldırmaq üçün alternativ vektorları tapmaq üçün çoxsaylı strategiyalardan istifadə etməklə araşdırmalar aparılır. Bu vektorlar daha güclü, daha geniş və daha davamlı effektor reaksiyalarına səbəb olacaq yeni peyvəndin əsas gücləndirici rejimləri ilə birlikdə immunoloji problemlərə perspektivli həllər təklif edir. Bir çox yeni vektor sistemlərinin meydana çıxması cari vektorların təkmilləşdirilməsi üçün böyük imkanlardan yayınmamalıdır. Viral genləri sıradan çıxaran və təkmilləşdirilmiş antigen təqdimatı, təkmilləşdirilmiş köməkçi təsirlər və immun cavabların qəsdən əyriliyi ilə nəticələnən yanaşmalar yeni tədqiqat istiqamətləridir. Yeni texnologiyalara bakterial süni xromosomlarda 28,124 'rekombinasiya' yolu ilə poxvirus genomlarının daha asan manipulyasiyası və bakterial xromosomların istifadəsi də daxil olmaqla, yüksək məhsuldar transgenin AdV vektorlarına daxil edilməsi daxildir. tet viral artım üçün zəhərli və ya zərərli ola bilən transgenlərin transkripsiyasını dayandırmaq üçün transgen promotorunda operator elementləri 125 . Bu cür texnologiyaların istifadəsi bir sıra müxtəlif vektor platformaları üçün qəbul ediləcək, buna görə də təhlükəsiz qalan, lakin onların təqdim etdiyi rekombinant vaksin antigenləri üçün təkmilləşdirilmiş immunogenlik nümayiş etdirən yeni virus peyvəndi vektorlarının skrininqinə imkan verəcək.

Heyvanlarda və insanlarda istifadə üçün viral-vektor peyvəndlərinin inkişafı həm elmi, həm də tənzimləyici arenalarda əhəmiyyətli problemlərlə üzləşir. Bununla belə, bu texnologiyalar nəhayət heyvanlarda effektivliyə və insanlarda uzun müddətdir axtarılan güclü immun reaksiyalara nail olur, xüsusən də malyariya, vərəm və qrip sahələrində. Bu yeni texnologiyaların tərcüməsi xərçəng və HİV-1 kimi bu sahədə ən çətin problemlərə qarşı peyvəndin hazırlanmasını asanlaşdıracaq. Replikasiya çatışmazlığı olan viral vektor peyvəndlərinin lisenziyası mümkündür, çünki onlar əlavə zülallı peyvəndlər və canlı viral peyvəndlərin iki ifrat nöqtəsi arasındadır - hər ikisi də xeyli səydən sonra əvvəllər lisenziyalaşdırılmışdır. Yapon ensefalit virusuna qarşı ilk kimerik flavivirus peyvəndi ilə tənzimləyici orqan təsdiqini gözləyən, qabaqcıl klinik inkişafda olan bir çox digər virus-vektor vaksinləri üçün yol asfaltlanmışdır. Növbəti 25 il peyvənd elmindəki bu intibah üçün çətin, lakin həyəcanlı bir zaman olacaq.

Qutu 1 | Yoluxmuş heyvanların peyvənd olunmuş heyvanlardan fərqləndirilməsi

Müəyyən heyvandarlıq infeksiyaları halında, effektiv ənənəvi peyvəndlər mövcuddur, lakin seroloji testlərə əsaslanan xəstəliyin monitorinqinə müdaxilə etmədən istifadə edilə bilməz. Həm təbii infeksiya, həm də peyvənd nəticəsində heyvan seropozitiv olur. Klassik nümunə iribuynuzlu heyvanlarda dabaq xəstəliyi virusudur (FMDV): təsirsiz hala salınmış peyvəndlər xəstəliyə nəzarət etmək üçün effektiv istifadə oluna bilsə də, “FMDV-dən azad” ölkələrdə onlar müntəzəm olaraq istifadə edilmir, çünki bu, ölkənin xəstəlikdən azad olmasını təhlükə altına qoyar. statusuna malikdir və beynəlxalq ticarət üçün əhəmiyyətli iqtisadi təsirlərə səbəb olur. FMDV vaksinləri epidemiya zamanı xəstəliyin yayılmasını azaltmaq üçün istifadə edilmişdir, baxmayaraq ki, peyvənd edilmiş heyvanlar sonradan həmin ölkənin FMDV-dən azad statusunu bərpa etmək üçün kəsilməlidir 126 . Digər nümunələr arasında mal-qaranın iribuynuzlu herpes virusunun 1-ci tip infeksiyası (bu, infeksion iribuynuzlu rinotraxeitlərə gətirib çıxarır), klassik donuz taunu və donuzlarda Aujeski xəstəliyi (psevdorabiya virusu və ya suid herpesvirus 1 səbəb olur) 79 daxildir.

Bu ssenarinin qarşısını almaq üçün alternativlərdən biri yoluxmuş heyvanları peyvənd olunmuş heyvanlardan fərqləndirməyə imkan verən vaksinlərin hazırlanmasıdır (DIVA). Bu, subunit peyvəndlərin istifadəsi (məsələn, patogendən tək antigeni ifadə edən viral vektorlar) və ya şərti zəiflədilmiş vaksinlərdən müəyyən edilmiş genlərin seçmə silinməsi ilə əldə edilir. Buna görə də, peyvənd və təbii infeksiya, heyvanın yalnız vəhşi təbiətlə təbii infeksiyaya məruz qaldığı, peyvənddən silinmiş və ya olmayan bir antigenə qarşı peyvənddəki antigenə qarşı antikor reaksiyalarını müəyyən edən uyğun diaqnostik analizlərdən istifadə etməklə seroloji olaraq fərqləndirilə bilər. - patogen növü.


Digər viral zülallara əsaslanan peyvəndlər

HA antigeninə humoral immun reaksiyanın tətbiqi və təkmilləşdirilməsi ilə yanaşı, universal qrip virusu peyvəndləri müxtəlif və daha yüksək qorunan antigenlərin daxil edilməsindən potensial olaraq faydalana bilər.

Neyraminidaza

İnsan qripinə qarşı mübarizə modelindən istifadə edən bu yaxınlarda aparılan bir araşdırma, serum neyraminidazanın inhibə fəaliyyətinin mövcud standart qorunma proqnozlaşdırıcısı olan HAI titri 127,128,129 ilə müqayisədə canlı virusa qarşı həssaslığın daha çox proqnozlaşdırıcı ola biləcəyini irəli sürdü. NA üç genetik qrupa daxil olan 11 alt tipdən ibarət II tip transmembran qlikoproteindir (Şəkil 3a). Bu tetramerik zülal terminal sialik turşuları çıxarır və yeni əmələ gələn viral hissəciklərin 130 buraxılmasını asanlaşdırır (Şəkil 3b). NA-ya qarşı antikorların 131,132,133,134 müəyyən edilməsinə baxmayaraq, onların qrip virusu infeksiyasının nəticələrinə necə təsir etdiyi barədə çox az şey məlumdur 135. NA təsdiqlənmiş dərman hədəfidir, çünki oseltamivir, zanamivir və laninamivir kimi NA-nın kiçik molekullu inhibitorları xəstəliyin şiddətini modullaşdıra bilər 136. NA-nın aktiv yerini tanıyan geniş qoruyucu antikorların son identifikasiyası və səciyyələndirilməsi bu antikorların potensial olaraq vaksinlər tərəfindən induksiya edilə biləcəyini göstərir 137. Antigenik sürüşmə və NA sürüşməsinin HA-dan asılı olmayaraq baş verdiyi düşünülür. Nəticədə, N2 antikorları HA-nın dəyişdiyi, lakin NA-nın dəyişmədiyi 1968-ci ildəki H3N2 pandemiyasının şiddətini məhdudlaşdırmağa kömək edə bilərdi. Qrip immunogeni kimi NA-nın potensial əhəmiyyəti həmin pandemiya zamanı tanınsa da 139,140 , cari mövsümi qrip peyvəndi istehsalçılarından bazara çıxarılan məhsullarda NA-nın kəmiyyətini və ya keyfiyyətini ölçmək tələb olunmur. Sadəcə olaraq, hazırkı mövsümi vaksinlərə məlum miqdarda konformasiya baxımından düzgün NA əlavə etmək effektivliyi və potensial olaraq qripin sürüklənmiş suşlarına qarşı genişliyi artıra bilər 141,142 . “Konsensus” NA immunogenlərinin yaradılması kimi əlavə səylər heyvan modellərində sınaqdan keçirilir və NA-nın daha universal peyvəndin tərkib hissəsi kimi istifadə edilməsi üçün vəd verə bilər 143.

a | A qripi və B qripinin neyraminidaza (NA) alt növlərinin filogenetik ağacı. A qripi NA genetik cəhətdən fərqli üç alt qrupa bölünə bilər: 1-ci qrup N1, N4, N5 və N8-dən ibarətdir 2-ci qrup N2, N3, N6, N7 və N9-dan ibarətdir və 3-cü qrupda meyvə yarasalarından iki NA alt növü var (*N10 və *N11). Şkala çubuğu sayt başına amin turşusu əvəzetmələrinin sayını göstərir. b | Qripin strukturu NA. NA tetramerlərinin yuxarı və aşağı görünüşləri göstərilir. 1977-ci ildən 2018-ci ilə qədər seçilmiş NA-lardan ardıcıllıqla qorunma qırmızı (dəyişən) və mavi (konservləşdirilmiş) ilə təsvir edilmiş və A/California/04/2009 (H1N1) (PDB 3TI6) tarixindən NA ektodomeninin kristal quruluşuna uyğunlaşdırılmışdır.

Matris protein 2 ektodomen

Qrip A virusu matrix protein 2 ektodomen (M2e) universal peyvənd antigeni kimi təklif edilmişdir 144,145 , lakin M2e bir çox problem təqdim edir. M2 ion kanalı qrip virusunun qönçələnməsi və viral nüvənin sökülməsi üçün vacib olsa da və beləliklə, yüksək dərəcədə qorunub saxlanılsa da, onun səthə məruz qalan amin terminal ektodomen zəif immunogendir 146 . M2e müxtəlif daşıyıcılarla konyuqasiya olunarsa və ya virusa bənzər hissəcik kimi çatdırılarsa, onun immunogenliyi yaxşılaşır 147 . Əslində, qrip virusu ştammlarının geniş spektrindən IgG vasitəçiliyi ilə qorunma heyvan modellərində nümayiş etdirilmişdir 148 . Bununla belə, bu qoruma Fc effektor funksiyalarından irəli gəlir və qorunmanın heç bir möhkəm immun korrelyasiyası qurulmayıb 149, bu da M2e əsaslı toxunulmazlığın kəmiyyətini çətinləşdirir və vaksinin effektivliyinin ölçülməsini geniş sahə sınaqları ilə məhdudlaşdırır. M2e-yə passiv şəkildə köçürülmüş insan monoklonal antikoru insan qripi problem modelində viral yükü azaltdı 150. M2e-nin immun cavabı adjuvantlarla yaxşılaşdırıla bilər və faza I klinik sınaqda M2e-flagellin füzyon proteini peyvəndi yüksək dozada güclü antikor reaksiyalarına səbəb oldu, baxmayaraq ki, sistemli reaktogenlik profili qəbuledilməz idi 146. M2e-nin nisbətən kiçik bir zülal olduğunu və virusdan qaçan mutantların müəyyən edildiyini nəzərə alsaq, əlavə qoruyucu toxunulmazlığı təmin etmək üçün M2e əsaslı peyvəndin HA əsaslı peyvəndlərə əlavə olaraq istifadə edilməsi ehtimalı daha yüksəkdir, xüsusən də viruslar arasında uyğunsuzluq olduqda. peyvənd və dövriyyədə olan epidemiya ştammları 151 .

Nukleoprotein

CD4 + və/və ya CD8 + T hüceyrə reaksiyalarının stimullaşdırılması, o cümlədən ağciyərin intraepitelial toxuma rezident yaddaş hüceyrələrinin 152 və ya limfa düyünlərində 153 cücərmə mərkəzinin formalaşması üçün vacib olan T follikulyar köməkçi hüceyrələrin cəlb edilməsi qripin davamlılığını, potensialını və genişliyini yaxşılaşdıra bilər. toxunulmazlıq. Həm CD4 +, həm də CD8 + T hüceyrə reaksiyalarının qripə qarşı heterosubtipik toxunulmazlıqla əlaqəli olduğu göstərilmişdir 154,155,156,157,158. T-hüceyrələri həm CD8 vasitəçiliyi ilə sitotoksiklik, həm də dolayı yolla CD4 yardımı vasitəsilə siçan 159 və qeyri-insan primat 160 qrip infeksiyası modellərində qorunma genişliyinə aid edilmişdir. Baxmayaraq ki, T hüceyrə əsaslı toxunulmazlıq HLA tipindən asılı olaraq dəyişir və qorunmanın mütləq korrelyasiyası hələ müəyyən edilməmişdir, insanlarda aparılan tədqiqatlar qrip infeksiyasından qorunma ilə daha çox sayda çarpaz reaktiv T hüceyrələrini əlaqələndirmişdir 161,162. NP, T-hüceyrə toxunulmazlığının hədəfi kimi müəyyən edilmiş və erkən faza klinik sınaqlarında tədqiq edilmiş qrip A ştammları arasında qorunan daxili zülaldır. MVA vektorlu NP + M1 peyvəndi, gənc və daha yaşlı kohortlar arasında interferon-γ (IFNγ) fermentlə əlaqəli immunospot tərəfindən aşkar edilən CD4 + və CD8 + T hüceyrə reaksiyalarına səbəb oldu (Cədvəl 2). Bu peyvənd həm də mövsümi vaksinlərlə birlikdə istifadə edildikdə T hüceyrəsi və ştama spesifik antikor reaksiyalarını artırdı 163,164. Qrip problemində, MVA NP + M1 peyvəndi ilə peyvənd edilmiş fərdlərin simptomları peyvənd olunmamış nəzarət qruplarına nisbətən daha aşağı idi, baxmayaraq ki, tədqiq edilən şəxslərin sayı 66,165 az idi. Yuxarıda qeyd olunan tədqiqatlarda olduğu kimi, virus vektorlu və nuklein turşusu əsaslı peyvənd platformalarının heyvan modellərində və insan qripi virusuna qarşı mübarizədə 59,60,166 və bu cür alternativ platformalarda ənənəvi təsirsizləşdirilmiş qrip peyvəndlərinə nisbətən təkmilləşdirilmiş T hüceyrə reaksiyalarına səbəb olduğu aşkar edilmişdir. T hüceyrələrini effektiv şəkildə cəlb etmək üçün universal bir peyvənd tələb oluna bilər.


Müzakirə

İlk dəfə olaraq H1N1pdm09 ilə yoluxmuş donuzların ağciyərlərini boşaltan limfa düyünlərindən donuz qripinə xas mAb-lar yaratdıq. Antikorlar əsasən HA başına qarşıdır və insanlar tərəfindən də tanınan Sa sahəsi (qalıq 160 və 163) və Ca sahəsi (qalıq 130) olan iki əsas immunominant epitopa yönəldilmişdir. Bu donuz mAb-lərinin neytrallaşdırıcı fəaliyyəti ən güclü insan mAb-ləri ilə müqayisə edilə bilər. Seçilmiş mAb, pb27, 10 mq/kq dozada tətbiq edildikdən sonra virus yükünü və patologiyanı azaldıb, bu da BAL-da təxminən üç log az olmaqla 100 μq/ml davamlı serum konsentrasiyası ilə nəticələnib. 10 mq/kq dozada ağciyər və BAL virus yükü ləğv edildi və ağciyər patologiyası aradan qaldırıldı. Burun tökülməsi azalsa da aradan qaldırılmadı.

Donuz epidemiyası diareyasına, klassik donuz taunu və donuz reproduktiv və tənəffüs sindromu viruslarına qarşı donuz mAb-lərinin yaxınlarda yaradılmasına baxmayaraq, burada biz donuz mAb-lərinin qandan çox drenaj edən limfa düyünlərindən istifadə etməklə yüksək effektivliklə istehsal oluna biləcəyini göstəririk [9-11]. Biz qanda HA spesifik B hüceyrələrinin çox aşağı tezliyini, lakin yerli ağciyər toxumalarında və badamcıqlarda daha yüksək tezlikdə olduğunu aşkar etdik. Drenaj düyünlərinə (iynə biopsiyası ilə), badamcıqlara və BAL-a daxil olmaq, şübhəsiz ki, insanlarda və ya digər iri heyvanlarda mümkündür və müxtəlif xəstəlik törədicilərinə qarşı mAb əmələ gəlməsinin effektivliyini artıra bilər.

mAb-lərimizin IGLV və IGKV gen seqmentlərinin repertuarında, donuzlar üçün gözlənildiyi kimi, heç bir açıq istifadə meyli yoxdur [25,26]. Maraqlıdır ki, ən uzun IGH zəncirləri IGL ilə, ən qısa IGH zəncirləri isə IGK ilə cütləşməyə meyllidirlər. Həmçinin, IGL zəncirləri CDRH3-də ikiqat Cys (yəqin ki, disulfid bağı) olan IGH zəncirləri ilə birləşməyə meyllidirlər. Təkamül nöqteyi-nəzərindən qeyd etmək maraqlıdır ki, mal-qara demək olar ki, yalnız IGL-dən istifadə edir və sisteinlərlə zəngin olan adi CDRH3-lərdən daha uzundur [34,35]. Bununla belə, bu tədqiqatda nisbətən az sayda klon təhlil edilmişdir (n = 45) və bu fenomenin bütün donuz repertuarında daha çox sayda klon üçün doğru olub olmadığını müəyyən etmək üçün gələcək iş lazımdır.

Qısa müddətli təcrübədə donuzlara profilaktik olaraq (15 mq/kq) tətbiq edilən HA başlığına qarşı güclü neytrallaşdıran 2-12C monoklonal antikorun H1N1pdm09 qripinə qarşı mübarizədən sonra virus yükünü və ağciyər patologiyasını azaltdığını göstərdik [23]. Bununla belə, daha uzun terapevtik təcrübələr insana qarşı antikor reaksiyaları problemi ilə qarşılaşır. Donuz mAb-lərinin istifadəsi bu çətinliyin qarşısını alacaqdır. Donuz mAb-lərinin farmakokinetik xüsusiyyətlərini hələ ölçməsək də, onların mövcudluğu xəstəliyin qarşısını almaq və ya müalicə etmək üçün mAb-lardan optimal şəkildə necə istifadə olunacağını araşdırmaq imkanı verəcək. Maraqlıdır ki, donuz IgG1 mAb olan pb27, burun çubuqlarında virus tökülməsini aradan qaldırmadı. Ola bilsin ki, fərqli bir IgG alt sinfi və ya tənəffüs yollarına yerli administrasiya burun axıntısının qarşısını almaqda daha təsirli ola bilər.

Təcrübəmizdə pb27 virusa qarşı mübarizədən 24 saat əvvəl verilmişdir, insanlarda isə mAb-lər infeksiyadan sonra veriləcək. Donuz modelində infeksiyadan sonra mAb terapiyasının effektivliyini müəyyən etmək üçün əlavə təcrübələr tələb olunacaq. Donuz qripi modeli antikorların çatdırılma platformalarını, IgA və müxtəlif IgG alt siniflərinin təsirini və Fc vasitəçiliyi funksiyalarının rolunu qiymətləndirmək üçün də istifadə edilə bilər. Xüsusilə, neytrallaşdırıcı olmayan gövdə bağlayıcı antikorlar əvvəllər donuz modelində inkişaf etmiş xəstəlikdə iştirak etdiyinə görə, in vivo anti-kök mAb pb29 təsiri, bu mühüm təbii host modelində Fc vasitəçiliyi funksiyası haqqında anlayışımızı yaxşılaşdıracaq [36].

Bütün mAb-lərimiz IgG1-dir, donuzlarda isə 6 fərqli IgG alt sinfi bildirilmişdir – IgG1, IgG3, IgG5a, IgG5b, IgG6a və IgG6b [37]. Onların Fc funksiyası haqqında heç bir məlumat yoxdur və aşağı bazar tələbi səbəbindən subclass spesifik anti-immunoqlobulin antikorları mövcud deyil. IgG3-ün əcdad ardıcıllığı olduğu düşünülür və təhlil onun komplementin aktivləşməsinə və IgG nəqliyyat reseptoru FcRn-ə bağlanmasına imkan verən motivləri ehtiva etdiyini proqnozlaşdırır [37]. Əlavə təhlil olmadan biz digər alt siniflərin induksiya olma ehtimalını istisna edə bilmərik və IgG1-in qrip infeksiyasına üstünlük verən cavab olub olmadığını bilmirik. Aydındır ki, IgG1 yüksək bağlayıcıları CDC və ADCC-yə vasitəçilik edirdi, əksinə, ehtimal olunan anti-gövdə pb29 nə CDC, nə də ADCC-yə vasitəçilik edə bilmədi. Əlavə tədqiqatlar digər anti-gövdə antikorlarının və digər IgG alt siniflərinin Fc vasitəçiliyi funksiyalarını yerinə yetirə biləcəyini müəyyən edəcək.

Donuz mAb-lərinin spesifikliyi H1N1pdm09 HA-nı hədəf aldığı bilinən insan mAb-lərinə çox oxşardır. Onlar Sa (qalıqlar 160 və 163) və Ca (qalıq 130) iki əsas yeri tanıdılar. 2014-cü ildə H1N1pdm09 virusları K163 mövqeyində əvəzetmə yolu ilə antigenik sürüşmə əldə etdi. Bununla belə, virusların monitorinqi üçün istifadə edilən ferret antiserumu bu antigenik dəyişikliyi aşkar edə bilmədi [31,38,39]. H1N1pdm09 donuzdan əmələ gəlsə də, donuzlarda antikor reaksiyasının spesifikliyinin mövsümi qrip virusları üçün insanlara oxşar olub-olmadığını təsdiqləmək üçün əlavə təhlil tələb olunur, bu viruslar zəif təkrarlanır və donuzlarda infeksiyaya səbəb olmaq üçün uyğunlaşma tələb olunur. Bununla belə, biz göstərmişik ki, 2017-2018-ci illərdə insan soyuqluğuna uyğunlaşdırılmış dördvalentli mövsümi LAIV donuzlarda immun reaksiyalara səbəb ola bilər, peyvəndin H3N2 komponentinin burun çubuqlarında təkrarlanması və H1N1 komponenti ilə müqayisədə H3N2-yə qarşı daha güclü immun reaksiya var [40]. Bundan əlavə, 6 donuzdan 4-ü A/Hong Kong/4801/2014 (H3N2) ilə yoluxmuş və H1N1pdm09 [40] ilə müqayisədə daha aşağı səviyyədə və daha qısa müddətə olsa da, virus tökülmüşdür.

Bütövlükdə, nəticələrimiz göstərir ki, donuz mAb-lərin insanlarda terapiya kimi ən yaxşı şəkildə necə tətbiq olunacağını başa düşmək üçün əla modeldir və donuzlar insanlarınkinə bənzər bir antikor reaksiyası meydana gətirdiyinə görə, donuz antiserası ferret antiseradan daha yaxşı surroqat ola bilər. qripin antigenik sürüşməsini aşkar etmək və bununla da insanlar üçün peyvənd tövsiyələrini məlumatlandırmaq.


Nəticələr

Ardıcıllıq təhlili

Bütün dəyişməz bölgələri müəyyən etmək üçün NCBI verilənlər bazasında mövcud olan Qrip A-nın H1, H2, H3 və H5 alt növlərinin ardıcıllığından istifadə etməklə hərtərəfli HA protein ardıcıllığının təhlili aparıldı. Təhlil əvvəlcə iki mərhələdə aparıldı, hər bir alt növün fərdi profilləri yaradıldı və daha sonra hər bir profil ən əhəmiyyətli uyğunlaşmaları əldə etmək üçün H2 profilinə uyğunlaşdırıldı. H2-nin digər alt növlərlə korrelyasiya qrafikləri H2 və H5 və H2 və H1 alt tiplərinin H2-H3 cütündən daha çox oxşar olduğunu göstərir (Şəkil 1). H2-H5 və H2-H1 cütlərinin HA1-dəki amin turşusu qalıqlarının 66%-i və 56%-i üçün 0,8-1,0 arasında dəyişən korrelyasiya balları var idi. Bununla belə, H2-H3 cütlüyündə qalıqların yalnız 33%-i üçün 0,8-1,0 korrelyasiya balı müşahidə edilmişdir. Oxşar nəticələr daha əvvəl Nobusava tərəfindən bildirilmişdi və b. [18], H1 alt növünün H2 və H5 alt tiplərindəki HA1 alt vahidinin müvafiq olaraq 58.7% və 55.7% eyniliyini və H3 alt növünə ən az eyniliyini (35.2%) nümayiş etdirdiyini göstərdi.

HA1 domenində H2-H5, H2-H3 və H2-H1 nisbətləri göstərilir. Bu analizdə H3 qalıqlarının nömrələnməsi izlənildi.

Ardıcıllıqla düzülmə məlumatları iki komponentə bölünmüşdür: 0,9-1,0 qorunma balı olan qalıqlar qorunmuş qalıqlar və 6 və ya daha çox qalıq olan bölgələr, 50%-dən çox qalıqların isə 0,9-1,0 qorunma balına malik olduğu bölgələr qorunmuş rayonlar kimi qruplaşdırılmışdır. . Bu meyarlardan istifadə edərək, biz bəzi vacib tək amin turşusu mövqelərini və konformasiya epitoplarını əldən verməyi gözlədik, lakin anti-viral/peptid terapiyaları üçün uyğun olan bölgələri müəyyən etdik. Bu məlumat Cədvəl 1 və 2-də göstərildiyi kimi bütün alt növlər daxilində ən çox qorunan doqquz bölgəni aydın şəkildə müəyyənləşdirdi. Dəyişiklik heç bir dəyişikliyə səbəb olmayacaq oxşar qalıqdan qaynaqlanırsa, müəyyən edilmiş qorunan bölgə daxilində hər bir dəyişən qalığın qorunma dərəcəsi mötərizədə təsvir edilmişdir. məsul/hidrofobiklik. Seçilmiş qorunan bölgələrdə hər mövqedə yekun qorunma Cədvəl 1 və 2-də göstərildiyindən daha yüksək olmuşdur, çünki seçilmiş regionlardakı alt növlər arasında dəyişiklik çox vaxt oxşar əvəzetmələrlə nəticələnirdi.

Biz belə nəticəyə gəldik ki, alt tiplərdəki böyük fərqlərə baxmayaraq, anti-peptid/anti-viral reaksiyalar üçün əsas hədəf ola biləcək aşağı dəyişkənlik bölgələri var.

Struktur təhlili

Antiviral agentlərin/antikorların zülalın spesifik bölgələrinə yönəldilməsi mürəkkəbdir və tam başa düşülməmişdir. Hal-hazırda patogenin epitop strukturunu proqnozlaşdırmaq və antigen kimi zülaldan istifadə edərək, antikor reaksiyasını əvvəlcədən müəyyən edilmiş bölgələrə yönəltmək üçün effektiv metod yoxdur. Bununla belə, əvvəlcədən müəyyən edilmiş ardıcıllıqla spesifikliyi olan qısa peptidlərin zülalın peptid spesifik bölgəsini tanıyan anti-peptid antikorlarını artırmaq üçün istifadə edilə biləcəyinə dair sübutlar var [19], [20] və sintetik peptidlərə qarşı qaldırılan monoklonal antikorlar bütöv zülal molekulu ilə reaksiya verir [21]. Ədəbiyyatın böyük əksəriyyəti göstərir ki, zülalın bütün bölgələri sintetik peptid antikorları ilə reaksiya vermir və səthə məruz qalma [22], [23], hidrofillik və qalıq növü [17] kimi bir sıra struktur parametrlər bu meylə təsir göstərir. Buna görə də, yuxarıda göstərilən parametrlər onların anti-peptid antikorlarına əlçatanlığını proqnozlaşdırmaq üçün müəyyən edilmiş doqquz saytın hər birində qiymətləndirilmişdir.

A/Aichi/2/68 qrip virusunun (alt tip H3) HA-nın strukturu Wilson et al., 1981 [24] tərəfindən müəyyən edilmişdir [24] və sonradan variant virusların tədqiqi zülal üzərində antigenik yerlərin xəritələşdirilməsinə imkan vermişdir (nəzərdən keçirilmişdir). istinad 10). Bu yaxınlarda, üç əlavə alt tip üçün A qrip virusunun HA strukturları həll edildi: H1 [25], [26], H5 [27] və H9 [28]. Ardıcıllıq analizində istifadə olunan nömrələməyə riayət etmək üçün təhlilimiz üçün H3 strukturunu (PDB: 1HGJ) seçdik.

Doqquz müəyyən edilmiş bölgənin mövqeyi HA monomerinin 3-D strukturunda xəritələnmiş və lent modeli kimi Şəkil 2A-da göstərilmişdir. Hər bir müəyyən edilmiş bölgə 3-D strukturunun təfərrüatlarını təsvir etmək üçün genişləndirilmişdir (Şəkil 2B). Müəyyən edilmiş 1-9 sahələrin hamısı qırmızı rəngə boyanmışdır (Şəkil 2B) və onların ikinci dərəcəli struktur detalları, hidrofobiklik dəyəri və həlledicinin əlçatan səth sahəsi cədvəl şəklində verilmişdir (Cədvəl 3). 1-ci sahə HA1-in N-terminusunda yerləşirdi. Bu saytda HA2 ilə disulfid əlaqəsi yaradan konservləşdirilmiş sistein qalığı var [10]. Sahə HA monomerində böyük bir həlledicinin əlçatan səth sahəsinə malik bir döngə kimi mövcuddur. 2-ci sahə və 7-ci sahə, müvafiq olaraq E və C-yə məlum olan antikor bağlama yerlərinin bir hissəsini təşkil edən bir neçə qalığa malik idi [10]. 2-ci sahə əsasən α-spiralvari, 7-ci sahə isə əsasən β-strukturlu idi. Bu yerlərin hər ikisinin həlledici ilə əlçatan kiçik səth sahələri var və monomerdə əlçatmaz/basdırılmış ola bilər.

(A) Konservləşdirilmiş bölgələrin mövqeyi düz lent modeli kimi göstərilən HA monomerində təsvir edilmişdir. H3 alt növünün kristal quruluşu (PDB: 1HGJ) müəyyən edilmiş qorunan bölgələrin xəritəsini tərtib etmək üçün istifadə edilmişdir (qırmızı rənglə). (B) Şəkil 2A-da göstərilən qorunan bölgələr 3 ölçülü struktur detallarını təsvir etmək üçün böyüdülmüşdür.

3-cü sahə həm α-spiral bölgədən, həm də 1-ci sahəyə bənzər, həlledicinin əlçatan olduğu geniş səth sahəsinə malik bir döngədən ibarət idi. Bu bölgə yüksək hidrofilik idi və sintetik peptidlərə qarşı antikorların yaranmasında immundominant olduğu göstərilmişdir [29] ], [30]. Bununla belə, bu bölgə məhlulda bu bölgənin yalnız peptid antikorları üçün əlçatan olan bəzi uyğunlaşma əldə edə biləcəyini göstərən məlum antikor bağlama sahəsinin bir hissəsini təşkil etmir.

4 və 6-cı yerlər əsasən β-vərəq şəklində mövcud idi və monomerdə gizlənmiş kimi görünürdü. Sahə 8 və sahə 9 hər ikisi HA1-in C-terminusunda tapılmışdır və əsasən geniş həlledicinin əlçatan səth sahəsinə və yüksək hidrofilliyə malik ilmələr idi. Sayt 9 da bir çox HA alt tiplərinə qarşı neytrallaşdırıcı antikor reaksiyasını ortaya çıxardığı göstərilmişdir [31].

Bu iş reseptorun bağlanma yerini ayrıca müəyyən etməyib, lakin qorunmuş bağlanma sahəsinin bəzi qalıqları 3, 4 və 5-ci sahələr daxilində yerləşirdi. Bu xüsusi identifikasiyanın olmaması reseptorun bağlanma sahəsinin qonşu olmayan qalıqlardan ibarət olması ola bilər. zülalın 3-D strukturu və bir sıra qalıqlar qorunmur [18].

Doqquz müəyyən edilmiş sahə H3 alt tipində olduğu kimi H1, H2 və H5 alt tiplərində oxşar konformasiya strukturlarını qəbul edərsə, geniş çapraz reaktiv antikor reaksiyası daha çox ehtimal olunur. Bunu yoxlamaq üçün H1 strukturundan (PDB: 1RVZ) istifadə edərək müəyyən edilmiş saytların strukturunu qiymətləndirdik. H1, H2 və H5 alt tipləri arasında yüksək ardıcıllıq oxşarlığına görə biz tək H1 strukturunu seçdik. Ardıcıllıq oxşarlığına əlavə olaraq, doqquz sahə oxşar həlledicinin əlçatan səthi və ikincil quruluşu ilə yüksək dərəcədə strukturun qorunmasına malik idi (Cədvəl 3). İkinci dərəcəli strukturda bəzi kiçik fərqlər 3, 6 və 7 sahələrində müşahidə edildi. H1 strukturunda hidrofobikliyi artıran 9-cu sahə istisna olmaqla, ərazilərin hidrofobik/hidrofil təbiəti də dəyişməz qaldı. Anti-peptid reaksiyası yaratmaq potensialı yüksək olan saytları müəyyən etmək üçün saytlar həlledicinin əlçatan səthi və hidrofobikliyi əsasında sıralanıb. Hidrofilik sahələr seçilmiş və həlledicinin əlçatan səthinə görə birinci sıralanmış, sonra isə hidrofobik yerlər (Cədvəl 3).

Müəyyən edilmiş doqquz dəyişməz bölgədən beşi (1, 3, 5, 8, 9) alt növlər arasında strukturun yüksək səviyyədə qorunmasına, uyğun ikincil quruluşa və anti-peptid/anti-viral təsir göstərmək üçün əhəmiyyətli dərəcədə geniş həlledicinin əlçatan səthinə malik idi. cavab.


Peyvəndin İstehsalı və Effektiv İstifadəsi üçün Mövcud Problemlər

Həm heyvan, həm də insan qripi üçün peyvənd istehsalı üçün ən böyük çətinlik virusun yüksək dəyişkənliyi və sürətli təkamülüdür ki, bu da vaksin virusunun dövran edən suşlara uyğun gəlməsi üçün daimi təqiblə nəticələnir. Nəticədə, cari peyvənd proqramları insan peyvəndləri üçün qlobal miqyasda və heyvan peyvəndləri üçün regional/yerli miqyasda geniş nəzarətdən asılıdır. Baytarlıq sahəsində peyvəndlərin seçilməsi üçün standartlaşdırılmış proqramlar olmadığı üçün vaksin ştammları çox vaxt uyğun gəlmir və sahə ştammlarının yayılmasını dayandırmaq əvəzinə, təşviq edə bilən suboptimal qoruma təklif edir. Əlavə olaraq, adjuvanlaşdırılmış İIV ilə peyvənd edilmiş və sonra eyni alt tipli heteroloji virusla mübarizə aparan donuzlar, peyvəndlə əlaqəli gücləndirilmiş tənəffüs xəstəliyi adlandırılan neytrallaşdırıcı olmayan antikor reaksiyasının güclü stimullaşdırılması səbəbindən inkişaf etmiş tənəffüs patologiyası göstərə bilər (VAERD Gauger et al., 2011) . Bundan əlavə, suboptimal vaksin populyasiyalar üçün artan təhlükə yaradan mutantların qaçması ilə nəticələnə bilər.

Effektiv vaksin üçün digər maneə peyvəndin istehsalı üçün lazım olan vaxt qrafiki və təsdiq üçün qaydalardır. İnsan qripi ilə bağlı müşahidə məlumatlarının toplanması cədvəli cari mövsümün zirvəsini daxil etməyə və gələn mövsümdə hansı virusların daha çox yayılacağı ilə bağlı düzgün proqnozlaşdırma şansını artırmağa çalışır. Bununla belə, istehsalçılar mümkün gecikmələri nəzərə almaq üçün istehsala kifayət qədər vaxt ayırmalı olduqlarından, bu, həmişə belə olmur və bəzi hallarda dövriyyədə olan virusların mövsümün sonunda paylanması və antigen tərkibi seçilmiş peyvənd ştamından fərqlənir. uyğunsuzluğu ilə nəticələnə bilər. Ştamın seçilməsindən peyvəndin paylanmasına qədər yumurta tədarükü ilə bağlı maneələr və ya biotəhlükəsizlik və sabitlik tələblərinə cavab verən problemlər kimi mümkün uğursuzluqlar nəzərə alınmadan ən azı 6 ay davam edir. Heyvan peyvəndlərinə gəldikdə, ştamlar tez-tez yenilənmir və yenilənmiş və ya yeni məhsulların lisenziyalaşdırılması prosesi insan vaksinlərindən daha çox vaxt apara bilər. USDA Baytarlıq Biologiya Mərkəzi tərəfindən həyata keçirilən son dəyişikliklər indi istehsalçılara tamamilə yeni lisenziyalaşdırma prosesindən keçmədən mövcud lisenziyaya əsasən ştammları dəyişdirməyə və ya dəyişdirməyə imkan verir (Center for Veterinary Biologics, 2007) bu, irəliləmə yolunda irəliləyiş təqdim edir. peyvənd proqramları.

Müəyyən bir əhalinin immun statusunun xas dəyişməsi də peyvəndin təhlükəsizliyinə və effektivliyinə təsir edən əsas amildir. Məsələn, yaşlılar və ya immuniteti zəif olan insanlar kimi yüksək risk qrupları immun funksiyasının azalması səbəbindən peyvəndlərə optimal reaksiya verə bilməzlər (Kunisaki və Janoff, 2009 Lambert et al., 2012). Şəxsin əvvəlki toxunulmazlığı peyvənd reaksiyalarına böyük təsir göstərə bilər. Təbii infeksiya və ya peyvənd yolu ilə qriplə ilk immunoloji qarşılaşmanın bir insanın həyatında gələcək reaksiyalarını formalaşdıracağı yaxşı qəbul edilir. orijinal antigenik günah və daha yaxınlarda kimi antigenik çap. Nəticədə ortaya çıxan ikincil məruz qalmalar, yeni ştama qarşı immunoloji cavabın tam və ya qismən zərəri olaraq, ilkin məruz qalmaya antikor reaksiyasını artırır, bu proses və ya arxa gücləndirici (Fazekas de St and Webster, 1966 Ma et al., 2011 Fonville et al., 2014).

Donuz və quşçuluq istehsal sistemlərində, gənc heyvanlarda anadan əldə edilən antikorlar peyvənd yaşından asılı olaraq peyvənd üçün aktiv immun reaksiyalara müdaxilə edə bilər (Loeffen et al., 2003 De Vriese et al., 2010). Kənd təsərrüfatı heyvanlarında peyvənd proqramlarının həyata keçirilməsi üçün digər maneələr xərclər, peyvənddən sonra qadağan olunmuş geri çəkilmə müddəti, peyvəndi yoluxmuş heyvanlardan fərqləndirmək çətinliyi və ticarət məhdudiyyətləri ilə nəticələnə biləcək klinik əlamətlərin maskalanmasıdır (Spackman və Pantin-Jackwood, 2014). ).


Yekun nitq

Biz yalnız HA kökündən ibarət olan bir sıra həll olunan HA immunogenlərinin dizaynını və xarakteristikasını təsvir etdik. Bütün seçilmiş mini-HA-lar FL HA ilə müqayisə edilə bilən antikor səviyyələri yaratsa da, mini-HA konfiqurasiyasının struktur təkamülü ilə əldə edilmiş antikorların genişliyi və qoruyucu qabiliyyəti tədricən artmışdır. Son namizəd - stabilləşdirilmiş trimerik mini-HA # 4900 - siçanlarda və qeyri-insani primatlarda geniş və qoruyucu immun reaksiya yaratmaq üçün unikal qabiliyyətini nümayiş etdirdi. bildirildi (42, 43) respirator sinsitial virus F antigeninin stabilləşməsi immun cavabı və müdafiəni yaxşılaşdırır. Nəticələrimiz göstərir ki, eyni prinsip qrip HA üçün də keçərlidir və epitop əsaslı universal qrip peyvəndinin dizaynı üçün əlavə istiqamət verir.