Məlumat

Hüceyrədən çıxan zülal - marker kimi

Hüceyrədən çıxan zülal - marker kimi


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Məməlilərin hüceyrələri üçün hüceyrədənkənar marker kimi istifadə edə biləcəyim bir zülal axtarıram. mRNT-ni hüceyrəyə daxil etməliyəm və mRNT uğurla daxil olub tərcümə olunarsa, hüceyrənin xaricində (membranda deyil) zülalı aşkar etməliyəm. (GFP deyil, çox sayda hüceyrədən çıxan proteinə ehtiyacım var)

Çox sağ ol.


Siz həmişə GFP və ya sevdiyiniz zülal kimi sekretor vektorda ifadə edə bilərsiniz pSecTag və ya pSecTag2 Invitrogen/Life/ThermoFisher/SuperUltraBioMegaMart-dan. Yəqin ki, başqaları da var, amma ilk rastlaşdıqlarım bunlar oldu. Onlar effektiv ifraz üçün siçan Igκ siqnal ardıcıllığını ehtiva edir (buna görə vebsayt deyir ki, mən ondan heç vaxt istifadə etməmişəm).

Təcrübənizin təfərrüatlarını bilmirəm, amma ifraz olunmuş zülaldan transfeksiya markeri kimi istifadə etmək istədiyinizə əminsinizmi? Unutmayın, hüceyrə populyasiyanızın yalnız kiçik bir hissəsinin vektoru (və ya mRNT, əgər istifadə etdiyiniz budursa, lakin bununla bağlı problemlər var) qəbul etməsi mümkündür, lakin siz hüceyrələrin sayından asılı olmayaraq ifraz olunan zülalları görəcəksiniz. ki, götürür.


SEAP, ifraz olunmuş qələvi fosfataz və bu reportyor geninə birləşmələri ifadə etmək üçün hazırlanmış vektorlar probleminizi həll etmək üçün çox uyğun ola bilər.


Hüceyrədən çıxan zülal - marker kimi - Biologiya

Birlikdə sekretomu təşkil edən ifraz olunan zülallar hüceyrədən aktiv şəkildə daşınan zülallar kimi müəyyən edilə bilər. İnsanlarda endokrin hüceyrələr və B-limfositlər kimi hüceyrələr zülal ifrazı üzrə ixtisaslaşmışdır, lakin bütün hüceyrələr müəyyən dərəcədə zülal ifraz edir. Hüceyrədən ifraz olunan zülallar bir çox fizioloji, inkişaf və patoloji proseslərdə həlledici rol oynayır və həm hüceyrələrarası, həm də hüceyrədaxili əlaqə üçün vacibdir. Yeni terapevtik vasitələrin və dərman hədəflərinin zəngin mənbəyi olmaqla yanaşı, klinikada istifadə edilən qan diaqnostik testlərinin böyük bir hissəsi ifraz olunan zülallara yönəldilir və bu sinif zülalların tibb və biologiya üçün əhəmiyyətini vurğulayır. Tibb baxımından əhəmiyyətli ifraz olunan zülallara sitokinlər, laxtalanma faktorları, böyümə faktorları və digər siqnal molekulları daxildir. Çoxsaylı proqnozlaşdırma metodlarının nəticələrinə əsasən 1708 zülalın və ya insan proteomunun 9%-nin ifraz olunacağını proqnozlaşdırırıq.

Ən çox yayılmış sekresiya yolu ifrazat yoludur (Şəkil 1). Yeni sintez edilmiş zülallar endoplazmik retikulumdan (ER) daşınır, Golgi aparatından keçərək veziküllərə yığılır. Sonra veziküllər plazma membranına nəql olunur. Veziküllər və plazma membranı birləşir və bununla da zülalları hüceyrədənkənar boşluğa buraxır (ekzositoz). Zülalları ER-yə yönəldən siqnal ardıcıllığı siqnal peptidi (SP) adlanır və qısa, hidrofobik N-terminal ardıcıllığından ibarətdir (von Heijne G&period (1985)). Membran zülallarında SP də ola bilər, lakin əksər hallarda N-terminal transmembran (TM) bölgəsi siqnal ardıcıllığı kimi fəaliyyət göstərir. Siqnal ardıcıllıqları sintez edən ribosomları kobud ER-ə istiqamətləndirən şaperon zülalları tərəfindən tanınır, burada yeni sintez edilmiş peptidin ko-tərcümə translokasiyası translokon kimi istinad edilən zülal kompleksinin köməyi ilə baş verir (Johnson AE et al. (1999). )). Membran zülalları translokon vasitəsilə ER membranının lipid iki qatına köçürülür, sekretor zülallar isə SP-nin proteolitik parçalanmasından sonra ER lümeninə buraxılır. ER lümenində keyfiyyət nəzarətindən keçən zülallar veziküllər vasitəsilə Qolgi aparatına daşınır, burada onlar daha da dəyişdirilir və ən çox plazma membranı, lizosomlar və ya hüceyrədən ifraz olunan son təyinat yerinə daşınmaq üçün çeşidlənir.

Şəkil 1. İfraz yoluna baxış.

İfraz olunan zülalların funksiyaları müxtəlifdir, lakin hüceyrə siqnalı mühüm nümunədir. İfraz olunmuş siqnal molekulları vasitəsilə hüceyrələr arasında və ya daxilində siqnal, hədəfdən asılı olaraq parakrin, avtokrin, endokrin və ya neyroendokrin ola bilər. Ən əhəmiyyətli siqnal zülalları arasında sitokinlər, kinazlar, hormonlar və böyümə faktorları var (Farhan H et al. (2011)).

Klinik olaraq təsdiqlənmiş müalicə rejimlərinin böyük bir hissəsi bu gün ifraz olunan zülallara və ya hüceyrə səthi ilə əlaqəli membran zülallarına yönəlmiş (və ya onlardan ibarət) dərmanlardan istifadə edir. Hazırda bazarda təsdiqlənmiş dərmanlar üçün farmakoloji təsiri məlum olan 754 protein hədəfindən (Wishart DS et al. (2006)) 163-nün ifraz olunacağı proqnozlaşdırılır.

İfraz olunan zülallar çox vaxt hüceyrədənkənar matrisə buraxılmazdan əvvəl ifrazat yolunun orqanoidlərində (ER, Qolqi aparatı, veziküllər) zənginləşir. Bu, zülalın IF tərəfindən aşkarlanmasına imkan verir, baxmayaraq ki, onların son təyinat yeri hüceyrədən kənardadır. Şəkil 2-də üç proqnozlaşdırılan ifraz olunan zülalın IF şəkilləri göstərilir.

Şəkil 2. Neyronabənzər SH-SY5Y hüceyrə xəttində üç fərqli proqnozlaşdırılan ifraz olunan zülalların nümunələri göstərilmişdir: CHGB və SCG3 ifrazat veziküllərində, NPY isə Qolji aparatında zənginləşdirilmişdir.

Gizli zülallar çox vaxt hesablama proqnozlaşdırma modelləri üçün uyğun olan bir sıra xüsusiyyətlərə malik olan SP-lərinə əsasən müəyyən edilə bilər. SP tipik olaraq 15-30 amin turşusu uzunluğundadır və ilk növbədə hidrofobik h-regionu və C-terminalının qütb yüksüz c-bölgəsi ilə birləşmiş qısa hidrofobik və əsasən müsbət N-terminal alfa-sarmal (n-region) tərəfindən tanınır (Emanuelsson). O və başqaları (2007)). Zülallarda SP-lərin mövcudluğunu təxmin etmək üçün bu xüsusiyyətlərdən istifadə edən bir çox alqoritmlər var və həmçinin daha etibarlı nəticələr əldə etmək üçün SP proqnozlaşdırma modelini transmembran (TM) topologiya proqnozlaşdırma alqoritmlərinə daxil edən bir sıra üsullar mövcuddur. SP və TM seqmentini fərqləndirmək.

İnsanın "sekretomu" ən azı bir ifraz olunmuş zülalı kodlayan bütün genlər kimi müəyyən edilə bilər və burada SP proqnozu üçün üç üsuldan istifadə edərək tam proteom skan edilməsi ilə təhlil edilmişdir: SignalP4.0 (Petersen TN et al. (2011) Käll L. et al. (2004)), Phobius və SPOCTOPUS (Viklund H et al. (2008)), bunların hamısının müqayisəli təhlillərdə etibarlı proqnoz nəticələri verdiyi göstərilmişdir. Proqnozlaşdırılan ifraz olunan zülalların siyahısını əldə etmək üçün üç müxtəlif SP proqnozlaşdırma metodunun nəticələrindən istifadə etməklə çoxluq qərara əsaslanan metod (MDSEC) qurulmuşdur (Uhlén M et al. (2015)). Üç üsuldan ən azı ikisi ilə proqnozlaşdırılan SP-yə malik bütün zülallar ifraz olunmuş hesab olunur və siqnal peptid proqnozuna malik olmasına baxmayaraq, ER və ya Golgi kimi hüceyrədaxili yerlərdə yerləşəcəyi təxmin edilən genləri xaric etmək üçün əlavə olaraq şərh edilmişdir. təyin edin. Siqnal peptidləri həm ifraz olunan zülallarda, həm də müəyyən növ membran zülallarında tapıldığından, nəticələr membran zülal topologiyasının proqnozlaşdırılması üçün əksər qərara əsaslanan metoddan (MDM) istifadə edilməklə süzülüb (Fagerberg L et al. (2010)). MDM-ə uyğun olaraq proqnozlaşdırılan TM bölgəsi ilə birlikdə proqnozlaşdırılan SP-li bütün zülallar membrana yayılan hesab olunur və buna görə də ifraz olunmur. Üç metoda əsaslanan proqnozlaşdırılan ifraz olunan zülalı kodlayan genlərin nəticədə sayı, həmçinin çoxluğun qərarına əsaslanan metod və sekretomun annotasiyasının nəticəsi Cədvəl 1-də göstərilmişdir. Nəticə olaraq proqnozlaşdırılan ifraz olunan zülalların, eləcə də proqnozlaşdırılan membranın siyahıları zülallar insan proteomunun təsnifatı kimi istifadə edilmişdir.

Cədvəl 1. Siqnal peptidləri, eləcə də MDSEC üçün üç müxtəlif proqnozlaşdırma üsulu ilə insan sekretomunun proqnozlaşdırılması və əl annotasiyası nəticəsində əldə edilən yekun proqnoz.

Protein sinfi Genlərin sayı Zülalların sayı Mənbə
Proqnozlaşdırılan ifraz olunan zülallar 1708 4361 HPA
MDSEC tərəfindən proqnozlaşdırılan ifraz olunan zülallar 2943 6743 HPA
SignalP ifraz olunan zülalları proqnozlaşdırdı 2525 5816 SiqnalP
Phobius ifraz olunan zülalları proqnozlaşdırdı 3338 7613 Fobi
SPOCTOPUS ifraz olunan zülalları proqnozlaşdırdı 3710 8165 SPOKTOP

RNT ardıcıllığı məlumatlarına əsaslanan toxuma paylama kateqoriyalarının təhlili göstərir ki, ifraz olunan zülalları kodlayan genlərin daha böyük bir hissəsi Hüceyrə Atlasında təqdim olunan bütün genlərlə müqayisədə toxuma gücləndirilmiş, toxuma zənginləşdirilmiş və ya qrup zənginləşdirilmiş genlərə aiddir (Uhlén M et al. (2015)) (Şəkil 3). Sekretomdakı genlərin yalnız nisbətən kiçik bir hissəsi aşağı toxuma spesifikliyini göstərir. Bu, bir çox ifraz olunan zülallar üçün toxuma spesifik funksiyaları ilə uyğun gəlir. İfraz olunan sinif ən çox ifadə olunan genlərin çoxunu ehtiva edir və ifraz olunan zülalların ən yüksək ifadə səviyyələri mədəaltı vəzi və tüpürcək vəzində olur.

Şəkil 3. Hüceyrə Atlasındakı bütün genlərlə müqayisədə ifraz olunan zülal kodlaşdıran genlər üçün müxtəlif toxuma spesifiklik kateqoriyalarında genlərin faizini göstərən çubuq qrafiki. Ulduz işarəsi binomial statistik testə əsaslanan kateqoriyadakı genlərin sayında statistik əhəmiyyətli kənarlaşmanı (p≤0.05) qeyd edir. Hər bir bar tıklanabilir və seçilmiş kateqoriyaya aid olan zülalların axtarış nəticəsini verir.

Parikh K et al., Sağlamlıq və iltihablı bağırsaq xəstəliyində kolon epitelial hüceyrə müxtəlifliyi&dövrü Təbiət&dövr (2019)
Nəşriyyat: 30814735 DOI: 10.1038/s41586-019-0992-y

Menon M et al., İnsan tor qişasının tək hüceyrəli transkriptomik atlası yaşa bağlı makula degenerasiyası ilə əlaqəli hüceyrə növlərini müəyyən edir. Nat Commun&dövrü (2019)
Nəşriyyat: 31653841 DOI: 10.1038/s41467-019-12780-8

Wang L et al., Ürək çatışmazlığı və sağalma zamanı yetkin insan ürəyinin tək hüceyrəli rekonstruksiyası ürək funksiyasının altında yatan hüceyrə mənzərəsini ortaya qoyur. Nat Cell Biol&dövrü (2020)
Nəşriyyat: 31915373 DOI: 10.1038/s41556-019-0446-7

Wang Y və başqaları, Təkhüceyrəli transkriptom analizi insan bağırsağında diferensial qida maddələrinin sorulması funksiyalarını aşkar edir. J Exp Med&dövrü (2020)
PubMed: 31753849 DOI: 10.1084/jem.20191130

Liao J et al., İnsan böyrəyinin təkhüceyrəli RNT ardıcıllığı və dövrü Sci Data&dövr (2020)
Nəşriyyat: 31896769 DOI: 10.1038/s41597-019-0351-8

MacParland SA və başqaları, İnsan qaraciyərinin təkhüceyrəli RNT ardıcıllığı fərqli intrahepatik makrofaq populyasiyalarını aşkar edir. Nat Commun&dövrü (2018)
Nəşriyyat: 30348985 DOI: 10.1038/s41467-018-06318-7

Vieira Braga FA və başqaları, İnsan ağciyərlərinin hüceyrə siyahıyaalınması sağlamlıq və astma dövründə yeni hüceyrə vəziyyətini müəyyən edir. Nat Med&dövrü (2019)
Nəşriyyat: 31209336 DOI: 10.1038/s41591-019-0468-5

Vento-Tormo R və başqaları, İnsanlarda erkən ana-döl interfeysinin tək hüceyrəli yenidən qurulması Təbiət&dövr (2018)
Nəşriyyat: 30429548 DOI: 10.1038/s41586-018-0698-6

Qadir MMF və başqaları, İnsan mədəaltı vəzi kanalının progenitor hüceyrə yuvasının təkhüceyrəli ayırdetmə analizi. Proc Natl Acad Sci U S A&dövr (2020)
PubMed: 32354994 DOI: 10.1073/pnas.1918314117

Solé-Boldo L et al., İnsan dərisinin təkhüceyrəli transkriptomları yaşla əlaqədar fibroblast astarlama itkisini aşkar edir. Commun Biol&dövrü (2020)
Nəşriyyat: 32327715 DOI: 10.1038/s42003-020-0922-4

Henry GH və başqaları, Normal Yetkin İnsan Prostat və Prostatik Uretranın Hüceyrə Anatomiyası Hüceyrə Rep&dövrü (2018)
PubMed: 30566875 DOI: 10.1016/j.celrep.2018.11.086

Chen J et al., Xrom tək hüceyrəli RNT ardıcıllığı və dövr üçün PBMC fiksasiyası və işlənməsi J Transl Med&dövr (2018)
Nəşriyyat: 30016977 DOI: 10.1186/s12967-018-1578-4

Guo J et al., Yetkin insan testisinin transkripsiya hüceyrə atlası. Cell Res. (2018)
Nəşriyyat: 30315278 DOI: 10.1038/s41422-018-0099-2

Uhlen M et al., Antikorların təsdiqlənməsi üçün təklif. Nat Metodları. (2016)
PubMed: 27595404 DOI: 10.1038/nmeth.3995

Stadler C və başqaları, SiRNA və konfokal mikroskopiyadan istifadə edərək antikorların bağlanmasının və zülalın hüceyrəaltı lokalizasiyasının sistematik təsdiqi. J Proteomika. (2012)
Nəşriyyat: 22361696 DOI: 10.1016/j.jprot.2012.01.030

Poser I və başqaları, BAC TransgeneOmics&colon məməlilərdə zülal funksiyasının tədqiqi üçün yüksək məhsuldarlıq metodudur. Nat Methods & period (2008)
Nəşriyyat: 18391959 DOI: 10.1038/nmeth.1199

Skogs M et al., Tagged zülalların endogen ifadəsinə əsaslanan bioimaging tətbiqlərində antikorların yoxlanılması. J Proteome Res. (2017)
PubMed: 27723985 DOI: 10.1021/acs.jproteome.6b00821

Takahashi H et al., Cap-analiz gen ifadəsi və növbəti nəsil ardıcıllığından istifadə edərək 5' son mərkəzli ifadə profili&dövr Nat Protoc&dövr (2012)
PubMed: 22362160 DOI: 10.1038/nprot.2012.005

Lein ES və başqaları, Yetkin siçan beynində gen ifadəsinin genom geniş atlası&dövrü Təbiət&dövr (2007)
PubMed: 17151600 DOI: 10.1038/nature05453

Kircher M et al., İkiqat indeksləşdirmə Illumina platformasında multipleks ardıcıllıqdakı qeyri-dəqiqlikləri aradan qaldırır. Nuklein Turşularının Tətbiqi (2012)
PubMed: 22021376 DOI: 10.1093/nar/gkr771

Pollard TD və başqaları, Aktin&vergül hüceyrə şəklində və hərəkətdə mərkəzi oyunçudur Elm&dövr (2009)
Nəşriyyat: 19965462 DOI: 10.1126/science.1175862

Mitchison TJ və başqaları, Aktin əsaslı hüceyrə hərəkətliliyi və hüceyrə hərəkəti&dövrü Hüceyrə&dövr (1996)
Nəşriyyat: 8608590

Pollard TD və başqaları, Sitokinezin Molekulyar Mexanizmi Annu Rev Biochem&dövrü (2019)
Nəşriyyat: 30649923 DOI: 10.1146/annurev-biochem-062917-012530

dos Remedios CG və başqaları, Aktin bağlayan zülallar və sitoskeletal mikrofilamentlərin kolon tənzimlənməsi və dövr Physiol Rev&dövrü (2003)
Nəşriyyat: 12663865 DOI: 10.1152/physrev.00026.2002

Campellone KG və başqaları, Nüvə silahlanma yarışı və aktin birləşməsinin kolon hüceyrə nəzarəti və dövrü Nat Rev Mol Cell Biol&dövrü (2010)
Nəşriyyat: 20237478 DOI: 10.1038/nrm2867

Rottner K və başqaları, Bir baxışda aktin yığma mexanizmləri J Cell Sci&dövr (2017)
Nəşriyyat: 29032357 DOI: 10.1242/jcs.206433

Quş RP & dövr, Kolon kanserogeni ilə müalicə olunan siçan kolonunda aberrant kriptlərin müşahidəsi və kəmiyyətinin müəyyən edilməsi və kolon ilkin tapıntılar. Xərçəng Lett&dövr (1987)
Nəşriyyat: 3677050 DOI: 10.1016/0304-3835(87)90157-1

HUXLEY AF və başqaları, Canlı əzələ liflərinin daralması və yarı müdaxilə mikroskopiyası zamanı əzələdə struktur dəyişiklikləri. Təbiət&dövr (1954)
Nəşriyyat: 13165697

HUXLEY H və başqaları, Büzülmə və uzanma zamanı əzələlərin çarpaz zolaqlarında dəyişikliklər və onların struktur şərhi. Təbiət&dövr (1954)
Nəşriyyat: 13165698

Svitkina T&dövrü, Aktin Sitoskeleti və Aktin Əsaslı Hərəkətlilik Cold Spring Harb Perspect Biol&dövrü (2018)
PubMed: 29295889 DOI: 10.1101/cshperspect.a018267

Kelpsch DJ və başqaları, Nüvə Aktin və Kolon Kəşfdən Funksiyaya və Dövr Anat Rec &lparHoboken&rpar&dövrü (2018)
Nəşriyyat: 30312531 DOI: 10.1002/ar.23959

Malumbres M et al., Hüceyrə dövrü və vergül CDK'ları və xərçəng və kolon dəyişən paradiqma və dövr Nat Rev Xərçəng&dövrü (2009)
Nəşriyyat: 19238148 DOI: 10.1038/nrc2602

Massagué J&dövr, G1 hüceyrə dövrünə nəzarət və xərçəng Təbiət&dövr (2004)
Nəşriyyat: 15549091 DOI: 10.1038/nature03094

Hartwell LH və başqaları, Hüceyrə dövrünə nəzarət və xərçəng&dövr Elm&dövr (1994)
PubMed: 7997877 DOI: 10.1126/science.7997877

Barnum KJ və başqaları, Nəzarət məntəqələri ilə hüceyrə dövrünün tənzimlənməsi Metodlar Mol Biol&dövrü (2014)
Nəşriyyat: 24906307 DOI: 10.1007/978-1-4939-0888-2_2

Weinberg RA&dövrü, Retinoblastoma zülalı və hüceyrə dövrünə nəzarət və dövr Hüceyrə&dövr (1995)
Nəşriyyat: 7736585 DOI: 10.1016/0092-8674(95)90385-2

Morgan DO&dövr, CDK-nın tənzimlənməsinin prinsipləri&dövrü Təbiət&dövr (1995)
Nəşriyyat: 7877684 DOI: 10.1038/374131a0

Teixeira LK və başqaları, Ubiquitin ligases və hüceyrə dövrünə nəzarət və dövr Annu Rev Biochem&dövrü (2013)
PubMed: 23495935 DOI: 10.1146/annurev-biochem-060410-105307

King RW və başqaları, Proteoliz hüceyrə dövrünü və dövrünü necə idarə edir Elm&dövr (1996)
PubMed: 8939846 DOI: 10.1126/science.274.5293.1652

Cho RJ və başqaları, İnsan hüceyrə dövrü ərzində transkripsiya tənzimlənməsi və funksiyası Nat Genet&dövr (2001)
Nəşriyyat: 11137997 DOI: 10.1038/83751

Whitfield ML et al., İnsan hüceyrə siklində dövri olaraq ifadə edilən genlərin və onların şişlərdə ifadəsinin müəyyən edilməsi. Mol Biol Hüceyrə və dövr (2002)
PubMed: 12058064 DOI: 10.1091/mbc.02-02-0030.

Boström J et al., Müqayisəli hüceyrə dövrü transkriptomikası xərçəng hüceyrələrində inkişaf transkripsiya faktoru şəbəkələrinin sinxronizasiyasını ortaya qoyur. PLoS One. (2017)
PubMed: 29228002 DOI: 10.1371/journal.pone.0188772

Lane KR və başqaları, Sinxron proliferasiya edən HeLa hüceyrələrində hüceyrə dövrü ilə tənzimlənən zülal bolluğundakı dəyişikliklərə mRNT-dən əvvəl birləşən zülalların tənzimlənməsi daxildir. PLoS One&dövr (2013)
PubMed: 23520512 DOI: 10.1371/journal.pone.0058456

Ohta S və başqaları, Mitotik xromosomların zülal tərkibi multiklassifikator kombinatorial proteomikadan istifadə etməklə müəyyən edilir. Hüceyrə&dövr (2010)
Nəşriyyat: 20813266 DOI: 10.1016/j.cell.2010.07.047

Ly T və başqaları, İnsan miyeloid lösemi hüceyrələrində hüceyrə dövrü vasitəsilə gen ifadəsinin proteomik xronologiyası. Elife&dövr (2014)
PubMed: 24596151 DOI: 10.7554/eLife.01630

Pagliuca FW və başqaları, Kəmiyyət proteomikası hüceyrə dövrü mexanizminin biokimyəvi spesifikliyinin əsasını ortaya qoyur. Mol Hüceyrəsi&dövrü (2011)
Nəşriyyat: 21816347 DOI: 10.1016/j.molcel.2011.05.031

Ly T və başqaları, İnsan miyeloid lösemi hüceyrələrində hüceyrə dövrü həbslərinə cavabın proteomik təhlili. Elife&dövr (2015)
PubMed: 25555159 DOI: 10.7554/eLife.04534

Dueck H et al., Dəyişiklik funksiyadır&kolondur Tək hüceyrə fərqləri funksional cəhətdən vacibdirmi&qust&colon Ümumi funksiya üçün tək hüceyrə dəyişikliyinin tələb olunduğu fərziyyəsinin yoxlanması&dövr Bioesselər&dövr (2016)
PubMed: 26625861 DOI: 10.1002/bies.201500124

Snijder B və başqaları, Hüceyrədən hüceyrəyə tənzimlənən dəyişkənliyin mənşəyi&dövrü Nat Rev Mol Cell Biol&dövrü (2011)
Nəşriyyat: 21224886 DOI: 10.1038/nrm3044

Thul PJ və başqaları, İnsan proteomunun hüceyrəaltı xəritəsi. Elm. (2017)
PubMed: 28495876 DOI: 10.1126/science.aal3321

Cooper S və başqaları, Siklinlərin A&vergül B1&vergül və E məzmununun membran-elüsyon analizi, məməlilərin pozulmamış hüceyrə dövrü&dövrü zamanı. Hüceyrə bölgüsü&dövr (2007)
Nəşriyyat: 17892542 DOI: 10.1186/1747-1028-2-28

Davis PK və başqaları, Məməli hüceyrələrinin hüceyrə dövrü sinxronizasiyasının bioloji üsulları Biotexnika və dövr (2001)
Nəşriyyat: 11414226 DOI: 10.2144/01306rv01

Domenighetti G və başqaları, Kütləvi informasiya vasitələri tərəfindən aparılan məlumat kampaniyasının histerektomiya nisbətlərinə təsiri&dövrü Lancet&dövr (1988)
PubMed: 2904581 DOI: 10.1016/s0140-6736(88)90943-9

Scialdone A və başqaları, Tək hüceyrəli transkriptom məlumatlarından hüceyrə dövrü mərhələsinin hesablama təyini Metodlar və dövr (2015)
Nəşriyyat: 26142758 DOI: 10.1016/j.ymeth.2015.06.021

Sakaue-Sawano A və başqaları, Çoxhüceyrəli hüceyrə dövrünün gedişatının və dövrünün məkan-zaman dinamikasının vizuallaşdırılması Hüceyrə&dövr (2008)
Nəşriyyat: 18267078 DOI: 10.1016/j.cell.2007.12.033

Grant GD və başqaları, U2OS hüceyrələrində dövri olaraq ifadə edilən hüceyrə dövrü ilə tənzimlənən genlərin müəyyən edilməsi və onların FOXM1 və E2F transkripsiya faktorları ilə tənzimlənməsi. Mol Biol Hüceyrə və dövr (2013)
Nəşriyyat: 24109597 DOI: 10.1091/mbc.E13-05-0264

Semple JW və başqaları, Pre-replikativ komplekslərin saxlanması yolu ilə DNT replikasiyasında Orc6-nın mühüm rolu. EMBO J&dövr (2006)
Nəşriyyat: 17053779 DOI: 10.1038/sj.emboj.7601391

Kilfoil ML et al., Stokastik dəyişkənlik və tək hüceyrələrdən superorqanizmlərə qədər kolon HFSP J&dövrü (2009)
Nəşriyyat: 20514130 DOI: 10.2976/1.3223356

Ansel J et al., Gen ifadəsində hüceyrədən hüceyrəyə stoxastik variasiya mürəkkəb bir genetik əlamətdir. PLoS Genet&dövrü (2008)
PubMed: 18404214 DOI: 10.1371/journal.pgen.1000049

Colman-Lerner A və başqaları, Hüceyrə taleyi qərar sistemində tənzimlənən hüceyrədən hüceyrəyə dəyişmə Təbiət&dövr (2005)
PubMed: 16170311 DOI: 10.1038/nature03998

Liberali P et al., Genetik pozğunluq ekranlarında tək hüceyrəli və çoxvariantlı yanaşmalar Nat Rev Genet&dövr (2015)
Nəşriyyat: 25446316 DOI: 10.1038/nrg3768

Elowitz MB et al., Tək hüceyrədə stoxastik gen ifadəsi&dövr Elm&dövr (2002)
PubMed: 12183631 DOI: 10.1126/science.1070919

Kaern M et al., Gen ifadəsində və kolonda stoxastiklik nəzəriyyələrdən fenotiplərə və dövrə Nat Rev Genet&dövr (2005)
Nəşriyyat: 15883588 DOI: 10.1038/nrg1615

Bianconi E et al., İnsan bədənindəki hüceyrələrin sayının təxmini və dövrü Ann Hum Biol&dövr (2013)
Nəşriyyat: 23829164 DOI: 10.3109/03014460.2013.807878

Malumbres M&dövrü, Siklin asılı kinazlar və dövr Genom Biol&dövrü (2014)
Nəşriyyat: 25180339

Collins K et al., Hüceyrə dövrü və xərçəng&dövr Proc Natl Acad Sci U S A&dövr (1997)
Nəşriyyat: 9096291

Jivotovsky B et al., Xəstəlikdə hüceyrə dövrü və hüceyrə ölümü&kolon keçmiş&vergül indi və gələcək&dövr J Intern Med&dövrü (2010)
Nəşriyyat: 20964732 DOI: 10.1111/j.1365-2796.2010.02282.x

Cho RJ və başqaları, Mitotik hüceyrə dövrü və dövrünün genom miqyasında transkripsiya analizi Mol Hüceyrəsi&dövrü (1998)
Nəşriyyat: 9702192

Spellman PT et al., Saccharomyces cerevisiae mayasının hüceyrə dövrü ilə tənzimlənən genlərinin mikroarray hibridizasiyası və dövrü ilə hərtərəfli identifikasiyası Mol Biol Hüceyrə və dövr (1998)
Nəşriyyat: 9843569

Orlando DA və başqaları, Birləşdirilmiş CDK və şəbəkə osilatorları ilə hüceyrə dövrü transkripsiyasına qlobal nəzarət Təbiət&dövr (2008)
Nəşriyyat: 18463633 DOI: 10.1038/nature06955

Rustici G et al., Parçalanma maya hüceyrəsi dövrünün dövri gen ifadə proqramı Nat Genet&dövr (2004)
Nəşriyyat: 15195092 DOI: 10.1038/ng1377

Uhlén M et al., İnsan proteomunun toxuma əsaslı xəritəsi. Elm (2015)
PubMed: 25613900 DOI: 10.1126/science.1260419

Nigg EA və başqaları, Sentrosom dövrü və kolon Centriole biogenesis & vergül çoxalması və xas asimmetriyalar&dövr Nat Cell Biol&dövrü (2011)
Nəşriyyat: 21968988 DOI: 10.1038/ncb2345

Doxsey S&dövr, Sentrosom funksiyasının yenidən qiymətləndirilməsi və dövr Nat Rev Mol Cell Biol&dövrü (2001)
Nəşriyyat: 11533726 DOI: 10.1038/35089575

Bornens M&dövrü, Sentrosom tərkibi və mikrotubula bağlanma mexanizmləri Curr Opin Cell Biol&dövrü (2002)
Nəşriyyat: 11792541

Conduit PT et al., Heyvan hüceyrələrində sentrozom funksiyası və yığılması Nat Rev Mol Cell Biol&dövrü (2015)
Nəşriyyat: 26373263 DOI: 10.1038/nrm4062

Tollenaere MA və başqaları, Centriolar peyklər və sentrozom funksiyalarının əsas vasitəçiləri və dövr Cell Mol Life Sci & period (2015)
Nəşriyyat: 25173771 DOI: 10.1007/s00018-014-1711-3

Prosser SL və başqaları, Onurğalılar hüceyrələrində sentriolyar peyk biogenezi və funksiyası J Cell Sci&dövr (2020)
Nəşriyyat: 31896603 DOI: 10.1242/jcs.239566

Rieder CL və başqaları, Onurğalılarda və kolonda sentrozom mikrotubula təşkil edən mərkəzdən daha çoxdur. Trends Cell Biol&dövr (2001)
Nəşriyyat: 11567874

Badano JL və başqaları, İnsan genetik xəstəliyində sentrozom&dövr Nat Rev Genet&dövr (2005)
Nəşriyyat: 15738963 DOI: 10.1038/nrg1557

Clegg JS&dövr, Sulu sitoplazmanın xüsusiyyətləri və maddələr mübadiləsi və onun sərhədləri Am J Physiol&dövr (1984)
Nəşriyyat: 6364846

Luby-Felps K&dövrü, Sitoplazmanın fiziki kimyası və onun hüceyrə funksiyasına təsiri və kolon yenilənməsi Mol Biol Hüceyrə və dövr (2013)
Nəşriyyat: 23989722 DOI: 10.1091/mbc.E12-08-0617

Luby-Felps K&dövrü, Sitoplazmanın və kolon həcminin sitoarxitekturası və fiziki xassələri & vergül özlülüyü & vergül diffuziya & vergül hüceyrədaxili səth sahəsi və dövr. Int Rev Cytol&dövrü (2000)
Nəşriyyat: 10553280

Ellis RJ&dövr, Makromolekulyar sıxlıq&kolon açıq-aşkar, lakin qiymətləndirilməmiş&dövr Trendlər Biochem Sci&dövr (2001)
Nəşriyyat: 11590012

Bright GR et al., Floresans nisbəti görüntüləmə mikroskopiyası və sitoplazmik pH və dövrünün kolon temporal və məkan ölçüləri J Hüceyrə Biol&dövrü (1987)
Nəşriyyat: 3558476

Kopito RR&dövrü, Aqresomlar və vergül daxiletmə orqanları və zülalların yığılması&dövrü Trends Cell Biol&dövr (2000)
Nəşriyyat: 11121744

Aizer A və başqaları, Hüceyrədaxili alver və P orqanlarının dinamikası Prion&dövr (2008)
Nəşriyyat: 19242093

Carcamo WC və başqaları, Molekulyar hüceyrə biologiyası və məməli çubuq və solinq strukturlarının immunobiologiyası. Int Rev Cell Mol Biol&dövrü (2014)
Nəşriyyat: 24411169 DOI: 10.1016/B978-0-12-800097-7.00002-6

Lang F&dövr, Hüceyrə həcminin tənzimlənməsinin mexanizmləri və əhəmiyyəti&dövrü J Am Coll Nutr&dövrü (2007)
Nəşriyyat: 17921474

Schwarz DS və başqaları, Endoplazmik retikulum və kolon quruluşu və vergül funksiyası və hüceyrə siqnalına cavab. Cell Mol Life Sci & period (2016)
Nəşriyyat: 26433683 DOI: 10.1007/s00018-015-2052-6

Friedman JR və başqaları, 3D-də ER çoxfunksiyalı dinamik membran şəbəkəsidir Trends Cell Biol&dövr (2011)
Nəşriyyat: 21900009 DOI: 10.1016/j.tcb.2011.07.004

Travers KJ və başqaları, Funksional və genomik analizlər, açılmamış protein reaksiyası ilə ER ilə əlaqəli deqradasiya arasında əsas koordinasiyanı aşkar edir. Hüceyrə&dövr (2000)
Nəşriyyat: 10847680

Roussel BD və başqaları, Nevroloji xəstəliklərdə endoplazmik retikulum disfunksiyası Lancet Neurol&dövr (2013)
Nəşriyyat: 23237905 DOI: 10.1016/S1474-4422(12)70238-7

Neve EP et al., Sitokrom P450 zülalları və yoğun bağırsağın tutulması və endoplazmik retikulumdan paylanması. Curr Opin Drug Discov Devel & period (2010)
Nəşriyyat: 20047148

Kulkarni-Qosavi P et al., Golgi aparatının və kolon iskelesinin forması və funksiyası, vergül sitoskeleti və siqnalizasiya. FEBS Lett&dövr (2019)
Nəşriyyat: 31378930 DOI: 10.1002/1873-3468.13567

Qısa B və başqaları, Golgi aparatı&dövrü Curr Biol&dövrü (2000)
Nəşriyyat: 10985372 DOI: 10.1016/s0960-9822(00)00644-8

Wei JH və başqaları, Golgi lentinin açılması&dövr Trafik&dövr (2010)
Nəşriyyat: 21040294 DOI: 10.1111/j.1600-0854.2010.01114.x

Wilson C və başqaları, Golgi aparatı və çox mürəkkəb funksiyaları olan bir orqanoidi bağlayır Biochem J&dövrü (2011)
Nəşriyyat: 21158737 DOI: 10.1042/BJ20101058

Farquhar MG və başqaları, Golgi aparatı & kolon 100 illik tərəqqi və mübahisə&dövr Trends Cell Biol&dövr (1998)
Nəşriyyat: 9695800

Brandizzi F et al., Membran trafikinə nəzarət və dövr üçün ER-Golgi interfeysinin təşkili Nat Rev Mol Cell Biol&dövrü (2013)
Nəşriyyat: 23698585 DOI: 10.1038/nrm3588

Potelle S və başqaları, Golgi post-translational modifikasiyalar və əlaqəli xəstəliklər və dövr J Metab Dis&dövrü miras alın (2015)
Nəşriyyat: 25967285 DOI: 10.1007/s10545-015-9851-7

Leduc C və başqaları, Hüceyrə miqrasiyası və işğalında ara filamentlər və qeyri-adi şübhəliləri kolonlaşdırırlar. Curr Opin Cell Biol&dövrü (2015)
Nəşriyyat: 25660489 DOI: 10.1016/j.ceb.2015.01.005

Lowery J et al., Aralıq Filamentlər Hüceyrə Arxitekturasının və Funksiyasının Tənzimlənməsində Əsas Rol Oynayir. J Biol Chem&dövrü (2015)
Nəşriyyat: 25957409 DOI: 10.1074/jbc.R115.640359

Robert A və başqaları, Aralıq filament dinamikası və kolon İndi görə biləcəyimiz şey və bunun nə üçün vacib olduğu&dövr Bioesselər&dövr (2016)
PubMed: 26763143 DOI: 10.1002/bies.201500142

Fuchs E və başqaları, Aralıq filamentlər və kolon quruluşu & vergül dinamikası & vergül funksiyası & vergül və xəstəlik & dövr Annu Rev Biochem&dövrü (1994)
Nəşriyyat: 7979242 DOI: 10.1146/annurev.bi.63.070194.002021

Janmey PA və başqaları, Digər filamentli biopolimer şəbəkələri ilə müqayisədə vimentinin özlü-elastik xüsusiyyətləri J Hüceyrə Biol&dövrü (1991)
Nəşriyyat: 2007620

Köster S və başqaları, Aralıq filament mexanikası in vitro və hüceyrə və kolonda qıvrılmış rulonlardan filamentlərə və vergül liflərinə və şəbəkələrə. Curr Opin Cell Biol&dövrü (2015)
Nəşriyyat: 25621895 DOI: 10.1016/j.ceb.2015.01.001

Herrmann H və başqaları, Hüceyrə arxitekturasından nanomexanikaya və dövrə qədər ara filamentlər və kolon Nat Rev Mol Cell Biol&dövrü (2007)
Nəşriyyat: 17551517 DOI: 10.1038/nrm2197

Gauster M et al., İnsan trofoblastında keratinlər&dövr Histol Histopatol&dövrü (2013)
PubMed: 23450430 DOI: 10.14670/HH-28.817

Janke C&dövr, Tubulin kodu və kolon molekulyar komponentləri və vergül oxuma mexanizmləri, vergül və funksiyalar. J Hüceyrə Biol&dövrü (2014)
Nəşriyyat: 25135932 DOI: 10.1083/jcb.201406055

Goodson HV və başqaları, Mikrotubullar və Mikrotubulla əlaqəli zülallar və dövr Cold Spring Harb Perspect Biol&dövrü (2018)
PubMed: 29858272 DOI: 10.1101/cshperspect.a022608

Wade RH&dövrü, Mikrotubullarda və ətrafında və kolonda ümumi baxış və dövr Mol Biotexnol&dövrü (2009)
Nəşriyyat: 19565362 DOI: 10.1007/s12033-009-9193-5

Desai A və başqaları, Mikroborucuqların polimerləşmə dinamikası və müddəti Annu Rev Cell Dev Biol&dövrü (1997)
Nəşriyyat: 9442869 DOI: 10.1146/annurev.cellbio.13.1.83

Conde C və başqaları, Akson və dendritlərdə mikrotubulların yığılması və vergül təşkili və dinamikası Nat Rev Neurosci&dövr (2009)
Nəşriyyat: 19377501 DOI: 10.1038/nrn2631

Wloga D et al., Mikrotubulların translasiyadan sonrakı modifikasiyaları J Cell Sci&dövr (2010)
PubMed: 20930140 DOI: 10.1242/jcs.063727

Schmoranzer J et al., Post-Golgi veziküllərinin plazma membranına birləşməsində mikrotubulların rolu. Mol Biol Hüceyrə və dövr (2003)
Nəşriyyat: 12686609 DOI: 10.1091/mbc.E02-08-0500

Skop AR və başqaları, Məməlilərin orta gövdəsi proteomunun parçalanması konservləşdirilmiş sitokinez mexanizmlərini ortaya qoyur. Elm&dövr (2004)
Nəşriyyat: 15166316 DOI: 10.1126/science.1097931

Waters AM et al., Siliopatiyalar və genişlənən xəstəlik spektri və dövrü Pediatr Nephrol&dövr (2011)
Nəşriyyat: 21210154 DOI: 10.1007/s00467-010-1731-7

Matamoros AJ və başqaları, Sağlamlıq və sinir sisteminin degenerativ xəstəliklərində mikrotubullar Brain Res Bull&dövr (2016)
PubMed: 27365230 DOI: 10.1016/j.brainresbull.2016.06.016

Jordan MA et al., Xərçəng əleyhinə dərmanlar üçün hədəf kimi mikrotubullar Nat Rev Xərçəng&dövrü (2004)
PubMed: 15057285 DOI: 10.1038/nrc1317

Nunnari J et al., Xəstəlikdə və sağlamlıqda mitoxondriya və kolon Hüceyrə&dövr (2012)
Nəşriyyat: 22424226 DOI: 10.1016/j.cell.2012.02.035

Friedman JR və başqaları, Mitoxondrial forma və funksiya və dövr Təbiət&dövr (2014)
Nəşriyyat: 24429632 DOI: 10.1038/nature12985

Calvo SE və başqaları, Mitoxondrial proteom və insan xəstəliyi&dövrü Annu Rev Genomics Hum Genet&dövrü (2010)
PubMed: 20690818 DOI: 10.1146/annurev-genom-082509-141720

McBride HM və başqaları, Mitoxondriya və kolon sadəcə bir güc mərkəzi və dövr deyil Curr Biol&dövr (2006)
Nəşriyyat: 16860735 DOI: 10.1016/j.cub.2006.06.054

Schaefer AM və başqaları, Mitoxondrial pozğunluqların epidemiologiyası - keçmiş və vergül indiki və gələcək dövr Biochim Biophys Acta&dövrü (2004)
Nəşriyyat: 15576042 DOI: 10.1016/j.bbabio.2004.09.005

Lange A və başqaları, Klassik nüvə lokalizasiyası siqnalları və iki nöqtənin tərifi və vergül funksiyası və vergül və importin alfa və dövrlə qarşılıqlı əlaqəsi J Biol Chem&dövrü (2007)
Nəşriyyat: 17170104 DOI: 10.1074/jbc.R600026200

Ashmarina LI və başqaları, 3-Hidroksi-3-metilqlutaril koenzim A liaz və kolon hədəflənməsi və peroksisomlarda və mitoxondriyalarda işlənməsi. J Lipid Resmi (1999)
Nəşriyyat: 9869651

Wang SC et al., Epidermal böyümə faktoru reseptor ailəsinin membran tirozin kinaz reseptorlarının nüvə translokasiyası. Clin Cancer Res&dövrü (2009)
Nəşriyyat: 19861462 DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-08-2813

Jeffery CJ&dövr, Ay işığı zülalları&dövrü Trendlər Biochem Sci&dövr (1999)
Nəşriyyat: 10087914

Jeffery CJ&dövr, Niyə ay işığı zülallarını və axtarışını öyrənin Ön Genet&dövr (2015)
PubMed: 26150826 DOI: 10.3389/fgene.2015.00211

Pancholi V&dövr, Çoxfunksiyalı alfa-enolaza və kolon xəstəliklərdə rolu Cell Mol Life Sci & period (2001)
Nəşriyyat: 11497239 DOI: 10.1007/pl00000910

Chapple CE və başqaları, İnsan zülalının qarşılıqlı əlaqə şəbəkəsindən müəyyən edilmiş həddindən artıq çoxfunksiyalı zülallar Nat Commun&dövrü (2015)
PubMed: 26054620 DOI: 10.1038/ncomms8412

Dechat T və başqaları, Nüvə və xromatinin struktur təşkili və funksiyasında nüvə laminləri və kolon əsas amilləri. Genes Dev&dövrü (2008)
Nəşriyyat: 18381888 DOI: 10.1101/gad.1652708

Gruenbaum Y et al., Nüvə lamina yaş və dövr gəlir Nat Rev Mol Cell Biol&dövrü (2005)
Nəşriyyat: 15688064 DOI: 10.1038/nrm1550

Stuurman N et al., Nüvə laminləri və onların quruluşu və vergül yığılması və vergül və qarşılıqlı əlaqə və dövr J Struct Biol&dövrü (1998)
Nəşriyyat: 9724605 DOI: 10.1006/jsbi.1998.3987

Paine PL et al., Nüvə zərfinin keçiriciliyi və müddəti Təbiət&dövr (1975)
Nəşriyyat: 1117994

Reichelt R və başqaları, Nüvə məsamə kompleksinin və fərqli məsamə kompleks komponentlərinin quruluşu və kütlə paylanması arasında korrelyasiya. J Hüceyrə Biol&dövrü (1990)
Nəşriyyat: 2324201

CALLAN HG və başqaları, Amfibiya oosit nüvələri üzrə eksperimental tədqiqatlar&dövr I&dövr Elektron mikroskop vasitəsilə nüvə membranının strukturunun tədqiqi&dövr. Proc R Soc Lond B Biol Sci&dövr (1950)
Nəşriyyat: 14786306

WATSON ML&dövr, Nüvə zərfi və onun quruluşu və sitoplazmatik membranlarla əlaqəsi J Biophys Biochem Cytol&dövrü (1955)
Nəşriyyat: 13242591

BAHR GF və başqaları, Xironomun larva tüpürcək vəzində və orta bağırsağında nüvə membranının incə quruluşu. Exp Cell Res&dövr (1954)
Nəşriyyat: 13173504

Terasaki M et al., Nüvə zərfinin parçalanması üçün yeni model&dövr Mol Biol Hüceyrə və dövr (2001)
Nəşriyyat: 11179431

Dultz E et al., Canlı hüceyrələrdə nüvə məsamələrinin mitotik parçalanmasının və yenidən yığılmasının sistemli kinetik analizi. J Hüceyrə Biol&dövrü (2008)
Nəşriyyat: 18316408 DOI: 10.1083/jcb.200707026

Salina D və başqaları, Nüvə zərfinin parçalanmasının asanlaşdırıcısı kimi sitoplazmik dinein. Hüceyrə&dövr (2002)
Nəşriyyat: 11792324

Beauduin J et al., Nüvə zərfinin parçalanması mikrotubula səbəb olan təbəqənin yırtılması ilə baş verir. Hüceyrə&dövr (2002)
Nəşriyyat: 11792323

Gerace L və başqaları, Nüvə zərfinin təbəqəsi mitoz və dövr ərzində tərs depolimerləşir Hüceyrə&dövr (1980)
Nəşriyyat: 7357605

Ellenberg J et al., Nüvə membranının dinamikası və canlı hüceyrələrdə yenidən yığılması və interfazada və mitozda daxili nüvə membran zülalının hədəflənməsi. J Hüceyrə Biol&dövrü (1997)
Nəşriyyat: 9298976

Yang L və başqaları, Nüvə zərfinin inteqral membran zülalları mitoz zamanı endoplazmatik retikulumda dağılır. J Hüceyrə Biol&dövrü (1997)
Nəşriyyat: 9182656

Bione S və başqaları, Emery-Dreifuss əzələ distrofiyasından məsul olan yeni X ilə əlaqəli genin müəyyən edilməsi. Nat Genet&dövr (1994)
PubMed: 7894480 DOI: 10.1038/ng1294-323

Boisvert FM və başqaları, Çoxfunksiyalı nüvə və dövr Nat Rev Mol Cell Biol&dövrü (2007)
Nəşriyyat: 17519961 DOI: 10.1038/nrm2184

Scheer U və başqaları, Nüvəçiyin quruluşu və funksiyası&dövrü Curr Opin Cell Biol&dövrü (1999)
Nəşriyyat: 10395554 DOI: 10.1016/S0955-0674(99)80054-4

Német A və başqaları, Nükleolusda və ətrafında genomun təşkili&dövrü Trendlər Genet&dövr (2011)
Nəşriyyat: 21295884 DOI: 10.1016/j.tig.2011.01.002

Cuylen S və başqaları, Ki-67 mitotik xromosomları dağıtmaq üçün bioloji səthi aktiv maddə kimi çıxış edir. Təbiət&dövr (2016)
PubMed: 27362226 DOI: 10.1038/nature18610

Stenström L və başqaları, Nüvə proteomunun xəritəsi daxili zülal pozğunluğu ilə əlaqəli bir məkan-zaman təşkilatını ortaya qoyur. Mol Syst Biol. (2020)
Nəşriyyat: 32744794 DOI: 10.15252/msb.20209469

Derenzini M et al., Nüvə ölçüsü xərçəng toxumalarında hüceyrə proliferasiyasının sürətini göstərir J Pathol&dövr (2000)
Nəşriyyat: 10861579 DOI: 10.1002/(SICI)1096-9896(200006)191:2<181::AID-PATH607>3.0.CO2-V

Visintin R et al., Hüceyrə dövrü hiylələri və dövr üçün nüvə və kolon sehrbazın papağı Curr Opin Cell Biol&dövrü (2000)
Nəşriyyat: 10801456

Marciniak RA və başqaları, İnsan hüceyrələrində Werner sindromu zülalının nüvə lokalizasiyası Proc Natl Acad Sci U S A&dövr (1998)
Nəşriyyat: 9618508

Tamanini F et al., X ilə əlaqəli kövrək zülallar FXR1P və FXR2P HİV-1 tənzimləyici zülallarına ekvivalent olan funksional nüvə hədəf siqnalını ehtiva edir. Hum Mol Genet&dövr (2000)
PubMed: 10888599

Willemsen R et al., FMRP-nin nüvədə ribosomal prekursor hissəcikləri ilə birləşməsi Biochem Biophys Res Commun (1996)
PubMed: 8769090 DOI: 10.1006/bbrc.1996.1126

Isaac C və başqaları, Treacher Collins sindromunda nüvə gen məhsulunun və vergül çətirinin və vergülün xarakteristikası. Mol Biol Hüceyrə və dövr (2000)
Nəşriyyat: 10982400

Drygin D et al., RNT polimeraza I transkripsiya maşını və kolon xərçəngin müalicəsi üçün yeni bir hədəfdir. Annu Rev Pharmacol Toxicol&dövrü (2010)
PubMed: 20055700 DOI: 10.1146/annurev.pharmtox.010909.105844

Spector DL&dövrü, Hüceyrə nüvəsindəki makromolekulyar domenlər və dövr Annu Rev Cell Biol&dövrü (1993)
PubMed: 8280462 DOI: 10.1146/annurev.cb.09.110193.001405

Lamond AI və başqaları, Nüvənin quruluşu və funksiyası Elm&dövr (1998)
Nəşriyyat: 9554838

SWIFT H&dövrü, Nüvənin incə quruluşu və dövrü üzrə tədqiqatlar Brookhaven Symp Biol&dövrü (1959)
Nəşriyyat: 13836127

Lamond AI və başqaları, Nüvə ləkələri və kolon nüvə orqanelləri üçün bir model və dövr Nat Rev Mol Cell Biol&dövrü (2003)
Nəşriyyat: 12923522 DOI: 10.1038/nrm1172

Thiry M&dövrü, Xromatinlərarası qranullar və dövr Histol Histopatol&dövrü (1995)
Nəşriyyat: 8573995

Sleeman JE et al., Yeni yığılmış snRNP-lər nüvə snRNP yetişmə yolunu təklif edən ləkələr və vergüllərdən əvvəl qıvrılmış cisimlərlə birləşir. Curr Biol&dövr (1999)
Nəşriyyat: 10531003

Darzacq X və başqaları, Cajal bədənə xas kiçik nüvə RNT-ləri və kolon 2'-O-metilasiya və psevduridilyasiya bələdçi RNT-lərinin yeni bir sinfi. EMBO J&dövr (2002)
PubMed: 12032087 DOI: 10.1093/emboj/21.11.2746

Jády BE və başqaları, Sm kiçik nüvə RNT-lərinin modifikasiyası sitoplazmadan idxal edildikdən sonra nukleoplazmik Cajal orqanında baş verir. EMBO J&dövr (2003)
PubMed: 12682020 DOI: 10.1093/emboj/cdg187

Liu Q və başqaları, Motor neyron zülalının sağ qalmasını ehtiva edən yeni nüvə quruluşu EMBO J&dövr (1996)
Nəşriyyat: 8670859

Lefebvre S və başqaları, Onurğa əzələsinin atrofiyasını təyin edən genin təyini və xarakteristikası Hüceyrə&dövr (1995)
Nəşriyyat: 7813012

Fischer U və başqaları, SMN-SIP1 kompleksi spliceosomal snRNP biogenezində mühüm rol oynayır. Hüceyrə&dövr (1997)
Nəşriyyat: 9323130

Lallemand-Breitenbach V et al., PML nüvə cisimləri və dövrü Cold Spring Harb Perspect Biol&dövrü (2010)
PubMed: 20452955 DOI: 10.1101/cshperspect.a000661

Booth DG et al., Ki-67 və Mitozda Xromosom Periferiya Bölməsi Trends Cell Biol&dövr (2017)
PubMed: 28838621 DOI: 10.1016/j.tcb.2017.08.001

Ljungberg O və başqaları, Qalxanabənzər vəzin və kolonun mürəkkəb follikulyar-parafollikulyar hüceyrəli karsinoması yeni bir şiş varlığı və axtarışı Xərçəng və dövr (1983)
PubMed: 6136320 DOI: 10.1002/1097-0142(19830915)52:6<1053::aid-cncr2820520621>3.0.co2-q

Melcák I və başqaları, Nüvə pre-mRNA bölmələri və buraxılmış transkriptlərin kolon amil rezervuarlarına daşınması və dövr. Mol Biol Hüceyrə və dövr (2000)
Nəşriyyat: 10679009

Spector DL ​​və başqaları, Fərqli pre-mRNT birləşmə komponentləri və hüceyrə nüvəsi arasında əlaqə EMBO J&dövr (1991)
Nəşriyyat: 1833187

Misteli T et al., Protein fosforilasiyası və pre-mRNT-nin birləşdirilməsinin nüvə təşkili. Trends Cell Biol&dövr (1997)
Nəşriyyat: 17708924 DOI: 10.1016/S0962-8924(96)20043-1

Cmarko D və başqaları, Bromo-UTP mikroinyeksiyasından sonra hüceyrə nüvəsində transkripsiyanın və birləşmənin ultrastruktur təhlili. Mol Biol Hüceyrə və dövr (1999)
Nəşriyyat: 9880337

Van Hooser AA və başqaları, Perikromosomal təbəqə və dövr Xromosoma&dövr (2005)
Nəşriyyat: 16136320 DOI: 10.1007/s00412-005-0021-9

Booth DG et al., Ki-67 mitotik xromosomun periferiyasını təşkil edən PP1 ilə qarşılıqlı əlaqədə olan zülaldır. Elife&dövr (2014)
PubMed: 24867636 DOI: 10.7554/eLife.01641

Kau TR və başqaları, Mexanizmdən müdaxiləyə nüvə nəqli və xərçəng və kolon Nat Rev Xərçəng&dövrü (2004)
Nəşriyyat: 14732865 DOI: 10.1038/nrc1274

Laurila K və başqaları, Zülalların lokalizasiyasına təsir edən xəstəliklə əlaqəli mutasiyaların proqnozlaşdırılması BMC Genomics&dövrü (2009)
Nəşriyyat: 19309509 DOI: 10.1186/1471-2164-10-122

Park S və başqaları, Zülalların lokalizasiyası genetik xəstəliklərin etiologiyası və komorbidliyinin əsas əlaməti kimi. Mol Syst Biol&dövrü (2011)
Nəşriyyat: 21613983 DOI: 10.1038/msb.2011.29

Christoforou A et al., Siçan pluripotent kök hüceyrə məkan proteomunun xəritəsinin layihəsi Nat Commun&dövrü (2016)
PubMed: 26754106 DOI: 10.1038/ncomms9992

Itzhak DN və başqaları, Zülalın subhüceyrə lokalizasiyasının və dövrünün qlobal və vergüllə kəmiyyət və dinamik xəritəsi Elife&dövr (2016)
PubMed: 27278775 DOI: 10.7554/eLife.16950

Roux KJ və başqaları, Promiscuous biotin ligase füzyon proteini məməlilərin hüceyrələrində proksimal və qarşılıqlı zülalları müəyyən edir. J Hüceyrə Biol&dövrü (2012)
Nəşriyyat: 22412018 DOI: 10.1083/jcb.201112098

Lee SY və başqaları, APEX Barmaq İzi Maraqlanan Zülalların Hüceyrəaltı Lokalizasiyasını aşkar edir. Hüceyrə Rep&dövrü (2016)
PubMed: 27184847 DOI: 10.1016/j.celrep.2016.04.064

Huh WK və başqaları, Qönçələnmə mayasında zülal lokalizasiyasının qlobal təhlili&dövr Təbiət&dövr (2003)
Nəşriyyat: 14562095 DOI: 10.1038/nature02026

Simpson JC və başqaları, Geniş miqyaslı cDNA ardıcıllığı ilə müəyyən edilmiş yeni zülalların sistematik subcellular lokalizasiyası. EMBO Rep&dövrü (2000)
PubMed: 11256614 DOI: 10.1093/embo-reports/kvd058

Stadler C və başqaları, İmmunofluoressensiya və flüoresan-zülal etiketlənməsi məməli hüceyrələrində zülalların lokalizasiyası üçün yüksək korrelyasiya göstərir. Nat Metodları. 2013 aprel 10(4):315-23 (2013)
PubMed: 23435261 DOI: 10.1038/nmeth.2377

Barbe L et al., İnsan proteomunun konfokal subcellular atlasına doğru. Mol Hüceyrə Proteomikası. (2008)
PubMed: 18029348 DOI: 10.1074/mcp.M700325-MCP200

Stadler C və başqaları, Proteom geniş immunofluoressensiya lokalizasiyası tədqiqatları üçün tək fiksasiya protokolu. J Proteomika. (2010)
Nəşriyyat: 19896565 DOI: 10.1016/j.jprot.2009.10.012

Fagerberg L et al., Üç insan hüceyrə xəttində subcellular protein paylanmasının xəritəsi. J Proteome Res. (2011)
Nəşriyyat: 21675716 DOI: 10.1021/pr200379a

Baker M&dövrü, Reproduktivlik böhranı&kolon.Bunu antikorlarda günahlandırın&dövr Təbiət&dövr (2015)
Nəşriyyat: 25993940 DOI: 10.1038/521274a

Jacobson K et al., Plazma Membran Komponentlərinin Yan Təşkili və Hərəkətliliyi Hüceyrə&dövr (2019)
Nəşriyyat: 31051105 DOI: 10.1016/j.cell.2019.04.018

Kobayashi T və başqaları, Transbilayer lipid asimmetriyası&dövr Curr Biol&dövr (2018)
Nəşriyyat: 29689220 DOI: 10.1016/j.cub.2018.01.007

Krapf D&dövr, Plazma membranının bölmələrə bölünməsi və dövr Curr Opin Cell Biol&dövrü (2018)
Nəşriyyat: 29656224 DOI: 10.1016/j.ceb.2018.04.002

Garcia MA və başqaları, Hüceyrə-hüceyrə qovşaqları struktur və siqnal şəbəkələrini təşkil edir Cold Spring Harb Perspect Biol&dövrü (2018)
PubMed: 28600395 DOI: 10.1101/cshperspect.a029181

Orlando K və başqaları, Hüceyrə qütbündə membranın təşkili və dinamikası Cold Spring Harb Perspect Biol&dövrü (2009)
PubMed: 20066116 DOI: 10.1101/cshperspect.a001321

Eaton RC və başqaları, Paraventrikulyar nüvədəki D2 reseptorları erkək siçovullarda genital reaksiyaları və kopulyasiyanı tənzimləyir. Pharmacol Biochem Davranışı&dövrü (1991)
Nəşriyyat: 1833780 DOI: 10.1016/0091-3057(91)90418-2

Simons K et al., Xolesterol və vergül lipid salları & vergül və xəstəlik&dövr J Clin Invest&dövrü (2002)
PubMed: 12208858 DOI: 10.1172/JCI16390

von Heijne G&dövr, Siqnal ardıcıllığı&dövr Dəyişiklik hədləri&dövr J Mol Biol&dövrü (1985)
Nəşriyyat: 4032478

Johnson AE və başqaları, Translokon və kolon ER membranında dinamik bir keçiddir Annu Rev Cell Dev Biol&dövrü (1999)
Nəşriyyat: 10611978 DOI: 10.1146/annurev.cellbio.15.1.799

Farhan H et al., İfraz yoluna və oradan siqnalın verilməsi J Cell Sci&dövr (2011)
Nəşriyyat: 21187344 DOI: 10.1242/jcs.076455

Wishart DS və başqaları, DrugBank & colon silisium dərmanlarının kəşfi və kəşfiyyatı üçün hərtərəfli mənbədir. Nuklein Turşularının Tətbiqi (2006)
PubMed: 16381955 DOI: 10.1093/nar/gkj067

Emanuelsson O və başqaları, TargetP&vergül SignalP və əlaqəli alətlərdən istifadə edərək hüceyrədə zülalların yerləşdirilməsi Nat Protoc&dövr (2007)
PubMed: 17446895 DOI: 10.1038/nprot.2007.131

Petersen TN və başqaları, SignalP 4&period0&kolon diskriminasiya edən siqnal peptidləri transmembran bölgələrindən&period Nat Methods & period (2011)
Nəşriyyat: 21959131 DOI: 10.1038/nmeth.1701

Käll L et al., Birləşdirilmiş transmembran topologiyası və siqnal peptidinin proqnozlaşdırılması metodu&dövrü J Mol Biol&dövrü (2004)
Nəşriyyat: 15111065 DOI: 10.1016/j.jmb.2004.03.016

Viklund H və başqaları, SPOCTOPUS&kolon siqnal peptidlərinin və membran zülal topologiyasının birləşmiş proqnozlaşdırıcısıdır. Bioinformatika&dövr (2008)
PubMed: 18945683 DOI: 10.1093/bioinformatika/btn550

Fagerberg L et al., İnsan membran proteomunun proqnozu. Proteomika. (2010)
Nəşriyyat: 20175080 DOI: 10.1002/pmic.200900258


NIH alimləri, koronavirusların hüceyrələrdən çıxmaq üçün istifadə etdiyi lizosomlarda əsas yolu kəşf edirlər

Hüceyrələrin 'zibil sıxıcı' hədəflənməsi COVID-19 ilə mübarizə üçün yeni antiviral strategiyaya səbəb ola bilər.

Şəkildə koronavirusların hüceyrələrdən çıxmaq üçün istifadə etdiyi lizosom ekzositoz yolunun komponentləri göstərilir. Normal biosintetik ifrazat yolunun komponentləri də göstərilir. NIH Agentliyi

Milli Sağlamlıq İnstitutunun tədqiqatçıları, yeni koronavirusun bədənə yayılarkən hüceyrələri oğurlamaq və çıxarmaq üçün istifadə etdiyi bioloji bir yol aşkar etdilər. Bu mühüm yolun daha yaxşı başa düşülməsi, COVID-19 xəstəliyinə səbəb olan virusun - SARS-CoV-2-nin ötürülməsinin dayandırılması üçün həyati fikir təmin edə bilər.

Hüceyrə tədqiqatlarında tədqiqatçılar ilk dəfə olaraq göstərdilər ki, koronavirus yoluxmuş hüceyrələrdən hüceyrələrin “zibil sıxıcısı” kimi tanınan orqanoid olan lizosom vasitəsilə çıxa bilir. Normalda lizosom virusları və digər patogenləri hüceyrələri tərk etməzdən əvvəl məhv edir. Bununla belə, tədqiqatçılar müəyyən ediblər ki, koronavirus lizosomun xəstəliklərlə mübarizə aparan mexanizmlərini deaktiv edir və onun bütün bədənə sərbəst şəkildə yayılmasına imkan verir.

Bu lizosomal yolun hədəflənməsi COVID-19 ilə mübarizə üçün yeni, daha effektiv antiviral müalicələrin inkişafına səbəb ola bilər. Bu gün jurnalda dərc olunan tapıntılar Hüceyrə, Dünya miqyasında yeni koronavirus hadisələrinin artdığı, ABŞ-da əlaqəli ölümlərin 225,000-ə yaxınlaşdığı bir vaxta gəldi.

Elm adamları bir müddətdir ki, virusların hüceyrələrə daxil olub onları yoluxdurduğunu və hüceyrədən qaçmazdan əvvəl hüceyrənin zülal istehsal edən mexanizmindən istifadə edərək özlərinin çoxsaylı surətlərini çıxardıqlarını bilirlər. Bununla belə, tədqiqatçılar virusların hüceyrələrdən tam olaraq necə çıxması ilə bağlı məhdud anlayışa malikdirlər.

Adi müdriklik uzun müddətdir ki, əksər virusların, o cümlədən qrip, hepatit C və Qərbi Nilin biosintetik ifrazat yolu deyilən yolla çıxdığını təsdiqləyir. Bu, hüceyrələrin hormonları, böyümə faktorlarını və digər materialları ətraf mühitə daşımaq üçün istifadə etdiyi mərkəzi yoldur. Tədqiqatçılar koronavirusların da bu yoldan istifadə etdiyini güman ediblər.

Lakin əsas eksperimentdə NIH-in Milli Ürək, Ağciyər və Qan İnstitutunda (NHLBI) Host-Patogen Dinamikası Laboratoriyasının rəhbəri, Ph.D. Nihal Altan-Bonnet və onun post-doktorluq yoldaşı Sourish Ghosh, Ph.D. D., tədqiqatın əsas müəllifləri, fərqli bir şey tapdılar. O və komandası koronavirusa yoluxmuş hüceyrələri (xüsusilə, siçan hepatiti virusu) biosintetik yolu maneə törətdiyi məlum olan bəzi kimyəvi inhibitorlara məruz qoydu.

"Şokumuza görə, bu koronaviruslar hüceyrələrdən yaxşı çıxdı" dedi Altan-Bonnet. "Bu, koronavirusların başqa bir yoldan istifadə etdiyinə dair ilk ipucu idi."

Bu yolu axtarmaq üçün tədqiqatçılar mikroskopik görüntüləmə və insan hüceyrələrini əhatə edən virusa xas markerlərdən istifadə edərək əlavə təcrübələr hazırladılar. Onlar aşkar ediblər ki, koronaviruslar hansısa yolla yüksək turşuluqlu lizosomları hədəf alır və orada toplanır.

Bu tapıntı Altan-Bonnet komandası üçün daha bir sual doğurdu: Koronaviruslar lizosomlarda toplanırsa və lizosomlar turşudursa, niyə koronaviruslar çıxmazdan əvvəl məhv edilmir?

Tədqiqatçılar bir sıra qabaqcıl təcrübələrdə lizosomların koronavirusa yoluxmuş hüceyrələrdə turşusuzlaşdığını, onların dağıdıcı fermentlərinin fəaliyyətini əhəmiyyətli dərəcədə zəiflətdiyini nümayiş etdirdilər. Nəticədə viruslar bütöv qalır və çıxdıqda digər hüceyrələrə yoluxmağa hazır olurlar.

"Bu koronaviruslar çox gizlidir" dedi Altan-Bonnet. "Onlar çıxmaq üçün bu lizosomlardan istifadə edirlər, lakin lizosomu da pozurlar ki, o, öz işini və ya funksiyasını yerinə yetirə bilmir."

Tədqiqatçılar həmçinin normal lizosom funksiyasının pozulmasının hüceyrələrin immunoloji mexanizminə zərər verdiyini aşkar etdilər. "Biz düşünürük ki, bu çox fundamental hüceyrə biologiyası tapıntısı insanların klinikada COVID xəstələrində immun sisteminin anormallıqları ilə bağlı gördükləri bəzi şeyləri izah etməyə kömək edə bilər" dedi Altan-Bonnet. Buraya sitokin fırtınaları daxildir, hansı ki, COVID xəstələrinin qanında müəyyən iltihab əleyhinə zülalların çoxluğu immunitet sistemini alt-üst edir və yüksək ölüm hallarına səbəb olur.

İndi bu mexanizm müəyyən edildikdən sonra, tədqiqatçılar bu yolu pozmağın yollarını tapa və lizosomların virusları hüceyrənin xaricinə çatdırmasının qarşısını ala və ya koronavirusla yoluxmuş hüceyrələrdə normal funksiyalarını bərpa etmək üçün lizosomları yenidən turşulaşdıra bilərlər. COVID ilə mübarizə apara bilər. Müəlliflər artıq koronavirusların hüceyrədən çıxmasını güclü şəkildə bloklayan bir eksperimental ferment inhibitorunu müəyyən ediblər.

"Lizosom yolu, hədəflənmiş terapevtiklər haqqında tamamilə fərqli bir düşüncə tərzi təklif edir" dedi və əlavə etdi ki, bu cür müdaxilələrin təsirli olub-olmayacağını və mövcud dərmanların bu yolu bağlamağa kömək edə biləcəyini müəyyən etmək üçün əlavə tədqiqatlara ehtiyac olacaq. O qeyd edir ki, tapıntılar ortaya çıxa biləcək digər koronavirusların yaratdığı gələcək pandemiyaların qarşısını almaq üçün uzun bir yol keçə bilər.

Bu araşdırmada bildirilən tədqiqat Milli Sağlamlıq İnstitutlarının bir hissəsi olan NHLBI-nin İntramural Tədqiqat Bölməsi tərəfindən maliyyələşdirilib. Bundan əlavə, tədqiqat NIH R01 AI091985-05 NIH R01 NS36592 F32-AI113973 NIH R37GM058615 və NIH R01AI135270 daxil olmaqla NIH qrantları tərəfindən dəstəkləndi. Bütün digər həmmüəlliflər intramural NIH və Milli Xərçəng İnstitutunun fondları tərəfindən dəstəkləndi.

Tədqiqat: β-Koronaviruslar biosintetik ifrazat yolu əvəzinə çıxış üçün lizosomlardan istifadə edirlər. DOI: 10.1016/j.cell.2020.10.039

Bu xəbər buraxılışı əsas tədqiqat tapıntısını təsvir edir. Əsas tədqiqatlar insan davranışı və biologiya haqqında anlayışımızı artırır ki, bu da xəstəliklərin qarşısının alınması, diaqnozu və müalicəsinin yeni və daha yaxşı yollarını inkişaf etdirmək üçün əsasdır. Elm gözlənilməz və artan bir prosesdir - hər bir tədqiqat irəliləyişi keçmiş kəşflərə əsaslanır, çox vaxt gözlənilməz yollarla. Fundamental fundamental tədqiqatların biliyi olmadan əksər klinik irəliləyişlər mümkün olmazdı.


Müəllif Xülasəsi

Enteroviruslar miokardit, aseptik meningit və ensefalit səbəb olan əhəmiyyətli insan patogenləridir. Enterovirusun ev sahibi və hüceyrədən hüceyrəyə yayılması mexanizmləri virus patogenezinə təsir edən kritik amillər ola bilər. Burada biz “flüoresan taymer” zülalını (Timer-CVB3) ifadə edən rekombinant koksaki virusu yaratdıq ki, bu da ev sahibi daxilində infeksiyanın gedişatını izləməyə kömək edir. Biz gözlənilmədən Timer-CVB3 ilə yoluxmuş qismən differensiallaşmış progenitor hüceyrələrdə virus ehtiva edən mikroveziküllərin tökülməsini müşahidə etdik. Hüceyrədənkənar mikroveziküllər (EMV) hüceyrə diferensiasiyasından sonra yüksək səviyyədə buraxılıb və virusun yayılmasında rol oynaya bilər. Timer-CVB3 yoluxmuş hostda virusun yayılmasının monitorinqində dəyərli alət olacaq.

Sitat: Robinson SM, Tsueng G, Sin J, Mangale V, Rahawi S, McIntyre LL və s. (2014) Coxsackievirus B Otofaqosomal markerləri göstərən anbar mikroveziküllərində ana hüceyrədən çıxır. PLoS Pathog 10(4): e1004045. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1004045

Redaktor: Ted C. Pierson, Milli Sağlamlıq İnstitutu, Amerika Birləşmiş Ştatları

Qəbul edildi: 26 oktyabr 2012-ci il Qəbul edildi: 17 fevral 2014-cü il Nəşr olundu: 10 aprel 2014-cü il

Müəlliflik hüququ: © 2014 Robinson et al. Bu, Creative Commons Attribution Lisenziyasının şərtlərinə əsasən paylanmış açıq girişli məqalədir və orijinal müəllif və mənbə qeyd olunmaqla istənilən mühitdə qeyri-məhdud istifadəyə, paylanmaya və reproduksiyaya icazə verir.

Maliyyələşdirmə: Bu iş Milli Sağlamlıq İnstitutları (NIH) R01 Mükafatı NS054108 (RF-yə), NIH R01 Mükafatları AI042314 və HL093177 (JLW-yə), NIH R01 Mükafatı HL092136 (RAG-a) və Sağlamlığın Təkmilləşdirilməsi üzrə NIH Tədqiqat Əlavəsi tərəfindən dəstəklənib. Tədqiqat Mükafatı 3R01NS054108-01A2S1 (RF və SMR-ə), SDSU Universiteti Qrant Proqramı Mükafatı (RF-yə), Milli Psixi Sağlamlıq İnstitutunun (NIMH) Azlıqların Tədqiqat İnfrastrukturuna Dəstək Proqramı (M-RISP) R24 Fakültə Təqaüdçüsü Mükafatı MH065RF515 (to) ) və NIH F32 Ruth L. Kirschstein Milli Tədqiqat Xidməti Mükafatı AI-065095 (CTC-yə). GT Kollec Alimləri (ARCS) Vəqfi Təqaüdü, Inamori Təqaüdü və Gen-Probe Təqaüdü üçün Nailiyyət Mükafatlarının alıcısıdır. SMR, Rees-Stealy Tədqiqat Vəqfinin və San Dieqo Dövlət Universitetinin Ürək İnstitutu Təqaüdünün alıcısıdır. SR SDSU McNair Scholars Proqramının və Milli Elm Fondunun S-STEM Alimlər Proqramının resipiyentidir. CC və AMS qismən NSF DEB 1046413: Ölçülər: Coral Reef Ekosistemlərində Viral Müxtəliflik tərəfindən dəstəklənib. TEM avadanlığı Milli Elm Fondunun DBI-030829 qrantının dəstəyi ilə alınmışdır. Tədqiqatın dizaynında, məlumatların toplanmasında və təhlilində, nəşr etmək qərarında və ya əlyazmanın hazırlanmasında maliyyə verənlərin heç bir rolu olmayıb. Mövzu ilə əlyazmada yer alan müəlliflər arasında maraqların toqquşması yoxdur.

Rəqabətli maraqlar: Müəlliflər heç bir rəqabət aparan maraqların olmadığını bəyan ediblər.


Yaşlanma Tədqiqatları üçün Olmalı 10 Marker

Qocalığı öyrənməklə maraqlanırsınız? Hüceyrə dövrünün dayanmasının nə vaxt və niyə baş verdiyini anlamaq inkişaf, qocalma və xərçənglə bağlı tədqiqatlar da daxil olmaqla (lakin bununla məhdudlaşmayaraq) bir çox tədqiqat sahələri üçün çox vacibdir. Biz hamımız bilirik ki, ən yaxşı alətlər ən yaxşı nəticələr verir, ona görə də qocalma tədqiqatınız üçün ən yaxşı 10 hədəfin bu siyahısı ilə bütün əsaslarınızı əhatə etdiyinizə əmin olun!

Yaşlı hüceyrələrin pH-dan asılı şəkildə β-qalaktosidazı ifadə etdiyi məlumdur, xüsusilə pH 6-da aşkar edilə bilər (1). Bu lazımlı boyama dəsti hüceyrələrdə və ya hətta dondurulmuş toxumalarda pH 6-da β-qalaktosidaza aktivliyini aşkar etmək üçün lazım olan hər şeyi ehtiva edir! Çoxsaylı hüceyrə populyasiyalarını və ya toxuma nümunələrini tez və asanlıqla sınamaq üçün mükəmməldir, istiqamətlər sadədir və mavi rəngləmə parlaq və aydındır.

29 (solda) populyasiyada normal WI38 hüceyrələrində pH 6-da β-qalaktosidaza boyanması və 36 (sağda) ikiqat artan populyasiyada qocalmış WI38 hüceyrələrində.

p53 o qədər yaxşı öyrənilib ki, demək olar ki, girişə ehtiyac yoxdur! DNT Zərərinə Cavab (DDR) yollarının əsas oyunçusu olan p53 eyni zamanda hüceyrə dövrünün kritik tənzimləyicisidir, burada yığılmış fosforlanmış p53 siklindən asılı kinaz inhibitorlarının (CDKIs) aktivləşməsinə səbəb olacaq və nəticədə hüceyrə dövrünün dayandırılmasına səbəb olacaqdır.

p53 (7F5) Rabbit mAb (yaşıl) istifadə edərək HT-29 hüceyrələrinin konfokal immunofluoresan analizi. Aktin filamentləri DY-554 phalloidin (qırmızı) ilə etiketlənmişdir.

Yuxarıda qeyd edildiyi kimi, qocalmış hüceyrə dövrünün dayandırılması çoxlu müxtəlif CDKI-ləri toplayan və aktivləşdirən fosfo-53-ə əsaslanır. P53 və fosfo-p53 səviyyələri arasında müqayisəli təhlil tez-tez DDR yolunun və qocalmanın öyrənilməsində mühüm addımdır.

Phospho-p53 (Ser46) Antikoru (yaşıl) istifadə edərək, müalicə olunmamış (solda) və ya etoposidlə müalicə olunmuş (sağda) MCF-7 hüceyrələrinin konfokal immunofluoresan analizi. Aktin filamentləri DY-554 phalloidin (qırmızı) ilə etiketlənmişdir.

Ən yaxşı qurulmuş qocalma markerlərindən biri olan p21, fosfo-p53-dən aşağı olan CDKI-dir. p21, CDK2 (1) ilə əlaqəli olduqda G1/S vasitəsilə irəliləməni bloklayaraq hüceyrə dövrünün inhibitoru kimi çıxış edir.

p21 Waf1/Cip1 (12D1) Dovşan mAb (qırmızı) və Fosfo-Histon H3 (Ser10) (6G3) Siçan mAb #9706 (yaşıl) istifadə edərək MCF7 hüceyrələrinin konfokal immunofluoresan analizi. Mavi pseudocolor = DRAQ5® #4084 (flüoresan DNT boyası).

Başqa bir ümumi və etibarlı qocalma markeri, p16 ifadəsinin hüceyrələri qocalmağa apardığı düşünülür (2). p16, G1-də (3) hüceyrə dövranını dayandırmaq üçün CDK4 və CDK6 ilə hərəkət edən INK4 CDKI ailəsinin üzvüdür.

p16 INK4A (D3W8G) Rabbit mAb (yuxarı) və ya β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457 (aşağı) istifadə edərək HeLa və HUVEC hüceyrələrindən ekstraktların Western blot analizi.

Yaşlı hüceyrələr tez-tez morfoloji dəyişikliklər nümayiş etdirir, bu da LaminB1-i qocalmanın başqa bir faydalı göstəricisi edir. Nüvə morfologiyası üçün marker olan LaminB1 ifadəsi qocalmış insan və siçan hüceyrələrində itir (4). LaminB1-in itirilməsi və p21 və p16-nın artan yığılması qocalmanın vacib, klassik əlamətləridir.

Lamin B1 (119D5-F1) Siçan mAb (yaşıl) və β-Actin (13E5) Dovşan mAb (Alexa Fluor® 647 Konjugat) #8584 (qırmızı) istifadə edərək HT-29 hüceyrələrinin konfokal immunofluoresan analizi. Mavi pseudocolor = Propidium Yodid (PI)/RNaz Boyanma Məhlulu #4087 (flüoresan DNT boyası).

Yaşlı hüceyrələrin bir çox ümumi xüsusiyyətləri var, lakin onlar heç bir şəkildə eyni deyillər. Hər bir qocalmış populyasiya sitokinlərin, böyümə faktorlarının və proteazların unikal səviyyələri ilə xarakterizə olunur, buna qocalma ilə əlaqəli ifrazat fenotipi (SASP) deyilir. SASP Antikor Sampler Kit, qocalmış hüceyrələri öyrənmək üçün müxtəlif zülallar üçün güclü antikor kolleksiyasını ehtiva edir. Bu kolleksiya sizə hüceyrə populyasiyanıza xas olan SASP-ni təyin etməyə imkan verəcək.

IL-1β (D3U3E) Rabbit mAb istifadə edərək rekombinant İnsan İnterleykin-1β (hIL-1β) #8900-ün Western blot analizi.

Tipik olaraq, Rb-nin fosforilasiyası transkripsiya hədəflərinin repressiyasını aradan qaldırmaq və hüceyrə dövrünü inkişaf etdirmək üçün lazımdır. Hüceyrə dövrünün müxtəlif CDKI-lər, o cümlədən p21 və p16 tərəfindən inhibə edilməsi Rb-nin hiperaktivləşməsinə gətirib çıxarır, bu da son nəticədə hüceyrə dövrünün və qocalmanın dayandırılmasını təşviq edir (4).

RB (4H1) Siçan mAb (yaşıl) istifadə edərək, SH-SY5Y hüceyrələrinin konfokal immunofluoresan şəkli. Aktin filamentləri Alexa Fluor® 555 phalloidin (qırmızı) ilə etiketlənmişdir.

Hüceyrə dövrünün inkişafı üçün Rb fosforilləşdirilməli olduğundan, qocalmış hüceyrələrdə fosfor-Rb tapılmır. p53 kimi, qocalmanı araşdırarkən Rb və fosfo-Rb-nin müqayisəli təhlili böyük əhəmiyyət kəsb edir.

Phospho-Rb (Ser807/Ser811) (D20B12) XP® Rabbit mAb (yaşıl) istifadə edərək, müalicə olunmamış (yuxarı) və ya λ fosfatazla işlənmiş (aşağı) MCF7 (solda) və BT-549 (sağda) hüceyrələrin konfokal immunofluoresan analizi. Aktin filamentləri DY-554 phalloidin (qırmızı) ilə etiketlənmişdir. Mavi pseudocolor = DRAQ® #4084 (flüoresan DNT boyası).

qamma-H2A.X DDR yolunun klassik markeridir. DNT zədələnməsi, H2A.X-in Ser139-da fosforilləşdiyi və qamma H2A.X (5) əmələ gətirdiyi və onu DDR yolunun və qocalmanın öyrənilməsi üçün güclü alətə çevirdiyi tez və möhkəm reaksiya ilə nəticələnir.

Phospho-Histone H2A.X (Ser139) (20E3) Rabbit mAb istifadə edərək, müalicə olunmamış (solda) və ya UV ilə işlənmiş (sağda) parafinlə yerləşdirilmiş HT-29 hüceyrələrinin immunohistokimyəvi analizi.

53BP1 əvvəlcə p53 üçün məcburi tərəfdaş kimi müəyyən edildi və onun transkripsiya fəaliyyətini gücləndirməyi təklif etdi (6, 7). 53BP1 DNT-nin təmirində mühüm rol oynayır, onun DNT zədələnmiş ərazilərə cəlb olunduğu məlumdur və 53BP1-in bu yerlərdə saxlanması qamma-H2A.X-dən asılıdır (8).

53BP1 Antikor (yaşıl) istifadə edərək HeLa hüceyrələrinin konfokal immunofluoresan analizi. Aktin filamentləri Alexa Fluor® 555 phalloidin (qırmızı) ilə etiketlənmişdir.

Bəzən bir şeyi aşkar etməyin ən yaxşı yolu onun nə etmədiyini müəyyən etməkdir. Ki67, proliferasiya edən hüceyrələrin tez-tez istifadə olunan markeri olan nüvə zülalıdır. Bu aşkarlama G1-dən mitozun sonuna qədər hər yerdə dəyişir, lakin hüceyrələr G0 istirahət mərhələsində olduqda aşkar edilmir (9). Yaşlı hüceyrələrin əlaməti hüceyrə dövründən daimi çıxışdır və buna görə də qocalmış hüceyrələr Ki67 ifadə etmir.

Ki-67 (8D5) Siçan mAb istifadə edərək parafinə daxil edilmiş insan döş karsinomasının immunohistokimyəvi analizi.

*Pro məsləhəti! Yaşlı hüceyrələrin çoxlu markerləri var, bəs niyə yalnız birini seçmək lazımdır? Bu əsas markerlərdən bir neçəsini ehtiva edən Senescence Marker Antikor Sampler Kit ilə başlamağı tövsiyə edirik və bu, qocalmış hüceyrələrinizi müəyyən etməyə başlamaq üçün mükəmməldir!


Əlaqədar Linklər

İstinadlar: β-Koronaviruslar biosintetik ifrazat yolu əvəzinə çıxış üçün lizosomlardan istifadə edirlər. Ghosh S, Dellibovi-Ragheb TA, Kerviel A, Pak E, Qiu Q, Fisher M, Takvorian PM, Bleck C, Hsu VW, Fehr AR, Perlman S, Achar SR, Straus MR, Whittaker GR, de Haan CAM, Kehrl J , Altan-Bonnet G, Altan-Bonnet N. Hüceyrə. 27 oktyabr 2020:S0092-8674(20)31446-X. doi: 10.1016/j.cell.2020.10.039. Çapdan əvvəl onlayn. PMID: 33157038.

Maliyyələşdirmə: NIH-in Milli Ürək, Ağciyər və Qan İnstitutu (NHLBI), Milli Allergiya və Yoluxucu Xəstəliklər İnstitutu (NIAID), Milli Nevroloji Xəstəliklər və İnsult İnstitutu (NINDS), Milli Ümumi Tibb Elmləri İnstitutu (NIGMS) və Milli Xərçəng İnstitutu ( NCI).


Monoklonal Antikorlar Orqanel Marker Panelinə Daxildir

Xəritəçəkmə, zülalın hüceyrə proseslərindəki rolunu xarakterizə etmək və aşkar etmək üçün vacib subcellular yerlərin seçiminə qarşı siçan monoklonal antikorlarının bu orqanoid marker paneli maraq zülalının yerini ləkələmək və təsdiqləmək üçün istinad kimi istifadə edilə bilər. Panel üzvləri mümkün qədər çox hüceyrə xəttində yüksək RNT səviyyələri üçün seçilmiş və beşə qədər hüceyrə xəttində ICC-IF-də təsdiqlənmişdir. Onların əksəriyyəti IHC və DB-də də təsdiq edilmişdir. Bütün panel üzvləri Prestige Antikor brendinə aiddir və eyni sərt şərtlər altında, etibarlı davamlılıq və sabit təchizatla hazırlanmışdır.


NƏTİCƏLƏR

Mutant lusiferaza zülalı xronoloji yaşlı maya hüceyrələrində Hsp42-SPG-lərə sekvestr edilir.

Əvvəllər Hsp42-SPG-lərin uzun ömürlü sakit maya hüceyrələrində zənginləşdiyi aşkar edilmişdir (Lee və digərləri, 2016 Liu və digərləri, 2012), Hsp42-SPG-lərin meydana gəlməsinin xronoloji yaşlanma zamanı hüceyrə fiziologiyasına təsir etdiyini göstərir. Yenidən qönçələnmə analizlərində stasionar faza hüceyrələrinin canlılığı tədqiq edildikdə, Hsp42-SPG-ləri olmayan hüceyrələr 1 aylıq kulturalarda (vəhşi tipli hüceyrələrin 46±1,6%-nə qarşı 26±0,3%-ə qarşı) əhəmiyyətli dərəcədə azalmış canlılıq nümayiş etdirdilər. hsp42Δ hüceyrələr, iki quyruqlu t-test, P=0,0049) (Şəkil 1A). Bununla belə, qranulların əmələ gəlməsi zamanı Hsp42-SPG komponentlərinin biokimyəvi vəziyyətini başa düşmək üçün zülalların qatlanması və fermentativ fəaliyyətlərinin həssas funksional analizinə ehtiyac var.

Hsp42 tərkibli qranulların əmələ gəlməsi stasionar fazada fermentlərin fəaliyyətini tənzimləyir. (A) Hsp42-SPG olmayan hüceyrələr stasionar fazada 30 gündən sonra daha az canlı olur. Hüceyrə rebudding dərəcəsi vəhşi tip və hüceyrə canlılığını təmsil etmək üçün istifadə edilmişdir hsp42Δ hüceyrələri (ətraflı məlumat üçün Materiallar və Metodlara baxın). Təcrübələr ən azı üç müstəqil koloniyadan istifadə etməklə təkrarlandı və hər təkrarda >100 hüceyrə sayıldı. ***P<0.005, iki quyruqlu Tələbə t-test. Səhv çubuqları s.e.m. (B) lusiferaza-EGFP (yaşıl) tərəfindən əmələ gələn qranullar stasionar faza hüceyrələrində Hsp42-BFP qranulları (qırmızı) ilə birləşir. Şəkillər çəkilməzdən əvvəl hüceyrələr 5 gün ərzində SC-URA mühitində 28°C-də yetişdirildi. Ölçək çubuğu: 5 μm. (C) Lusiferaza-EGFP-nin qranul əmələ gəlməsi Hsp42-dən asılıdır. Vəhşi tip və hsp42Lusiferaza-EGFP-ni daşıyan Δ hüceyrələri 1 günlük, 4 günlük, 7 günlük və 14 günlük kulturalardan toplanmış və şəkillər çəkilmişdir. Ölçək çubuğu: 5 μm. (D) Hsp42-SPG-lərin formalaşması xronoloji qocalma zamanı lusiferaza fəaliyyətinin aşağı tənzimlənməsini asanlaşdırır. Ümumi hüceyrə lizatının mq başına orta lusiferaza aktivliyi üç təkrardan hesablanmışdır. P dəyərlər iki quyruqlu Student istifadə edərək hesablanmışdır t-test. *P<0.05, ***P<0.005. Səhv çubuqları s.e.m. (E) Lusiferazanın zülal miqdarı hsp42Δ mutant (–) vəhşi tip (+) ilə müqayisədə daha yüksək deyil. Ümumi hüceyrə lizatları western blotting və lusiferaza ilə təhlil edildi, Hsp42 və G6PDH anti-GFP (lusiferaza-EGFP üçün), anti-Hsp42 və anti-G6PDH (yükləmə nəzarəti üçün) antikorlarından istifadə etməklə aşkar edildi. (F) Hüceyrələr stasionar fazadan çıxdıqda vəhşi tipli hüceyrələrdə lusiferaza aktivliyi yeni protein sintezi olmadan tez bərpa olunur. Qıvrımların dəyişməsini daha asan görmək üçün təzələnmiş hüceyrələrin lusiferaza fəaliyyəti təzələnmədən əvvəl eyni hüceyrə mədəniyyətinin aktivliyinə normallaşdırıldı. Stasionar faza hüceyrələri 100 μg/ml sikloheksimidin iştirakı ilə 1 saat ərzində təzə mühitlə təzələndi və sonra lusiferaza aktivliyini ölçmək üçün parçalandı. 14 günlük vəhşi tipli hüceyrələr ən böyük qat dəyişikliyinə malik idi, çünki lusiferaza zülalının çoxu bu zaman Hsp42-SPG-lərdə saxlanılırdı.

Hsp42 tərkibli qranulların əmələ gəlməsi stasionar fazada fermentlərin fəaliyyətini tənzimləyir. (A) Hsp42-SPG-ləri olmayan hüceyrələr stasionar fazada 30 gündən sonra daha az canlı olur. Hüceyrə rebudding dərəcəsi vəhşi tip və hüceyrə canlılığını təmsil etmək üçün istifadə edilmişdir hsp42Δ hüceyrələri (ətraflı məlumat üçün Materiallar və Metodlara baxın). Təcrübələr ən azı üç müstəqil koloniyadan istifadə etməklə təkrarlandı və hər təkrarda >100 hüceyrə sayıldı. ***P<0.005, iki quyruqlu Tələbə t-test. Səhv çubuqları s.e.m. (B) lusiferaza-EGFP (yaşıl) tərəfindən əmələ gələn qranullar stasionar faza hüceyrələrində Hsp42-BFP qranulları (qırmızı) ilə birləşir. Şəkillər çəkilməzdən əvvəl hüceyrələr 5 gün ərzində SC-URA mühitində 28°C-də yetişdirildi. Ölçək çubuğu: 5 μm. (C) Lusiferaza-EGFP-nin qranul əmələ gəlməsi Hsp42-dən asılıdır. Vəhşi tip və hsp42Lusiferaza-EGFP daşıyan Δ hüceyrələri 1 günlük, 4 günlük, 7 günlük və 14 günlük kulturalardan toplanmış və şəkillər çəkilmişdir. Ölçək çubuğu: 5 μm. (D) Hsp42-SPG-lərin formalaşması xronoloji qocalma zamanı lusiferaza fəaliyyətinin aşağı tənzimlənməsini asanlaşdırır. Ümumi hüceyrə lizatının mq başına orta lusiferaza aktivliyi üç təkrardan hesablanmışdır. P dəyərlər iki quyruqlu Student istifadə edərək hesablanmışdır t-test. *P<0.05, ***P<0.005. Səhv çubuqları s.e.m. (E) Lusiferazanın zülal miqdarı hsp42Δ mutant (–) vəhşi tipli ştamla (+) müqayisədə yüksək deyil. Ümumi hüceyrə lizatları western blotting və lusiferaza ilə təhlil edildi, Hsp42 və G6PDH anti-GFP (lusiferaza-EGFP üçün), anti-Hsp42 və anti-G6PDH (yükləmə nəzarəti üçün) antikorlarından istifadə etməklə aşkar edildi. (F) Yabanı tipli hüceyrələrdə lusiferaza aktivliyi hüceyrələr stasionar fazadan çıxdıqda yeni protein sintezi olmadan tez bərpa olunur. Qıvrım dəyişikliklərini daha asan görmək üçün təzələnmiş hüceyrələrin lusiferaza fəaliyyəti təzələnmədən əvvəl eyni hüceyrə mədəniyyətinin aktivliyinə normallaşdırıldı. Stasionar faza hüceyrələri 100 μg/ml sikloheksimidin iştirakı ilə 1 saat ərzində təzə mühitlə təzələndi və sonra lusiferaza aktivliyini ölçmək üçün parçalandı. 14 günlük vəhşi tipli hüceyrələr ən böyük qat dəyişikliyinə malik idi, çünki lusiferaza zülalının çoxu bu zaman Hsp42-SPG-lərdə saxlanılırdı.

Biz tapdıq ki, atəşböcəyi lusiferaza-EGFP füzyon zülalının mutant forması bu problemi həll etmək üçün model ferment kimi xidmət edə bilər (Gupta et al., 2011). Bu lusiferaza mutant kortəbii hətta istilik şoku (Şəkil. 1B) olmadan stasionar faza mədəniyyətlərində Hsp42-SPGs ilə colocalize sitozolik qranullar formalaşır. Bunun əksinə olaraq, vəhşi tipli lusiferaza qranula nadir hallarda cəlb edilmişdir (lusiferaza mutantını daşıyan hüceyrələrdə 81,3±3,4% ilə müqayisədə 3,3±0,9%). Üstəlik, lusiferazanın qranul formalaşması ciddi şəkildə Hsp42-dən asılı idi, lusiferaza zülalı stasionar fazada sitozolda bərabər paylandı. hsp42Δ hüceyrələri (Şəkil 1C). Lusiferazanın davranışı əvvəllər müəyyən edilmiş Hsp42-SPG komponentləri Hos2 və Mca1-ə bənzəyir (Liu et al., 2012). Bu lusiferaza asanlıqla zülalın yanlış qatlanmasına səbəb olacaq mutasiyalar ehtiva etdiyinə görə, Hsp42-SPG-lərə yalnız yanlış qatlanmaya meylli zülalların toplanması ehtimalını artırır. Buna baxmayaraq, təcrid olunmuş zülalların qalıcı şəkildə zədələndiyi və ya sonradan yenidən aktivləşə biləcəyi bəlli deyil.

Hsp42-SPG-lərin əmələ gəlməsi hüceyrələrə stasionar fazada protein fəaliyyətini tənzimləməyə imkan verir

Mutant lusiferaza tədricən Hsp42-SPG-lərə toplandığından (Şəkil 1C), Hsp42-SPG-lərin yalnız stasionar faza zamanı tamamilə səhv qatlanmış və ya zədələnmiş lusiferaza-GFP zülalını sekvestr etməsi mümkündür. Bu fərziyyəni yoxlamaq üçün biz qranulsuz böyüdük hsp42Δ mutant və vəhşi tipli hüceyrələr və müxtəlif vaxt nöqtələrində lusiferazanın fəaliyyətini izlədilər. Yalnız tamamilə səhv qatlanmış və ya zədələnmişsə və buna görə də qeyri-aktiv zülallar Hsp42-SPG-lərə, yabanı tipli və hsp42Δ mutant hüceyrələr oxşar lusiferaza fəaliyyətini nümayiş etdirməlidir. Bunun əksinə olaraq, Hsp42-SPG-lər tam və ya qismən funksional zülalları aktiv şəkildə toplaya bilsələr, vəhşi tipli hüceyrələr daha aşağı lusiferaza fəaliyyəti göstərəcəklər. 1 günlük hüceyrə mədəniyyətlərində hər iki suş ümumi hüceyrəli lusiferaza aktivliyinin oxşar səviyyələrinə malik idi (Şəkil 1D). Ancaq lusiferaz fəaliyyətləri arasındakı fərq hsp42Δ və vəhşi tipli hüceyrələr, lusiferaza qranullarının formalaşmağa başladığı sonrakı zaman nöqtələrində tədricən artmışdır (Şəkil 1C və D, 7 günlük və 14 günlük hüceyrələrdə müvafiq olaraq ~3 dəfə və ~10 dəfə fərqlər). ).

Lusiferaza zülalının ümumi miqdarını araşdırmaq üçün western blots da həyata keçirdik. Həm vəhşi tipdə, həm də hsp42Δ mutant hüceyrələrdə lusiferaza zülalının səviyyələri tədricən azaldı - ola bilsin ki, stasionar faza hüceyrələrində aktivləşdirilmiş autofagiyaya görə (Wang et al., 2001). Buna baxmayaraq, tərkibində lusiferaza zülalının bolluğu hsp42Δ mutantlar vəhşi tipli ştammla müqayisədə bir qədər az idi (Şəkil 1E), vəhşi tip hüceyrələrdə lusiferaza fəaliyyətinin azalmasının protein miqdarının azalması ilə bağlı olması ehtimalını inkar etdi. Daha yüksək lusiferaza fəaliyyəti üçün başqa bir mümkün izahat hsp42Δ hüceyrələri mutant hüceyrələrin sitozolunda daha çox molekulyar şaperonların olmasıdır. ifa etdik in vitro Bu imkanı yoxlamaq üçün lusiferazanın yenidən qatlanan analizi (Glover və Lindquist, 1998). 14 günlük yabanı tipdən hazırlanmış hüceyrə lizatları və hsp42Lusiferaza-GFP konstruksiyasını daşımayan Δ hüceyrələri, denatürləşdirilmiş lusiferazanı yenidən aktivləşdirmək qabiliyyətinə görə ölçüldü. Nəticə bunu göstərdi hsp42Δ hüceyrələri vəhşi tipli hüceyrələrə nisbətən bir qədər aşağı refolding fəaliyyəti səviyyəsinə malik idi (Şəkil S1), bu onu göstərir ki, hsp42Δ hüceyrələrinin sitozolda daha çox şaperonları yox idi. Birlikdə götürdükdə, əldə etdiyimiz nəticələr göstərir ki, Hsp42-SPG-lərə xüsusi bir zülal sekvestr edilməsi hüceyrəyə zülal səviyyəsini azaltmadan fermentativ fəaliyyətini aşağı salmağa imkan verir.

Stasionar fazada hüceyrələr stress şərtlərinə bənzər bir çox problemlə qarşılaşırlar. Log fazalı hüceyrələrdə aparılan tədqiqatlar göstərmişdir ki, hüceyrələr stress şəraitində zədələnmiş və ya səhv qatlanmış zülalları IPOD, CytoQ və ya Q-bədən kimi xüsusi bölmələrə toplaya bilir və bu zülallar stress aradan qaldırıldıqdan sonra sonradan parçalanır (Escusa-Toret et başqaları, 2013 Kaganoviç et al., 2008 Miller et al., 2015). Hsp42-SPG-lərdəki zülal komponentlərinin deqradasiyaya hədəf olub-olmadığını və ya hüceyrələr sakit vəziyyətdən çıxdıqda yenidən funksional uyğunlaşmaya çevrilə biləcəyini sınaqdan keçirdik. Stasionar faza hüceyrələri yeni zülalların tərcüməsini maneə törətmək üçün sikloheksimid tərkibli təzə mühitlə təchiz edilmişdir. Sikloheksimid müalicəsi aşkar edilmiş lusiferaza aktivliyinin stasionar faza hüceyrələrində əvvəlcədən mövcud olan lusiferazadan gəldiyini təmin etdi. Əvvəlki araşdırmamız göstərdi ki, bu vəziyyətdə Hsp42-SPG-lər öz komponentlərini sökür və buraxır (Liu və digərləri, 2012). Maraqlıdır ki, zülal Hsp42-SPG-lərdən azad edildikdə sitozolik lusiferaza aktivliyi kəskin şəkildə artdı (Şəkil 1F). Bunun əksinə olaraq, lusiferaza aktivliyi qranulsuzda oxşar səviyyədə qaldı hsp42Δ mutantlar qidalanmadan əvvəl və sonra. Bu məlumatlar Hsp42-SPG-lərdə saxlanılan xüsusi zülalların hüceyrə dövrünə yenidən daxil olduqdan sonra yenidən qatlana və sonra istifadə üçün yenidən aktivləşdirilə biləcəyinə dair birbaşa sübutlar təqdim edir.

Stasionar faza hüceyrələrində məlum qranul strukturlarında zülal komponentlərinin müəyyən edilməsi

Hsp42-SPG-lərə sekvestr edilmiş zülalların sonrakı mərhələlərdə yenidən aktivləşdirilə biləcəyini göstərən nəticəmiz bizi Hsp42-SPG-lərin endogen komponentlərini axtarmağa sövq etdi. Hsp42-SPG komponentlərinin hərtərəfli siyahısını əldə etmək üçün biz maya GFP-füzyon kolleksiyasından istifadə edərək stasionar fazada maya zülallarının hüceyrəaltı lokalizasiyasının genom geniş ekranını həyata keçirdik (Huh et al., 2003). Birinci turda kolleksiyadan 4071 suş stasionar fazaya daxil olmaq üçün 5 gün ərzində YPD-də yetişdirildi və həm log, həm də stasionar fazada hüceyrələrin flüoresan şəkilləri təhlil edildi (ətraflı məlumat üçün Materiallar və Metodlara baxın). Stasionar fazada GFP füzyon zülallarının lokalizasiya nümunələri əl ilə altı kateqoriyaya bölündü, yəni xüsusi nümunə, qranul, nöqtə, hüceyrə periferiyası, nüvə periferiyası və fibril (Cədvəl 1 və Şəkil 1).S2A həmçinin https://doi.org/10.6084/m9.figshare.6958307 ünvanında mövcud olan FigShare məlumatlarına baxın). Zülalların əksəriyyəti stasionar faza hüceyrələrində sitozolda, nüvədə və ya vakuolda bərabər paylanmışdır və buna görə də heç bir xüsusi nümunə kateqoriyasına daxil deyildi. Maraqlıdır ki, 600-dən çox maya zülalı stasionar fazada nöqtəvari strukturlar əmələ gətirərək, punktat və ya qranullar kateqoriyasına düşür (Cədvəl 1).

Maya zülallarının hüceyrəaltı lokalizasiyası

e4D53AwjWzTX2F3ldvuOcfsGfeAIMki4itkelG7vw-YBhtpqO6oquhbUo2cVCKrIhkVQnzbFgBld6OWFFEJ2vEiqvIkHgP3vlRbyGNBXrpxrAqvWgM-6FfIysTL3WeD75tlrKeXPrw9O9T65ykB7k7iw0-SAqiRGK7S9A3XGmFl-1kLWtNNOFcxil80THD8isd5XymaA8q7RCbQq4rUNj2SCCLidG8YcSSwTplkpzKOtMLyPyvLHDA __ & ampKey-Pair-Id = APKAIE5G5CRDK6RD3PGA "/>

Sonra, biz yalnız bir və ya iki fərdi sitozolik nöqtə meydana gətirən 307 zülala diqqət yetirdik, çünki bu kateqoriyaya Hsp42 daxildir və eyni kateqoriyaya daxil olan digər zülalların Hsp42-SPG komponentləri olma ehtimalı daha yüksəkdir (Şəkil S2C). Bu qranul əmələ gətirən zülalların log-faza lokalizasiya nümunələri tədqiq edildikdə, onların yalnız kiçik bir hissəsi (17,9%) nöqtəli naxışlar nümayiş etdirdi və əksəriyyəti sitozolda (45,0%) və ya nüvədə (31,6%) bərabər paylandı ( Şəkil S2D). Ümumilikdə, 200-dən çox maya zülalları stasionar faza zamanı sitozolik qranullar əmələ gətirmək üçün orijinal lokalizasiyasını kökündən dəyişdirdi və bu, qranulların əmələ gəlməsinin aclıq stresinə və ya stasionar faza hüceyrələrində qocalma təsirlərinə spesifik cavab olduğunu göstərir.

Hsp42-SPG komponentlərini daha da müəyyən etmək üçün, mCherry etiketli Hsp42, onun digər zülallarla birgə lokalizasiyasını görmək üçün Hsp42-SPG-lərin markeri kimi istifadə edilmişdir (ətraflı məlumat üçün Materiallar və Metodlara baxın). Tərkibində mCherry etiketli plazmid HSP42 gen əvvəlcə GFP-füzyon qranul əmələ gətirən zülalları daşıyan 307 ştammın hər birinə çevrildi və transformatorlar mCherry və GFP siqnallarının lokalizasiya nümunələrini yoxlamaq üçün stasionar faza induksiya edildi (Şəkil S3A). 307 suşdan 61-i GFP və Hsp42-mCherry siqnallarının kolokalizasiyasını göstərdi (bir nümunə Şəkil 2A-da göstərilib) və Hsp42-SPG-lərin komponentləri kimi müəyyən edilib (Cədvəl 2 və Cədvəl S1). Maraqlıdır ki, Hsp42-SPG-nin müxtəlif komponentləri ardıcıllıqla qranullara toplanmışdır (Şəkil S3B və Cədvəl S2), Hsp42-SPG-nin xüsusi bir quruluşa malik olduğunu göstərir.


Axın Sitometriya Protokolu

Dünyadakı laboratoriyalar axın sitometriya protokolunu optimallaşdırmağa davam edərkən, şərti olaraq aşağıdakı addımları əhatə edir:

  1. Maraqlanan zülalları və onların keçici siqnal hadisələrini hərəkətsizləşdirmək üçün hüceyrələr formaldehidlə bərkidilir. və ya yuyucu vasitə hüceyrədaxili boşluqlara daxil ola bilən antikorlara keçirici hala gətirmək üçün sınaq borusuna əlavə edilir. əlavə edilir və eyni vaxtda birdən çox səth və hüceyrədaxili zülalların rənglənməsi zamanı epitopların optimal hədəflənməsinə və düzgün antigen aşkarlanmasına imkan vermək üçün diqqətlə seçilməlidir.
  2. Sınaq borusu axın sitometrinə yerləşdirilir və mayenin –-ə çatmasına və sonra – axın kamerasından, hər dəfə bir hüceyrədən çıxmasına icazə verilir.
  3. Hər bir hüceyrə lazer şüasını keçdikcə ondan sıçrayan işıq işıq/rəng detektorlarına ötürülür.
  4. Bu təcrübədən əldə edilən məlumatlar, nəhayət, hüceyrələrin özünəməxsus cəhətlərini və hüceyrə siqnallarının nümunələrini açmaq üçün analizdən keçə bilər.

Antikor boyanması da fərqli ola bilər:

  • ilə birbaşa boyanma, hüceyrələr birbaşa flüoroxroma (məsələn, FITC) birləşdirilən antikorla inkubasiya edilir. Bu, bir addımlı inkubasiyadır və hüceyrədaxili boyanma üçün xüsusilə faydalıdır.
  • In dolayıboyanma, əsas antikor etiketlənmir, əksinə flüoroxrom etiketli ikincil antikor tərəfindən aşkar edilir. Bu üsul bir çox fərqli hədəflərə qarşı konyuqasiya edilməmiş birincil antikorların qaldırıla biləcəyini bildirir ki, bu da tədqiqatçı üçün hədəf zülalların seçimini genişləndirir.
  • Hüceyrədaxili boyanma hüceyrədaxili antigenlərin ləkəsinə aiddir.
  • Nəhayət, bir hüceyrə tərəfindən ifraz olunan zülallar bir Golgi bloku ilə işarələnə və izlənilə bilər, sonra hüceyrədaxili boyanır.

Kursun Təsviri

Endoplazmik retikulum (ER) zülalların sintezi, düzgün qatlanması, dəyişdirilməsi və nəticədə son təyinat yerlərinə daşınması üçün müxtəlif hüceyrə proseslərini təşkil edir. Bu mühüm biosintetik prosesin bir hissəsi olaraq düzgün qatlanmayan və nəticədə normal hüceyrə funksiyasına zərər verən zülallar daim əmələ gəlir. Alzheimer və Parkinson da daxil olmaqla bir çox neyrodegenerativ xəstəliklərin ümumi əlaməti hüceyrələrin səhv qatlanmış zülalların yükü ilə məşğul olmaq qabiliyyəti pozulduqda ortaya çıxan səhv qatlanmış zülalların yığılması və çökməsidir. Bu kursda biz ER keyfiyyətinə nəzarət mexanizminin yalnız düzgün yığılmış zülalların ER-dən çıxmasını necə təmin etdiyini araşdıracağıq, eyni zamanda, bioloji aktiv qatlanmış vəziyyətə gedən yeni yaranan zülalları terminal olaraq səhv qatlananlardan ayırd edə bilərik.


Videoya baxın: Tapşırıqlar DNT, zülal sintezi (Noyabr 2022).